低强度脉冲场超声促进人脂肪间充质干细胞的增殖和黏附

doi:10.12307/2021.003

中国组织工程研究 ›› 2021, Vol. 25 ›› Issue (25): 3949-3955.doi: 10.12307/2021.003

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低强度脉冲场超声促进人脂肪间充质干细胞的增殖和黏附

陈扬，黄邓高，高元慧，王顺兰，曹卉，郑琳麟，何浩伟，罗思琴，肖敬川，张应爱，张淑芳

中南大学湘雅医学院附属海口医院，海南省海口市 570208

收稿日期:2020-06-20 修回日期:2020-06-28 接受日期:2020-07-23 出版日期:2021-09-08 发布日期:2021-03-24
通讯作者: 黄邓高，副研究员，中南大学湘雅医学院附属海口医院，海南省海口市 570208 张淑芳，研究员，教授，中南大学湘雅医学院附属海口医院，海南省海口市 570208
作者简介:陈扬，男，1979年生，海南省海口市人，汉族，副主任技师，主要从事临床检验诊断和细胞生物学研究。
基金资助:
海南省自然科学基金(819QN386)，项目负责人：黄邓高；海南省自然科学基金(819QN390)，项目负责人：高元慧；海南省重大科技项目 (ZDZX2013003，ZDKJ2017007)，项目负责人：张淑芳；海南省自然科学基金(18A200137)，项目负责人：张应爱

Low-intensity pulsed ultrasound promotes the proliferation and adhesion of human adipose-derived mesenchymal stem cells

Chen Yang, Huang Denggao, Gao Yuanhui, Wang Shunlan, Cao Hui, Zheng Linlin, He Haowei, Luo Siqin, Xiao Jingchuan, Zhang Yingai, Zhang Shufang

Affiliated Haikou Hospital of Xiangya Medicine College, Central South University, Haikou 570208, Hainan Province, China

Received:2020-06-20 Revised:2020-06-28 Accepted:2020-07-23 Online:2021-09-08 Published:2021-03-24
Contact: Huang Denggao, Associate researcher, Affiliated Haikou Hospital of Xiangya Medicine College, Central South University, Haikou 570208, Hainan Province, China Zhang Shufang, Researcher, Professor, Affiliated Haikou Hospital of Xiangya Medicine College, Central South University, Haikou 570208, Hainan Province, China
About author:Chen Yang, Associate chief technician, Affiliated Haikou Hospital of Xiangya Medicine College, Central South University, Haikou 570208, Hainan Province, China
Supported by:
the Natural Science Foundation of Hainan Province, No. 819QN386 (to HDG), No. 819QN390 (to GYH), No. 18A200137 (to ZYA); Major Scientific and Technological Project in Hainan Province, No. ZDZX2013003 (to ZSF), No. ZDKJ2017007 (to ZSF)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：
CCK-8增殖实验：CCK-8试剂化学名是2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲臜产物(Formazan)，生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比。
转录组测序技术：用高通量测序技术把mRNA、smallRNA和noncoding RNA的序列测出来，全面快速地获取某一物种特定器官或组织在某一状态下的几乎所有转录本，反映出它们的表达水平。

背景：间充质干细胞是目前组织工程和再生医学研究的热点之一，然而如何在体外进行干细胞的有效扩增以满足临床需求仍是研究者们面临的难题。
目的：探讨低强度脉冲场超声对人脂肪间充质干细胞增殖和黏附的影响。
方法：取第3代人脂肪间充质干细胞，在人脂肪间充质干细胞培养24，48，72 h时以0，10，30，50 mW/cm2低强度脉冲场超声强度进行第1，2，3次刺激，每次刺激时间为5 min，刺激结束后将细胞置于培养箱继续培养24 h，然后采用CCK-8实验筛选最佳刺激条件。选用30 mW/cm2强度刺激2次后的细胞为实验组进行后续实验，0 mW/cm2刺激为对照组。流式细胞仪术检测细胞表面标志物；免疫组化染色观察细胞增殖相关抗原Ki-67和黏着斑激酶FAK的表达；RT-PCR检测细胞增殖通路相关基因Cyclin D1和c-myc的表达；转录组测序检测转录水平基因的变化。
结果与结论：①30 mW/cm2强度连续刺激2次是促进人脂肪间充质干细胞增殖的最佳条件；②与对照组相比，30 mW/cm2低强度脉冲场超声刺激后细胞表面标志物未改变，增殖相关基因CyclinD1、c-myc和黏着斑激酶FAK表达上调；③转录组测序结果显示有27个基因出现显著性差异，其中15个基因上调，12个基因下调；④结果表明，低强度脉冲场超声通过上调CyclinD1、c-myc基因和FAK的表达，伴随转录组多个基因的调控，在细胞未分化的状态下，促进人脂肪间充质干细胞增殖。
https://orcid.org/0000-0002-9927-1622(黄邓高)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

