水解南珠液能促进人微血管内皮细胞的增殖和迁移

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.0215

中国组织工程研究 ›› 2018, Vol. 22 ›› Issue (16): 2564-2569.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.0215

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水解南珠液能促进人微血管内皮细胞的增殖和迁移

岑妍慧1，2，林湧3，林江1，贾微1，赵静1

1广西中医药大学，广西壮族自治区南宁市 530001；2广西中医药大学第一附属医院，广西壮族自治区南宁市 530023；3北海市宝珠林海洋科技有限公司，广西壮族自治区北海市 536000

收稿日期:2018-03-01 出版日期:2018-06-08 发布日期:2018-06-08
通讯作者: 林江，博士研究生，教授，广西中医药大学，广西壮族自治区南宁市 530001 通讯作者：贾微，硕士，副教授，广西中医药大学，广西壮族自治区南宁市 530001
作者简介:岑妍慧，女，1980年生，广西壮族自治区合浦县人，汉族，2012年广西医科大学毕业，博士，副教授，主要从事海洋药物开发的相关研究。并列第一作者：林湧，男，1971年生，广西壮族自治区北海市人，汉族，1993年广西大学毕业，高级工程师，主要从事珍珠等海洋生物的研发。
基金资助:
国家级海洋经济创新发展示范城市(北海市)产业链协调创新项目(Bhsfs002)；广西自然科学基金重点项目(2015GXNSFDA227002)：合浦珍珠“解毒生肌”药效机制及物质基础研究；广西科技基地和人才专项(桂科AD17195080)；“北部湾海洋医药研究与开发”广西特聘专家岗位；中国博士后科学基金(2017M623297XB)；广西中医药大学岐黄工程高层次人才团队培育项目(2018001)

Hydrolysis of Nanzhu fluid promotes proliferation and migration of human microvascular endothelial cells

Cen Yan-hui1, 2, Lin Yong3, Lin Jiang1, Jia Wei1, Zhao Jing1

1Guangxi University of Chinese Medicine, Nanning 530001, Guangxi Zhuang Autonomous Region, China; 2the First Affiliated Hospital of Guangxi University of Chinese Medicine, Nanning 530023, Guangxi Zhuang Autonomous Region, China; 3Beihai Baozhulin Marine Technology Co., Ltd., Beihai 536000, Guangxi Zhuang Autonomous Region, China

Received:2018-03-01 Online:2018-06-08 Published:2018-06-08
Contact: Lin Jiang, Doctoral candidate, Professor, Guangxi University of Chinese Medicine, Nanning 530001, Guangxi Zhuang Autonomous Region, China Corresponding author: Jia Wei, Master, Associate professor, Guangxi University of Chinese Medicine, Nanning 530001, Guangxi Zhuang Autonomous Region, China
About author:Cen Yan-hui, M.D., Associate professor, Guangxi University of Chinese Medicine, Nanning 530001, Guangxi Zhuang Autonomous Region, China; the First Affiliated Hospital of Guangxi University of Chinese Medicine, Nanning 530023, Guangxi Zhuang Autonomous Region, China Lin Yong, Senior engineer, Beihai Baozhulin Marine Technology Co., Ltd., Beihai 536000, Guangxi Zhuang Autonomous Region, China Cen Yan-hui and Lin Yong contributed equally to this work.
Supported by:
the National Industrial Chain Coordination Innovation Project of Marine Economy Innovation and Development Model City (Beihai City), No. Bhsfs002; the Key Project of Natural Science Foundation of Guangxi Zhuang Autonomous Region, No. 2015GXNSFDA227002; the Science and Technology Base and Talent Specialization of Guangxi Zhuang Autonomous Region, No. AD17195080; Guangxi Specialist Posts of “Beibu Gulf Marine Medicine Research and Development”; the National Postdoctoral Science Foundation of China, No. 2017M623297XB; Qihuang Engineering High-Level Talent Team Cultivation Project of Guangxi University of Chinese Medicine, No. 2018001

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：
南珠：即合浦珍珠，其作为传统名贵中药材，入药始见于《雷公炮炙论》，此后历代本草均有记载，其性味甘、咸、寒，归心、肝经，功效为解毒生肌、安神定惊、明目消翳等。
血管内皮细胞功能障碍：指血管内皮细胞对非适应性功能状态所作的有限调整，通常是内皮功能特征的改变或功能的部分缺失。

