富血小板血浆与肌腱干细胞共混物干预跟腱病模型兔肌腱组织形态及金属蛋白酶1的表达

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.0069

中国组织工程研究 ›› 2018, Vol. 22 ›› Issue (6): 921-926.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.0069

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富血小板血浆与肌腱干细胞共混物干预跟腱病模型兔肌腱组织形态及金属蛋白酶1的表达

咸杰，何本祥，吴骁，檀亚军

成都体育学院，四川省成都市 610041

收稿日期:2017-09-08 出版日期:2018-02-28 发布日期:2018-02-28
通讯作者: 何本祥，博士，主任医师，博士生导师，成都体育学院，四川省成都市 610041
作者简介:咸杰，男，1989年生，汉族，硕士，主要从事运动创伤防治研究。
基金资助:
四川省科技厅重点项目(2016JY0052)；四川省科技厅支持项目(2014SZ0003)；成都体育学院硕士点建设基金项目(16SSZX01)

Autologous platelet-rich plasma in combination with tendon stem cells to treat tendinopathy in a rabbit model: histomorphological changes of the tendon tissue and matrix metalloproteinase 1 expression

Xian Jie, He Ben-xiang, Wu Xiao, Tan Ya-jun

Chengdu Sport Institute, Chengdu 610041, Sichuan Province, China

Received:2017-09-08 Online:2018-02-28 Published:2018-02-28
Contact: He Ben-xiang, M.D., Chief physician, Doctoral supervisor, Chengdu Sport Institute, Chengdu 610041, Sichuan Province, China
About author:Xian Jie, Master, Chengdu Sport Institute, Chengdu 610041, Sichuan Province, China
Supported by:
the Key Project of Science and Technology Department of Sichuan Province, No. 2016JY0052; Science and Technology Support Project of Science and Technology Department of Sichuan Province, No. 2014SZ0003; the Master Project of Chengdu Sport Institute, No. 16SSZX01

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：

富血小板血浆：是自体血小板的浓缩后的产物，通过采集外周血后二次离心后制备，其中的α-颗粒可释放许多生长因子和细胞因子，其生长因子含量高于正常血浆的3-5 倍，主要的生长因子包括有转化生长因子β、胰岛素样生长因子1、血管内皮生长因子等，这些因子能够在组织修复工程中发挥关键作用。

前列腺素E2制作跟腱病模型的机制：可能是前列腺素E2能够使肌腱组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原细胞外基质发生改变，使Ⅰ型胶原纤维含量下降的同时，Ⅲ型胶原表达上升，降低其生物力学特性，其表现与因退变所致的改变一致；同时前列腺素E2能够刺激炎性递质的产生，增加血管通透性，促进炎性细胞的趋化与浸润，这一过程与肌腱病初期炎性改变吻合。

背景：富血小板血浆针对组织重建修复的研究及应用一直是医学及生物工程学的研究热点。

目的：观察富血小板血浆与肌腱干细胞共混物对肌腱病兔肌腱组织形态及金属蛋白酶1表达的影响。

方法：将40只新西兰大白兔随机分为2组，模型组(n=32)在距左跟骨附着点约2 cm处注射前列腺素E2，1次/周，共4周，建立肌腱病动物模型；空白对照组(n=8)相同部位注射等量的生理盐水。4周后，将模型组随机分为4组，联合组于跟腱局部注射自体富血小板血浆与自体肌腱干细胞混合物，干细胞组注射自体肌腱干细胞，富血小板血浆组注射自体富血小板血浆，模型对照组注射等量的生理盐水，每3周1次，注射2次。注射6周后取跟腱组织标本，进行组织学检查及金属蛋白酶1检测。