关键词: 干细胞, 脂肪间充质干细胞, 超声, 低强度脉冲场超声, 细胞增殖, 细胞黏附, 基因

Abstract: BACKGROUND: Mesenchymal stem cells are one of the hot topics in tissue engineering and regenerative medicine. However, how to effectively expand the stem cells in vitro to meet the clinical needs is still a challenge for researchers.
OBJECTIVE: To investigate the effect of low-intensity pulsed ultrasound on the proliferation and adhesion of human adipose-derived mesenchymal stromal cells.
METHODS: The human adipose-derived mesenchymal stromal cells of the passage 3 were cultured for 24, 48 and 72 hours. The first, second and third times of stimulation were performed with 0, 10, 30, and 50 mW/cm2 low-intensity pulsed ultrasound intensity, and each stimulation time was 5 minutes. After the stimulation, the cells were placed in the incubator for 24 hours. CCK-8 test was used to screen the best stimulation conditions. The cells stimulated twice with 30 mW/cm2 were selected as the experimental group for follow-up experiments, and 0 mW/cm2 for the control group. Flow cytometry was used to detect cell surface markers. Immunohistochemistry was used to observe the expression of proliferation related antigen Ki-67 and focal adhesion kinase FAK. RT-PCR was used to detect the expression of Cyclin D1 and c-myc. Transcriptome sequencing was used to detect the changes of transcription genes.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) 30 mW/cm2 continuous stimulation twice was the best condition to promote the proliferation of human adipose-derived mesenchymal stem cells. (2) Compared with the control group, cell surface markers remained unchanged after 30 mW/cm2 low-intensity pulsed ultrasound stimulation, and the expression of proliferation-related genes CyclinD1, c-myc and focal adhesion kinase FAK were up-regulated. (3) Transcriptome sequencing results showed that there were significant differences in 27 genes, among which 15 genes were up-regulated and 12 genes were down-regulated. (4) It is concluded that low-intensity pulsed ultrasound promotes human adipose-derived mesenchymal stromal cells proliferation in undifferentiated cells by upregulating the expression of CyclinD1, c-myc and FAK, accompanied by regulation of multiple transcriptome genes.

Key words: stem cells, adipose-derived mesenchymal stem cells, ultrasound, low-intensity pulsed ultrasound, cell proliferation, cell adhesion, gene

中图分类号:

陈扬, 黄邓高, 高元慧, 王顺兰, 曹卉, 郑琳麟, 何浩伟, 罗思琴, 肖敬川, 张应爱, 张淑芳. 低强度脉冲场超声促进人脂肪间充质干细胞的增殖和黏附[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(25): 3949-3955.

Chen Yang, Huang Denggao, Gao Yuanhui, Wang Shunlan, Cao Hui, Zheng Linlin, He Haowei, Luo Siqin, Xiao Jingchuan, Zhang Yingai, Zhang Shufang. Low-intensity pulsed ultrasound promotes the proliferation and adhesion of human adipose-derived mesenchymal stem cells[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2021, 25(25): 3949-3955.

