中国组织工程研究

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    农杆菌介导注射法建立番茄子叶瞬时表达系统
    郎遥玲, 王 倩, 陈 彬, 白国辉, 管晓燕, 刘建国
    中国组织工程研究    2023, 27 (34): 5462-5468.   DOI: 10.12307/2023.747
    摘要 （305）      PDF （1302KB）（60）   


    文题释义：

    植物表达载体pCAMBIA-E8-APB-DOCK8(简称pE8AD3)：为课题组构建，它是以pCAMBIA2301双元穿梭载体为骨架，将外源基因果实特异性启动子E8，APB中包含cat、PacA和ctxB基因以及胞质分裂专一蛋白8(DOCK8)依次构建到载体上。
    变异链球菌(Streptococcus mutans，S.mutans)：是人类最主要的致龋菌，其中主要的致龋毒力因子是表面蛋白和葡糖基转移酶，研究针对这2种致龋毒力因子的抗体，可以有效抑制龋病的发生和发展。
    转基因番茄口服防龋疫苗：番茄果实可直接生食，在全世界广泛种植且产量高，以番茄植物系统作为真核生物反应器，能有效对重组蛋白进行准确地加工和修饰，是一个理想的外源蛋白表达的工厂，利用转基因番茄生产口服疫苗能有效激发实验动物的黏膜免疫应答和体液免疫，具有较大的优势及广阔的应用前景。

    背景：转基因植物生产口服疫苗具有较大的优势及广阔的应用前景。目前，关于番茄瞬时表达系统的研究罕见报道，对番茄瞬时表达条件进行优化，可使植株的遗传转化效率大幅度提高。
    目的：利用农杆菌介导的注射法，建立番茄子叶瞬时表达系统，检测植物表达载体pCAMBIA-E8-APB-DOCK8中外源基因的转录水平。
    方法：通过对番茄无菌苗的培育，观察不同番茄品种的出芽数、成苗数及农艺学性状的差异显著性，筛选出适用于此实验的番茄品种，将前期构建的植物表达载体pCAMBIA-E8-APB-DOCK8转化到农杆菌EHA105中，通过对番茄子叶、注射农杆菌浓度、农杆菌注射量、生长苗龄以及共培养天数进行筛选，建立农杆菌介导的番茄子叶瞬时表达系统，观察报告基因的转录水平。

    结果与结论：初步建立番茄子叶瞬时表达系统，筛选出适合的番茄品种为欧洲大红(苹果型)，选材部位为番茄的子叶，注射农杆菌浓度A600为0.2-0.7，农杆菌注射量为50 μL，苗龄为7-10 d，共培养24-48 h。该实验为后期外源基因蛋白表达分析研究提供一种方便、快捷和有效的方法。

    https://orcid.org/0000-0003-2568-5838(郎遥玲) 

    中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料；口腔生物材料；纳米材料；缓释材料；材料相容性；组织工程

    多模态影像分子体外验证触液神经元的神经干细胞特性
    罗张荣, 曹 亮, 张 毅, 皮文俊, 李 青
    中国组织工程研究    2023, 27 (34): 5505-5509.   DOI: 10.12307/2023.751
    摘要 （197）      PDF （1659KB）（40）   


    文题释义：

    多模态影像分子：集合了2种及以上成像技术。该实验中的多模态影像分子包含了荧光成像和生物发光成像2种成像方式，可在体内、外示踪触液神经元。前者成像原理是影像分子在触液神经元中表达的绿色荧光蛋白经入射光照射后发出一定波长的出射光，通过荧光显微镜在体外示踪触液神经元，后者成像原理是影像分子在触液神经元中表达的荧光素酶与相应底物反应后发出探针信号，通过小动物活体成像仪在体内示踪触液神经元。
    触液神经元：是脊髓中央管内直接接触脑脊液并穿越实质的神经元亚群，100年前该细胞群被首次发现至今，其功能还不甚明了。以往研究认为其主要功能是机械和化学感受器，感受脑脊液的理化性质变化。课题组近期在体内、外首次发现触液神经元具有神经干细胞潜能。由于触液神经元在哺乳动物体内数量稀少，在脊髓中央管附近的细胞占比不超过5%，且目前尚无触液神经元细胞系的建立，因此需要获得纯度高且细胞活性好的触液神经元，同时获得的触液神经元能在体内、外被活体示踪，为将来运用触液神经元体内移植治疗脊髓损伤提供可靠细胞来源。

    背景：最近研究发现位于脊髓中央管附近的接触脑脊液神经元(简称触液神经元)具有神经干细胞潜能，但触液神经元在体外研究中纯度不高，且目前尚无体外示踪技术证明其神经干细胞特性。
    目的：通过多模态影像分子筛选并在体外验证触液神经元的神经干细胞特性。
    方法：根据触液神经元特异性表达Pkd2l1基因，针对Pkd2l1基因上游启动子设计一种使触液神经元特异性表达绿色荧光蛋白(GFP)的多模态影像分子慢病毒(Lentivirus-Pkd2l1-GFP-puromycin-luciferase)。从出生24 h 内C57BL/6 小鼠延髓组织中提取出原代神经干细胞贴壁培养，用多模态影像分子病毒转染含有触液神经元的原代神经干细胞，通过嘌呤霉素筛选并纯化触液神经元。对筛选纯化的触液神经元进行体外悬浮培养并连续传代4代以上，免疫荧光检测第3代触液神经元与神经干细胞标记物Nestin、Sox2共表达情况。通过对第3代触液神经元诱导分化培养，免疫荧光检测触液神经元与神经元标记物NeuN、星形胶质细胞标记物S100β、少突胶质细胞标记物O4的共表达情况。

    结果与结论：成功构建出多模态影像分子慢病毒，并且筛选纯化后的触液神经元能够存活、增殖并表达绿色荧光蛋白。绿色荧光蛋白阳性触液神经元能在体外连续传代4代以上，并表达神经干细胞标记物Nestin、Sox2。诱导分化后，绿色荧光蛋白阳性触液神经元表达神经元标记物NeuN、星形胶质细胞标记物S100β、少突胶质细胞标记物O4。结果表明：多模态影像分子病毒能特异性标记触液神经元，触液神经元在体外具有自我更新、多向分化能力，通过多模态影像分子在体外成功验证触液神经元具有神经干细胞特性。

    https://orcid.org/0000-0003-3259-2306 (罗张荣) 

