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人参皂苷Rg1与神经干细胞共培养的促增殖和保护作用

孙建忠，刘欣伟，管华鹏，张鹏，刘琦，杨珺，郭群峰，倪斌

中国组织工程研究 2015, 19 (10): 1580-1584. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2015.10.019

摘要（284）

PDF （342KB）（532）

背景：研究表明传统中药提取物对大鼠神经干细胞进行干预，能够反映其对神经系统的恢复和保护作用。

目的：探讨人参皂苷Rg1对神经干细胞的增殖和保护作用。

方法：将妊娠19 d左右的SD大鼠进行解剖取出胎鼠，然后分离海马组织提取神经干细胞，与含50 g/L人参皂苷Rg1的DMEM/F12培养基共培养作为人参皂苷Rg1组，正常DMEM/F12培养基培养的神经干细胞作为空白对照组，与含0.64%苯酚的DMEM/F12培养基共培养作为阳性对照组，MTT法检测各组神经干细胞的增殖情况，Western-blot方法检测各组神经干细胞脑源性神经营养因子和转化生长因子β蛋白的表达。

结果与结论：神经干细胞分离初期在镜下为圆形单个细胞，细胞的边缘比较清楚，接种2 d后，细胞贴壁并形成小的细胞球。人参皂苷Rg1组大鼠神经干细胞增殖率显著高于空白对照组(P < 0.05)，阳性对照组神经干细胞增殖率显著低于空白对照组(P < 0.05)。与空白对照组相比，人参皂苷Rg1组大鼠神经干细胞脑源性神经营养因子蛋白表达显著升高，转化生长因子β蛋白表达显著下降，以上结果提示人参皂苷Rg1对大鼠神经干细胞具有一定的促进增殖和保护作用。

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中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

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芍药苷对骨髓间充质干细胞增殖的影响

晁二涛，白海，王存邦，葸瑞，欧剑锋，赵强

中国组织工程研究 2015, 19 (1): 101-107. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2015.01.018

摘要（296）

PDF （2247KB）（413）

背景：研究显示芍药苷具有补血及治疗自身免疫性疾病的功效，骨髓间充质干细胞对机体的造血及免疫功能也起着重要的作用，但芍药苷对骨髓间充质干细胞的增殖及细胞因子的分泌和表达有何影响报道较少。
目的：探讨芍药苷对人骨髓间充质干细胞增殖及白细胞介素6表达的影响。
方法：采用密度梯度离心法和贴壁培养法体外分离培养人骨髓间充质干细胞，用流式细胞术和成脂及成骨诱导法鉴定人骨髓间充质干细胞生物学特性，MTT法检测不同浓度芍药苷对人骨髓间充质干细胞增殖的影响，ELISA 法测定芍药苷干预人骨髓间充质干细胞后培养上清液中白细胞介素6的分泌水平，RT-PCR 检测芍药苷干预后白细胞介素6 mRNA的表达情况。
结果与结论：成功分离出骨髓间充质干细胞，具有成骨、成脂分化潜能。与对照组相比，芍药苷浓度为2 μmol/L和10 μmol/L可明显促进骨髓间充质干细胞增殖。10 μmol/L芍药苷干预骨髓间充质干细胞后，G₀/G₁期细胞比例显著降低，S期细胞比例显著升高。10 μmol/L芍药苷干预组骨髓间充质干细胞白细胞介素6的分泌和mRNA表达均显著高于对照组(P < 0.01)。由此得出，一定浓度的芍药苷可促进骨髓间充质干细胞增殖，并提高骨髓间充质干细胞分泌白细胞介素6水平和基因表达。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

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人参皂苷对不同强度电离辐射损害人造血干细胞的缓解作用

黄颖，梁晓燕，李骋进，胡军，周理乾

中国组织工程研究 2015, 19 (1): 124-129. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2015.01.022

