血清药理学方法对药理、药效学和新药研发的贡献

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.0811

中国组织工程研究 ›› 2018, Vol. 22 ›› Issue (24): 3914-3920.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.0811

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血清药理学方法对药理、药效学和新药研发的贡献

吴沅皞1，刘维1，赵文甲2

1天津中医药大学第一附属医院，天津市 300193；2天津中医药大学研究生院，天津市 300193

收稿日期:2017-11-30
通讯作者: 刘维，博士，教授，主任医师，天津中医药大学第一附属医院风湿免疫科，天津市 300193
作者简介:吴沅皞，男，1983年生，汉族，博士，副主任医师，主要从事风湿免疫病的临床与基础研究。
基金资助:
国家自然科学基金(81503506，81473635)；天津市科技计划项目(15ZXLCSY00020)；天津市卫生和计划生育委员会中医中西医结合科研课题(2015091，2015092)

Contributions of serum pharmacology to pharmacology, pharmacodynamics and new drug discovery

Wu Yuan-hao1, Liu Wei1, Zhao Wen-jia2

1First Teaching Hospital of Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, Tianjin 300193, China; 2School of Graduate, Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, Tianjin 300193, China

Received:2017-11-30
Contact: Liu Wei, M.D., Professor, Chief physician, First Teaching Hospital of Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, Tianjin 300193, China
About author:Wu Yuan-hao, M.D., Associate chief physician, First Teaching Hospital of Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, Tianjin 300193, China
Supported by:
the National Natural Science Foundation of China, No. 81503506 and 81473635; the Science and Technology Program of Tianjin, No. 15ZXLCSY00020; the Integrated Chinese and Western Medicine Research Project of Tianjin Health and Family Planning Commission, No. 2015091 and 2015092

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：
血清药理学：通过动物服用药物并在其体内完成生物转化，获取以血清为载体的药物，进而施加于实验反应体系，用于研究该药物作用效果及药理机制等的实验技术方法。该方法常用于研究复杂成分药物，尤其是中药和复方药物。
血清供体：服用和代谢药物后，其一定量的血清被采集用于血清药理学实验的人类志愿者或动物个体。多选用成年健康志愿者或动物，与实验体系的研究对象种属一致，常用灌胃法多次给药，亦可按需采用注射、外敷等方式给药。

摘要
背景：对于复杂成分药物，尤其是复方中药，国内外诸多学者采用血清药理学方法进行药效评价及相关作用机制的研究，推动了药理药效学研究进展以及血清药理学技术方法本身的不断规范与完善。
目的：对最近几年来中药血清药理学方法在各领域研究中的广泛应用作以综述，并对血清药理学方法的优势和不足进行评价。
方法：应用计算机检索PubMed数据库、中国知网数据库2012年1月至2017年6月发表的与血清药理学方法学相关，或采研究方法中应用了含药血清的研究，检索词为“血清药理学，含药血清，serum pharmacology，medicated serum，drug-containing serum”。依据纳入排除标准筛选检索到的2 977篇文献，共纳入58篇并分析。
结果与结论：血清药理学方法可以较好地反映药物的药效及其作用环境，有助于研究中药药效物质及其在体内的过程，因此已被众多学者和专家所采用。近年来对血清供体、给药剂量、频次方案、血清采集、处理保存、加药比例等研究方案的探索优化中取得了显著进展，并已在心血管系统、呼吸系统、消化系统、神经系统、骨骼系统、泌尿系统、生殖系统、免疫系统、抗肿瘤、抗炎、抗菌、抗病毒等方向广泛应用，推动了药理学、药效学和新药研发等研究的发展进步。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程
ORCID: 0000-0003-3093-0252(吴沅皞)

关键词: 血清药理学, 中药, 方法学, 含药血清, 综述, 组织构建

Abstract:

BACKGROUND: Serum pharmacological methods have been used to evaluate the efficacy and related mechanisms of complex drug ingredients, especially Chinese herbal compounds, which promote the ongoing development of pharmacodynamics and serum pharmacological technologies.
OBJECTIVE: To summarize the serum pharmacological methods applied in various fields, and to evaluate the advantages and disadvantages.
METHODS: A computer-based retrieval of PubMed and CNKI databases was performed for the articles related to serum pharmacology published from January 2012 to June 2017 with the keywords of “serum pharmacology, medicated serum, drug-containing serum” in English and Chinese, respectively. Totally 2 977 articles were collected and finally 58 eligible ones were included for result analysis according to the inclusion and exclusion criteria.
RESULTS AND CONCLUSION: As serum pharmacology can reflect the efficacy and indications of medicines, and is helpful to study the effective compositions and in vivo course, it has been extensively used in various studies. In recent years, the studies on optimizing the serum donators, dosage, frequency, serum collection, serum storage and administration have achieved significant outcomes in the cardiovascular system, respiratory system, digestive system, nervous system, skeletal system, urinary system, reproductive system, immune system, anti-cancer, anti-inflammatory, antibacterial and antiviral treatments. Moreover, it is accompanied by the development of pharmacology, pharmacodynamics as well as new drug discovery.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

Key words: Drugs, Chinese Herbal, Pharmacology, Serum, Tissue Engineering

中图分类号:

R318

吴沅皞，刘维，赵文甲. 血清药理学方法对药理、药效学和新药研发的贡献[J]. 中国组织工程研究, 2018, 22(24): 3914-3920.

Wu Yuan-hao1, Liu Wei1, Zhao Wen-jia2. Contributions of serum pharmacology to pharmacology, pharmacodynamics and new drug discovery[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2018, 22(24): 3914-3920.

图/表（结果） 2

2.1 血清药理学研究方法概述

2.1.1 血清供体的选择不同种属的动物有着不同的血清成分，以及各异的生理、病理状态和遗传背景，导致药代动力学参数不一。人和各种动物血清有不同程度差异，所以在选择动物时，应该选择与人类生物特性近似的同种属动物，或招募人类健康志愿者。且血清供体应与目的实验体系中的离体器官、组织细胞其种属相一致，以减少或避免供体血清与目的实验体系在理化、生物等特性上的差异，提高实验结果的可靠性。动物常采用大鼠、小鼠、兔、豚鼠等，一般首选家兔和大鼠，因此两种动物能提供充足的血量，一般至少选用4只成年动物，且雌雄各半来制备含药血清，将数只动物血清混合以减少个体差异，同时也能适应实验需求。这些动物与人类生物学相似，同时又易获得，一般动物给药前禁食不禁水6-12 h为宜。为了中药血清药理学实验结果与体内实验的一致性，有研究者提倡对含药血清供体进行造模，使进行的体外中药血清药理学实验与在体的药理学实验结果能够相互联系、相互参照，从而对药物疗效的评价达到真实、可信^[11-12]。

2.1.2 给药剂量进行血清药理学实验需要制定给药剂量，给药剂量的大小直接与血清药物水平高低有关，给药剂量不能太大或太小。剂量太大，血清加入体外反应后浓度稀释，小于体内浓度，导致浓度过低出现的假阳性或阴性结果。给药剂量过大则易产生毒副作用。

动物给药量换算公式为给药剂量＝人临床用量×动物等效剂量比值×培养液中血清稀释度，实际操作时会受到给药浓度和体积的限制，因此给药剂量应参照具体药物的量效关系研究，不能一概而论。而含药依照新药药理研究设计方法给药，可以将血清制成冻干粉，给动物灌胃，使得药物血清浓度达到所需要的水平^[13]。

2.1.3 给药方案不同的灌药间隔、次数，以及禁食与否都会影响血药浓度，故在进行动物实验之前，应先行给药方案确定，如是否禁食，每日给药次数及间隔。动物食物可改变胃肠道理化性质，改变功能，影响血清的药物浓度。一般应该在实验之前令动物禁食8-12 h，保持空腹状态，从而减少其他因素引起血药浓度的变化。中药剂型多样，给药途径各不相同，实验中应根据实际情况，可使用黏膜、呼吸道及注射等途径给药，以降低因给药途径不同造成的差异性。