摘要
背景：珍珠有镇静安神的药效，临床可应用于高血压病，但水解珍珠液对高血压病的防治作用及相关机制研究目前报道尚少。
目的：观察水解南珠液对人微血管内皮细胞生物学行为和分泌功能的影响。
方法：人微血管内皮细胞培养，传代。实验分为水解南珠液高、中、低剂量组：分别加入含质量浓度为120，60，30 mg/L水解南珠液的培养基200 μL；对照组：只加 200 μL的培养基。CCK8法检测人微血管内皮细胞增殖情况，流式细胞术检测细胞的周期分布，TUNEL法了解细胞的凋亡情况，Transwell法检测细胞迁移情况，硝酸还原酶法检测细胞的NO分泌量及化学荧光法检测细胞活性氧的分泌情况。
结果与结论：①与对照组相比，低、中、高剂量水解南珠液对人微血管内皮细胞均有促增殖作用，且浓度越高，对细胞的促增殖能力越强(P < 0.05)，因此确定120 mg/L水解南珠液为最佳作用浓度；②与对照组相比，水解南珠液组细胞S期和G2期百分比增加，而G1期的细胞比例则减少(P < 0.05)，提示水解南珠液可以促进血管内皮细胞的周期进展；③各组均未发现有细胞核被染成绿色的凋亡细胞；④水解南珠液组的迁移细胞数比对照组显著增加(P < 0.05)；⑤水解南珠液组细胞NO分泌量明显高于对照组(P < 0.05)，活性氧量显著低于对照组(P < 0.05)；⑥结果表明，水解南珠液能促进体外培养的人微血管内皮细胞的增殖和迁移，并具有促进其分泌NO及抑制其活性氧分泌的功能，在保护内皮细胞功能方面可能有积极的作用。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程
ORCID: 0000-0002-0003-4708(林江)

关键词: 合浦珍珠, 南珠, 水解, 人微血管内皮细胞, 增殖, 迁移, TUNEL法, Transwell法, 生物学行为

Abstract:

BACKGROUND: Pearl has the tranquilizing effect, and it can be applied in the treatment of hypertension. However, there is little report on the prevention and cure effect and mechanism of hydrolyzed pearl liquid on hypertension.
OBJECTIVE: To observe the effect of hydrolysis of Hepu pearl (hydrolyzed Nanzhu fluid) on the biological behavior and secretion of human microvascular endothelial cells.
METHODS: Human microvascular endothelial cells were cultured and passaged. There were four groups, and the microvascular endothelial cells were incubated in the 200 μL culture medium containing nothing (control group), and 120, 60 and 30 mg/L hydrolysis of Nanzhu fluid. The cell proliferation and migration was detected by cell conuting kit-8 assay and Transwell assay respectively; the cell cycle distribution was tested by flow cytometry; the cell apoptosis was assayed by TUNEL method; the secretion of nitric oxide and reactive oxygen species was tested by nitrale reduetase and chemical fluorescence method, respectively.
RESULTS AND CONCLUSION: Compared with the control group, hydrolysis of Nanzhu fluid significantly promoted the proliferation of microvascular endothelial cells in a manner-dependent manner (P < 0.05), suggesting the optimal concentration was 120 mg/L. Compared with the control group, the percentage of cells in S and G2 phase was significantly increased, and the percentage of cells in the G1 phase was significantly reduced in the hydrolysis of Nanzhu fluid group (P < 0.05), indicating hydrolysis of Nanzhu fluid could promote cell cycle progression. Apoptotic cells with green-stained nucleus were invisible in both groups. The number of cell migration in the hydrolysis of Nanzhu fluid group was significantly more than that in the control group (P < 0.05). Compared with the control group, there was a significant increase in the nitric oxide secretion, and a significant decrease in the production of reactive oxygen species in the hydrolysis of Nanzhu fluid group (P < 0.05). To conclude, hydrolysis of Nanzhu fluid can promote the proliferation and migration of human microvascular endothelial cells in vitro, and has the function of promoting the secretion of nitric oxide and inhibiting reactive oxygen species secretion, implying its positive role in the protection of endothelial cell function.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

Key words: Hypertension, Endothelial Cells, Cell Movement, Tissue Engineering

中图分类号:

R318

岑妍慧，林湧，林江，贾微，赵静. 水解南珠液能促进人微血管内皮细胞的增殖和迁移[J]. 中国组织工程研究, 2018, 22(16): 2564-2569.

