头颈部不同部位肿瘤动物模型的建立及生长转移特性比较

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2016.05.024

中国组织工程研究 ›› 2016, Vol. 20 ›› Issue (5): 748-753.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.05.024

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头颈部不同部位肿瘤动物模型的建立及生长转移特性比较

李文晋，牛金亮，朱莉，王涛，王瑜，余佳丽

山西医科大学第二医院，山西省太原市 030001

收稿日期:2015-11-25 出版日期:2016-01-29 发布日期:2016-01-29
通讯作者: 牛金亮，博士，教授，山西医科大学第二医院，山西省太原市 030001
作者简介:李文晋，女，1976年生，山西省文水县人，汉族， 2011年山西医科大学毕业，博士，副主任医师，主要从事口腔医学的研究。
基金资助:
山西省卫生厅科技攻关计划项目(20100141)，山西省基础研究青年科技研究基金项目(2011021035-4)，山西省研究生优秀创新项目(20093066)，山西医科大学第二医院博士启动基金(2013-6)

Establishing tumor-bearing animal models at different sites of the head and neck and their growing and metastatic characteristics

Li Wen-jin, Niu Jin-liang, Zhu Li, Wang Tao, Wang Yu, Yu Jia-li

Second Hospital of Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, Shanxi Province, China

Received:2015-11-25 Online:2016-01-29 Published:2016-01-29
Contact: Niu Jin-liang, M.D., Professor, Second Hospital of Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, Shanxi Province, China
About author:Li Wen-jin, M.D., Associate chief physician, Second Hospital of Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, Shanxi Province, China
Supported by:
the Scientific Research Plan of Shanxi Provincial Health Department, No. 20100141; the Youth Science and Technology Research Fund for Basic Research in Shanxi Province, No. 2011021035-4; the Outstanding Graduate Innovation Project of Shanxi Province, No. 20093066; Doctoral Startup Fund of the Second Hospital of Shanxi Medical University, No. 2013-6

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：

转移：是指肿瘤细胞从原发部位侵入淋巴管，血管或其他途经被带到它处继续生长，形成与原发部位肿瘤相同类型的肿瘤，这个过程成为转移，所形成的肿瘤成为转移瘤或转移癌。转移是恶性肿瘤的特征。

头颈部肿瘤：包括颈部肿瘤、耳鼻喉科肿瘤以及口腔颌面部肿瘤三大部分，比较常见的就是甲状腺肿瘤、喉癌、副鼻窦及口腔癌等。头颈部所发生的肿瘤，其原发部位和病理类型之多，居全身肿瘤之首。同时，头颈部重要器官比较集中，解剖关系复杂，治疗方法各异。

背景：建立头颈部肿瘤的动物模型，为进一步研究其发病及转移机制，寻找积极有效的诊断及治疗方案有重要的临床意义。

目的：比较头颈部不同部位动物模型肿瘤的生长特性、淋巴结转移及远处转移的特性。

方法：VX2肿瘤细胞株复苏培养传代后建立荷瘤种兔，麻醉后从荷瘤处剥离肿瘤，制成肿瘤组织细胞悬液，在兔大腿内侧肌肉处注入瘤细胞悬液，制成传代兔，2周后传代。从传代兔大腿内侧获取肿瘤，制备肿瘤组织悬液，分别在兔耳部、舌部和鼻咽部注入，建立兔头颈部VX2肿瘤模型。

结果与结论：3组兔精神、饮食、活动等存在明显差异，耳部移植兔明显好于舌部和鼻咽部。兔耳部、舌部、鼻咽部接种VX2肿瘤细胞悬液，2周后均可成功的建立兔头颈部VX2肿瘤模型，成瘤率耳部最高，为100%(15/15)，舌部和鼻咽部成瘤率为93%(14/15)；不同部位VX2肿瘤模型经历了肿瘤迅速增长、中心坏死、表面破溃等阶段，生存期为4-6周；3组均出现头颈部淋巴结转移以及肺转移。苏木精伊红染色证实兔VX2肿瘤组织以及转移淋巴结为中至低分化鳞状细胞癌。说明VX2肿瘤组织细胞悬液接种建立的兔头颈部肿瘤模型具有建模周期短，稳定性好、易于重复、移植瘤成功率高、操作简单等特点，兔头颈部不同部位VX2瘤生长各具特点，可根据研究目的选择不同的种植部位。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程