在实验过程中多采用口服灌胃给药，灌胃前多禁食，不禁水，保持空腹状态可较快较好地吸收药物，避免饮食的干扰。给药次数及间隔方面，目前各家说法不一，常用的方法有：1次给药或间隔2-4 h给药，或1-3次/d，连续3-10 d^[10]。同一给药方案连续数日给药较1 次给药有明显差异，主要与药物诱导机体产生内源性生物活性物质有关，主张多次给药。白金霞等^[14]用复方鳖甲软肝片给大鼠每日不同次数灌胃给药，将大鼠分为每日给药1次组、2次组以及3次组。结果显示每日给药2次组对HSC-T6抑制的效应动力学曲线下面积(AUC)及药代动力学AUC均高于每日给药1次组和3次组。李仪奎等^[15]对大量的中药药动学参数进行分析后，提出中药血清药理研究通用的给药方案：每天给药2次，连续给药3 d效果最好。
2.1.4 采血时间一般应该在给药浓度的峰浓度内采血，但是中药成分较为复杂，不同药物达到峰浓度的时间不一，这就给采血时间的制定带来一定的难度。有研究表明一般达到峰浓度时间都在给药后1.0-2.0 h，故采血时间最好为末次给药后0.5-3.0 h，一般不超过6.0 h。采血时间过早，部分药物组分未被吸收入血；采血时间过长，部分药物组分在体内发生转化或被排泄掉，理想的采血时间应落在药物达到稳态血药浓度期间。进行血清药理学实验前可参照经验给药方案，并结合药物的药效动力学研究来确定最佳的给药、采血时间。李强等^[16]在验证陇中损伤散提取物对成骨细胞临床常用量增殖影响实验中，分别再末次给药后1，2，3 h采血，结果显示，末次给药后1 h采血为最优采血时间。

2.1.5 含药血清的处理及保存血清中含有许多酶、抗体、补体、细胞因子及其他生物活性物质，血清灭活可去除血清中的大部分蛋白质、部分电解质和糖，使其丧失生物学活性，减少对血清的非药理学干扰，更容易突出血清药中中药的作用，也符合减少微生物感染的常规细胞培养要求。常用的处理方法见表1。

但有学者认为，药物血清不宜灭活。首先药物血清灭活后，血清中含有的机体在药物作用下产生的内生性有效成分(如补体)将减少，生物活性降低，必然影响药理实验结果，其次与体内实验和临床用药情况也不相符，因此可设置空白血清组作为对照，或根据实验所选指标及药物本身性质来判断含药血清是否需要灭活^[18]。

2.1.6 血清添加量血清药理研究中，含药血清添加量的问题是不能忽视的问题。体外实验中含药血清的浓度没有明确规定，实验一般选取浓度为5%-20%的含药血清，但是没有确切依据，所得结果也存在争议。事实上，不同实验中选取的最佳血清浓度也不尽相同，最好通过预实验选择恰当的添加量，既要避免高浓度血清对细胞的毒性作用，又要使含药血清的浓度接近于血药浓度，以便较客观地反映复方的整体药效。但总体而言，一般进行细胞增殖促进作用实验时，低浓度的含药血清效果较好；而在细胞增殖抑制作用的实验中，高浓度的含药血清效果好。血清药理学方法用于临床研究时，还应考虑血清本身所含的化学成分、血清容量以及细胞培养液中所含的营养物质等对研究结果的影响^[19] (图1)。