    中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料；口腔生物材料；纳米材料；缓释材料；材料相容性；组织工程

    局部应用霉酚酸酯抑制成纤维细胞增殖及迁移预防硬膜外纤维化
    朱东明, 张 振, 张 杰, 颜连启
    中国组织工程研究    2022, 26 (16): 2551-2556.   DOI: 10.12307/2022.256
    摘要 （440）      PDF （980KB）（65）   

    文题释义：
    细胞增殖：是生物体的重要生命特征，细胞以分裂的方式进行增殖，单细胞生物以细胞分裂的方式产生新的个体，多细胞生物以细胞分裂的方式产生新的细胞，用来补充体内衰老或死亡的细胞。
    细胞迁移：也称为细胞爬行、细胞移动或细胞运动，是指细胞在接收到迁移信号或感受到某些物质的梯度后而产生的移动。细胞迁移为细胞头部伪足的延伸、新的黏附建立、细胞体尾部收缩在时空上的交替过程，是正常细胞的基本功能之一，是机体正常生长发育的生理过程，也是活细胞普遍存在的一种运动形式。

    背景：研究发现，椎板切除术后的硬膜外纤维化主要由成纤维细胞增殖及迁移造成，而霉酚酸酯能够抑制成纤维细胞的增殖和迁移。
    目的：探讨局部应用霉酚酸酯预防椎板切除术后硬膜外纤维化的作用及其可能机制。
    方法：①细胞实验：分别以0，0.01，0.1，1，10，100 μmol/L的霉酚酸酯溶液处理成纤维细胞24 h，采用CCK-8法检测细胞活性，选择较适宜的处理浓度进行后续的细胞实验。分别以0，0.1，1，10 μmol/L的霉酚酸酯溶液处理成纤维细胞24 h，EdU和细胞周期实验检测细胞增殖情况，划痕实验与transwell细胞迁移实验检测细胞迁移能力，Western blot检测细胞增殖相关蛋白(细胞核增殖抗原、Cyclin D1)与迁移相关蛋白(α-微管蛋白、黏着斑蛋白)的表达量。②动物实验：取48只成年SD大鼠，构建大鼠椎板切除模型，随机分4组：对照组将浸透生理盐水的棉片置于术后骨缺损区域，低、中、高浓度组分别将浸透2.5，5，10 g/L霉酚酸酯溶液的棉片置于术后骨缺损区域，术后4周取术区椎体进行组织学分析。
    结果与结论：①细胞实验结果：CCK-8检测显示，霉酚酸酯呈浓度依赖性抑制成纤维细胞的活性；EdU实验显示，霉酚酸酯呈浓度依赖性抑制成纤维细胞的增殖；流式细胞仪检测显示，0.1 μmol/L的霉酚酸酯溶液使细胞周期停滞在G0/G1期；划痕实验与transwell实验显示，霉酚酸酯呈浓度依赖性抑制成纤维细胞的迁移能力；Western blot检测显示，霉酚酸酯呈浓度依赖性抑制成纤维细胞增殖相关蛋白与迁移相关蛋白的表达；②动物实验结果：组织学观察显示，随着霉酚酸酯浓度增加，术区纤维化组织中成纤维细胞数量与胶原生成逐渐减少；③结果表明，椎板切除术后局部应用霉酚酸酯可有效预防硬膜外纤维化的发生，可能是通过抑制成纤维细胞的增殖和迁移发挥作用。

    https://orcid.org/0000-0001-7346-2167 (朱东明) 

    中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

    组织工程与再生医学领域的专利竞争态势
    张 婷，陈 娟，欧阳昭连，池 慧
    中国组织工程研究    2019, 23 (34): 5479-5485.   DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.1923
    摘要 （368）      PDF （26695KB）（132）   

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    文题释义：
    对组织工程与再生医学领域专利竞争态势研究的意义：通过对组织工程与再生医学领域近20年的全球专利申请、发明专利申请与授权、三方专利申请进行分析，从专利数量与质量、专利申请人区域分布、专利受理国家/地区、专利申请人、发明人、技术领域等角度展示该领域的技术开发现状与趋势，有助于了解该领域的全球竞争态势，揭示中国在该领域的技术实力水平，从情报学角度提供基于数据和事实的研究证据。
     
     
    背景：组织工程可以实现组织器官再生，是再生医学的关键研究领域，体现了再生医学的主要发展方向。专利是技术信息最有效的载体，通过对组织工程与再生医学领域的专利分析，从情报学角度为组织工程与再生医学领域提供新的研究视角，为技术开发提供一定的借鉴和参考。
    目的：通过对组织工程与再生医学领域的专利分析，揭示全球技术竞争态势。
    方法：对组织工程与再生医学领域近20年的全球专利申请、发明专利申请与授权、三方专利申请进行分析，从专利数量与质量、专利申请人区域分布、专利受理国家/地区、专利申请人、发明人、技术领域等角度展示该领域的技术开发现状与趋势，揭示中国在该领域的技术实力水平。
    结果与结论：全球组织工程与再生医学领域技术开发活跃，发展速度快，近3年尤为迅猛，创新性强，且已经产出一批具有较高市场价值的技术成果。中国组织工程与再生医学领域技术开发规模和增速均远超美国，是全球主要技术来源地之一。中国和美国是全球组织工程与再生医学领域最受关注的两大目标市场，且中国市场受关注程度持续快速升温。中国多家高校在组织工程与再生医学领域的技术开发规模跻身全球前列。中国发明人在组织工程与再生医学领域取得卓越研究成果。
    三种小鼠眼球组织石蜡切片固定液固定效果的比较
    孙 良, 徐 林
    中国组织工程研究    2019, 23 (34): 5492-5496.   DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.1414
    摘要 （871）      PDF （20831KB）（145）   