图/表（结果） 6

2.1 筛选最佳刺激条件在人脂肪间充质干细胞培养24，48，72 h时以0，10，30，50 mW/cm2低强度脉冲场超声强度进行第1，2，3次刺激，每次刺激时间为5 min，刺激结束后将细胞置于培养箱继续培养24 h，然后采用CCK-8检测细胞增殖活性，结果发现刺激2次后，各组细胞增殖活性均高于对照组(P < 0.05)，其中30 mW/cm2组增殖活性最大，在第3次刺激后，10，30 mW/cm2组增殖能力高于对照组(P < 0.05)，同样30 mW/cm2组增殖活性最大。因此选用
30 mW/cm2强度刺激2次后的细胞进行后续实验。将
30 mW/cm2组设为实验组，0 mW/cm2组设为对照组。镜下观察30 mW/cm2组的细胞数量增多，而细胞形态不变，见图1。

2.2 细胞增殖相关抗原Ki-67和黏着斑激酶FAK的表达如图2所示，与对照组相比，30 mW/cm2组的FAK和Ki-67表达均增高。

2.3 人脂肪间充质干细胞表面标志物的表达采用流式细胞术检测低强度脉冲场超声刺激后人脂肪间充质干细胞表面标志物(CD73、CD105、CD45和CD34)的表达。由图3和表2可见，与对照组(0 mW/cm2)比较，30 mW/cm2组细胞表面标志物的表达无显著变化。

2.4 人脂肪间充质干细胞的Cyclin D1和c-myc基因表达采用RT-PCR检测增殖信号通路基因CyclinD1和c-myc的表达。图4结果显示，与对照组(0 mW/cm2)比较，30 mW/cm2组的CyclinD1和c-myc表达上调(P < 0.05)，差异有显著性意义。

2.5 转录组实验结果
2.5.1 差异分析基因的差异表达分析使用edgeR软件进行。首先根据基因的原始reads数生成相对表达量，其单位为CPM(每百万计数)；然后根据分组情况计算差异表达基因。差异表达倍数通过log2转换。显著差异表达基因的筛选阈值为P值< 0.05且|log2(FC)|≥ 1。图5A为基因散点图，图5B为显著差异表达基因热图。与对照组相比，低强度脉冲场超声刺激组有15个基因上调和12基因下调，差异有显著性意义。
2.5.2 差异基因GO通路注释及富集使用分组差异基因比较中显著(q值 < 0.05)结果进行GO的注释与富集。注释和富集分析的方法为R语言clusterProfiler扩展包，同时使用FDR方法进行多重假阳性矫正。GO显著富集(P值 < 0.05)的主要通路进行注释。结果显示差异基因主要富集的前30类生物学组分为分子功能(序列特异性DNA结合和核酸绑定转录因子活性等)、生物学进程(RNA合成和代谢进程、核酸模板转录调节和染色体结构等)和细胞组分(包括细胞核内腔、核浆和蛋白复合体等)，见图6A。
2.5.3 差异基因KEGG通路注释及富集使用分组差异基因比较显著(P < 0.05)的结果进行KEGG的注释与富集。注释和富集分析的方法为R语言clusterProfiler
扩展包，同时使用FDR方法进行多重假阳性矫正。对KEGG显著富集(P < 0.05)的主要通路进行注释并绘制柱状图。实验结果显示，相关基因主要富集到微环境信号转导、氨基酸代谢、细胞群体和细胞运动性等功能，见图6B。