2.2 血清药理学方法的应用现状概述
2.2.1 在心血管系统研究中的应用汪艳丽等^[20]通过对Wistar乳鼠给予强心复脉方连续7 d灌胃，2次/d，末次给药后2 h采血制成含药血清，将含药血清加入到乳鼠受损窦房结细胞外液中，测定对造模后细胞动作电位的影响，结果表明，不同浓度的强心复脉方含药血清均能缩短乳鼠受损窦房结细胞的复级电位时程，增大动作电位幅值，同时动作电位时程也明显缩短，细胞自发性搏动频率相应加快(P < 0.05)。杨洋等^[21]运用血清药理学方法研究加味丹参饮对心肌缺血再灌注损伤(ischemic reperfusion injury，IRI)大鼠心肌血管新生的影响。结果显示，加味丹参饮含药血清可明显促进骨髓间充质干细胞移植后心肌缺血再灌注损伤模型大鼠梗死心肌边缘区血管的新生，改善梗死区心肌组织的病理形态，说明加味丹参饮对心肌具有保护效果。此外，有学者通过血清药理学方法发现复方丹参滴丸含药血清可减少细胞间黏附分子1以及血管细胞黏附分子1 mRNA的表达，并且能够通过抑制核因子活化B细胞k轻链增强子(nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells, NF-κB)通路相关炎性因子的表达，减轻血管内皮细胞的黏附作用，从而证明了复方丹参滴丸可保护心肌，延缓动脉硬化的病变进程^[22]。

2.2.2 在呼吸系统研究中的应用李玲等^[23]为进一步探究五倍子的抗呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus，RSV)机制，采用血清药理学方法检测了五倍子含药血清对呼吸道合胞病毒感染的人支气管上皮细胞凋亡及NF-κB核转位和表达的影响。研究表明：五倍子含药血清能抑制对呼吸道合胞病毒的复制，同时通过抑制NF-κB发生核转位，抑制呼吸道合胞病毒诱导的人支气管上皮细胞的凋亡，进而降低细胞增殖的抑制率，缓解呼吸道炎性疾病。陈贺等^[24]采用中药血清药理学方法，选择高、中、低剂量的复方川贝颗粒水溶液以灌胃方式给药，分别观察加入豚鼠含药血清1，3，5 min后对磷酸组胺引起的气管平滑肌收缩的拮抗作用，结果显示，随着含药血清与标本的接触时间的延长，解痉率逐渐增加，药物与标本接触5 min后作用为好。药物吸收增加则作用强度增大，为进一步探讨复方川贝颗粒豚鼠含药血清的平喘作用机制提供实验数据支持。

甘雨等^[25]应用血清药理学方法研究射干提取物含药血清对豚鼠离体气管平滑肌收缩功能的影响，发现射干提取物含药血清对组胺引起的气管平滑肌收缩反应有一定拮抗作用，其中剂量(0.46 g/kg)3，5，10 min解痉率分别为44.29%、45.27%和48.30%；高剂量(0.92 g/kg)3，5 min 解痉率分别为31.17%和31.83%，与空白对照组比较有显著性差异(P < 0.05或P < 0.01)，药物与标本接触5 min效果最好。说明射干提取物含药血清对组胺引起的气管平滑肌收缩反应具有一定的拮抗作用，为以后的体外实验药物与标本的接触时间提供了参考。

2.2.3 在消化系统研究中的应用李绍民等^[26]在体外研究中采用中药血清药理学方法，探讨逍遥散含药血清对肝纤维化发生的中心环节基质金属蛋白酶1和金属蛋白酶组织抑制剂(tissue inhibitor of metallopro-teinase，TIMP) 1表达的影响，以此探讨逍遥散抗肝纤维化的细胞分子机制。结果表明逍遥散药物血清可明显下调基质金属蛋白酶1的mRNA和蛋白的表达，提高金属蛋白酶组织抑制剂1的mRNA和蛋白的表达，干预胶原的合成，因而逍遥散具有很好的抗肝纤维化作用。

郭灿等^[27]为验证疏肝健脾方含药血清对酒精损伤细胞的保护作用，分别测定疏肝健脾方含药血清与酒精性损伤HepG2细胞作用后细胞增殖以及过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptor，PPAR)γ蛋白表达水平，结果显示疏肝健脾方含药血清可以改善酒精损伤HepG2细胞的增殖能力并显著增加过氧化物酶体增殖物激活受体γ蛋白表达量，进而调控脂类代谢相关基因的表达，说明了疏肝健脾方含药血清对酒精性损伤HepG2细胞脂肪变性的保护作用，能抗肝脏纤维化。