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    文题释义：
    石蜡切片：组织学常规制片技术中最为广泛应用的方法，石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构，也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法，而且也已被相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。教学中，光镜下观察切片标本多数是石蜡切片法制备的。活的细胞或组织多为无色透明，各种组织间和细胞内各种结构之间均缺乏反差，在一般光镜下不易清楚区别出；组织离开机体后很快就会死亡和产生组织腐败，失去原有正常结构，因此组织要经固定、石蜡包埋、切片及染色等步骤以免细胞组织死亡，而能清晰辨认其形态结构。
     
     
    背景：固定液是影响病理制片质量的重要因素，为了优化眼球组织病理学观察的条件，需要相对简便、实用和可靠的固定液。
    目的：比较3种固定液对小鼠眼球组织石蜡切片的影响，优化小鼠眼球组织石蜡切片的固定方法。
    方法：取30只BALB/c小鼠(济南朋悦实验动物繁育有限公司提供)眼球，随机分为3组，每组10只，分别固定于3种固定液中，即甲醛-戊二醛混合固定液、Davidson固定液和体积分数10%甲醛固定液，24 h后制作标本并进行苏木精-伊红染色，分析比较固定效果。动物实验获得山东省立第三医院伦理委员会批准，批准号：sdsldsyy-m-201801006。
    结果与结论：①各组大部分眼球大体标本均略有收缩变形；②苏木精-伊红染色显示，甲醛-戊二醛组眼球壁出现皱缩，晶状体结构较完整、清晰，中央区无破碎，细胞排列整齐有序；角膜成纤维细胞间出现较大空隙；视网膜组织明显脱落分离，各层细胞不清晰，细胞间可见明显空白裂隙；③苏木精-伊红染色显示，Davidson组视网膜轻微变薄，分层排列较平整，未见明显缺失，无明显脱落，各层细胞排列紧密整齐，细胞核各层核膜清晰，细胞无收缩、膨胀；角膜各层结构完整，无明显结构改变，未见脱片现象，各层结构清晰、无裂隙；晶状体结构中央区可见不同程度破碎、脱片、染色不连续；④苏木精-伊红染色显示，甲醛组角膜组织轻微收缩，角膜上皮各层结构较整齐、层次较分明，晶状体和视网膜结构基本完整，但晶状体组织皱缩破裂、空隙形成，细胞排列乱序，可见视网膜组织脱落，各层排列较平整，细胞结构基本清晰，细胞间可见明显空白裂隙；⑤结果表明对于苏木精-伊红染色，Davidson固定液对角膜和视网膜的固定效果较为理想，而甲醛-戊二酸混合固定液是固定小鼠眼球晶状体组织的较好方法。
    萝卜硫素干预纳米细菌诱导肾小管上皮细胞凋亡及线粒体自噬相关蛋白的表达
    蒲道静，郑 府，徐先顺，丁文娟，陈 艳，邹照银
    中国组织工程研究    2019, 23 (34): 5503-5507.   DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.1484
    摘要 （403）      PDF （17376KB）（110）   

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    文题释义：
    线粒体自噬：指细胞选择性清除受损、衰老的线粒体，从而维持细胞内环境稳定；是一种进化上保守的细胞过程，以清除功能失调或多余的线粒体，从而微调线粒体数和保持能量代谢；还一种特异性的过程，线粒体通透性孔道通透性的改变在这个过程中起着重要的作用。
    纳米细菌：胞内存在一种原核微生物，能通过100 nm的滤菌器，1990年Kajander等将此种微生物命名为纳米细菌。纳米细菌是革兰阴性菌，呈球状或球杆状，细胞壁厚，无荚膜与鞭毛结构，20-200 nm，可通过0.1-0.4 μm的滤菌膜，体积极小，通过电子显微镜和其他的高分辨率显微镜(如原子显微镜)可发现。
     
     
    背景：萝卜硫素能改善肾小管上皮细胞氧化应激损伤，抑制细胞凋亡，对肾小管上皮细胞损伤作用具有保护作用，但萝卜硫素对肾小管上皮细胞线粒体自噬的影响还有待研究。
    目的：验证萝卜硫素对纳米细菌诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)凋亡及线粒体自噬相关蛋白表达的影响。
    方法：研究方案的实施符合恩施土家族苗族自治州中心医院对研究的相关伦理要求。纳米细菌取自恩施土家族苗族自治州中心医院泌尿外科临床确诊肾结石且未服药或手术患者的尿液，患者对实验方案完全知情同意。将人肾小管上皮细胞HK-2分为3组：对照组、纳米细菌组及萝卜硫素干预组(给予纳米细菌刺激同时加30 μmol/L萝卜硫素)。采用CCK-8法检测HK-2细胞相对存活率，流式细胞仪检测HK-2细胞凋亡率，Western Blot方法检测凋亡相关蛋白(Bax和Bcl-2)及同源性磷酸酶张力蛋白诱导的激酶1(PINK1)/帕金蛋白(Parkin)介导的线粒体自噬相关蛋白PINK1、Parkin、LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ的表达。
    结果与结论：①萝卜硫素能有效改善纳米细菌对HK-2细胞增殖的抑制作用(P < 0.05)；②纳米细菌可上调促凋亡蛋白Bax表达，下调抗凋亡蛋白Bcl-2表达，诱导线粒体自噬相关蛋白PINK1、Parkin的表达及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值上升(P < 0.05)；而萝卜硫素处理可明显下调促凋亡蛋白Bax表达，上调抗凋亡蛋白Bcl-2表达，抑制PINK1、Parkin蛋白表达及LC3-Ⅱ/ LC3-Ⅰ比值(P < 0.05)；③结果说明，萝卜硫素可抑制纳米细菌诱导的肾小管上皮细胞HK-2的凋亡，缓解其由PINK1/Parkin介导的线粒体自噬。
    参考电极对面孔识别事件相关电位成分的影响
    王 毅, 黄 华, 赖虹宇, 张军鹏
    中国组织工程研究    2019, 23 (18): 2909-2914.   DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.1694
    摘要 （460）      PDF （709KB）（160）   