Cen Yan-hui1, 2, Lin Yong3, Lin Jiang1, Jia Wei1, Zhao Jing1. Hydrolysis of Nanzhu fluid promotes proliferation and migration of human microvascular endothelial cells[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2018, 22(16): 2564-2569.

图/表（结果） 2

2.1 人微血管内皮细胞株的体外培养及形态学特征观察体外培养的人微血管内皮细胞增殖较快，贴壁后很快展开(图1A)，约48 h即显示出典型的形态学特征：细胞边界清楚，折光性强，细胞连接成片，呈“地砖样”外貌(图1B，C)，细胞铺满瓶底面积约80%即可传代，传代后细胞分裂增殖更快速，生长更旺盛。取传代后对数生长期的细胞进行后续指标的检测。

2.2 CCK8法检测人微血管内皮细胞株增殖不同剂量水解南珠液对细胞增殖活性的影响结果见表1，可见低、中、高剂量水解南珠液对人微血管内皮细胞均有促增殖作用，且质量浓度越高，对细胞的促增殖能力越强。虽然低剂量组和中剂量组均能促进细胞增殖，但与对照组比较无明显差异 (P > 0.05)。而高剂量组与中剂量组、低剂量组以及对照组比较差异均有显著性意义(P < 0.05)，可见水解南珠液浓度越高，细胞增殖越快，且高浓度水解南珠液对细胞的增殖作

用最大(图2)。因此确定水解南珠液质量浓度为120 mg/L时为最佳作用浓度，用于后续实验研究。

2.3 流式细胞术检测细胞周期分布情况两组细胞周期的检测结果如图3显示，与对照组比较，水解南珠液组细胞S期和G₂期百分比增加，而G₁期的细胞比例则减少(P < 0.05)，见表2。

2.4 水解南珠液作用前后的细胞凋亡情况 TUNEL检测中DAPI可以将凋亡的或未凋亡的细胞均染成蓝色，但只有凋亡的细胞核中才有 FITC-12-dUTP的掺入而定位的绿色荧光。图4可以看到细胞质和细胞核被DAPI染成蓝色，却均未发现有细胞核被染成绿色的细胞。

2.5 Transwell实验了解细胞的迁移能力的改变接种细胞于Transwell小室16 h后，倒置相差显微镜下计数各组细胞的穿膜数，结果显示空白对照组的穿膜细胞数为(34.00±2.86)个/视野(图5A)，水解南珠液组的穿膜细胞数为(66.00±3.08)个/视野(图5B)。经统计学分析，水解南珠液组的迁移细胞数比对照组显著增加(P < 0.05)。

2.6 NO的分泌量检测收集2组细胞的培养液，测量相应的吸光度值后，计算出各组细胞培养液中NO浓度并进行对比分析，结果发现水解南珠液高剂量组细胞NO分泌量为(119.86±0.16) μmol/L，明显高于对照组(91.32± 0.84) μmol/L(P < 0.05)，见图6。

2.7 活性氧的分泌情况采用DCFH-DA细胞内活性氧检测探针了解各组细胞活性氧的分泌情况，最后使用荧光酶标仪检测细胞内活性氧，设置参数直接检测孔板中各组细胞内的荧光强度，记录分析，结果显示水解南珠液组分泌的活性氧量(0.86±0.18)显著低于对照组(1.23±0.14)，差异有显著性意义(P < 0.05)，见图7。