摘要（348）

PDF （777KB）（488）

背景：国内外诸多学者和机构都在研究如何缓解辐射损害，寻找最合适的药物，而人参皂苷作为名贵中药人参的主要药理成分，具有明显的抗氧化作用。
目的：探讨人参总皂苷对不同强度电离辐射损害人造血干细胞的缓解作用及其作用机制。
方法：采集健康人脐血，分离培养得到CD34⁺造血干细胞，分为未处理组和人参皂苷预处理组，之后分别用1，2，5 Gy的X射线对细胞照射24 h。MTT检测细胞增殖活性，应用流式细胞仪测定各组内的活性氧水平，AV/PI双染检测各组细胞的凋亡率，最后用Western blot和Real-time PCR对各组细胞内caspase-3和Nrf-2水平进行定量分析。
结果与结论：治疗剂量的电离辐射可以诱导CD34⁺细胞活性下降，同时诱导其发生凋亡，而且细胞内的活性氧活性也呈现进行性升高，这种作用与电离辐射的剂量相关，用人参皂苷进行预处理后，上述作用可得到明显缓解。Western blot和PCR检测结果显示人参皂苷Rb3可以有效抑制由电离辐射引起的caspase-3表达活性增强，另外还可以促进Nrf-2在CD34⁺细胞内的表达。结果表明人参皂苷可以有效抑制电离辐射诱导CD34⁺造血干细胞的损伤，这种保护作用很可能与其抗凋亡和抑制氧化应激作用相关。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

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不同剂量骨碎补对兔骨髓间充质干细胞增殖分化的影响

张虎林，张自强，许宏斌，张晓刚

中国组织工程研究 2014, 18 (41): 6649-6654. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2014.41.016

摘要（247）

PDF （865KB）（661）

背景：现代研究表明骨碎补具有推迟细胞退行性变、降低骨关节病发病率的作用。

目的：比较不同剂量骨碎补冻干粉诱导兔骨髓间充质干细胞增殖、分化的效果，并筛选出最佳剂量。

方法：利用密度梯度离心法结合贴壁筛选法分离培养兔骨髓间充质干细胞，分为空白组、转化生长因子β1阳性对照组、骨碎补高、中、低剂量组(分别含骨碎补0.4 mg，0.1 mg，5 μg)，取第3代骨髓间充质干细胞，根据实验分组加入不同培养液进行培养，1周后MTT比色法检测活细胞数目，免疫组化法测定Ⅱ型胶原表达。

结果与结论：MTT比色结果显示转化生长因子β1和骨碎补冻干粉均能促进骨髓间充质干细胞增殖，转化生长因子β1阳性对照组>骨碎补低剂量组>骨碎补中剂量组>骨碎补高剂量组>空白组。细胞免疫组化检测Ⅱ型胶原结果显示转化生长因子β1和骨碎补冻干粉均可以诱导兔骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化，诱导后的细胞明显表达Ⅱ型胶原，转化生长因子β1阳性对照组>骨碎补低剂量组>骨碎补中剂量组>骨碎补高剂量组>空白组。结果表明骨碎补能促进兔骨髓间充质干细胞增殖和分化，尤以5 μg剂量效果最佳。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

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三七三醇皂苷与脑缺血耐受对脑自体神经干细胞增殖的作用

姜晓锋，张杰文，罗祖明

中国组织工程研究 2014, 18 (37): 6014-6018. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2014.37.020

摘要（353）

PDF （604KB）（558）

背景：脑缺血耐受可促进大鼠脑梗死后海马区自体神经干细胞的增殖，但传统中药三七通舒对脑自体神经干细胞增殖的影响还未见报道。
目的：明确中药三七三醇皂苷、缺血预处理与大鼠脑梗死后7 d海马区自体神经干细胞增殖的关系，以及其对大鼠脑梗死后神经行为学评分的影响。
方法：50只SD雄性大鼠随机等分为假手术组、缺血组、预缺血对照组、预缺血组和三七三醇皂苷组，后4组采用改良的Zea-Longa法制备急性脑梗死模型，假手术组仅做颈部手术切口，预缺血组采用二次线栓法建立局灶-局灶性脑缺血耐受的动物模型，缺血对照组利用假手术代替预缺血。三七三醇皂苷组大鼠在造模前 7 d起，每天给予三七三醇皂苷100 mg/kg腹腔注射。
结果与结论：大鼠脑梗死7 d后，缺血组大鼠神经行为学评分和海马区中神经干细胞数量明显增加(P< 0.01)，而与缺血组相比，预缺血组和三七三醇皂苷组大鼠神经行为学评分下降(P < 0.01)，而海马区中神经干细胞数量增加(P < 0.01)，且两组差异无显著性意义(P > 0.05)，而预缺血对照组大鼠神经行为学评分和海马区中神经干细胞数量与缺血组接近(P > 0.05)。提示传统中药三七三醇皂苷可以发挥类缺血耐受作用，改善大鼠脑梗死后的神经功能缺损症状。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