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    文题释义：
    头皮统计学参数映射：两种条件下，大脑皮质电位具有显著性统计学差异的分布情况，它会随参考电极的选择而发生改变。因此，在同一实验中，采用不同的参考电极方式可能会导致得出不同的实验结论。
    源定位：通过在头皮记录的事件相关电位来推算其颅内起源，即获得每个源区域的源活动。源定位结果显示各部分网格内的电流密度值，用以表示大脑皮质活动水平。
     
     
    背景：选择脑电图参考电极方式是分析事件相关电位的关键步骤，但是参考电极事件相关电位成分影响的相关研究较少。
    目的：从统计学和头皮电位拓扑学角度比较分析了平均参考、左耳乳突参考和零参考对面孔识别事件相关电位成分的影响。
    方法：使用的脑电图数据来自国际公开数据库Open fMRI中的多模态人类神经影像数据集。招募了19名正常或矫正视力正常的健康者进行视觉刺激试验，试验的视觉刺激因子分别为陌生人脸和扰乱人脸。使用brainstorm软件对3种参考(平均参考、左耳参考、零参考)方式下，在枕颞叶区域采集到的事件相关电位，进行N170潜伏期和幅值分析，并进行头皮电位拓扑图和源定位计算，对3种参考下的实验结果进行对比分析。
    结果与结论：①与扰乱人脸相比，陌生人脸诱发的事件相关电位N170有更短的潜伏期和更大N170幅值的特点，N170潜伏期没有显著性差异，N170幅值有显著性差异；②拓扑结果表明，在相同的刺激因子下大脑右侧颞叶比左侧枕叶活动更为强烈，且只有REST参考能够最好地揭示大脑右侧颞叶和前额叶区域在陌生人脸和扰乱人脸刺激时存在显著性差异；③结果说明，REST参考方式下得到的脑电图数据更加真实准确，这为进一步研究面孔识别神经机制提供了帮助，为面孔识别相关实验参考电极的选择提供依据。
    针刺与异常机械应力对大鼠椎间盘纤维环纳米级生物力学特性影响的对比
    李海涛，梁 婷，邵毅杰，陈 曦，杨惠林，罗宗平
    中国组织工程研究    2018, 22 (34): 5526-5517.   DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.0649
    摘要 （496）      PDF （897KB）（149）   

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    文题释义：
    复合改良型大鼠椎间盘退变模型：    放弃使用llizarov所使用的固定应力诱导椎间盘退变，转而采用距离缩短的方式压缩椎间盘诱导退变，具有操作简便、装置轻便、可重复性高的优点。
    原子力显微镜：微悬臂上尖细探针与受测样品之间的作用力引起微悬臂形变，利用激光束反射放大微悬臂形变的信号，达到以极高分辨率(纳米级)检测样本三维表面的目的，同时可以精确计算样本结构的力学特性。


    背景：目前关于椎间盘退变机制的研究仍不透彻，尤其是不同退变机制影响下退变椎间盘纳米级改变的研究几乎处于空白状态。
    目的：建立一种简便易行的大鼠尾椎椎间盘退变模型，探索针刺及异常机械应力退变机制对纤维环单根胶原纤维纳米级别生物力学特性的影响。
    方法：取8只骨发育成熟的雄性SD大鼠，手法定位每只大鼠第5-11尾椎间盘位置，其中Co5-Co6椎间盘为正常组；对Co6-Co7椎间盘实施半程穿刺操作(针刺组)；对第7-10椎间盘加装自行设计的外固定支架(其中Co8-Co9椎间盘为异常压应力组)；Co10-Co11椎间盘为邻近组。4周后，对大鼠尾椎行磁共振矢状位T2加权像扫描，椎间盘组织行苏木精-伊红与番红O-快绿染色，以及椎间盘组织纤维环内外层原子力显微镜观察。
    结果与结论：①异常压应力组、针刺组大鼠尾椎间盘MRI信号明显低于正常组及邻近组(P < 0.05)，正常组及邻近组尾椎间盘MRI信号无明显差异；②组织学观察显示，邻近组尾椎间盘组织表现与正常组相似；针刺组一侧纤维环明显紊乱、增厚且突入髓核区域之内，髓核与纤维环界限紊乱，穿刺一侧髓核内细胞数量明显下降，空泡状结构消失；异常压应力组纤维环髓核区域面积下降，髓核细胞数量减少、聚集，空泡状结构消失，髓核与纤维环界限清晰；③原子力显微镜观察显示，各组纤维环外层的胶原纤维弹性模量均高于内层(P < 0.05)；邻近组、异常压应力组纤维环内、外层的胶原纤维弹性模量与正常组比较无差异；针刺组纤维环内、外层的胶原纤维弹性模量大于正常组、异常压应力组(P < 0.01)；④结果表明与异常压应力诱导机制不同，针刺机制诱导的椎间盘退变纤维环胶原纤维表现出明显僵硬化现象。

    ORCID: 0000-0001-8655-1513(杨惠林)
    富血小板血浆与肌腱干细胞共混物干预跟腱病模型兔肌腱组织形态及金属蛋白酶1的表达
    咸 杰，何本祥，吴 骁，檀亚军
    中国组织工程研究    2018, 22 (6): 921-926.   DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.0069
    摘要 （400）      PDF （2341KB）（289）   

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    文题释义：
    富血小板血浆：是自体血小板的浓缩后的产物，通过采集外周血后二次离心后制备，其中的α-颗粒可释放许多生长因子和细胞因子，其生长因子含量高于正常血浆的3-5 倍，主要的生长因子包括有转化生长因子β、胰岛素样生长因子1、血管内皮生长因子等，这些因子能够在组织修复工程中发挥关键作用。
    前列腺素E2制作跟腱病模型的机制：可能是前列腺素E2能够使肌腱组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原细胞外基质发生改变，使Ⅰ型胶原纤维含量下降的同时，Ⅲ型胶原表达上升，降低其生物力学特性，其表现与因退变所致的改变一致；同时前列腺素E2能够刺激炎性递质的产生，增加血管通透性，促进炎性细胞的趋化与浸润，这一过程与肌腱病初期炎性改变吻合。
     
