同种异体与自体血清对骨髓基质干细胞的增殖效应

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2015.45.005

中国组织工程研究 ›› 2015, Vol. 19 ›› Issue (45): 7242-7248.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2015.45.005

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同种异体与自体血清对骨髓基质干细胞的增殖效应

李方国¹，卢艳东¹，崔猛¹，赵嘉国¹，杨强¹，王磊²，裴国献³，孙杰¹

1天津医院创伤骨科，天津市 300211；2南方医科大学附属南方医院创伤骨科，广东省广州市 510515；3解放军第四军医大学国际骨科教育学院，陕西省西安市 710032

收稿日期:2015-09-11 出版日期:2015-11-05 发布日期:2015-11-05
通讯作者: 孙杰，副主任医师，天津医院创伤骨科，天津市 300211
作者简介:李方国，男，1983年生，山东省聊城市人，汉族，2011年南方医科大学毕业，硕士，医师，主要从事骨组织工程方面与四肢骨折的研究。
基金资助:
国家自然科学基金项目(31470937，331300798)；南方医科大学南方医院院长基金项目(2014CO14)

Effects of allogeneic versus autologous serum on the proliferation of bone marrow stromal stem cells

Li Fang-guo¹, Lu Yan-dong¹, Cui Meng¹, Zhao Jia-guo¹, Yang Qiang¹, Wang Lei², Pei Guo-xian³, Sun Jie¹

1Department of Orthopedic Traumatology, Tianjin Hospital, Tianjin 300211, China; 2Department of Orthopedic Traumatology, Nanfang Hospital, Southern Medical University, Guangzhou 510515, Guangdong Province, China; 3International College of Orthopedics Education, Fourth Military Medical University of Chinese PLA, Xi’an 710032, Shaanxi Province, China

Received:2015-09-11 Online:2015-11-05 Published:2015-11-05
Contact: Sun Jie, Associate chief physician, Department of Orthopedic Traumatology, Tianjin Hospital, Tianjin 300211, China
About author:Li Fang-guo, Master, Physician, Department of Orthopedic Traumatology, Tianjin Hospital, Tianjin 300211, China
Supported by:
the National Natural Science Foundation of China, No. 31470937, 331300798; President Foundation of Nanfang Hospital, No. 2014CO14

摘要/Abstract

摘要：

背景：传统的细胞培养方法大多采用胎牛血清作为营养支持，其存在传播疾病的风险和免疫排斥反应。寻找胎牛血清替代物并建立规范、安全、高效的成人骨髓基质干细胞体外培养体系刚刚起步，有待进一步研究。
目的：探讨AB血清、自体血清替代胎牛血清体外培养人骨髓基质干细胞的效果。
方法：从成人骨髓穿刺液中分离人骨髓基质干细胞，分别用含体积分数10%AB血清、自体血清和胎牛血清的基础培养基培养人骨髓基质干细胞，取第3代细胞进行相关指标检测。
结果与结论：相差显微镜下见AB血清组细胞最先达到汇合；流式细胞仪检测细胞表面抗原，各组均符合骨髓干细胞表型，纯化程度良好；Alamar Blue法显示AB血清组平均荧光强度最高，促增殖效率最高；Annexin V-FITC法显示各组细胞凋亡率均在5%以下，生长状态良好；碱性磷酸酶染色、钙结节和油红O染色结果显示，各组细胞均保持了成骨、成脂分化能力。AB血清对人骨髓基质干细胞的增殖作用较胎牛血清、自体血清明显增强。AB血清有望替代胎牛血清建立符合骨组织工程临床应用要求的体外成人骨髓基质干细胞培养体系。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

关键词: 干细胞, 骨髓干细胞, 自体血清, 骨髓基质干细胞, 成人骨髓基质干细胞, 血清, 同种异体血清, AB血清, 胎牛血清, 增殖, 骨组织工程, 国家自然科学基金

Abstract:

BACKGROUND: Fetal bovine serum as nutritional support is often used in the traditional cell culture. Consequently, a host of potential problems such as the spread of disease and immunological reactions exist. To find a suitable fetal bovine serum substitute and to establish a culture system of human bone marrow stromal stem cells in vitro which has been standardized, safe and efficient has just started.

OBJECTIVE: To investigate the effects of different serums on proliferation of bone marrow stromal stem cells in vitro.