结果与结论：①苏木精-伊红染色：联合组纤维组织排列有序，纤维完整；干细胞组纤维组织有少许断裂，纤维排列较为整齐；富血小板血浆组纤维断裂明显，纤维结构松散；模型对照组肌腱纤维形态差，未见完整纤维结构，炎性细胞浸润明显；②Masson染色：联合组纤维组织有轻微波浪状改变，但纤维连续；干细胞组纤维组织轻微紊乱，组织无明显断裂，炎性细胞浸润明显；富血小板血浆组纤维组织断裂明显，胶原纤维明显减少，炎性细胞浸润明显；模型对照组已无明显纤维排列结构，炎性细胞浸润明显；③金属蛋白酶1水平：干细胞组、富血小板血浆组、模型对照组金属蛋白酶1水平高于空白对照组(P < 0.05)，联合组金属蛋白酶1水平与空白对照组接近(P > 0.05)；④结果表明：富血小板血浆与肌腱干细胞共混物可通过抑制肌腱细胞基质及胶原降解的恶性循环、下调肌腱细胞中金属蛋白酶1表达，延缓肌腱病炎性反应及退行性改变。

ORCID: 0000-0002-0665-8861(何本祥)
中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

关键词: 富血小板血浆, 肌腱干细胞, 肌腱病, 运动医学, 金属蛋白酶, 动物模型, 组织修复, 生物材料

Abstract:

BACKGROUND: The research and application of platelet-rich plasma in tissue regeneration and restoration have always been an issue of concern in the medicine and bioengineering fields.

OBJECTIVE: To analyze the effects of platelet-rich plasma in combination with tendon stem cells on histomorphology change and matrix metalloproteinase 1 expression of the tendon tissues in a rabbit model of Achilles tendinopathy.

METHODS: Forty New Zealand white rabbits were randomly divided into model group (n=32) and blank control group (n=8). In the model group, the animals were injected about 2 cm distant to the attachment point of the left calcaneus with prostaglandin E2 (once a week, for totally 4 weeks) to make the animal model of tendinopathy. The rabbits in the blank control group were injected the equal amount of normal saline. After 4 weeks, model rabbits were randomly divided into four subgroups: combination group, tendon stem cell group, platelet-rich plasma group and model control group, with eight rabbits in each group. Platelet-rich plasma and tendon stem cells, alone or in combination, and normal saline were injected into the corresponding group, twice with an interval of 3 weeks. At 6 weeks after injection, the tendon tissue was collected and stained for histological examination and detection of matrix metalloproteinase 1 expression.

RESULTS AND CONCLUSION: (1) Hematoxylin-eosin staining: the tendon fibers in the combinationgroup were intact and arranged orderly; in the tendon stem cell group, the tendon fibers were almost arranged orderly despite some fractured fibers; in the platelet-rich plasma group, fiber breakage and loose fiber structure were observed; in the model control group, there were no intact tendon fibers, with the presence of inflammatory cell filtration. (2) Masson staining: The tendon fibers in the combination group had slight wave-shaped changes but the fibers were not cut off; in the tendon stem cell group, the tendon fibers were slightly in disorder, but with the intact structure, and obvious inflammatory cell filtration was observed; in the platelet-rich plasma group, fiber breakage, reduced collagen fibers and inflammatory cell filtration were obviously observed; in the model control group, there were no intact tendon fibers, and inflammatory cell filtration was clearly visible. (3) The expression of matrix metalloproteinase 1: Compared with the blank control group, the expression of matrix metalloproteinase 1 was significantly higher in the other groups except the combination group (P < 0.05). There was no significant difference in the expression of matrix metalloproteinase 1 between the combination group and blank control group (P > 0.05). To conclude, the combination of platelet-rich plasma and tendon stem cells can inhibit the vicious cycle of degeneration of collagen and extracellular matrix, reduce the expression of matrix metalloproteinase 1 in tenocytes, and delay inflammation responses and degeneration due to tendinopathy.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

Key words: Platelet-Rich Plasma, Stem Cells, Tendinopathy, Metalloproteases, Tissue Engineering

中图分类号:

R318

咸杰，何本祥，吴骁，檀亚军. 富血小板血浆与肌腱干细胞共混物干预跟腱病模型兔肌腱组织形态及金属蛋白酶1的表达[J]. 中国组织工程研究, 2018, 22(6): 921-926.