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红景天苷诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化中的Ca²⁺/CaM信号通路

赵玲，赵红斌，潘茜，李根，王九娜，唐俊杰

中国组织工程研究 2014, 18 (37): 6019-6023. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2014.37.021

摘要（270）

PDF （753KB）（464）

背景：课题组前期研究表明，红景天苷能诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞定向分化，Ca²⁺信号是实现其生物学信号传导的重要途径之一
目的：探讨Ca²⁺/CaM 信号通路在红景天苷诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞定向分化中的作用及机制。
方法：实验分为空白对照组和红景天苷诱导组，红景天苷诱导组将不同质量浓度红景天苷(5，10，20，50，100 mg/L)作用骨髓间充质干细胞24 h和100 mg/L红景天苷作用骨髓间充质干细胞12，24，48，72 h。采用Western blot方法分别检测红景天苷诱导骨髓间充质干细胞后神经标志分子MAP2和Ca²⁺/CaM信号通路中关键蛋白CaM、CaMKⅡ的表达水平。另外实验设阻断剂组，分别加Ca²⁺信号通路特异性阻断剂：500 µmol/L EGTA (细胞外Ca²⁺螯合剂)、1 mmol/L Nifedipine (L型Ca²⁺通道阻断剂)、10 mmol/L LY294002 (PI3K抑制剂)分别作用细胞30 min后，再加入100 mg/L红景天苷作用细胞24 h，采用Western blot方法检测阻断Ca²⁺/CaM信号通路后NSE、CaM的表达情况。
结果与结论：①红景天苷诱导后，MAP2的表达上调(P < 0.01)，说明红景天苷可诱导骨髓间充质干细胞分化为神经细胞。②不同质量浓度红景天苷诱导骨髓间充质干细胞24 h后，10 mg/L红景天苷组CaM、CaMKⅡ的表达与其他诱导组比较显著上调(P < 0.01)；同一质量浓度红景天苷诱导72 h后CaM、CaMKⅡ表达明显下调(P < 0.01)。③阻断细胞外Ca²⁺和PI3K信号通路后，NSE与CaM的表达水平较红景天苷诱导组上调(P < 0.05)。结果表明，红景天苷通过抑制Ca²⁺/CaM信号通路实现骨髓间充质干细胞向神经细胞定向分化。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

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白藜芦醇联合间充质干细胞改善损伤内皮细胞的代谢记忆效应

丁慧，王鹏，王颜刚

中国组织工程研究 2014, 18 (14): 2232-2237. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2014.14.016