ORCID: 0000-0001-5491-9248(牛金亮)

关键词: 实验动物, 细胞损伤与修复模型, 头颈部肿瘤, 鳞状细胞癌, VX2瘤株, 动物模型, 兔, 淋巴结转移

Abstract:

BACKGROUND: To establish a tumor-bearing animal model of the head and neck is of clinical significance for further studying pathogenesis and transfer mechanisms and for actively finding an effective diagnosis and therapeutic regimen.
OBJECTIVE: To compare the growth, lymphatic metastasis and distant metastasis characteristics of head and neck tumors in animals.
METHODS: VX2 tumor cell lines were resuscitated and passaged to establish tumor-bearing rabbit models. Under anesthesia, the tumor was stripped from the tumor-bearing site to make tumor cell suspension. Then, the
cell suspension was injected into the thigh muscle of rabbits and then passaged 2 weeks later. Tumor samples were harvested from the thigh of passage rabbits to make VX2 tumor cell suspension that was injected into the ear, tongue and nasopharynx of rabbits to make a VX2 tumor model of the head and neck in the rabbit.
RESULTS AND CONCLUSION: The three groups of rabbits had significant differences in spirit, diet, activity and so on. Rabbits with tumor xenograft of the ear were significantly better than those with tumor xenograft of the tongue and nasopharynx. At 2 weeks after injection of VX2 tumor cell suspension, the VX2 tumor models of the head and neck were made successfully in rabbits, and the tumor formation rate was 100% (15/15) at the ear, 93% (14/15) at the tongue and nasopharynx. VX2 tumors at different sites experienced rapid growth period, central necrosis period, surface ulceration period, and the life cycle was about 4-6 weeks. Lymph node metastasis in head and neck and pulmonary metastasis were found in the all three groups. Hematoxylin-eosin staining showed that VX2 tumor tissues and metastatic lymph nodes were confirmed as moderately to poorly differentiated squamous cell carcinoma. These findings indicate that tumor-bearing rabbit models of the head and neck established by VX2 cell suspension are characterized by short modeling cycle, good stability, easy to repeat, high tumor formation rate and simple operation. VX2 tumors in the different sites of the head and neck of rabbits have different characteristics, so we can choose the different implanting sites according to the different research purposes.
中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程

李文晋，牛金亮，朱莉，王涛，王瑜，余佳丽. 头颈部不同部位肿瘤动物模型的建立及生长转移特性比较[J]. 中国组织工程研究, 2016, 20(5): 748-753.

Li Wen-jin, Niu Jin-liang, Zhu Li, Wang Tao, Wang Yu, Yu Jia-li. Establishing tumor-bearing animal models at different sites of the head and neck and their growing and metastatic characteristics [J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2016, 20(5): 748-753.

图/表（结果） 1

2.1 实验动物数量分析所有实验兔均进入结果分析。

2.2 大体观察结果各组兔在瘤体植入后的第1，2周状况均良好，精神正常，皮毛光滑，进食正常，体质量无减轻，活动度正常。在第3-5周期间一般状况呈现进行性衰竭的表现，兔毛失去光泽，进食减少，体质量减轻，活动下降，部分的实验兔出现轻度腹泻的症状，随着时间的延长上述症状呈进行性加重。

2.2.1 耳部种植组由于移植瘤位于耳部，对进食的影响小，因此实验兔反应症状较其他两组轻，在第5周后才相继死亡。

2.2.2 舌部种植组在种植早期第1，2周移植瘤呈局限性生长，表面光滑；在种植中晚期第3，4周瘤体增大越过中线，甚至占据舌体大部，黏膜溃烂、坏死，中心呈豆渣样坏死，伴大量脓血，气味腐臭。因肿瘤位于舌部，对进食影响比耳部种植组大，兔子的反应症状较重。在后期肿瘤增大明显时动物进食容易磨擦瘤体，导致瘤体表面多有破溃、出血，影响动物进食，有5只实验兔由于舌部肿瘤过大，影响进食在第4周死亡。到晚期所有实验兔均出现拒食，极度消瘦，活动受限，最后死亡。