    背景：富血小板血浆针对组织重建修复的研究及应用一直是医学及生物工程学的研究热点。
    目的：观察富血小板血浆与肌腱干细胞共混物对肌腱病兔肌腱组织形态及金属蛋白酶1表达的影响。
    方法：将40只新西兰大白兔随机分为2组，模型组(n=32)在距左跟骨附着点约2 cm处注射前列腺素E2，1次/周，共4周，建立肌腱病动物模型；空白对照组(n=8)相同部位注射等量的生理盐水。4周后，将模型组随机分为4组，联合组于跟腱局部注射自体富血小板血浆与自体肌腱干细胞混合物，干细胞组注射自体肌腱干细胞，富血小板血浆组注射自体富血小板血浆，模型对照组注射等量的生理盐水，每3周1次，注射2次。注射6周后取跟腱组织标本，进行组织学检查及金属蛋白酶1检测。
    结果与结论：①苏木精-伊红染色：联合组纤维组织排列有序，纤维完整；干细胞组纤维组织有少许断裂，纤维排列较为整齐；富血小板血浆组纤维断裂明显，纤维结构松散；模型对照组肌腱纤维形态差，未见完整纤维结构，炎性细胞浸润明显；②Masson染色：联合组纤维组织有轻微波浪状改变，但纤维连续；干细胞组纤维组织轻微紊乱，组织无明显断裂，炎性细胞浸润明显；富血小板血浆组纤维组织断裂明显，胶原纤维明显减少，炎性细胞浸润明显；模型对照组已无明显纤维排列结构，炎性细胞浸润明显；③金属蛋白酶1水平：干细胞组、富血小板血浆组、模型对照组金属蛋白酶1水平高于空白对照组(P < 0.05)，联合组金属蛋白酶1水平与空白对照组接近(P > 0.05)；④结果表明：富血小板血浆与肌腱干细胞共混物可通过抑制肌腱细胞基质及胶原降解的恶性循环、下调肌腱细胞中金属蛋白酶1表达，延缓肌腱病炎性反应及退行性改变。
    血液透析导管中残留单体二苯基甲烷二异氰酸酯的检测
    黄元礼，孙 雪，柯林楠，王春仁
    中国组织工程研究    2018, 22 (6): 927-931.   DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.0070
    摘要 （626）      PDF （727KB）（733）   

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    文题释义：
    可耐受摄入量(tolerable intake，TI)：在规定时间周期内，根据体质量计算的被认为不会明显危害健康的对一种物质的日平均摄入量，通常用毫克每千克每日表示[mg/(kg•d)]。
    可耐受接触(tolerable exposure，TE)：可耐受摄入量，体质量和应用因子的乘积，其中，应用因子表示考虑医疗器械使用频次和与其他预期含有同一种物质的医疗器械一起使用时的数值。
     
    背景：目前，含聚氨酯医疗器械的质量控制文件和技术标准中均未明确残留单体二苯基甲烷二异氰酸酯(diphenylmethane diisocyanate，MDI)的控制指标及检测方法，考虑到MDI对人体具有致癌的潜在风险，为控制该类产品的安全有效性，应及早建立质量标准。
    目的：建立测量血液透析导管中残留单体MDI的测试方法，分析该产品的MDI溶出量对人体是否存在风险。
    方法：取血液透析导管样品用乙酸乙酯加热回流，采用气相色谱法分析MDI含量。色谱条件为：DB-5 MS色谱柱(30 m×0.25 mm)，起始温度60 ℃，保持5 min，然后以15 ℃/min升至280 ℃，保持6 min；进样口温度280 ℃；检测器：FID，温度 280 ℃；载气：氦气，99.999%。
    结果与结论：MDI在4.970-99.40 mg/L(r=0.999 64)范围线性关系良好；平均加标回收率为100.9%，相对标准偏差(RSD)=3.2%(n=6)。3批样品的MDI残留量低于可耐受接触量。该方法灵敏、快速、准确、专属性强，可为血液透析导管的质量标准研究提供依据。
    组织工程小口径血管的制备及性能检测
    马小龙，李温斌，辛志飞，李殿坤，周子凡，万局易，王坚刚
    中国组织工程研究    2018, 22 (6): 932-937.   DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.0071
    摘要 （509）      PDF （835KB）（347）   

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    文题释义：
    血管组织工程：在体外获取、纯化和扩增血管壁内皮细胞、平滑肌细胞和成纤维细胞，接种于管状组织工程支架材料上，体外培养同天然血管结构和功能相似的组织，植入体内一段时间后，支架材料降解消失，剩余部分经生长和重塑具有体内正常血管所需的生物学功能和生物力学强度。
    组织工程血管支架材料的特点：在组织学上，血管壁细胞外基质主要由3层结构组成，其中中膜层有重要的生理意义，主要成分有胶原纤维和弹性蛋白，这种结构赋予血管良好的机械性质和顺应性。所以，在设计和制造血管组织工程支架材料时，应尽可能地模拟自然血管的细胞外基质的成分、三维结构、生理功能及机械性能。
     