METHODS: Bone marrow stromal stem cells were obtained from adult bone marrow, which were cultured in DMEM containing 10% AB serum, 10% autologous serum, or 10% fetal bovine serum. Cells at passage 3 were used in this study.

RESULTS AND CONCLUSION: The cell confluence in the AB serum group was earlier than that in the fetal bovine serum group and autologous serum group. Human bone marrow stromal stem cells maintained the phenotypes of bone marrow stem cells in three serums detected by flow cytometry. AB serum group showed the highest fluorescence intensity and the most efficiency of cell proliferation which examined by the AlamarBlue assay. Apoptosis rate was < 5% in all the three groups, and cells grew well in these serums. Alkaline phosphatase, calcium nodules and oil red O staining showed that the cells maintained the osteogenesis and adipogenesis capacity in the three groups. AB serum was found to have a better effect on proliferation capability of cells than fetal bovine serum and autologous serum. Taken together, AB serum is expected to be a substitute of fetal bovine serum to build an in vitro culture system of adult bone marrow stromal stem cells that accord with the clinical requirements of bone tissue engineering.
中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

Key words: Bone Marrow, Mesenchymal Stem Cells, Serum, Cells, Cultured, Cell Proliferation, Tissue Engineering

李方国，卢艳东，崔猛，赵嘉国，杨强，王磊，裴国献，孙杰. 同种异体与自体血清对骨髓基质干细胞的增殖效应[J]. 中国组织工程研究, 2015, 19(45): 7242-7248.

Li Fang-guo, Lu Yan-dong, Cui Meng, Zhao Jia-guo, Yang Qiang, Wang Lei, Pei Guo-xian, Sun Jie. Effects of allogeneic versus autologous serum on the proliferation of bone marrow stromal stem cells[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2015, 19(45): 7242-7248.

图/表（结果） 4

2.1 相差显微镜观察人骨髓基质干细胞生长情况各血清组细胞均于接种后12-24 h开始半贴壁，24 h后均已完全贴壁，呈现梭形、多角形，以梭形为主。AB血清组人骨髓基质干细胞于2 d开始增殖明显，3 d后多个细胞开始融合，逐渐形成集落；培养五六天，细胞长满瓶底并达到单层细胞融合，呈漩涡状排列；而自体血清组和胎牛血清组则需要七八天才达到单层细胞融合。传代培养后，AB血清组细胞两三天可长满瓶底，自体血清组和胎牛血清组则需要三四天。

2.2 人骨髓基质干细胞表面标志物的测定经流式细胞仪检测，3个血清组培养的人骨髓基质干细胞均一性较好，第3代各血清组细胞CD29、CD44和CD105均表达为强阳性(98%以上)；各组细胞CD14、CD34和CD45均表达为阴性(2%以下)，各组之间差异无显著性意义(P > 0.05)，见图1。结果表明各血清组均能保持人骨髓基质干细胞的生物学活性，纯化程度良好。

2.3 Alamar Blue法测定细胞增殖活性干预至第3，5，7，9，11天时，3个血清组对人骨髓基质干细胞的增殖效应(荧光强度值)比较发现：3个血清组均能不同程度的促进人骨髓基质干细胞增殖，其效应由强至弱依次为AB血清组、自体血清组、胎牛血清组，各组之间差异有显著性意义(P < 0.05)，见图2。结果表明AB血清组和自体血清组培养细胞的增殖效率明显高于胎牛血清组，AB血清组促人骨髓基质干细胞增殖效率最高。

2.4 Annexin V-FITC法测定细胞凋亡率流式细胞仪所测得结果表明，第3代各血清组间细胞凋亡率差异无显著性意义(F=0.003，P=0.997)；各血清组细胞凋亡率分别为：AB血清组(4.33±0.76)%，自体血清组(4.31±0.70)%，胎牛血清组(4.34±0.59)%，见图3。表明各血清组均保持了人骨髓基质干细胞良好的生长繁殖能力。