2.2.3 鼻咽部种植组由于移植瘤的生长，实验兔都出现张口呼吸，这是由于移植瘤长大堵塞呼吸道导致。所有实验兔到晚期均出现呼吸急促、发绀，最后全身衰竭而死亡。1只实验兔在第4周出现眼部症状如眼球外突、固定，眼睑下坠，影像学检查证实为移植瘤广泛浸润双侧破裂孔、眶尖、眶后、海绵窦等。3只实验兔在第3周发生口鼻大出血现象，是因为移植瘤侵犯周围大血管，导致其破裂引起。3只实验兔在第4周由于肿瘤过大影响呼吸，窒息死亡。14只瘤兔经影像学检查和解剖观察显示移植瘤在鼻咽部呈浸润性生长，其可侵及颞下窝、海绵窦、鼻腔、斜坡、口咽及咽旁间隙等邻近重要器官。

2.3 MRI结果不同部位种植肿瘤表现为T1WI低信号，T2WI高信号，肿瘤坏死囊变T2WI高信号。转移淋巴结呈圆形，表现为T1WI低信号，T2WI高信号(图1-3)。

2.4 动物模型瘤体及转移特性

2.4.1 移植瘤

耳部种植组：15只实验兔耳部移植VX2瘤株后MRI扫描第1周没发现肿物形成，第2周有5只，第3周7只，第4周3只，共15只发现头部有肿物发生，均经影像学检查及解剖证实移植成功，种植组成瘤率100%。移植成功的肿瘤均生长迅速，2-3周生长明显加速，第5周肿瘤坏死囊变(图1)。

舌部种植组：15只实验兔舌部移植VX2瘤株后第1周没发现肿物形成，第2周有7只，第3周5只，第4周2只，共14只发现舌部有肿物发生，经影像学检查及解剖证实舌部移植成功，舌部移植瘤的成功率为93%。有5只实验兔由于舌部肿瘤过大，影响进食在第4周死亡。移植瘤的潜伏期为3-7 d，在第2，3周时肿瘤生长迅速，第4，5周肿瘤破溃(图2)。

鼻咽部种植组：15只实验兔鼻咽部移植VX2瘤株后影像学检查在第1周未发现肿瘤形成，第2周发现有4只出现移植瘤，第3周有8只，第4周有2只，共有14只发现鼻咽部有肿物生成，通过影像学检查和大体解剖证实移植瘤成功，鼻咽部的成瘤率为93%。有3只实验兔在第3周期间因口鼻大出血导致死亡。3只实验兔在第4周由于肿瘤过大影响呼吸，窒息死亡。移植成功的肿瘤生长迅速，在第2，3周时生长明显加速(图3)。

3组实验兔的肿瘤组织通过苏木精-伊红染色证实均为中到低度分化鳞状细胞癌(图片未显示)。

2.4.2 颈部淋巴结转移

耳部种植组：对15只实验兔进行影像学检查和通过解剖病理证实，15只实验兔均有头颈部淋巴结的转移，其中发生腮腺区淋巴结转移的为100%，颈部淋巴结转移的为67%，其中发生双侧颈部淋巴结转移的有3只。转移淋巴结依次出现的顺序为腮腺、颈部(颈浅、颈深)(图1)。

舌部种植组：对15只实验兔进行影像学检查和通过解剖病理证实，15只实验兔均有颈部淋巴结的转移，转移率为100%，其中发生双侧颈部淋巴结转移的有5只。转移顺序为颌下、颈部(颈浅、颈深)(图2)。

鼻咽种植组：对14只移植瘤兔进行影像学检查和通过解剖病理证实，11只实验兔有颈部淋巴结的转移，转移率为78.57%，其中发生双侧颈部淋巴结转移的有4只。转移淋巴结依次出现的顺序为颈浅、颈深，肿物较大时可波及颌下(图3)。

3组实验兔的淋巴结通过苏木精-伊红染色证实均有转移(图片未显示)。

2.4.3 远处转移(图片未显示)