Xian Jie, He Ben-xiang, Wu Xiao, Tan Ya-jun. Autologous platelet-rich plasma in combination with tendon stem cells to treat tendinopathy in a rabbit model: histomorphological changes of the tendon tissue and matrix metalloproteinase 1 expression[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2018, 22(6): 921-926.

图/表（结果） 6

2.1 肌骨超声检测造模情况空白对照组动物肌腱连续，回声均匀，未见异常血流信号；模型组动物可见明显肌腱增粗，边界不清，回声强度不均匀，尤其跟骨上2 cm处可见多处强度不等回声团，周围筋膜回声增强，血流信号较丰富，见图1。

2.2 一般情况所有参与实验的动物均顺利完成实验周期，造模组动物造模后均能正常活动、进食及饮水，体质量未出现明显下降，未出现跟腱红肿、流脓等感染表现，未出现其他疾病情况。

2.3 血小板计数情况联合组及富血小板血浆组均需收集富血小板血浆，其二次离心后与原全血中血小板浓度情况详见表1，2。

2.4 肌腱干细胞流式细胞仪鉴定结果流式细胞仪鉴定结果显示，肌腱干细胞CD34(内皮细胞表面标记物)、CD44(骨髓充间质细胞标记物)表面标记物表达均为阴性，CD90(成纤维细胞标记物)表面标记物表达为阳性，见图2；从而排除内皮细胞、造血来源充间质细胞的污染，确定所培养的为肌腱干细胞。

2.5 各组肌腱标本苏木精-伊红染色观察结果空白对照组纤维组织排列整齐有序，纤维整体性强，纤维染色清晰完整，细胞密度均匀，细胞核无变形，无新生血管生成；联合组纤维组织排列有序，纤维完整，细胞核形态以长梭形为主，但纤维排列紧凑，纤维排列无明显波浪形表现，细胞密度正常，无明显炎性细胞浸润；干细胞组可见纤维组织有少许断裂，纤维排列较为整齐，纤维略松散，整体呈轻微波浪形表现，炎性细胞浸润明显；富血小板血浆组可见较为明显的纤维断裂，纤维结构松散，呈波浪形改变，细胞核变圆，同时细胞密度增加，炎性细胞浸润明显；模型对照组肌腱纤维形态差，未见完整纤维结构，纤维排列成明显波浪形改变，细胞核明显变圆，细胞密度增加明显，新生血管异常增生，炎性细胞浸润明显，见图3。

2.6 各组肌腱组织Masson染色观察结果 Masson染色能够较为明显地显示肌肉纤维组织，空白对照组肌肉纤维排列整齐，整体性强，纤维染色充分；联合组纤维组织有轻微波浪状改变，但纤维连续，无明显炎性细胞浸润；干细胞组纤维组织轻微紊乱，但组织无明显断裂，排列成波浪样改变，炎性细胞浸润明显；富血小板血浆组纤维组织断裂明显，胶原纤维明显减少，纤维呈波浪样变，排列紊乱，卷曲，同时细胞核变形明显，炎性细胞浸润明显；模型对照组已无明显纤维排列结构，纤维失染明显，甚至可见脂肪样改变，炎性细胞浸润明显，见图4。

2.7 各组肌腱细胞中金属蛋白酶1水平表达检测结果空白对照组、联合组、干细胞组、富血小板血浆组、模型对照组的金属蛋白酶1水平分别为(0.08±0.02)，(0.12±0.02)，(1.31±0.07)，(1.35±0.03)，(2.89±0.15)ng/L。4组间金属蛋白酶1水平比较差异有显著性意义(F=16.186，P=0)，联合组与空白对照组比较差异无显著性意义(P=0.265)，干细胞组、富血小板血浆组比较差异无显著性意义(P=0.315)，干细胞组、富血小板血浆组、模型对照组金属蛋白酶1水平高于空白对照组、联合组(P均=0)，干细胞组、富血小板血浆组金属蛋白酶1水平低于模型对照组(P均=0)。