2.5 人骨髓基质干细胞分化能力鉴定成骨诱导培养 7 d，各组部分细胞由梭形转变为多角形或卵圆形，体积明显增大，细胞持续增殖、重叠。随诱导时间延长，AB血清组细胞内颗粒明显增多，细胞外基质分泌旺盛，有些细胞团中央可见棕色物质。14 d后可见钙沉积出现，随后出现明显的钙结节。自体血清组和胎牛血清组出现钙结节的时间较晚，并且钙结节数量较少。各组细胞诱导培养后碱性磷酸酶染色、茜素红染色均呈阳性表达(图4)。碱性磷酸酶和钙结节的阳染细胞数量由多至少依次为AB血清组、自体血清组、胎牛血清组。表明AB血清、自体血清均能保持诱导人骨髓基质干细胞向成骨细胞分化能力，且AB血清组成骨分化能力最高。成脂诱导培养5 d，各组部分细胞由梭形变成圆形或多角形，呈多极突起，且突起细长，小部分细胞浆中可见许多微小的折光性很强的脂滴形成。10 d后各组细胞浆中的小脂滴逐渐融合，形成红色的大脂肪泡。各组细胞油红O染色均呈红色阳性表达(图4)，阳染细胞数量相当。表明AB血清、自体血清保持了良好的诱导人骨髓基质干细胞向成脂细胞分化的能力，且3种血清诱导分化能力相似。

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引言

在骨组织工程研究中，有效种子细胞的选择是组织工程化骨应用于临床需解决的基本问题。目前，骨组织工程种子细胞有4种来源：骨髓、骨、骨外膜及骨外组织，其中骨髓分造血和基质两大系统，造血系统是更新循环血细胞的成体造血干细胞的主要来源，而基质系统则含有间叶干细胞或骨髓基质干细胞。骨髓基质干细胞具有强大的增殖能力和多向分化潜能，是应用较广泛的种子细胞，其在体内能够自我更新，具有支持与调控造血作用，而且在不同的诱导条件下，可分化为骨、软骨、肌腱、肌肉、脂肪、神经元等多种组织细胞。传统的培养过程中，研究者大都会加入胎牛血清，其对于细胞的生长起着重要作用，但同时也成为临床应用的障碍。胎牛血清可能有细菌及病毒感染的可能，特别是朊病毒可以导致疯牛病^[1-2]，另外，可能引起局部免疫反应或炎性反应^[3]。Plomer等^[4]报道，传统方法采用胎牛血清培养，获得10⁸个骨髓基质干细胞，可检测到7-30 mg胎牛血清异基因蛋白。用商品化的无血清培养基替代动物血清培养细胞，在实际应用中仍存在一些问题，如培养基研制成本高，不具有通用性，仅限于特定的细胞培养等。在培养基中加入特定的细胞因子，成本则更加昂贵，如作为代表性的生长因子之一骨形态发生蛋白^[5-8]，其提取制备工艺复杂，产率低，成本可观，还具有潜在的毒性、致基因突变及异位成骨等缺点^[9]，使其不能满足临床应用的需要。因此，在骨髓基质干细胞培养过程中，细胞营养基质的选择仍然是困扰骨组织工程进入临床应用的瓶颈之一。本研究针对这一问题，采用同种异体AB血清、自体血清替代胎牛血清体外培养成人骨髓基质干细胞，尝试探讨一种避免引入动物源性异种蛋白的安全培养方法，为骨组织工程种子细胞向临床应用提供实验依据和理论基础。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

材料方法

1.1 设计细胞观察实验。

1.2 时间及地点实验于2014年3至12月在广东省骨与软骨再生实验室完成。

1.3 材料

1.3.1 主要试剂 PBS、胎牛血清(特优级)、DMEM培养基(美国Gibco公司)；油红O(美国Sigma公司)；Alamar Blue(美国Invitrogen公司)；Annexin V-FITC 凋亡试剂检测盒(美国Biovision公司)；鼠抗人单克隆抗体CD14-FITC、CD44-FITC、CD105-FITC、CD29-PE、CD34-PE、CD45-PE(美国Becton Dickinson公司)。

1.3.2 主要仪器 CO₂细胞培养孵箱(美国Harris公司)；4500型倒置相差显微镜(日本Nikon公司)；FACSCalibur流式细胞仪(美国Becton Dickinson公司)；AB-160型电子分析天平(美国Denver公司)；GL-16低速离心机(珠海Hema公司)。