耳部种植组：对15只存活并移植成功的实验兔行影像学检查发现有1例发生肺转移，转移率为7%。

舌部种植组：对14只存活并移植成功的实验兔行影像学检查发现有12例发生肺转移，转移率为86%。

鼻咽部种植组：对14只存活并移植成功的实验兔行影像学检查发现有1例发生肺转移，转移率为7%。

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引言

头颈部肿瘤是人体最常见的恶性肿瘤之一，占全身恶性肿瘤的3%，其中90%为上皮源性的鳞状细胞癌，近年来头颈部肿瘤的发病率呈上升趋势，发病年龄也趋于年轻化^[1-5]。头颈部解剖结构复杂，头颈部肿瘤与周围重要组织器官如脑等关系密切，随着病情的进展，肿瘤常多方向侵犯、累及多个部位及邻近器官。头颈部鳞状细胞癌扩散的主要途径是通过区域淋巴结转移，约有≥ 80%头颈部恶性肿瘤发生颈部淋巴结转移，这是头颈部肿瘤患者难于治疗、引起死亡的重要原因^[6]。因而建立头颈部肿瘤的动物模型，对进一步研究其发病及转移机制，寻找积极有效的诊断及治疗方案有重要的临床意义。

VX2瘤株是来源于Shope病毒致乳头瘤恶变形成的上皮细胞恶性肿瘤，属于低分化鳞状细胞癌，1940年建株^[7]，是一种较稳定的可移植的肿瘤细胞株，与头颈部肿瘤多数低分化鳞癌有病理共性^[8]。VX2瘤株可在兔体内接种，具有较高的局部淋巴结转移及肺、肝等远处转移特性，在大型动物模型的研究上具有很高的应用价值。目前由于VX2瘤株在侵袭方式、淋巴结及血道转移等方面与人类头颈部鳞癌、肝癌等极为相似，并具有易于种植、侵袭性强、生长迅速、移植成功率高和血供丰富等特点，可接种于兔的肝脏、肾脏、肌肉、骨骼和颅脑等处^[9-11]，常用于建立这类肿瘤的动物模型^[6^，^12-16]。

作者拟在兔耳、舌及鼻咽部建立VX2头颈部肿瘤的动物模型，结合MRI表现和病理学诊断比较头颈部不同部位动物模型肿瘤的生长特性、淋巴结转移及远处转移的特性。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程

材料方法

1.1 造模动物及材料无特定病原体远系杂交的新西兰白兔47只，雌雄不限，兔龄四五个月，体质量2.0-2.5 kg，购自山西医科大学动物中心，动物许可证号SCXK(晋) 2009-0001。实验前动物适应新环境5 d。兔子被分别安放在笼子中，单只饲养，保持恒定的环境，温度18-20 ℃，湿度60%，兔子饮用酸性自来水，每天饮水和进食随意。所有实验均在白天进行。所有实验均符合动物伦理学要求，实验经过山西医科大学动物伦理学委员会批准。所有实验操作均在30 mg/kg戊巴比妥钠耳缘静脉麻醉后进行。

VX2瘤细胞株由北京协和医院病理科提供。

1.2 荷瘤兔的制备取2只新西兰白兔，麻醉后，仰卧位固定，皮肤进行剃毛、消毒，放置无菌洞巾，从皮肤分层剖开，穿过肌肉将0.5 mL VX2肿瘤细胞悬液(细胞浓度为5×10¹¹ L^-1)移植在兔的大腿后方，观察肿瘤的生长^[17-20]。2周后制成荷瘤兔。

1.3 传代接种将所需接种VX2瘤株的兔子常规麻醉，无菌条件下，用带有18号注射针头的1mL注射器吸取配置好的VX2肿瘤细胞悬液(细胞浓度为5×10¹¹L^-1)0.5 mL，注入兔右侧大腿股内侧的肌肉，观察兔子大腿后方肿瘤的生长情况，待肿瘤长至直径2 cm大小即制成传代兔，取出的新鲜肿瘤组织制备细胞悬液，取下的肿瘤组织做病理切片苏木精-伊红染色，病理证实鳞癌方可用于实验兔种植。在2 h内将肿瘤移植入实验兔所需的部位。

1.4 制备细胞悬液荷瘤兔常规麻醉，无菌条件下剥离肿瘤，用生理盐水冲洗，剔除坏死组织后，用手术刀片切取肿瘤边缘生长旺盛的灰白色鱼肉样组织，将其置于烧杯中用眼科剪刀将其剪碎，再放入匀浆器中匀浆，生理盐水稀释制成肿瘤组织细胞悬液。