摘要（349）

PDF （777KB）（401）

背景：白藜芦醇联合间充质干细胞是否能够进一步改善高糖诱导内皮细胞产生的不良记忆目前鲜有报道。
目的：验证不同浓度的白藜芦醇联合间充质干细胞对高糖诱导人脐静脉内皮细胞损伤代谢记忆效应的保护作用。
方法：将人脐静脉内皮细胞分为10组：正常对照组、甘露醇对照组、高糖组、白藜芦醇低剂量组(0.1 μmol/L)、白藜芦醇中剂量组(1 μmol/L)、白藜芦醇高剂量组(10 μmol/L)、干细胞组、白藜芦醇低剂量+干细胞组、白藜芦醇中剂量+干细胞组及白藜芦醇高剂量+干细胞组。分别于5.5 mmol/L葡萄糖培养第1，4，6天收集细胞培养上清液、提取细胞核蛋白，应用ELISA法检测细胞培养上清中血管细胞黏附分子1、单核细胞趋化蛋白1、纤溶酶原激活剂抑制剂1的表达水平，以Western blot法检测细胞内核因子κB的蛋白水平。
结果与结论：与正常对照组相比，高糖可诱导内皮细胞核因子κB表达上调，同时血管细胞黏附分子1 、单核细胞趋化蛋白1和纤溶酶原激活剂抑制剂1水平升高，且在糖浓度恢复正常后仍持续上升。与高糖组相比，白藜芦醇及其联合干细胞干预后可以使内皮细胞核因子κB表达及血管细胞黏附分子1、单核细胞趋化蛋白1和纤溶酶原激活剂抑制剂1水平呈白藜芦醇剂量依赖性降低。干细胞组上述指标与高糖组比差异无显著性意义，甘露醇组与正常对照组相比差异无显著性意义。结果提示白藜芦醇可能通过核因子κB通路降低血管细胞黏附分子1、单核细胞趋化蛋白1和纤溶酶原激活剂抑制剂1水平，改善高糖代谢记忆效应介导的内皮细胞损伤。而间充质干细胞发挥内皮细胞保护作用可能不仅有赖于核因子κB通路。

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黄芪甲苷联合丹参酮Ⅱa诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化

宋雪云，龙云，谭超，郑景辉

中国组织工程研究 2013, 17 (36): 6515-6520. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2013.36.021

摘要（312）

PDF （2291KB）（422）

背景：黄芪甲苷和丹参酮Ⅱa是传统中医药治疗心肌缺血的有效成分，是否可参与骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的过程呢？
目的：观察黄芪甲苷联合丹参酮Ⅱa对体外诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化作用的影响。
方法：应用MTT法分别测定黄芪甲苷和丹参酮Ⅱa的最大无毒浓度，确定两者联合诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的剂量。将分离纯化的骨髓间充质干细胞分5组进行诱导：黄芪甲苷组、丹参酮Ⅱa组、丹参酮Ⅱa+黄芪甲苷组、5-氮胞苷组、空白对照组，ELISA方法观察体外诱导后骨髓间充质干细胞缝隙连接蛋白43和肌钙蛋白表达变化。
结果与结论：诱导后丹参酮Ⅱa+黄芪甲苷组、丹参酮Ⅱa、黄芪甲苷、5-氮胞苷组肌钙蛋白、缝隙连接蛋白43表达水平均高于正常对照组(P < 0.01)，丹参酮Ⅱa+黄芪甲苷组高于丹参酮Ⅱa、黄芪甲苷组(P < 0.01)。丹参酮Ⅱa+黄芪甲苷组与5-氮胞苷组缝隙连接蛋白43表达水平差异无显著性意义(P > 0.05)。结果提示黄芪甲苷联合丹参酮Ⅱa可以诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞方向转化，而其联合作用高于单一成分的作用。

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透骨消痛颗粒含药血清诱导骨髓基质干细胞向软骨细胞分化

刘伯龄，李西海，肖丽春，梁珪清，吴广文，李照辉，陈其勇

中国组织工程研究 2013, 17 (32): 5863-5870. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2013.32.018