张艳晓等^[28]通过血清药理学方法观察附子理中汤对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎模型肠道黏膜的影响，结果表明，附子理中汤可降低血清促炎症因子及细胞间黏附因子的表达，间接促进大鼠肠道黏膜的修复，且随浓度的递增疗效呈上升趋势。

2.2.4 在神经系统研究中的应用邹宇等^[29]采用血清药理学方法，对6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine，6-OHDA)诱导PC12细胞凋亡，模拟帕金森病神经损伤作用，探究镇肝熄风汤对PC12细胞的凋亡作用影响。采用细胞的活力测定法分别检测镇肝熄风汤组与空白血清组细胞存活率，结果显示，镇肝熄风汤含药血清具有保护6-羟基多巴胺诱导PC12细胞损伤的作用，并且与空白血清组相比，含药血清组醌氧化还原酶1 mRNA表达明显上调(P < 0.05)，说明了镇肝熄风汤含药血清的神经保护作用其可能与其提高了神经细胞的抗氧化能力有关。

周胜强等^[30]在研究补阳还五汤促进脑缺氧损伤后神经再生的机制中，应用血清药理学方法，观察补阳还五汤对体外缺氧损伤神经干细胞增殖及Notch信号通路相关因子mRNA表达的影响。结果发现含药血清能明显上调缺氧NSCs Notch-1、Hairy and enhancer of split homolog-1 (Hes-1)、Neurogenin-1(Ngn-1) mRNA以及下调Delta-like-1 (Dll-1) mRNA的表达，促进其增殖，并能增加缺氧神经干细胞克隆球数，与体积分数10%正常血清相比差异显著(P。证明该作用可能是补阳还五汤促进脑缺氧损伤后神经再生的机制之一。 < 0.05)

2.2.5 在骨骼系统研究中的应用宋永周等^[31]采用中药血清药理学方法制备含抗骨增生胶囊大鼠血清。取乳鼠颅骨培养成骨细胞，加入不同浓度的抗骨增生胶囊含药血清进行干预，检测中药血清对成骨细胞增殖的影响，结果显示成骨细胞经抗骨增生胶囊含药血清作用后，细胞的生长呈现不同程度的增殖，且呈剂量依赖性。结果还显示，不同浓度的抗骨增生胶囊含药血清均可增强骨保护蛋白的表达，对NF-кB受体活化子配体的表达则有不同程度的抑制作用，与空白血清组比较差异有统计学意义(P，阐明抗骨增生胶囊含药血清可以促进成骨细胞的增值、分化，从而促进骨形成，对拓展其治疗范畴提供理论依据及实验基础。 < 0.05)

罗毅等^[32]研究健步虎潜丸含药血清对体外成骨样细胞增殖和功能的影响，实验发现成骨样细胞经健步虎潜丸血清处理后，可造成细胞从活跃的生长状态向成熟状态转化，且存在浓度依赖性及时间依耐性，这对骨形成有着重大的意义，与现有的化学药物主要抑制骨吸收为主，并少有促进骨形成不同，为寻找理想的抗骨质疏松药物提供新的思路。

2.2.6 在泌尿系统研究中的应用王晶等^[33]在体外实验中通过培养小鼠肾小球足细胞，进行分组观察，从而研究芡实含药血清对高糖干预下肾小球足细胞标志性蛋白(nephrin)及α平滑肌激动蛋白(smooth muscle actin，α-SMA)表达的影响。结果显示，芡实治疗组nephrin mRNA及蛋白表达明显升高，而α平滑肌激动蛋白mRNA及蛋白表达量明显减少，提示芡实含药血清对高糖介导的足细胞损伤具有一定的调节作用，其具体机制有待于进一步研究。