1.5 头颈部肿瘤动物模型的建立将其余45只实验兔分为3组：耳部接种组、舌部接种组和鼻咽部接种组，各15只。

耳部接种组：常规麻醉，耳后部常规术区备皮消毒后，种植部位为侧耳郭边缘和耳中央动脉之间，双耳的下1/3入颅处。用18号针头在种植部位前约1 cm处入针，潜行注入0.5 mL的肿瘤细胞悬液(细胞浓度为5×10¹¹ L^-1)，缓慢退出针头，并用无菌纱布块压迫针孔数分钟，防止瘤细胞渗漏。术毕肌注青霉素4×10⁵ U，1次/d，连续5 d。

舌部接种组：常规麻醉，牵拉出舌体，接种部位为舌侧缘中1/3舌黏膜。用5号针头于接种处潜行注入0.2 mL肿瘤细胞悬液(细胞浓度为5×10¹¹L^-1)，缓慢退出针头，并用无菌纱布块压迫针孔数分钟，以防止瘤细胞渗漏及出血，术后抗菌处理同上。

鼻咽部接种组：常规麻醉，将兔张口固定，暴露软腭，用18号穿刺针穿过软腭进入鼻咽部，注入0.4 mL肿瘤细胞悬液(细胞浓度为5×10¹¹L^-1)，缓慢退出针头，并用无菌纱布块压迫针孔数分钟，以防止瘤细胞渗漏及出血，术后抗菌处理同上。

1.6 大体观察自肿瘤种植成功起每天观察实验兔的精神状态、饮食、活动等一般生命体征。

1.7 影像学观察肿瘤种植成功后第2，3，4，5周行MRI(美国GE公司)扫描，观察其肿瘤大小，侵犯部位、淋巴结转移及远处转移情况。MRI扫描方法：扫描序列T1WI(TR/TE 560 ms/ 11.0 ms，SE)，T2WI(TR/TE 5 120/ 87.5 ms，SE)和T2加权梯度回波(TR/TE 500 ms/15 ms，翻转角15°-20°)3个序列的扫描，分别进行横轴位和冠状位扫描，扫描的层厚为3 mm，采用0.3 mm的间隔^[21-24]。

1.8 病理学观察每组取肿瘤组织及头颈部淋巴结经体积分数10%甲醛固定。自固定液中取出标本，流水冲洗 30 min；梯度乙醇脱水；二甲苯透明；浸蜡，包埋。以3 μm厚度连续切片；常规烘片脱蜡(60 ℃，10 min)；二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化；苏木精染色3 min；体积分数1%盐酸乙醇分化数秒；自来水冲洗5 min；pH 7.5-8.0的稀氨水浸泡数秒，自来水冲洗5 min；梯度乙醇脱水；二甲苯透明；中性树胶封固。在显微镜观察。

1.9 主要观察指标兔耳、舌及鼻咽部建立VX2头颈部肿瘤的效果。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程

讨论

鳞状细胞癌是头颈部最常见的癌症，占所有新确诊癌症病例的3%^[25-27]，是最主要的男性癌症之一，居第8位。过去几十年尽管在肿瘤细胞和分子生物学方面开展大量的研究，运用最新肿瘤治疗和外科手术，但头颈部鳞状细胞癌患者死亡率和发病率一直保持不变^[28]，因此探索头颈部肿瘤的发病机制进而寻找到一条积极有效的预防途径极为重要。国内外学者对头颈部鳞状细胞癌进行了大量的基础及临床研究。以往的研究多采用小鼠做为研究对象来诱发肿瘤，但有些学者发现小鼠与人类的头颈部鳞癌在某些特性上相差较大。

Dünne等^[12]报道建立了兔耳部VX2移植瘤的模型，在VX2瘤株移植后发现有淋巴结的转移。之后Sapundzhiev等^[29]也报道建立了兔耳部VX2移植瘤的模型，研究发现兔耳部VX2移植瘤的生长在形态学和病理学方面与人类的头颈部肿瘤类似。Lee等^[30]报道利用建立的兔VX2耳癌模型，结合病理诊断，认为MRI能鉴别转移淋巴结和炎性增生淋巴结。