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引言

材料方法

1.1 设计对比观察细胞实验。
1.2 时间及地点 2018年12月至2020年6月在海口市人民医院完成。
1.3 材料
1.3.1 实验试剂人脂肪间充质干细胞和培养基(广州赛业生物科技有限公司，#HUXMD-01001和#HUXMD-90031)；杜尔贝克磷酸盐缓液(D-PBS，#8119217)、胰酶消化液(Gibco
公司，#1897336)；细胞表面标志物抗体(CD105-PE，
# 560839；CD73-PE，# 550257；CD34-PE，# 560941；
CD45-PE，# 555481)(BD公司)；Trizol试剂(Life Technologies公司，# 10296010)；MiniBEST Universal RNA 提取试剂盒、SYBR Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus)试剂盒(TaKaRa公司，#9767&# RR820A)；CCK-8试剂盒(Dojindo公司，#PH629)；Ki-67 细胞增殖试剂盒(上海生工，#E607238)；FAK抗体(Cell Signaling公司，#71433)；DAPI染料(Life Technologies公司，# 4803S)。
1.3.2 超声刺激设备使用SonaCell(IntelligentNano公司，加拿大，SONACELL)在1.5 MHz时产生低强度脉冲场超声，占空比为20%，脉冲重复1 kHz，输出强度0-80 mW/cm2。超声发生器固定在细胞培养板的底部，在超声探头上涂抹适量超声凝胶，超声波通过超声凝胶进入细胞，然后将细胞和超声发生器置于细胞培养箱一起培养。
1.4 实验方法
1.4.1 人脂肪间充质干细胞的培养实验前准备并预热好人脂肪间充质干细胞培养基和PBS；将第1代人脂肪间充质干细胞从液氮中迅速取出，并转移至提前预热的37 ℃水浴锅内快速融化，然后迅速将细胞悬液转移至准备好的10 mL新鲜培养基内，充分混匀，1 100 r/min离心5 min，弃去上清，使用新鲜的培养基重悬细胞，接种于100 mm培养皿中，然后放入37 ℃，体积分数为5% CO2温箱中培养，24 h后换液，当细胞汇合至80%-90%，使用0.25%胰酶-EDTA消化并传代，取第3代细胞做后续实验。
1.4.2 CCK-8 实验筛选最佳超声刺激强度和时间取第3代人脂肪间充质干细胞，将细胞浓度调整为2×107 L-1，取1 mL接种于12孔板，培养24 h后更换新鲜的培养基，分别以0，10，30，50 mW/cm2低强度脉冲场超声强度进行第1次刺激，然后在培养48，72 h时进行第2，3次刺激，每次刺激时间为5 min。刺激结束后将细胞置于培养箱继续培养24 h，吸去全部的培养基，加入新鲜培养基200 μL，同时加入CCK-8试剂20 μL，置于培养箱内继续培养4 h，取100 μL培养基上清至96孔板中，使用酶标仪于450 nm处检测吸光度值。
1.4.3 Ki-67细胞增殖和FAK细胞黏附实验根据上述实验的结果选用30 mW/cm2强度刺激2次后的细胞进行后续实验，将
30 mW/cm2组设为实验组，0 mW/cm2组设为对照组。在室温下，细胞用40 g/L多聚甲醛固定45-60 min，PBS清洗3次，然后于新配置的0.1% Triton X-100(溶于柠檬酸钠)室温孵育5-10 min，PBS清洗3次；加入3% BSA封闭液孵育30-
45 min，PBS洗3遍；加入抗ki-67抗体(1∶25)或抗FAK抗体(1∶100)，4 ℃孵育过夜；第1天将细胞从4 ℃转至室温孵育60 min，PBS清洗3次；加入相应的二抗(1∶100)避光孵育60 min，PBS洗3次，DAPI进行细胞核染色5 min，置于荧光显微镜下观察。
1.4.4 细胞表面标志物检测根据上述实验的结果选用
30 mW/cm2强度刺激2次后的细胞进行后续实验，将
30 mW/cm2组设为实验组，0 mW/cm2组设为对照组。使用0.25%胰酶-EDTA消化细胞，D-PBS清洗2次，细胞重悬于D-PBS中，细胞浓度为1×108 L-1，每个流式管取样1 mL，
3 000 r/min离心5 min，弃去上清，加入适量荧光标记的单克隆抗体(CD105-PE、CD73-PE、CD34-PE和CD45-PE)，室温避光孵育30 min，最后用0.3 mL D-PBS重悬细胞，上流式细胞仪检测，运用BD FACSDIVA软件进行分析。
1.4.5 RT-PCR检测细胞增殖相关基因的表达根据上述实验的结果选用30 mW/cm2强度刺激2次后的细胞进行后续实验，将30 mW/cm2组设为实验组，0 mW/cm2组设为对照组。采用Trizol法和RNA提取柱纯化法试剂盒提取细胞总RNA。参照PrimeScrip RT Master Mix (Perfect Real Time)试剂盒说明书，配制反转录反应液，轻柔混匀后进行反转录反应，合成cDNA第一链。参照SYBR Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus)试剂盒说明书配制荧光定量PCR反应液，充分混匀后放置于实时荧光PCR仪中进行荧光定量PCR反应。实验条件：预变性95 ℃，30 s；PCR反应(循环数：50)95 ℃，5 s；55 ℃，30 s；72 ℃，30 s；熔解曲线Melt Curve Stage(循环数：1)：95 ℃，60 s；55 ℃，30 s；95 ℃，30 s。引物设计见表1。