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引言

高血压病是最常见的心血管疾病，同时又是心脑血管疾病的主要危险因素^[1]。合浦珍珠又称为“南珠”，作为传统名贵中药材，入药始见于《雷公炮炙论》，此后历代本草均有记载，其性味甘、咸、寒，归心、肝经，功效为解毒生肌、安神定惊、明目消翳等。目前，珍珠无论是作为单方还是复方君药已广泛应用于临床。近十多年来，珍珠应用于高血压的临床疗效也得到了证实^[2-4]。人们发现珍珠的主要药效成分之一氨基酸，如丙氨酸、精氨酸在治疗高血压方面有显著的功效，且具有安全性高等优点^[5-7]。但珍珠难溶于水，服食和外用时人体一般只能吸收极少量的部分，而水解南珠液既保存了珍珠全成分，又使之成活性态易被人体吸收，充分发挥珍珠生理效应，因此水解南珠液适宜在临床应用，但迄今为止未见任何有关水解南珠液治疗高血压病及相关作用机制的报道，因此有必要展开相关的研究^[8-9]。课题组成员前期成功研发了水解珍珠技术(见林江等国家发明专利ZL95106283.2；ZL95108034.2；ZL95107894.1)，选用道地药材合浦珍珠进行水解，研发了水解南珠液、水解南珠粉、珍蜜片等系列产品，其中“水解南珠液”、“水解南珠粉”获广西壮族自治区自治区高新技术产品认证(P0505B0005)、“珍蜜片”获得广西医疗机构中药民族药制剂注册批件(桂药制字Z20140001)。另外，在前期的初步研究中还发现了水解南珠液对血管内皮细胞生长的促进作用，这为进一步研究水解珍珠对血管内皮细胞的生物学行为和分泌功能的影响提供了思路和依据。近年来研究发现血管内皮功能障碍在高血压的发生、发展过程中起重要作用，血管内皮细胞功能障碍不仅可能是高血压病的病因之一，它还能加快高血压病的进展，影响高血压病的预后^[10-15]。所谓血管内皮功能障碍指的是内皮细胞在病理状态下出现血管活性物质合成和释放间的失衡，如内皮结构受损、一氧化氮的合成和释放减少、活性氧分泌增多，引起内皮依赖性舒张功能下降，最终导致血压升高，因此改善血管内皮功能对于预防和治疗高血压都有着重要的意义^[16-18]。

当前研究基于这些研究理论，拟从阐释珍珠“解毒生肌”功效入手，在前期的研究基础上体外培养人微血管内皮细胞，从细胞水平观察课题组成员研发的水解南珠液对细胞的生物学行为及分泌作用的影响，以了解水解南珠液在保护内皮细胞功能方面可能存在的作用，从而探讨水解南珠液在治疗高血压方面的作用机制，为开展水解南珠液防治高血压作用机制的研究提供实验基础。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

材料方法

1.1 设计对比观察实验。

1.2 时间及地点于2016年9月至2017年6在广西中医药大学基础医学院医学创新综合实验室完成。

1.3 材料人微血管内皮细胞购自北京北纳创联生物技术研究院；水解南珠液由北海市宝珠林海洋科技有限公司提供。

实验主要试剂和仪器：DMEM 培养液(Hyclone 公司)，胎牛血清(杭州四季青公司)，CCK8(杭州四季青公司)，水解南珠液(1 g/L，批号20160511，北海市宝珠林海洋科技有限公司)，普通光学显微镜(Olympus，日本)，荧光显微镜(LEICA，德国)。

1.4 方法

1.4.1 药物的准备实验时量取质量浓度为1 g/L的水解南珠液60 mL，然后加入无血清的DMEM培养液稀释至 100 mL，配成600 mg/L的样品液，过微孔滤膜除菌后备用。实验时依所需浓度进一步稀释。

1.4.2 人微血管内皮细胞株的培养、传代及分组用含体积分数10%胎牛血清的高糖DMEM培养基培养，并放置在体积分数5%CO₂，37 ℃培养箱中培养。每2 d换一次培养液，换液前后均在倒置相差显微镜下观察细胞形态，待细胞铺满瓶底面积约60%时使用0.25%胰蛋白酶进行传代。连续传2代后，取对数生长期的人微血管内皮细胞3-5代，用胰蛋白酶消化成单细胞悬液，接种于96孔塑料培养板，密度为0.5×10⁴/孔，每孔加入100 μL的细胞悬液和100 μL的DMEM培养基，常规培养24 h后吸弃原培养液。

实验分组：水解南珠液组，分为高、中、低剂量组，分别加入已经配置的含质量浓度为120，60，30 mg/L水解珍珠液的培养基200 μL；对照组每孔只加200 μL的培养基。细胞均隔天换液，换液时按组别加入相应的培养基。

1.4.3 CCK8法测定珍珠水解液对各组人微血管内皮细胞株的增殖影响作用细胞的生长情况观察通过细胞计数试剂盒-8(Cell counting kit-8，CCK8)检测吸光度值并绘制生长曲线。首先调节细胞浓度为4×10⁷L^-1, 设3个复孔，每孔加入10 μL CCK8，37 ℃孵育4 h，酶标仪上450 nm处读出吸光度值，连测15 d，以只加培养液和CCK8的孔为对照，以3个孔的吸光度值数减去对照孔的值为分析数。以吸光度值均数值为纵坐标，时间(d)为橫坐标绘制细胞生长曲线^[19]。