Jefferis等^[31]首次报道了兔舌部VX2瘤株鳞状细胞癌模型的建立，该动物模型与人类舌部鳞癌十分相似，同鼠类等小动物模型比较其是目前优势较大的中等动物肿瘤模型；其肿瘤摄取率为92.6%，但颈部淋巴结的状况尚未见报道。Chikui等^[32]也成功利用VX2兔的癌症模型的口腔颊部黏膜诱导了鳞状上皮细胞癌抗原，并且证明了有20枚颈部淋巴结被转移，只是肿瘤摄取率并未统计。沈毅等^[33]通过建立兔舌不同部位VX2鳞癌和颈淋巴结转移模型，对其生物学特性进行研究，发现其生物学特性与人类基本一致，生长迅速，容易转移，是较理想的动物肿瘤模型^[34-37]。

本实验鉴于VX2肿瘤的生物学特性与人类鳞状细胞癌具有较高的相似性，兔类比鼠类在体积上也给实验操作带来了许多方便等因素^[38-39]，采用兔做为实验动物，并将兔VX2瘤株种植于耳部、舌部及鼻咽部等头颈部不同部位，发现耳部的移植瘤成功率最高达100%，这可能与位置外露，操作方便，注射肿瘤细胞悬液的量容易控制，保证了植入的肿瘤细胞悬液的活性所致。舌部和鼻咽部由于位置隐蔽，操作不便，麻醉所需的时间较长，导致肿瘤细胞悬液的活性降低；注射时压力过高，致使注射的肿瘤细胞悬液的量不易控制，有外溢现象发生，这都可能导致舌部和鼻咽部移植瘤的成功率较耳部低。

3.1 移植瘤的生长特性由于肿瘤种植的部位不同，实验兔的生存状况有所不同^[40]。移植前期3组兔的一般状况基本相同，后期一般状况出现很大差异。耳部种植组生存时间最长，舌部种植组有5只实验兔在第4周时发生死亡，鼻咽部种植组3只实验兔在第4周由于肿瘤过大影响呼吸，窒息死亡。鼻咽部移植对周围组织的侵犯范围最广，其可侵及双侧破裂孔、眶尖、眶后、颞下窝、海绵窦、鼻腔、斜坡、口咽及咽旁间隙等邻近重要器官。

3.2 头颈部淋巴结的转移于各部位淋巴回流的途径不同，转移的顺序及转移率有所不同。耳部种植组先发生腮腺淋巴结的转移，转移率为100%，其次为颈部(颈浅、颈深)淋巴结，转移率为67%，其中发生双侧颈部淋巴结转移的有3只。舌部种植组均有颈部淋巴结的转移，转移率为100%，其中发生双侧颈部淋巴结转移的有5只。转移顺序为颌下、颈部(颈浅、颈深)。鼻咽部种植组有11只实验兔发生颈部淋巴结的转移，转移率为79%，其中发生双侧颈部淋巴结转移的有4只。转移淋巴结依次出现的顺序为颈浅、颈深，肿物较大时可波及颌下。

3.3 远处转移 3组实验兔均发生肺转移，但耳部和鼻咽部种植组较低，舌部种植组高，这可能与注射肿瘤细胞悬液时压力过高可导致“注射播散”的现象，肿瘤细胞植入到血管内，出现肺转移和淋巴结转移。

此次实验采用VX2瘤株肿瘤细胞株接种的方法，先将肿瘤细胞进行传代培养获得瘤株，然后将瘤株接种到兔后腿内制成荷瘤兔，获得了实体肿瘤，再从荷瘤兔身上取得VX2肿瘤组织，制备建立头颈部肿瘤所需的肿瘤组织混悬液，注入耳、舌和鼻咽部等相应部位，获得头颈部肿瘤的动物模型。实验证明通过此种方法可以在短期内大批量的建立所需的动物模型，其稳定性和重复性均较好，成瘤率可高达100%，晚期发生颈淋巴结转移和肺转移，其临床症状同人类十分相似，为研究头颈部肿瘤及淋巴结转移的提供依据。中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程

头颈部不同部位肿瘤动物模型的建立及生长转移特性比较

Establishing tumor-bearing animal models at different sites of the head and neck and their growing and metastatic characteristics

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