    背景：由于材料来源问题、材料血液相容性和抗凝性能不佳，致使小口径组织工程血管无法应用于临床。
    目的：探究经过脱细胞处理后绵羊颈动脉的理化性能及力学性能，为制备组织工程血管寻找合适材料。
    方法：获取新鲜离体绵羊颈动脉，分2组处理，对照组进行修剪及清洗处理，冻存备用；实验组进行修剪及清洗处理后，以Triton X-100+脱氧胆酸钠盐+EDTA进行脱细胞处理24 h，漂洗72 h，接着以RNA酶/DNA酶消化24 h，漂洗24 h后冻存备用。将两组血管进行苏木精-伊红染色、胶原纤维染色、弹力纤维染色及电镜扫描观察，检测血管的抗拉力强度、血管壁张力及厚度。
    结果与结论：①胶原纤维染色显示，对照组胶原纤维排列整齐，致密，无明显断痕；实验组胶原纤维排列整齐，致密，无明显断痕；②苏木精-伊红染色显示，对照组细胞核分布在血管的内膜、中层、外膜，纤维走行规则；实验组纤维走行规则，较松散，内膜、中层、外膜无明显细胞核分布；③弹力纤维染色显示，对照组弹力纤维分布规则，整齐，主要在于血管的中层及外膜；实验组弹力纤维走行规则，但较疏松，主要分布在于血管中层及外膜；④电镜扫描显示，实验组血管保持原有的形态，未见细胞结构残留，胶原纤维走行规则，连续性完整，孔隙结构较均匀；⑤实验组血管厚度低于对照组(P < 0.01)，两组拉力强度无差异，均可承受46.55 kPa的压力；⑥结果表明，经脱细胞处理的绵羊颈动脉，在最大程度去除抗原性的基础上保留了血管必要的力学性能。
    液质谱联用法同时检测体外生殖培养液中的3种能量成分
    黄元礼，柯林楠，王春仁，杨昭鹏
    中国组织工程研究    2017, 21 (2): 291-295.   DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2017.02.023
    摘要 （373）      PDF （981KB）（286）   

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    文题释义：
    人类辅助生殖技术    ：指采用医疗辅助手段使不育夫妇妊娠的技术，包括人工授精和体外受精-胚胎移植及其衍生技术两大类。
    体外生殖培养液：是含有能量成分、渗透压调节成分、酸碱度调节成分、氨基酸、生长因子等，保证生殖细胞在体外可以存活并成长的一种培养液。不同的体外生殖细胞使用不同的培养液，在不同的生长阶段，也会使用不同的培养液，因此体外生殖培养液的成分对最终体外生殖手术的成功率有很大影响。

    背景：目前，对于体外生殖培养液的质量控制文件或技术标准中，对成分含量的指标及检测方法未做明确规定，为保证该类产品的安全有效性，应及早建立质量标准。
    目的：建立采用液相质谱联用法检测体外生殖培养液中葡萄糖、乳酸钠、丙酮酸钠3种指标成分的方法，分析不同用途培养液中3种成分的含量。
    方法：采用超高效液相色谱三重四级杆质谱联用法，使用SUPELCO Discovery HS F5-3色谱柱(15 cm×2.1 mm，3 μm)，流动相为0.1%甲酸水溶液-0.1%甲酸乙腈溶液，梯度洗脱，流速0.35 mL•min-1，柱温40 ℃；质谱采用电喷雾离子源，负离子模式扫面，扫描方式为多反应监测。
    结果与讨论：葡萄糖、丙酮酸钠、乳酸钠分别在0.1-10 mg/L(r=0.999 8)、0.05-5 mg/L(r=0.999 4)、0.1-       10 mg/L(r=0.999 4)范围线性关系练好；平均加样回收率在96.4%-98.1%之间，相对标准偏差均小于2.8%。说明采用液相质谱联用法检测体外生殖培养液灵敏、快速、准确、专属性强，可为体外生殖培养液的质量标准研究提供依据。
    基于计算机模拟研究雷公藤治疗类风湿关节炎的药效物质基础与分子作用机制
    严培晶，郑春松，叶蕻芝，郑丽秀，鲍红娟
    中国组织工程研究    2016, 20 (12): 1818-1824.   DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.12.022
    摘要 （383）      PDF （519KB）（551）   

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    文题释义：

    中药计算机模拟：指应用化学空间、分子对接、生物网络等计算机方法，模拟中药的药效物质基础及药代动力学等。
    系统描述雷公藤中不同化合物在治疗类风湿关节炎中的作用：通过计算机模拟方法，从分子水平直观展示了雷公藤中不同化合物与类风湿关节炎治疗靶点的相互作用，明确了其药效物质基础和作用靶点，揭示了其治疗类风湿关节炎作用机制可能是通过抗炎、调节免疫应答、抑制软骨和骨的破坏、改善类风湿关节炎血瘀证，上述为从雷公藤中寻找新的类风湿关节炎治法和新药开发奠定基础。

     

    背景：雷公藤及某些单体在治疗类风湿关节炎上临床效果确切，而较为系统探讨雷公藤药效物质基础与分子作用机制的研究较少。
    目的：探讨雷公藤治疗类风湿关节炎的药效物质基础与分子作用机制。
    方法：借助Discovery Studio 4.0模拟平台，构建雷公藤化学成分分子数据集，比较其与Therapeutic Target Database中类风湿关节炎治疗药物分子的化学空间，在此基础上，采用网络药理学方法探讨其与类风湿关节炎治疗靶点的相互作用。

    结果与结论：雷公藤分子与类风湿关节炎药物分子具有相似的化学空间，其药效物质基础含有苯乙烯南蛇碱、表没食子儿茶精、雷公藤新碱和雷公藤甲素等46个化合物，可作用于肿瘤坏死因子α、JAK-1、基质金属酶1、基质金属酶3和基质金属酶9等10个靶点，来抗炎、调节免疫应答、抑制软骨和骨的破坏、改善类风湿关节炎血瘀证。计算机模拟直观展示了雷公藤治疗类风湿关节炎的多成分、多靶点、多途径作用。 

    ORCID: 0000-0001-5612-2865(严培晶)

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    新型材料磁性附着体设计模型的建立
    姜 瑞，聂二民，张春元，曾尽娣，谈济州
    中国组织工程研究    2015, 19 (3): 460-464.   DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2015.03.024
    摘要 （355）      PDF （365KB）（532）   