1.4.4 流式细胞术检测细胞周期分布按照Cycle test^TMplus DNA reagent试剂盒操作说明进行，分别收集处于对数生长期的4组细胞，用0.25%胰蛋白酶消化，离心后弃上清，以试剂盒中的缓冲液洗涤细胞1次，收集并调整细胞浓度至1×10⁷L^-1；加入250 μL A液，轻柔震荡使其混匀，室温下作用10 min；加入250 μL B液，轻柔震荡使其混匀，室温下作用10 min；加入200 μL预冷至4 ℃的C液，避光，冰上孵育10 min；上机前用200目筛网过滤一次，加样入流式细胞分析仪样品管，记录激发波长488 nm处红色荧光。

1.4.5 细胞凋亡的检测采用TUNEL 法进行。准备好细胞爬片，其中对照组为用 DNA酶Ⅰ处理的细胞。每个样本滴加100 μL 1×Equilibration Buffer使其全部覆盖待检样本区域，室温孵育10-30 min，然后在细胞上加入50 μL预先配置好的TdT 孵育缓冲液，湿盒内、37 ℃ 孵育60 min，注意避光。接着PBS中室温孵育5min，共2次。用滤纸轻轻擦掉样本周围及背面的PBS。样本在染色缸中染色，在黑暗中将载玻片浸入装有DAPI溶液(1 mg/L，用PBS新鲜配制并稀释)的染色缸，室温放置5 min。洗涤样本，将载玻片浸入去离子水中，室温放置5 min，重复2次。叩干载玻片上多余的水并且用吸水纸擦拭细胞周边的区域。立即在荧光显微镜下分析样本，用标准的荧光过滤装置在 (520±20) nm的荧光下观察绿色荧光；在460 nm观察蓝色的DAPI。DAPI能将细胞都染成蓝色，但只在凋亡的细胞核中才有 FITC-12-dUTP 掺入而定位的绿色荧光。

1.4.6 Transwell检测细胞的迁移能力^[20] 各组细胞均用0.25%胰蛋白酶消化为单个细胞，以无血清的 L-DMEM 调节细胞浓度为6×10⁸ L^-1。按200 μL/孔分别将各组制备好的细胞悬液加入各小室的上室，下室中加入500 μL含体积分数10%FBS的培养液。37 ℃孵育16 h，将Transwll小室取出，用湿棉棒轻轻擦去上室中细胞，置于预先加有体积分数95%乙醇的培养皿中固定30 min；取出小室，轻擦去固定液，待小室膜风干后使用0.1%结晶紫染色20 min，取出小室，用流水冲干净即可。小室膜干后，将小室膜沿边缘切下，铺于中性树脂中，盖上盖玻片并赶走气泡，在正置显微镜下计数上、下、左、右、中5个高倍镜视野的细胞数并照相，分析时取均数。

1.4.7 NO分泌量的检测两组细胞均检测培养48 h时的NO分泌量，使用南京建成生物工程研究所的试剂盒进行。按说明配置实验用的各组试剂，设空白管、标准管和测定管，按说明往各管内添加相应试剂，混匀，室温静置10 min，然后波长550 nm，光径0.5 cm，双蒸水调零，测定各管吸光度值。

1.4.8 活性氧的检测两组细胞均检测培养48 h时的ROS分泌量，采用化学荧光法，使用2’7’-二氯二氢荧光素二乙酯(2’7’-dichlorodihy drofluorescein diacetate，DCFH-DA)细胞内活性氧检测探针进行。预先准备好相应的实验试剂后，加入DCFH-DA于培养基，37 ℃孵育细胞30 min，用胰酶消化细胞2 min，加入培养基终止消化，制成细胞悬液，离心5 min收集细胞，用PBS洗涤后再离心收集细胞沉淀物用于荧光检测。

1.5 主要观察指标 ①人微血管内皮细胞的增殖情况；②细胞周期分布情况；③细胞凋亡情况；④细胞迁移情况；⑤NO和活性氧分泌情况。

1.6 统计学分析利用SPSS 10.0软件完成统计分析，计量资料采用单因素方差分析和q检验。计量资料均以x(_)±s表示，P < 0.05为差异有显著性意义。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