1.4.6 转录组实验根据上述实验的结果选用30 mW/cm2强度刺激2次后的细胞进行后续实验，将30 mW/cm2组设为实验组，0 mW/cm2组设为对照组。采用RNeasy Mini试剂盒标准操作流程进行样品的总RNA抽提，然后mRNA富集或rRNA去除、片段化、一链和二链cDNA合成、末端补平、3'端加A、接头连接、PCR扩增、文库质控、文库标准化和簇生成，最后上机测序和数据分析。测序原始数据经过去接头序列和低质量序列等方式处理，使用软件为Fastp。质控后的数据比对到人类(Homo sapiens)基因组上(hg38)，使用软件为HISAT2 v.2.0.5。利用Sringtie软件进一步对匹配上的reads进行注释与定量，利用R包edagR进行标准化与差异统计。
1.5 主要观察指标 ①人脂肪间充质干细胞的增殖情况；②人脂肪间充质干细胞的增殖相关抗原Ki-67和黏着斑激酶FAK的表达；③人脂肪间充质干细胞的Cyclin D1和c-myc基因表达；④人脂肪间充质干细胞的转录水平基因表达。
1.6 统计学分析所有实验均重复3次以上，数据以x±s表示，采用SPSS 20.0软件分析。首先对数据行正态性检验，若不符合正态分布，通过正态性转换后再下一步处理。两组数据分析采用独立t 检验，多组数据采用单因素方差分析(one way-ANOVA)，P < 0.05为差异有显著性意义。