1.4 实验方法

1.4.1 同种异体AB血清及自体血清的制备参照文献[10]报道的方案制备血清，采集12名健康成年志愿者静脉血 50 mL(年龄24-30岁，平均26.5岁，其中6名为AB血型志愿者，6名为捐献骨髓志愿者，均对研究知情同意，并已签署知情同意书)，置入不含肝素的离心管，37 ℃温箱静置，待完全凝血后，4 ℃保存6 h。其中，6份捐献骨髓者的静脉血不混合制备自体血清，另外6份AB血型非抗凝静脉血混合均匀制备同种异体AB血清。将混有血液凝块离心管置于离心机中，2 000×g/min离心15 min，收集离心管内上清液，重复离心1次，收集上层淡黄色透明血清转移至另一离心管中，置于56 ℃水浴加热40 min，灭活血清补体， 0.22 μm过滤除菌，加入DMEM低糖培养基中或分装入无菌血袋中，待用。

1.4.2 人骨髓基质干细胞的体外分离、原代培养及诱导培养采用髂后上嵴骨髓穿刺法，骨髓穿刺针刺入髂嵴，用含有肝素的注射器抽取6名捐献骨髓志愿者骨髓8 mL，混匀放入含有8 mL PBS的离心管，密度梯度离心法获取有核细胞，去除上层脂肪组织及上清液，接种入25 cm²培养瓶。胎牛血清组采用的培养基为体积分数为10%胎牛血清配比低糖DMEM培养基加入1%的青霉素、链霉素及新霉素混合液；自体血清组采用的培养基为体积分数为10%自体血清配比低糖DMEM培养基加入1%的青霉素、链霉素及新霉素混合液；AB血清组采用的培养基为体积分数为10%AB血清配比低糖DMEM培养基加入1%的青霉素、链霉素及新霉素混合液。采用全骨髓法进行原代培养人骨髓基质干细胞。倒置相差显微镜逐日观察细胞生长情况，当培养瓶底细胞达到70%融合后，按1∶3比例传代培养。取第3代各组人骨髓基质干细胞，按5×10⁴/孔的密度分别植入6孔板中培养，次日更换各组成骨诱导液(各血清组完全培养液中加入0.05 mmol/L维生素C、 100 mmol/L地塞米松和10 mmol/L β-甘油磷酸钠)和成脂诱导液(各血清组完全培养液中加入0.5 mmol/L 1-甲基-3-异丁基-黄嘌呤、1 μmol/L地塞米松、10 mg/L胰岛素和100 mol/L吲哚美辛)培养，相差显微镜观察细胞生长情况。1.4.3 人骨髓基质干细胞表面标志物的检测取第3代各组人骨髓基质干细胞，以含0.25%胰酶-0.02%EDTA的PBS消化细胞，终止胰酶作用后，800-1 000 r/min离心5 min，弃去上清液，PBS漂洗2遍，制备成单细胞悬液300 μL，分别加入适当稀释的单克隆抗体(CD14-FITC，CD29-PE，CD34-PE，CD44-FITC，CD45-PE，CD105-FITC)，室温避光25 min，小鼠IgGI-FITC，IgGI-PE作为阴性对照，PBS洗涤2次，加入400 μL PBS混匀细胞，4 ℃保存，24 h内采用流式细胞仪检测分析。

1.4.4 Alamar Blue法测定细胞增殖能力取第3代各组人骨髓基质干细胞，将细胞密度调整为1×10³/孔，接种于96孔板，每孔加入100 μL各组相应培养液，每3 d换液1次，培养1，3，5，7，9，11 d时，各检测孔分别加入10 μL Alamar Blue染液，室温静置反应4 h，使用酶标仪测定荧光强度(发射波长和激发波长分别为590 nm和544 nm)，每组每个时间点各测5孔。

1.4.5 Annexin V-FITC法测定细胞凋亡率取第3代各组人骨髓基质干细胞，以含0.25%胰酶-0.02%EDTA的PBS消化细胞，终止胰酶作用后，800-1 000 r/min离心5 min，弃去上清液，PBS漂洗2遍，调整细胞浓度为1×10⁹ L^-¹，置于200 μL结合缓冲液，分别添加10 μL PI和10 μL Annexin V-FITC，室温避光反应15-30 min，加入300 μL结合缓冲液，于1 h内使用流式细胞仪检测，Annexin V-FITC显示绿色荧光，PI显示红色荧光。