汪青等^[34]采用体外培养的大鼠近端肾小管上皮NRK52E细胞为研究对象，观察益肾化瘀方含药血清对NRK52E细胞转分化过程中转化生长因子β1、骨形态发生蛋白7 mRNA 表达的影响。结果表明益肾化瘀方含药血清通过在基因水平抑制转化生长因子β1 mRNA 表达，并以剂量依赖方式上调骨形态发生蛋白7 mRNA表达，证明益肾化瘀方含药血清可阻抑NRK52E细胞转分化过程，为中医药干预肾间质纤维化可能的分子机制提供了一定的理论基础和新的防治方法。

2.2.7 在生殖系统研究中的应用刘慧萍等^[35]采用机械分离法建立SD大鼠卵巢颗粒细胞体外培养体系。通过不同浓度补肾活血方含药血清研究其对大鼠卵巢颗粒细胞的作用，结果发现补肾活血方含药血清能通过增加激活素A的分泌量，促进体外培养的卵巢颗粒细胞增殖和分化，令其对雌激素、孕酮的分泌增多，并且具有剂量依赖性，含药血清浓度为15%时颗粒细胞增殖率最高。揭示中医药作用于生殖系统的药理机制，为临床应用和实验研究提供依据。宋翠淼等^[36]在补肾调经方含药血清对对体外培养的人卵巢颗粒细胞研究中发现，不同浓度含药血清不仅提高了人卵巢颗粒细胞培养液中雌二醇、环磷酸腺苷的水平，卵泡刺激素受体蛋白及其mRNA、P450芳香化酶mRNA表达亦相应提高，说明补肾调经方可能通过调节卵巢颗粒细胞卵泡刺激素/环磷酸腺苷-蛋白激酶A(follicle stimulating hormone/ cyclic adenosine monophosphate-protein kinase A，FSH/cAMP-PKA)通路，从而促进卵巢颗粒细胞的内分泌功能。

2.2.8 在免疫系统研究中的应用邢文婷等^[37]比较含红芪和含黄芪的补中益气汤含药血清对老龄小鼠脾淋巴细胞的抗氧化损伤作用，实验发现两种补中益气汤含药血清均有提高老龄小鼠脾淋巴的总超氧化物歧化酶活性、降低丙二醛及活性氧水平的作用，含红芪和含黄芪的补中益气汤在抗老龄小鼠脾淋巴细胞氧化损伤方面作用相似，具有一定可替换性。

Tang等^[38]研究表明：麻黄附子细辛汤含药血清在不同时间均能降低抗原诱导RBL-2H3细胞释放组胺(P；除4 h含药血清外，其余各时间点含药血清均能抑制该细胞脱颗粒(P；在15，30 min时间点含药血清能显著抑制脂多糖诱导的小鼠脾细胞增殖。 < 0.05) < 0.05)

陈达等^[39]用血清药理学方法研究鹅不食草挥发油对抗原诱导RBL-2H3细胞释放组胺、β-氨基已糖苷酶，对刀豆蛋白A诱导小鼠脾细胞增殖、诱导脾淋巴细胞分泌白细胞介素4的影响，探讨其抗变态反应的可能机制。结果显示与空白血清相比，鹅不食草挥发油0.5-2 h含药血清(9 g/kg生药量，10%含药血清)均具有抑制抗原诱导RBL-2H3释放组胺、β-氨基已糖苷酶，抑制刀豆蛋白A诱导小鼠脾细胞增殖、分泌白细胞介素4的作用。说明鹅不食草挥发油抗变态反应作用机制可能与抑制炎症介质释放，抑制细胞免疫功能有关。

2.2.9 在抗肿瘤研究中的应用郝淑兰等^[40]在体外实验中探讨软坚散结胶囊含药血清对胃癌SGC7901细胞血管内皮生长因子-细胞外调节蛋白激酶(vascular endothelial growth factor-extracellular regulated protein kinases，VEGF-ERK)信号通路的影响，以此探讨软坚散结胶囊含药血清调控胃癌细胞凋亡的机制。经研究证明SGC7901细胞经过血清处理后，血管内皮生长因子表达减少，表明含药血清诱导人胃癌SGC7901细胞凋亡的作用机制可能是通过抑制血管内皮生长因子蛋白表达，调控ERK信号通路，抑制ERK磷酸化表达进而促进胃癌细胞凋亡。