讨论

研究显示低强度脉冲场超声能促进人脂肪间充质干细胞的增殖和黏附。CCK-8检测结果显示30 mW/cm2强度刺激2次为最佳增殖条件，增殖后的细胞形态与间充质细胞保持一致，呈梭形贴壁生长[11-12]。低强度脉冲场超声刺激后细胞表面标志物CD105和CD73呈阳性表达，CD34和CD45呈阴性表达，与对照组细胞表面标志物无显著差异，符合间充质干细胞的特征 [13-14]。以往研究认为高强度的低强度脉冲场超声和长时间的刺激会促进干细胞向成骨和成脂分
化[15-16]。在此研究中30 mW/cm2的低强度脉冲场超声刺激下，与对照组相比，细胞表面标记物未见差异，提示30 mW/cm2的低强度脉冲场超声在人脂肪间充质干细胞未分化的情况下促进细胞增殖，同时维持干细胞的特性。
以往关于低强度脉冲场超声促进不同干细胞增殖途径主要有MAPK/ERK、ERK1/2和PI3K-AKT信号通路[8-10]。
BUDHIRAJA等[7]、XIE等[8]和REN等[17]都认为低强度脉冲场超声是通过上调CyclinD1的表达促进细胞增殖。CyclinD1是细胞周期信号传导的早期组成部分，其与细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK4或CDK6)结合形成活性复合物，该复合物可导致一系列转录激活和细胞周期信号分子的表达，驱动细胞进入细胞周期的下一阶段[17]。该研究RT-PCR实验显示，与对照组相比，30 mW/cm2刺激组的CyclinD1基因表达上调。另有研究显示无外源培养条件下培养的人脂肪组织源性干细胞c-myc基因表达增强，促进细胞增殖[18]。在此实验中低强度脉冲场超声刺激后c-myc基因表达出现上调，因此推测低强度脉冲场超声刺激促进细胞增殖是通过上调cyclinD1基因和c-myc基因表达实现的，其一是激活的MAPK/ERK信号通路通过磷酸化作用促进细胞增殖的主要调控因子CyclinD1的转录，帮助完成细胞周期进程；其二是通过磷酸化AKT激活后促进c-myc基因的表达。c-myc与myc相关因子X (MAX)形成复合物，促进CyclinD1的转录，最终促进细胞增殖。
Ki-67是与细胞增殖相关的抗原，与核糖体RNA转录有关。Ki-67失活时核糖体RNA合成受限，是细胞增殖的标记物。Ki-67在细胞增殖的所有活跃阶段(G1，S，G2和M)均有表达，但在细胞静止期G0期不表达[19]。该研究显示30 mW/cm2刺激组Ki-67表达高于对照组，提示低强度脉冲场超声刺激后人脂肪间充质干细胞增殖能力增强。
FAK是黏着斑位点的整合成分，在机械生物学中发挥关键作用[20]。实验显示低强度脉冲场超声刺激后人脂肪间充质干细胞的FAK表达上调，提示CyclinD1、c-myc和FAK共同参与了ERK1/2、PI3K-AKT和MAPK/ERK信号通路促进人脂肪间充质干细胞增殖[21-22]。
转录组是特定组织或细胞中所有基因转录组探针的总和，与基因组的遗传信息和蛋白质组的生物学功能有关，是研究不同细胞分子机制的一种有效手段[23]，更有利于分析涉及干细胞命运调控的转录基因差异，包括自我更新、增殖和分化[23-24]。在该实验中，低强度脉冲场超声刺激后的转录水平分析显示27个基因存在显著差异，15个基因表达上调，12个基因表达下调。KMT2A、APC、DYRK1A等表达上调，在转录激活[25-26]、细胞粘连[27]、细胞增殖信号调控中发挥重要作用[28]，WFS1等基因表达下调，参与多种疾病的发生发展[29]。GO分析显示基因差异的主要途径包括序列特异性DNA结合、核酸绑定转录因子活性、RNA合成和代谢进程、核浆与蛋白复合体等相关生物组分。KEGG分析显示相关差异基因主要富集到微环境信号转导、氨基酸代谢、细胞群体和细胞运动性等功能，这些结果与FAK表达上调产生的效应相一致。
据报道，Ras通路被激活，就会启动丝氨酸-苏氨酸激酶的级联放大。然后它从细胞质中招募Raf-1丝氨酸-苏氨酸激酶进入细胞膜，Raf激酶在细胞膜上磷酸化MAPK激酶(MAPKK，也称为MEK)，MAPKK激活MAPK(也称为ERK)。MAPK被激活后转位进入细胞核，直接激活转录因子。此外，MAPK刺激Fos和Jun转录因子，形成转录因子AP-1，与myc基因旁的特定DNA序列结合，启动转录。myc基因产物也是激活其他基因的转录因子，最终这些信号诱导Cyclin-D的表达[30]。另一方面， NF-κB家庭成员(RelA/p65、RelB、c-Rel和p50/p105)调控Ras信号通路及其下游基因的表达[31]。在该实验中，转录组实验富集了Rel蛋白家族相关基因Rel (c-Rel)，提示低强度脉冲场超声刺激的人脂肪间充质干细胞通过激活Ras信号通路及下游通路基因表达促进细胞增殖。
当细胞受到外力作用时与局部微环境利用信号来调节细胞的命运和行为。在体外，利用合成的干细胞微环境模型可以精确操控干细胞微环境的生物物理和生化特性，指导干细胞的分化和再生[32-33]。低强度脉冲场超声是一种通过皮肤将机械波以高频、小振幅和脉冲的形式传递到生物组织的方法，现已被广泛应用[34-35]。在细胞水平上，超声通过释放细胞束、增加细胞膜的通透性、调节培养基并影响细胞组分、细胞功能和遗传学来促进微生物的生长。在分子水平上，超声波通过改变酶的性质、酶与底物之间的反应来促进或破坏酶的活性，并为反应提供一个最佳的环境。适当频率和强度的超声处理可以在不改变蛋白质分子结构完整性的情况下，诱导其构象发生良好变化，从而提高酶的活性[36]。这些结果表明，适当强度的低强度脉冲场超声将有利于干细胞增殖和再生医学的发展。
综上所述，低强度脉冲场超声能促进人脂肪间充质干细胞的增殖和黏附。低强度脉冲场超声刺激后在人脂肪间充质干细胞未分化情况下，可能是通过上调CyclinD1、c-myc和FAK表达，激活MAPK/ERK和PI3K/AKT信号通路，同时多个转录基因的调控，共同参与促进细胞的增殖。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

低强度脉冲场超声促进人脂肪间充质干细胞的增殖和黏附

Low-intensity pulsed ultrasound promotes the proliferation and adhesion of human adipose-derived mesenchymal stem cells

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