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引言

富血小板血浆是自体血小板的浓缩后的产物，通过采集外周血后二次离心后制备，其中的α-颗粒可释放许多生长因子和细胞因子，生长因子含量高于正常血浆3-5倍^[1]，而其中主要的生长因子包括有转化生长因子β、胰岛素样生长因子1、血管内皮生长因子等，这些因子能够在组织修复工程中发挥关键作用^[2]。与此同时，富血小板血浆制备简便，费用低廉，极易在临床推广，治疗肌腱病有较好的前景。

肌腱干细胞近年来相继在人类、大鼠及兔的肌腱组织中被发现。研究表明，肌腱干细胞除维持肌腱生理平衡的作用外，还被认为可能与退行性肌腱病有关，且在肌腱病退行性改变过程中起着重要作用^[3]。与其他成人干细胞一样，肌腱干细胞也具有多向分化的潜能，表达干细胞相关基因(如Oct-4、SSEA-1/4、Nucleostemin)，肌腱内环境及相关因子的改变可使肌腱干细胞的行为发生改变^[4]。干细胞多向分化能力被认为能够恢复及重建受损肌腱的结构和功能，最近的一项研究结果证实，肌腱干细胞可有效修复肌腱损伤^[4]。与其他组织来源的干细胞相比，肌腱来源的干细胞表达更多的肌腱特异性基因。同时，肌腱干细胞增殖潜能更好，可产生更多肌腱细胞的细胞外基质成分(如蛋白聚糖、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原等)^[4]，这些性能都表明肌腱干细胞有较好修复受损肌腱纤维组织的能力。此次实验通过观察富血小板血浆与肌腱干细胞共混物对兔跟腱病动物模型中金属蛋白酶1的表达及肌腱组织切片形态的影响，一方面探究共混物对肌腱病是否有治疗效果，为肌腱病的临床推广打下基础；另一方面对共混物对特定细胞因子表达水平影响的机制做研究，为富血小板血浆及肌腱干细胞对肌腱病的治疗寻求理论依据。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

材料方法

1.1 设计随机对照动物实验。

1.2 时间及地点于2016年6至10月在成都体育学院运动医学重点实验室(国家体育总局运动医学重点实验室、四川省运动医学重点实验室)完成。

1.3 材料

实验动物：成年新西兰纯种雄性大白兔40只，体质量1.80-2.50 kg，平均(2.14±0.16)kg，由达硕生物科技有限公司提供，许可证号：SCXK(川)2013-24。清洁级环境条件下饲养于成都体育学院国家体育总局运动医学重点实验室动物实验中心饲养室，分笼单独饲养，标准兔饲养笼40个，大小为0.8 m×0.7m×0.6 m，每笼1只动物，室内通风、干燥，室温20-25 ℃，相对湿度55%-70%，每天更换清洁饮水，清除粪、尿，清洁笼具底盘。饲料为国家标准啮齿动物饲料，由达硕生物科技有限公司提供。成都体育学院动物实验室情况，

主要试剂：金属蛋白酶1 ELISA试剂盒(四川生工科技有限公司)；PE anti-rabbit CD90、CD34 Anti-rabbit(Santa Cruz公司)；FITC anti-rabbit CD44(Serotec 公司)。

1.4 实验方法

1.4.1 动物分组及模型建立 40只成年雄性新西兰大白兔予以适应性喂养1周后，采用数字随机法分为模型组(n=32)和空白对照组(n=8)^[⁵^]。

造模方法：模型组参照Khan等^[⁶^]的造模方式，针对左跟腱造模，右跟腱留作干细胞取材。造模前先剪去局部被毛，然后用镊子夹棉球蘸脱毛剂，涂抹在已剪去被毛的部位，3-5 min后用温水洗净备用。取俯卧位将实验动物固定在兔手术操作台上，体积分数75%乙醇和碘伏消毒手术部位，铺无菌洞巾，以左跟骨附着点近端约距离2.0 cm处注射前列腺素E2 0.2 mL(300 ng/0.2 mL)^[⁶^]，1次/周，共4次，术毕取无菌棉签按压局部防止渗血。术后实验动物均放回笼舍正常饲养，不予制动措施。空白对照组在相同部位注射等量医用生理盐水。