    背景：研究表明钕铁硼是体积小、质量轻、高性能的新型永磁体材料，最新研制出来的钕铁硼永磁体(钕铁硼N52)磁能积可达53MGOe，目前尚未应用于口腔领域。
    目的：建立钕铁硼永磁体的磁性附着体模型并进行模型结构的评价。
    方法：根据设计模型结构图，磁体结构采用闭路磁场中的“杯型”结构，按照尺寸对购买的钕铁硼磁性材料、铁镍软磁合金和HPM75不锈钢进行切割，分别制备出永磁体、衔铁、磁轭、垫片、隔磁环，然后进行组装、焊接、镀铬与充磁。制作10个试件，测试并记录每个试件的磁力和磁感应强度。
    结果与结论：成功建立了10个闭路式磁性附着体模型，其模拟磁力和实际磁力分别为87.6 mT和(48.930±2.827) mT，侧面模拟磁感应强度和实际磁感应强度分别为0.331 mT和2.7 mT，顶面模拟磁感应强度和实际磁感应强度分别为6.52 mT和18.7 mT。3D软件模拟钕铁硼N52磁性附着体中磁体和衔铁之间距离与磁力的关系显示，磁体和衔铁从紧密接触到二者之间分开距离0.1 mm的过程中，随着磁体与衔铁之间距离的增加，磁力迅速下降；当磁体和衔铁分开距离0.1 mm时，磁力由最大下降为最初固位力的24%左右，随着二者分开距离继续增加，磁力下降趋势减缓，当分开距离达到0.5 mm时，磁力几乎为零。结果表明新型材料磁性附着体设计模型能够满足临床需求，磁场泄露符合安全标准。


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    次氯酸钠溶液对不同时期粪肠球菌生物膜的药物作用
    王珊珊，董 明，王丽娜，牛卫东
    中国组织工程研究    2014, 18 (52): 8509-8514.   DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2014.52.026
    摘要 （313）      PDF （696KB）（611）   

    背景：有研究指出粪肠球菌能在营养物质缺乏、抗菌药存在的恶劣环境中生存，形成再感染而影响根管再治疗效果。也有实验表明次氯酸钠溶液作为根管冲洗液对残留的粪肠球菌具有很强的清除作用。

    目的：建立不同时期粪肠球菌生物膜，研究不同浓度次氯酸钠溶液对其的作用效果。
    方法：建立对数期、稳定期、饥饿期粪肠球菌生物膜模型，以1%，2.5%，5.25%次氯酸钠溶液分别作用于各时期粪肠球菌生物膜表面30 s、5 min、10 min，同时用激光共聚焦显微镜观察用药后生物膜情况。

    结果与结论：在相同浓度次氯酸钠溶液作用下，饥饿期粪肠球菌生物膜中的活菌降低量低于稳定期与对数期粪肠球菌生物膜中的活菌降低量(P < 0.05)；在1%次氯酸钠溶液作用下，稳定期与对数期粪肠球菌生物膜中的活菌降低量差异有显著性意义(P < 0.05)；在2.5%，5.25%次氯酸钠溶液作用下，稳定期与对数期粪肠球菌生物膜中的活菌降低量差异无显著性意义(P > 0.05)。在同一时期生物膜模型下，5.25%次氯酸钠溶液作用下的活菌降低量高于2.5%、1%次氯酸钠溶液作用下的活菌降低量(P < 0.05)；2.5%次氯酸钠溶液作用下的活菌降低量高于1%次氯酸钠溶液作用下的活菌降低量，但仅在药物作用30 s时差异有显著性意义(P < 0.05)。结果表明，在相同药物浓度、相同作用时间内，饥饿期粪肠球菌生物膜较对数期、稳定期粪肠球菌生物膜对次氯酸钠溶液更具耐药性；在相同作用时间内，5.25%次氯酸钠溶液对饥饿期粪肠球菌生物膜的杀菌效果最佳。


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    铍对牙龈卟啉单胞菌菌毛基因型的影响
    黄 睿，李庆艳，林 华，郭 巍，高 宁
    中国组织工程研究    2014, 18 (30): 4816-4822.   DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2014.30.010
    摘要 （308）      PDF （1852KB）（375）   

    背景：含铍合金口腔修复体在口腔湿润的环境中合金易被腐蚀、溶解而释放出铍离子，铍离子对牙周病主要致病菌——牙龈卟啉单胞菌菌毛基因型是否有影响？
    目的：检测铍离子对牙龈卟啉单胞菌菌毛基因型的影响。
    方法：将复苏后的牙龈卟啉单胞菌置于含铍离子浓度为10×10-6，5×10-6，1.25×10-6的人工唾液中厌氧培养48 h，采用PCR扩增、测序的方法从分子水平检测铍离子对牙龈卟啉单胞菌菌毛基因型的影响。
    结果与结论：在实验条件下培养后的牙龈卟啉单胞菌fimA基因出现突变现象，表现为：当铍离子浓度为5×10-6时，DNA 217、和257位点处出现G/A套峰，与其他组测得的碱基G不同，表明此处有可疑的碱基变化，部分碱基由G转变为A；所有浓度都发现DNA 101位点处插入由7个A碱基组成的碱基(段)，目前研究尚未发现突变的发生与铍离子浓度存在直接相关关系。铍离子可影响牙龈卟啉单胞菌fimA基因发生变化，可能引起其阅读框架的移位及编码的蛋白合成异常，进而引起牙龈卟啉单胞菌黏附能力及致病力的改变。


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    超声波对高分子材料降解过程启动的控制
    高喜翔，张 建，陈 兵，谷涌泉，李建新，张淑文，叶 霖，冯增国
    中国组织工程研究    2014, 18 (30): 4868-4872.   DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2014.30.018
    摘要 （355）      PDF （753KB）（667）   

    背景：可降解高分子材料在植入体内后其降解过程就开始启动，如何能控制可降解材料降解过程的启动，做到定时、定位启动，国内外鲜有研究。
    目的：研究超声波对高分子材料降解过程启动的控制。
    方法：将ε-己内酯/L-丙交酯共聚物制成样本的可降解内核，在其表面通过4种方法涂覆低密度聚乙烯疏水涂层：①先将内核表面黏附一薄层CaCl2粉末，而后将聚乙烯涂覆于其表面。②先将聚乙烯涂覆于内核表面，静置粗化3 h。③将内核表面黏附一薄层CaCl2粉末，而后将聚乙烯涂覆于其表面，静置粗化3 h。④直接将聚乙烯涂覆于内核表面。将4种样本包埋于带皮猪肉内进行体外超声波轰击实验。
    结果与结论：方法1、4制备的样本，在轰击前其疏水层能够保护内核材料，其浸泡液在631 nm处无吸收峰值；轰击后由于疏水层破损，甲苯胺蓝染料被释放出来，造成溶液颜色改变及631 nm处吸收峰值明显升高。方法2、3制备的样本，在轰击前其疏水层未能起到保护作用，其浸泡液在631 nm处出现吸收峰值。电镜扫描显示4组样本在超声波作用下发生了明显表面容貌变化。表明采用低密度聚乙烯制作的疏水层可以保护内核ε-己内酯/L-丙交酯共聚物材料，以体外超声波作为诱发因素，可以控制可降解内核降解过程的启动。