讨论

越来越多研究表明高血压的发生与血管内皮细胞的功能有着密切的关系，尽管已有大量治疗高血压的新药问世，然而人们从未停止寻找新的治疗靶点和更加有效的治疗药物，特别是探索新的具有心血管保护作用的药物^[21-23]。珍珠在治疗高血压病方面的功效引起了越来越多的重视，也得到了越来越多的肯定。但对于水解南珠液在防治高血压方面的作用及机制的研究甚少，因此有必要对其进行进一步的探索。

基于内皮细胞功能障碍与高血压的发生紧密相关，改善内皮细胞的功能有利于防治高血压的理论及相关研究，课题组在前期预实验中观察到道地药材合浦珍珠(也称为“南珠”)的水解液对血管内皮细胞的体外促增殖作用，因此研究进一步探讨了水解南珠液对血管内皮细胞的生物学行为及分泌功能的影响，以探讨水解南珠液在改善血管内皮细胞功能方面可能存在的作用，为其在防治高血压病的作用机制研究打下基础。实验发现高剂量水解南珠液组能显著促进血管内皮细胞的分裂增殖，与低、中剂量组及对照组比较具有显著性差异，因此确定了高剂量的水解南珠液为最佳作用浓度以进行后续指标的检测。在检测细胞周期的分布情况时，还发现了高剂量的水解南珠液可以促进细胞周期的进展，体现为水解南珠液作用后血管内皮细胞处于G₁期的细胞减少，而S期的细胞增多，提示了高浓度的水解南珠液能促进细胞跨越G₁/S限制点，促进细胞增殖。

内皮细胞迁移是血管新生过程中一个重要环节，在防治高血压的血管内皮细胞功能障碍中也发挥重要的作用^[24]。实验中发现高剂量的水解南珠液可显著增加内皮细胞的迁移能力，提示其可能也具有促进新生血管生成的作用，有望改善高血压发病过程中血管内皮功能的障碍及修复损伤的血管。但因为细胞迁移过程中有约80种蛋白质和信号分子的参与，受到胞内多种信号分子的影响，所以水解南珠液是通过什么途径和机制影响内皮细胞的迁移的还有待下一步的研究^[25]。

NO是影响血压的重要因素，因为它可以引起血管平滑肌细胞舒张，是一种重要的血管舒张因子^[26-27]。而机体活性氧产生过多或机体抗氧化能力减弱，活性氧清除不足，均可导致活性氧在体内增多并引起细胞氧化损伤，导致内皮细胞功能障碍，从而导致高血压的发生并加重进展^[28-29]。而用药物等手段对血管内皮细胞的内环境及其分泌物进行调整，从而逆转内皮功能失调，已是高血压治疗领域的一个新的研究方向。实验中发现高剂量的水解南珠液能显著增加内皮细胞的NO分泌量并减少活性氧的分泌，有效调节了内皮细胞的分泌功能，提示了水解南珠液具有保护内皮细胞的作用，让水解南珠液有望在改善内皮细胞功能障碍从而防治高血压方面具有很好的应用价值。

内皮细胞功能障碍可诱导细胞的凋亡，而凋亡的增加也是内皮细胞功能障碍的原因之一^[30-31]。因此抑制细胞凋亡有助于内皮细胞功能的恢复。但当前研究TUNEL法检测结果显示水解南珠液组的细胞与对照组比较，细胞凋亡率无统计学差异，考虑主要是因为对照组的细胞为正常细胞株，而非内皮细胞功能障碍的细胞模型，且细胞状态也较好，无明显凋亡的现象，因此尽管推测水解南珠液具有抗细胞凋亡从而保护内皮细胞的作用，也未能在实验结果中体现出来，在后续实验中可制作相应的内皮细胞功能障碍的动物模型及细胞模型，以更客观地观察水解南珠液的抗内皮细胞凋亡作用。综上所述，研究通过探讨水解南珠液对人微血管内皮细胞的生物学行为和分泌作用的影响，发现了水解南珠液对血管内皮细胞的促增殖、促迁移、促NO分泌以及抑制活性氧分泌的作用，为探讨其在防治高血压方面的作用机制提供了重要的实验依据。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

水解南珠液能促进人微血管内皮细胞的增殖和迁移

Hydrolysis of Nanzhu fluid promotes proliferation and migration of human microvascular endothelial cells

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