造模成功标准：连续4周注射前列腺素E2后，为了确认动物造模是否成功，从所有造模动物中选取8只进行造模患肢肌骨超声检测，分析局部注射肌腱形态。

1.4.2 造模后的干预治疗将造模成功的32只兔再次通过数字分组法随机分为4组^[⁵^]，联合组、干细胞组、富血小板血浆组与模型对照组，每组8只。

富血小板血浆的制备：参照Landesberg等^[⁷^]文献，采用二次离心法制备富血小板血浆。自联合组、富血小板血浆组兔耳中心动脉采血约5 mL，注入含有肝素钠抗凝的真空采血管内，反复晃动采血管数次，使抗凝剂与血液充分混合，以防止血液凝固。将装有5 mL兔动脉血的肝素钠抗凝真空采血管放入离心机中，液体配平后先行进行第1次离心，200×g离心10 min。离心后采血管中血液分为3层：上层为血清，中层为富含血小板与白细胞的白膜，下层为红细胞。用1 mL注射器轻轻吸取白膜下1.0-2.0 mm界面以下的红细胞并弃去。剩余部分再次放入离心机，进行二次离心，200×g离心10 min。离心后可见样本依旧为第1次离心后3层，此时用1 mL注射器吸取上层上方3/4部分并弃去，剩余部分即为富血小板血浆。采用此种方法二次离心可制备约0.5 mL富血小板血浆。采用EDTA-K2 抗凝真空采血管采集2 mL动脉血，直接在血细胞分析仪中进行血小板计数，作为常规全血中血小板含量。采用血细胞分析仪中检测富血小板血浆中血小板含量。

兔肌腱干细胞的制备：联合组、干细胞组兔腹腔麻醉后，取其右后肢跟腱，放入PBS中简单清洗2次，同时使用组织剪剪去多余组织和肌肉组织。此后，将其转移入另一个15 mL离心管中，剪成1 mm×1 mm大小的组织块。在离心管中加入5 mL10%胶原酶开始消化肌腱组织，同时用组织剪继续修剪组织并使胶原酶与组织充分混合，此后转入37 ℃水浴箱中消化1 h，在此过程中每隔5 min 摇匀离心管1次；消化完成后，通过细胞筛网将悬液转移至另一 15 mL离心管，同时加入5 mL PBS并吹打均匀。300×g离心4 min，离心后去上清，同时清洗细胞1次。将分离下来的细胞用完全培养基重悬，接种至明胶包被后的6孔板中，每3 d换一次液；将细胞静置于37 ℃、体积分数5%CO₂环境的细胞孵箱中。当细胞克隆繁殖至孔板面积90%时，开始传代，传代密度以5 000-8 000/cm²为准。将第3代细胞接种至12孔板中，用于进行下一步实验。

肌腱干细胞的流式检测：收集约1×10⁶的第3代细胞，200×g离心3 min后弃去上清。 PBS重悬后，分别取100 µL细胞悬液加入6个Ep管内。以1∶500的浓度分别于各管加入不同抗体，避光孵育1 h。实验管加入2 mL PBS，300×g离心3 min后弃去上清。实验管加入500 µL PBS重悬，上机检测。

富血小板血浆与肌腱干细胞共混物的制备：参照Wang等^[⁸^]的方法，联合组将1×10⁷L^-1的自体肌腱干细胞PBS细胞悬液与浓度为10%的富血小板血浆萃取液按1∶1体积比混合。