杜佳等^[41]在实验中发现，与空白血清对照组相比，左金丸含药血清组显著增加了MCF-7人乳腺癌细胞Sub-G₁期和G₀/G₁期的细胞数，证明了左金丸含药血清具有抑制MCF-7人乳腺癌细胞增殖作用，其机制可能与阻滞细胞G₀ /G₁周期并诱导细胞凋亡有关。

Chen等^[42]应用血清药理学方法探讨扶正抑瘤方对人肝癌细胞株HepG2的抑制增殖和促进凋亡的作用，发现其主要是抑制肿瘤细胞的S期DNA合成、令细胞生长阻滞在G₀/G₁期，并可促进细胞的凋亡。

2.2.10 在抗炎作用研究中的应用^[43-44] 于红红等^[45]为验证四妙勇安汤含药血清的抗炎机制，用四妙勇安汤含药血清干预细胞24 h后，巨噬细胞Toll样受体4(Toll like receptor 4，TLR4)、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor88，MyD88)的表达明显下降，并且下游肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor，TNF)α及白细胞介素6表达也显著降低。这说明四妙勇安汤含药血清对TLR4及MyD88 依赖性信号转导通路有明显的抑制作用，并且对下游肿瘤坏死因子α及白细胞介素6等炎症因子同样具有明显的抑制作用，阐明了四妙勇安汤含药血清的抗炎作用机制之一。

张智伟等^[46]研究了紫花地丁含药血清对炎症性疾病的疗效机制，发现5%-20%的紫花地丁含药血清可令未经脂多糖活化的巨噬细胞肿瘤坏死因子α、一氧化氮分泌增加(P或P < 0.01)，而白细胞介素6分泌则降低(5%含药血清组)(P或增加(10%含药血清组)(P。经脂多糖活化的巨噬细胞肿瘤坏死因子α、一氧化氮分泌降低(P或P < 0.01)，而白细胞介素6分泌则降低(10%含药血清组)(P或增加(20%含药血清组)(P。紫花地丁含药血清5%-20%各浓度组经脂多糖活化的巨噬细胞一氧化氮分泌量显著降低(P，肿瘤坏死因子α分泌量在5%含药血清浓度组降低P < 0.01)，而在10%和20%浓度组升高(P，白细胞介素6分泌量在5%含药血清浓度组降低(P，而在20%浓度组升高(P。说明紫花地丁含药血清对巨噬细胞产生肿瘤坏死因子α、白细胞介素6和一氧化氮的干预作用，可能是临床上该药调控炎症反应过程的重要机制。 < 0.01) < 0.01) < 0.01) < 0.01) < 0.01) < 0.01) < 0.05 < 0.01) < 0.01) < 0.05

2.2.11 在抗菌作用研究中的应用吴方评等^[43]将吴茱萸制剂给家兔灌胃后采血得到吴茱萸生物碱含药血清，在已经分纯的待测菌平板上分别挑取标准病原菌接种于培养基内培养，将已经校正浓度的伤寒杆菌等待测菌悬液接种于含药血清试管内培养，观察细菌的生长情况。结果显示：吴茱萸生物碱含药血清对伤寒杆菌、甲型副伤寒杆菌和福氏痢疾杆菌具有较好的抑菌作用，且该抑制作用具有一定的浓度依赖性。

王宇翎等^[44]采用血清药理学和体外抗菌试验，观察香术茯苓颗粒的镇痛和抗菌作用，探讨其治疗腹泻的可能机制。结果显示香术茯苓颗粒6 g/kg给药3 d血清可以增加大肠埃希菌抑菌圈直径，有明显的抑菌作用；但对伤寒杆菌和金黄色葡萄球菌无作用。体外抗菌实验显示，香术茯苓颗粒对大肠埃希菌的最低抑菌浓度为20 g/L，最低杀菌浓度为80 g/L；对伤寒杆菌和金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度均为160 g/L，未测出最低杀菌浓度值。说明香术茯苓颗粒具有一定的镇痛和抗菌作用，可能是其治疗腹泻的部分机制。