摘要（313）

PDF （2618KB）（345）

背景：骨髓基质干细胞根据环境而有不同的分化路径，在特定的环境中有分化为透明软骨细胞的趋势，可能为治疗骨性关节炎提供新思路。
目的：观察透骨消痛颗粒含药血清对骨髓基质干细胞向软骨分化的影响。
方法：取SD大鼠四肢建立体外培养的骨髓基质干细胞，取第3代骨髓基质干细胞进行干预，分为生理盐水血清组、透骨消痛颗粒水提物血清组、透骨消痛颗粒醇提物血清组、诱导软骨剂组、透骨消痛颗粒水提物血清+诱导软骨剂组、透骨消痛颗粒醇提物血清+诱导软骨剂组。Real time PCR及Western Blot检测Sox9、collagen Ⅱ、collagen Ⅹ mRNA及蛋白表达。
结果与结论：含药血清干预14 d后，Sox9、 collagen Ⅱ、collagen Ⅹ mRNA及蛋白表达水平，透骨消痛颗粒水提物血清组、透骨消痛颗粒醇提物血清组、诱导软骨组、透骨消痛颗粒水提物血清+诱导软骨剂组、透骨消痛颗粒醇提物血清+诱导软骨剂组明显高于生理盐水血清组(P < 0.05，P< 0.01)，诱导软骨组、透骨消痛颗粒水提物血清+诱导软骨剂组、透骨消痛颗粒醇提物血清+诱导软骨剂组明显高于透骨消痛颗粒水提物血清组、透骨消痛颗粒醇提物血清组(P < 0.01)，其中Sox9表达透骨消痛颗粒水提物血清+诱导软骨剂组高于诱导软骨。说明透骨消痛颗粒含药血清通过上调Sox9的表达，加速骨髓基质干细胞细胞向软骨细胞分化。

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骨髓间充质干细胞联合丹红注射液干预脑梗死组织GAP-43、Bcl-2的表达

李金艳，张哲成

中国组织工程研究 2013, 17 (32): 5871-5876. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2013.32.019

摘要（409）

PDF （1974KB）（435）

背景：丹红注射液能够清除自由基和抑制脂质过氧化反应，能够改善中枢神经系统梗死后损伤区的微环境。
目的：探讨骨髓间充质干细胞移植联合丹红注射液对大鼠脑梗死组织GAP-43、Bcl-2表达的影响。
方法：选取Wistar大鼠60只，建立大脑中动脉闭塞模型，随机分为对照组、骨髓间充质干细胞组和联合治疗组。对照组尾静脉注射PBS、骨髓间充质干细胞组尾静脉注射2.5×10⁹ L^-1的骨髓间充质干细胞悬液、联合治疗组联合注射2 mL/kg丹红注射液+2.5×10⁹ L^-1的骨髓间充质干细胞悬液，均连续5 d，1次/d。
结果与结论：移植后24 h，3 d各组间大鼠神经功能障碍评分差异无显著性意义(P > 0.05)，移植后1周、2周，联合治疗组大鼠神经功能障碍评分低于骨髓间充质干细胞组及对照组(P < 0.05)；在联合治疗组中，GAP-43、Bcl-2的表达明显高于骨髓间充质干细胞组及对照组(P < 0.05)。说明骨髓间充质干细胞移植与丹红注射液联合应用可明显促进脑梗死局部GAP-43、Bcl-2的表达，对大鼠脑梗死细胞凋亡具有明显抑制作用。

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增强大鼠神经干细胞生物活性的黄芪注射液

张力，罗秀成，杨石照，张军峰，杨吉平，赵朝华，张辉

中国组织工程研究 DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2013.27.017

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补阳还五汤生物碱有效部位对人脐血干细胞体外增殖的影响

蔡咏，林金丽，布林白乙拉

中国组织工程研究 2013, 17 (19): 3533-3537. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2013.19.018

摘要（267）

PDF （644KB）（422）

背景：研究表明补阳还五汤对各种细胞均有保护作用，但机制尚不清楚，有研究推测是它的生物碱有效部位起作用。
目的：观察补阳还五汤生物碱有效部位对人脐血干细胞体外增殖的影响。
方法：获取临床健康产妇的新鲜脐血，制备人脐血干细胞悬液，将纯化的人脐血干细胞接种于40个培养皿中进行传代。分组：川芎嗪组给予100 g/L川芎嗪，阿魏酸组给予50 g/L阿魏酸，生物碱有效部位组(川芎嗪+阿魏酸组)给予100 g/L川芎嗪+ 50 g/L阿魏酸；对照组：继续用含体积分数为20%小牛血清的DMEM培养液培养。培养2，4，6，8，10 d观察人脐血干细胞增殖情况；24，72 h后流式细胞仪测定S期细胞的比例，培养10 d后电流钳模式记录细胞静息膜电位变化。
结果与结论：川芎嗪组和阿魏酸组人脐血干细胞的增殖作用不明显，培养10 d时生物碱有效部位组细胞增殖情况明显高于川芎嗪组、阿魏酸组和对照组(P < 0.01)。生物碱有效部位组在培养24，72 h后处于S期的人脐血干细胞明显增多；川芎嗪+阿魏酸组细胞静息膜电位高于川芎嗪组、阿魏酸组和对照组(P < 0.01)。提示补阳还五汤生物碱有效部位能促进人脐血干细胞的体外增殖。