干预治疗手段：动物模型稳定后，联合组左跟腱局部注射自体富血小板血浆及肌腱干细胞共混物1 mL，3周1次，共2次；干细胞组左跟腱局部注射细胞浓度1×10⁷ L^-1的自体第3代肌腱干细胞悬液1 mL(以PBS重悬)，3周1次，共2次；富血小板血浆组左跟腱局部注射自体富血小板血浆1 mL，3周1次，共2次；模型对照组左跟腱局部注射等量生理盐水，3周1次，共2次。

1.5 主要观察指标治疗6周后用空气栓塞法处死所有实验动物。

组织形态学观察：收集所有动物左下肢跟腱组织观察大体形态，PBS漂洗2次，置于40 g/L多聚甲醛中固定24 h，石蜡包埋，纵向切片，常规苏木精-伊红染色及Masson染色，光镜下对比各组间肌腱纤维形态。

金属蛋白酶1水平测定：采用双抗夹心法对样本中肌腱细胞内金属蛋白酶1水平进行检测。

1.6 统计学分析采用Spass 16.0对所得数据进行统计学分析，组间数据比较采用方差分析，P < 0.05表示差异有显著性意义。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

讨论

此次实验通过对比多项造模方法^[9]，采取局部注射前列腺素E2对动物肌腱进行化学造模。化学造模法简便易行且易于控制，同时周期较短，容易观察。Wang等^[10]通过对肌腱进行机械牵拉后，发现肌腱内前列腺素E2含量增加；因此在肌腱病的发病原理中，前列腺素E2的参与十分重要。肌腱病的组织病理学表现表明，肌腱胶原纤维损伤及新生血管生成与自我修复共存，最终细胞基质重塑的平衡被打破^[11]。前列腺素E2的造模机制可能是其能够使肌腱组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原细胞外基质发生改变，使Ⅰ型胶原纤维含量下降的同时，Ⅲ胶原表达上升，降低其生物力学特性，其表现与因退变所致的改变一致；同时前列腺素E2能够刺激炎性递质的产生，增加血管通透性，促进炎性细胞的趋化与浸润，这一过程与肌腱病初期炎性改变吻合。从结果来看，所有造模动物在连续4周注射前列腺素E2后，肌骨彩超显示肌腱纤维增粗明显，跟骨上2 cm出出现多处大小不等不均匀回声团，局部筋膜组织回声增强，血流信号丰富，这些结果与肌腱病影像学表现一致，提示造模成功。

众多研究已表明肌腱细胞能够合成大量多聚糖及胶原等物质，并分泌到细胞外基质中，这些基质在肌腱机械及生物力学中发挥极为重要的作用。金属蛋白酶是一大类内肽酶家族，其主要作用能够使细胞外基质降解，其中金属蛋白酶1广泛参与肌腱组织的细胞外基质降解^[12]。因此，金属蛋白酶1的表达水平在肌腱组织损伤及修复过程中具有重要意义，其表达水平与肌腱修复水平呈负相关影响。此次实验6周治疗后，联合组金属蛋白酶1水平相比其余3组最低，接近于空白对照组(P > 0.05)，从侧面说明富血小板血浆与肌腱干细胞共混物对肌腱组织修复具有较为理想的结果；模型对照组金属蛋白酶1表达水平最高，与其余3组比较差异有显著性意义，表明其胶原及肌腱细胞外基质降解程度高，同时也提示肌腱胶原及蛋白多糖受到破坏，造模成功；富血小板血浆组、干细胞组金属蛋白酶1水平位于联合组、模型对照组之间，均低于模型对照组(P < 0.05)，表明两组胶原及细胞外基质均有不同程度降解的同时，也表明金属蛋白酶1在富血小板血浆组、干细胞组中的表达受到抑制，侧面说明富血小板血浆及肌腱干细胞有促进肌腱细胞外基质重塑及胶原修复的作用，两组组间比较差异无显著性意义，说明肌腱干细胞与富血小板血浆在防治肌腱胶原退化及促进细胞外基质重建的作用差异并不大。