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    高效液相色谱-示差折光检测法测定辅助生殖培养液中果糖及葡萄糖的含量
    孙 雪，黄元礼，柯林楠
    中国组织工程研究    2014, 18 (30): 4873-4877.   DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2014.30.019
    摘要 （663）      PDF （661KB）（606）   

    背景：目前国内外辅助生殖培养液的质量技术标准中对成分含量的指标以及检测方法未进行明确要求，亟待建立相关的质量标准弥补这一空缺，从而对辅助生殖培养液的质量进行有效的控制。
    目的：建立辅助生殖培养液中果糖及葡萄糖含量的评价方法，为其质量技术标准提供制定依据。
    方法：采用高效液相色谱法，Rezex RCM-Monosaccharide Ca2+(8%)色谱柱(300.0 mm×7.8 mm)，流动相为超纯水，流速：0.6 mL/min，柱温80 ℃，示差折光检测器。
    结果与结论：葡萄糖峰与果糖峰的分离度为3.2。葡萄糖浓度和果糖质量浓度分别在30.1-502 mg/L(r=0.999 8)和102-408 mg/L(r=0.999 8)内，线性关系良好，重复性实验的相对标准偏差分别为0.17%和0.40%，稳定性实验的相对标准偏差分别为0.22%和0.73%。葡萄糖组和果糖组的平均加样回收率分别为1.22%和1.38%。方法学验证符合要求。供试品1的葡萄糖和果糖含量分别为96.7 mg/L和208.5 mg/L，供试品2的葡萄糖和果糖含量分别为99.6 mg/L和197.4 mg/L。文章填补了国内外辅助生殖培养液质量技术标准中关于组分含量的空缺，对辅助生殖培养液的质量控制具有重要的实际意义。


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    芍药苷对白色念珠菌生物膜的作用
    王殿明，王健平，杨景云，张慧明，刘淑红
    中国组织工程研究    2014, 18 (25): 4038-4042.   DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2014.25.018
    摘要 （398）      PDF （732KB）（866）   

    背景：研究证实中药赤芍有效成分对白色念珠菌有较好的抑制作用，但其单体芍药苷对白色念珠菌生物膜是否有抑制作用未见报道。 
    目的：观察芍药苷对体外白色念珠菌生物膜的影响。
    方法：用RPMI-1640分别按2倍稀释法制备5个浓度梯度(4，2，1，0.5，0.25 g/L)的芍药苷溶液。用RPMI-1640稀释洗必泰为5个浓度梯度(2%，1%，0.5%，0.25%，0.125%)。采用琼脂扩散法检测不同浓度梯度芍药苷或洗必泰对白色念珠菌的抑菌直径。MTT法检测不同浓度洗必泰或芍药苷对白色念珠菌细胞黏附的作用，以及对白色念珠菌生物膜的抑制作用，并且利用激光共聚焦扫描显微镜和死菌活菌荧光染色技术相结合方法观察常态及药物作用下的白色念珠菌生物膜。
    结果与结论：洗必泰与芍药苷均有抑菌能力，抑菌环直径与药物浓度呈正相关；除2 g/L芍药苷组与1%，2%洗必泰组抑菌环直径无差异外，其余组间两两比较差异均有显著性意义。不同质量浓度芍药苷对白色念珠菌的细胞黏附都具有抑制作用，对白色念珠菌生物膜也具有抑制作用，且抑制率与药物质量浓度呈正相关。观察48 h时常态生物膜结构中大部分是活菌，有少量死菌存在；随芍药苷质量浓度改变白色念珠菌生物膜中死菌比例不断增高，其抑菌活性相对弱于洗必泰。表明芍药苷对体外白色念珠菌生物膜有较明显的抑制作用。

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    不同龋敏感儿童牙菌斑内微生物群落的分子生态学特点
    刘莉霞，陈 琳
    中国组织工程研究    2014, 18 (25): 4043-4050.   DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2014.25.019
    摘要 （404）      PDF （801KB）（690）   

    背景：玻璃离子水门汀充填的儿童牙体仍易发生继发龋现象，与充填材料表面牙菌斑内复杂微生物群落具有密切关系，而传统微生物学方法无法获知牙菌斑微生物的重要信息。
    目的：利用先进的现代分子生态学技术解析不同龋敏感儿童玻璃离子水门汀表面牙菌斑内微生物群落结构与重要致龋微生物的数量水平。
    方法：选择3-5岁儿童24名，按乳牙龋失补牙面指数不同分为无龋组、中龋组和高龋组，每组8名。采集各组儿童全口牙面菌斑，利用变性梯度凝胶电泳进行微生物群落多样性分析与微生物种群鉴定，利用荧光原位杂交考察致龋微生物Streptococcus spp.的数量分布，利用实时定量PCR考察重要致龋菌Streptococcus mutans占总菌的相对数量。
    结果与结论：无龋组牙菌斑内微生物群落的多样性显著高于中龋组和高龋组(P < 0.05)，中龋组和高龋组中大量富集的某些微生物可能在龋病发展过程中起重要作用。3组样本共检出16个微生物菌属，Streptococcus spp.和Actinomyces spp.可能是高龋组中重要的致龋微生物。Streptococcus spp.和Streptococcus mutans在高龋组中所占比例显著高于无龋组和中龋组(P < 0.01)。综合来看，研究采用的分子生态学技术可以较好反映牙菌斑内与致龋过程密切相关的复杂微生物群落。


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