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土鳖虫含药血清干预骨髓间充质干细胞的成脂分化

齐振熙，李树强，于涛

中国组织工程研究 2013, 17 (14): 2597-2602. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2013.14.019

摘要（348）

PDF （1616KB）（552）

背景：实验拟通过土鳖虫对激素诱导骨髓间充质干细胞向脂肪细胞分化的影响，解释中药土鳖虫治疗股骨头缺血性坏死的作用机制。
目的：观察土鳖虫对地塞米松诱导骨髓间充质干细胞成脂分化的干预作用。
方法：通过大剂量地塞米松诱导体外培养的骨髓间充质干细胞成脂分化，在诱导成脂的同时给予土鳖虫含药血清干预。检测干预6 d后细胞内成脂标志物三酰甘油、氧化物酶增殖物激活受体mRNA和脂肪酸相关蛋白mRNA的表达。
结果与结论：土鳖虫可抑制骨髓间充质干细胞分化过程中氧化物酶增殖物激活受体基因和脂肪酸相关蛋白基因的表达，降低三酰甘油水平，说明土鳖虫药物可以逆转因大量激素导致的骨髓间充质干细胞成脂分化增加。

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柚皮甙诱导兔骨髓间充质干细胞的成骨特征

杨渊，李小峰，罗道明，温超海

中国组织工程研究 2013, 17 (14): 2603-2608. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2013.14.020

摘要（281）

PDF （825KB）（436）

背景：骨碎补能在促进骨生长且取得了良好的临床疗效，其主要成分柚皮甙能否诱导骨髓间充质干细胞向成骨方向分化？
目的：用柚皮甙诱导兔骨髓间充质干细胞向成骨方向分化。并观察柚皮甙诱导兔骨髓间充质干细胞向成骨方向分化的能力。
方法：用贴壁筛选法对兔骨髓间充质干细胞进行分离培养。对生长良好的第3代骨髓间充质干细胞分别用50 μg/L的柚皮甙和经典成骨诱导剂向成骨方向进行诱导，分别进行成骨鉴定。
结果与结论：经典成骨诱导液、柚皮甙诱导液都能使骨髓间充质干细胞向成骨方向分化，基质分泌增多，形成钙结节。用酶联免疫检测仪检测柚皮甙诱导组和经典成骨诱导组细胞吸光度值未见明显的差异。同时检测柚皮甙诱导液和L-DMEN细胞培养液的吸光度值发现两者差异无显著性意义(P > 0.05)。证实柚皮甙可成功诱导骨髓间充质干细胞向成骨方向分化，无明显毒性作用。

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丹酚酸B及丹参酮ⅡA诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞

李旭，王亚玲

中国组织工程研究 2013, 17 (10): 1849-1855. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2013.10.022

摘要（345）

PDF （521KB）（423）

背景：目前大多数研究者采用5-氮胞苷诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞，存在着一定的不良反应，难以应用于临床。中药丹参本身在临床上广泛用于治疗心血管系统疾病，其主要化学成分为丹酚酸 B和丹参酮ⅡA。
目的：观察丹酚酸B及丹参酮ⅡA联合诱导骨髓间充质干细胞定向分化为心肌样细胞的效果。
方法：取SD大鼠四肢骨骨髓，分离培养骨髓间充质干细胞，应用丹酚酸B、丹参酮ⅡA及二者联合分别对第2代骨髓间充质干细胞定向诱导，不加诱导剂为空白对照组。3 d后各实验组去除诱导培养基，用正常培养基继续培养4周。
结果与结论：空白对照组细胞结蛋白、α-横纹肌肌动蛋白、肌钙蛋白T及缝隙连接蛋白43均为弱阳性或阴性表达。与空白对照组相比，丹酚酸B组，丹参酮ⅡA组，丹酚酸B+丹参酮ⅡA组骨髓间充质干细胞各标记物阳性表达均明显升高，且差异有显著性意义(P < 0.01)。其中，二者联合诱导组各标记物的阳性率均最高。荧光免疫细胞化学鉴定可见诱导组细胞质内结蛋白的表达呈红色，肌钙蛋白T的表达呈绿色，当两者同时被观察时可见其重叠的部位变成黄色。结果显示丹酚酸B及丹参酮ⅡA均可分别诱导骨髓间充质干细胞获得心肌分化表型，且二者联合诱导效果最好。