临床采用的富血小板血浆制取方法多种多样，但目前主要采取的是仍以二次离心法为主，而在这之中最为常见的有Petrungaro法、Landesberg法、Aghaloo法^[13]，此次实验采用Landesberg法对全血细胞进行二次离心收集富血小板血浆，结果显示此法制备操作简便，制取后的富血小板血浆浓度高，其血小板比例高于全血细胞3-5倍，符合国内外文献要求。肌腱干细胞是近年来新发现的一类肌腱来源的干细胞。肌腱干细胞作为修复肌腱损伤有其特有的优势，肌腱干细胞取材简便，体外易于培养及克隆传代，同时其具有与宿主相当的抗原，避免了自身机体产生排异反应及炎性反应，避免了机体释放自身免疫物质及炎性物质，避免了给机体带来进一步的损伤与破坏。此外，相关研究表明，肌腱干细胞能够在体外实验中表达特异性的Ⅰ、Ⅲ型胶原及蛋白多糖，并且有持续合成Ⅰ型胶原的能力^[8]。此次实验采用富血小板血浆与肌腱干细胞共混，旨在通过富血小板血浆的诱导，增强肌腱干细胞的多向分化表达能力，促进Ⅰ型胶原的合成及细胞外基质的重塑；同时，富血小板血浆自体富含多种细胞活性因子，这些活化的因子自身既具有组织修复功能又能抑制金属蛋白酶等内肽水解酶对肌腱组织及蛋白多糖的降解，使富血小板血浆与肌腱干细胞的作用发挥最大化^[14]。

肌腱病发病原因复杂，病理机制尚未完全明了。检索大量研究文献得出，经反复过度使用后，肌腱细胞外基质及胶原与蛋白多糖修复损伤动态平衡被打破，这一过程中金属蛋白酶大量表达，致使胶原与蛋白多糖等细胞外基质被降解^[15-17]；同时肌腱病初期炎性细胞的浸润与多种炎性因子的分泌，使肌腱纤维及腱周产生损伤及疼痛^[18]。此次实验观察兔跟腱病动物模型经富血小板血浆与肌腱干细胞共混物干预后，光镜下苏木精-伊红染色及Masson染色均表明其纤维组织排列及分布均接近正常肌腱组织，基于此，富血小板血浆与肌腱干细胞共混物对肌腱病中退变肌腱的修复与保护作用是通过富血小板血浆诱导肌腱干细胞多向分化，使其最大限度表达Ⅰ、Ⅲ型胶原及蛋白多糖等特异性矿物质的同时，持续合成Ⅰ型胶原，以期恢复肌腱纤维的机械强度及生物力学性能；同时，富血小板血浆所释放的细胞活性物质能够有效抑制金属蛋白酶1的表达，减少因金属蛋白酶1所致的胶原及细胞外基质降解^[19]，抑制了肌腱细胞基质及胶原降解的恶性循环，达到延缓肌腱病炎性反应及退行性改变，抑制其病变进程，使细胞外基质物质重新恢复产生与降解的动态平衡，达到修复受损肌腱组织和缓解肌腱病症状的和抑制其病变进程的作用。

尽管如此，此次实验仍旧存在诸多不足，富血小板血浆的制备过程尚未统一，且富血小板血浆在制备过程中可产生含白细胞的富血小板血浆及不含白细胞的富血小板血浆^[20]；二者在对膝关节骨性关节炎干预过程中的机制及对比尚需进一步完善。此次实验中富血小板血浆与肌腱干细胞以1∶1的比例共混，然而其是否是共混的最佳比例仍有待多个不同梯度浓度的进一步研究。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

富血小板血浆与肌腱干细胞共混物干预跟腱病模型兔肌腱组织形态及金属蛋白酶1的表达

Autologous platelet-rich plasma in combination with tendon stem cells to treat tendinopathy in a rabbit model: histomorphological changes of the tendon tissue and matrix metalloproteinase 1 expression

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