2.2.12 在抗病毒作用研究中的应用彭志等^[47]利用中药血清药理学研究银黄清肺胶囊的抗病毒作用，观察到不同浓度的银黄清肺胶囊含药血清对呼吸道合胞病毒均有直接灭活作用，能阻断呼吸道合胞病毒侵入Hep-2细胞，同时能抑制抗呼吸道合胞病毒在Hep-2细胞内增殖。当稀释度为6.25%时体外抗呼吸道合胞病毒活性最强。

汪玉冠等^[48]采用血清药理学的实验方法，研究防感煎剂对甲1型流感病毒的体外抑制作用，结果显示，含药血清与病毒同时作用及预防给药方式时病毒抑制率明显高于治疗给药方式，而又以同时作用的抑制率最高，各含药血清组抑制作用高于正常血清组，高剂量组抑制作用强于低、中剂量组，稍低于达菲时照组血清。防感煎剂对甲1型流感病毒感染有显著的预防与直接作用，作用机制可能主要是通过直接杀灭病毒、以及抑制病毒吸附及膜融合作用来阻止流感病毒进入宿主体内增殖复制而产生的。

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引言

材料方法

讨论

3 综合评价与展望 Conclusions and prospects

3.1 血清药理学应用的综合评价血清药理学是首先给动物服药，之后采集血液，分离出血清后作为药源进行观察，较为接近真实在体内产生药物效应的真实过程，其原有成分或在体内转化为活性成分，或代谢后失活，或没有被吸收入体内，或通过第2信使而间接起作用都可以通过血清药理学反映出来^[49-50]。该方法具有如下优点：①排除粗制剂的各种影响因素对实验的干扰(如pH，渗透压等)；②于灌胃给药后不同时间采取的血清，其体外药理实验的效应及其变化，可以反映机体真实的血药浓度及其变化，开创了对于许多成分不明或复方中药制剂药动学研究的一种新方法；③实验结果与在体实验较为一致，具有直接快速的实验室指标；④操作简单，使用材料少，费用较低；⑤使中药的研究易于深入到细胞分子水平，对于创建中药细胞分子药理学研究具有重要的促进作用^[51-53]。

然而，血清药理学诞生时间短，国内起步较晚，虽然取得了一些的成果，但是还有着一些问题需要继续改进：①多数情况下中药血清中药物浓度并非随着给药剂量的增加而增加，导致血清中的含药量不能达到药物的临床最大给药剂量；②较难制定恰当的采血时间。采血时间过早或过迟均会影响血清药效，并且中药成分复杂，各个成分给药后达峰值的时间不一，为制定恰当的采血时间带来困难；③不同种属的动物，血清成分不同，生理、病理状态及遗传背景各异，引起药代动力学参数不一致，从而影响血清药物及其含量，增加了质控难度；④在体外培养体系中，不可能增加100%浓度的血清，而且不是所有的中药均通过血清起作用，有的通过消化道，有的位于皮肤局部，这是血清药理学难于解决的；⑤不能将辨病论治与辨证论治相结合应用于血清药理学，在实验中难以做到药味增减与药量增减的变化^[54-56]。

3.2 展望尽管中药血清药理学的应用、方法存在不少问题，但随着分离和分析技术的不断提高，存在问题的逐步解决，新兴的中药血清药理学目前在多个领域内已经得到应用，研究范围涉及到心血管、呼吸、消化等多个方面，已经取得了较大的进步。另外，中药血清药理学已经和中药血清药物化学、检测鉴定医学、血清成分药效学等相关学科相结合，以更客观地分析中药的物质基础和药效规律，为中药质量标准的制定、中药新药的开发提供新方法^[57-58]。相信随着相关技术的日益成熟，中药血清药理学将会更广泛地作用在科学研究和临床应用之中。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

血清药理学方法对药理、药效学和新药研发的贡献

Contributions of serum pharmacology to pharmacology, pharmacodynamics and new drug discovery

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