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胶质细胞源性神经营养因子对猴骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的影响

刘晓刚，邓宇斌，蔡辉

中国组织工程研究 2013, 17 (10): 1856-1861. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2013.10.023

摘要（298）

PDF （487KB）（403）

背景：鉴于骨髓间充质干细胞体外分化为神经样细胞的最终研究目的，是将诱导后的细胞移植入体内参与损伤神经系统的修复过程，因此，保证移植细胞的活性显得十分重要。
目的：探讨胶质细胞源性神经营养因子对隐丹参酮体外诱导猴骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的保护作用。
方法：以隐丹参酮为诱导剂诱导第8代猴骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞，应用流式细胞仪检测不同时段诱导细胞的凋亡百分比(每间隔0.5 h为1组，共12组)。选择细胞凋亡百分比较高的一个时段，观察添加不同质量浓度胶质细胞源性神经营养因子(0-100 μg/L，共11组)对诱导细胞凋亡的影响。
结果与结论：诱导后细胞凋亡百分比逐渐升高，约4 h时达到峰值，维持约1 h后下降(P < 0.05)。随着胶质细胞源性神经营养因子质量浓度由0 μg/L提高到30 μg/L，细胞凋亡百分比逐渐下降(P < 0.05)，当胶质细胞源性神经营养因子质量浓度超过30 μg/L后，细胞凋亡水平受胶质细胞源性神经营养因子质量浓度影响不再显著。结果可见胶质细胞源性神经营养因子在隐丹参酮体外诱导猴骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞过程中具有保护作用。

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益气活血类药物血清对嗅鞘细胞增殖及相关因子分泌的影响

饶耀剑，朱文潇，马文虎，王拥军

中国组织工程研究 2013, 17 (6): 1094-1100. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2013.06.024

摘要（310）

PDF （545KB）（442）

背景：益气化瘀是中医药对脊髓损伤的主要治则，但疗效不确切。那么，益气活血类中医药治法能否结合现代科技共同治疗脊髓损伤从而提高疗效呢？
目的：观察益气活血类汤剂促进嗅鞘细胞增殖及分泌神经生长因子、脑源性神经营养因子的作用。
方法：组织块培养法体外培养新生大鼠嗅鞘细胞；采用MTT法检测补阳还五汤和痿症方含药血清对嗅鞘细胞增殖的影响；采用Western-Blot法测定培养上清中神经生长因子、脑源性神经营养因子水平。
结果与结论：MTT结果显示补阳还五汤药物血清及痿证方药物血清均能促进嗅鞘细胞增殖，且两者促增殖作用无差异；Western-Blot结果显示补阳还五汤药物血清及痿证方药物血清均能促进嗅鞘细胞分泌神经生长因子、脑源性神经营养因子，两组间细胞因子分泌水平也无明显差异。

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骨碎补总黄酮依赖PI3K/Akt通路与牙髓干细胞的成骨分化

黄晓菲，袁苏健，杨成

中国组织工程研究 2013, 17 (1): 92-97. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2013.01.015

摘要（357）

PDF （373KB）（620）

背景：PI3K/Akt通路可能在骨碎补总黄酮促成骨分化作用中发挥重要调控作用。
目的：观察骨碎补总黄酮对大鼠牙髓干细胞成骨分化的影响，并对PI3K/Akt通路在其中的作用进行初步探讨。
方法：采用组织块消化法获得大鼠牙髓细胞，克隆化分离培养大鼠牙髓干细胞并进行鉴定。在培养体系中加入不同质量浓度(0.01，0.05，0.1 g/L)的骨碎补总黄酮，观察各组细胞的碱性磷酸酶水平及钙结节形成情况，并用Western Blot法检测各组细胞磷酸化Akt的表达变化。
结果与结论：分离得到的牙髓干细胞的细胞表面标志CD44和CD29呈阳性表达，而CD34表达呈阴性。骨碎补总黄酮组牙髓干细胞的碱性磷酸酶活性、钙结节形成能力和磷酸化Akt蛋白相对表达量增加，较空白对照组差异有显著性意义，且随骨碎补总黄酮质量浓度的增加而升高，表现出一定浓度和时间依赖性。说明骨碎补总黄酮对大鼠牙髓干细胞成骨分化具有促进作用，且该作用可能是依赖PI3K/Akt通路所介导的。

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土鳖虫含药血清干预骨髓间充质干细胞的蛋白组学差异

仲卫红，齐振熙

中国组织工程研究 2013, 17 (1): 98-105. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2013.01.016

摘要（338）

PDF （330KB）（584）

背景：国内外学者对股骨头缺血性坏死做了大量研究，但股骨头缺血性坏死的确切发病机制仍未完全清楚。
目的：探讨土鳖虫含药血清干预骨髓间充质干细胞后抑制成脂分化和促进成骨分化的靶位蛋白或相关蛋白。
方法：第3代骨髓间充质干细胞分为空白对照组、激素组、土鳖虫组，分别用含空白血清、地塞米松磷酸钠注射液、土鳖虫含药血清+地塞米松磷酸钠注射液的DMEM培养基干预。3组干预6 d后运用同位素标记相对和绝对定量技术(iTRAQ)标记3组样本的蛋白，二维液相色谱质谱仪(2D LC-MS/MS)鉴定蛋白并进行相对定量分析。
结果与结论：以激素组为对照，在空白对照组中共有15种蛋白质出现显著的表达上调，12种出现下调蛋白；在土鳖虫组中共有16种蛋白质出现显著的表达上调，14种出现显著下调。其中Hspa1L和PrxⅤ蛋白可能是土鳖虫抗细胞凋亡的作用靶点。Serpinh1和ADP/ATP translocase 1蛋白可能是土鳖虫促进成骨分化的作用靶点。

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虫草多糖体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为类肝细胞样细胞

刘江凯，宋雅芳，刘友章，杨谕晨，张久梅

中国组织工程研究 2012, 16 (49): 9221-9225. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2012.49.018

摘要（388）

PDF （343KB）（533）

背景：如何促进骨髓间充质干细胞向肝细胞完全意义上的转化，以便更有效改善病变肝组织的结构和功能将成为未来相关研究的重中之重。
目的：探讨虫草多糖在体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为类肝细胞样细胞的可行性。
方法：采用贴壁法培养Wistar大鼠骨髓间充质干细胞，实验分3组对骨髓间充质干细胞进行诱导分化，虫草组培养液中加虫草多糖进行诱导，终末质量浓度为0.15 g/L；阳性对照组培养液中加肝细胞生长因子和表皮生长因子联合诱导，质量浓度分别为20 μg/L和10 μg/L；空白对照组仅用含体积分数为10%胎牛血清的DMEM培养液。
结果与结论：分离纯化的骨髓间充质干细胞经流式细胞仪检测显示CD34阴性表达，CD44阳性表达。诱导分化7 d时虫草组及阳性对照组细胞出现甲胎蛋白表达，14 d时表达增强，28 d时表达减弱，阳性对照组甲胎蛋白阳性率高于虫草组；诱导分化7 d时阳性对照组细胞角蛋白18出现表达，14 d时表达增强，虫草组则在14 d时出现表达，而后持续。诱导分化7 d时虫草组及阳性对照组白蛋白表达阴性，14 d时出现阳性。诱导分化14 d时虫草组及阳性对照组细胞糖原染色阳性，28 d时表达减弱。空白对照组结果皆为阴性。结果可见虫草多糖可以在体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为类肝细胞样细胞。

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