1.4.6 碱性磷酸酶染色、钙结节及油红O染色

碱性磷酸酶染色：各组骨髓基质干细胞成骨培养10 d，PBS漂洗2次，用冷丙酮固定10 min，蒸馏水漂洗3次，加入BCIP/NBT染液，室温避光2 h后，倾去BCIP/NBT染液，用蒸馏水洗涤3次终止显色反应，阳性细胞染为紫红色。

钙结节染色：各组骨髓基质干细胞成骨培养21 d，PBS漂洗2次，体积分数为95%乙醇固定10 min，蒸馏水漂洗3次，加入0.1%茜素红染色30 min，蒸馏水漂洗，自然干燥，钙结节染为棕红色。

油红O染色：各组骨髓基质干细胞成脂培养10 d，PBS漂洗2次，用冷丙酮固定10 min，油红O染液染色15 min，蒸馏水漂洗，自然干燥，细胞内脂滴染为红色。

1.5 主要观察指标 ①相差显微镜观察各组细胞生长情况。②流式细胞仪检测细胞表面抗原。③Alamar Blue法检测细胞增殖活性。④Annexin V-FITC法测定细胞凋亡率。⑤通过碱性磷酸酶染色、钙结节及油红O染色鉴定人骨髓基质干细胞分化能力。

1.6 统计学分析计量资料以x(_)±s表示，P < 0.05为差异有显著性意义，采用SPSS 13.0统计软件进行统计分析。统计分析采用One-Way ANOVA，用LSD法对各组数据进行多重比较；若经Levene检验，数据不满足方差齐性，则采用方差分析的近似方法Dunnet’s T3法进行统计分析。

讨论

种子细胞作为骨组织工程的三大要素之一，如何使其体外高效扩增，安全应用已成为目前的关注热点^[11]。作为理想的种子细胞之一，基质干细胞来源广泛^[12-13]，其中以骨髓最佳^[14]，骨髓基质干细胞在骨科领域具有广泛的应用前景^[15-18]，其特点具有：①细胞来源丰富，易于获得。②较强的增殖能力，易于扩增。③易于分化和保持成骨细胞的表型。④易于作为基因治疗的运载工具，携带治疗基因进入靶器官。骨髓基质干细胞在体外扩增、成骨诱导培养，并在裸鼠、鼠、兔、山羊、恒河猴等多种动物体内构建组织工程骨，成功修复多个部位的骨缺损，但总体来说，尚处于摸索阶段，因此，深入研究成人骨髓基质干细胞的生物学行为，对临床应用有重要意义。

种子细胞的培养中，营养基质是细胞生长和增殖的基本环境。目前，培养基种类繁多，但仍没有一种培养基能提供细胞生长的所有需求^[19]。血清是细胞培养基中不可或缺的成分，它能提供维持细胞指数级生长的激素、生长因子，提供在细胞代谢过程中起重要作用的结合蛋白，以及金属离子，提供酸碱平衡缓冲液作用等。通常组织工程实验室培养骨髓基质干细胞多采用基础培养基中添加动物异种血清的方法^[20]，其中以胎牛血清质量最好，但动物血清潜在的生物安全隐患已日益引起研究者的关注，其可能携带衣原体、支原体等病原体及各种病毒，如疯牛病病毒^[21-22]，使其在临床应用中受到了限制。

既往一些学者围绕营养基质的选择，如同种异体血清、自体血清、富血小板血浆、血小板裂解产物等进行相关研究，并取得了一些成果^[23-28]，但这些报道的结果仍存在争议。本实验采用同种异体AB血清及自体血清培养人骨髓基质干细胞，扩增至第2代时，细胞的外观形态均一，符合骨髓基质干细胞的形态特征。单从形态无法鉴定骨髓基质干细胞，但是目前尚未发现其特有的细胞表面标志物，尚无直接鉴定方法^[29-30]。现在普遍的观点认为骨髓基质干细胞是一个异质细胞群，其不表达如Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原，碱性磷酸酶或骨桥蛋白，此外，还不表达造血系标志，如分化群CD11b，CD14，CD19，CD31，CD34，CD38，CD45等，其表达CD29，CD44，CD54，CD71，CD105/SH3，FIK1，CD106等，还可以发现SH2、SH3和SH4等表面抗原的特异性表达。因此，测定细胞表面特异性CD标志物是鉴定骨髓基质干细胞的常用方法^[31-32]。本研究中，各组细胞CD29、CD44和CD105均为强阳性表达，CD14、CD34和CD45等造血干细胞标志均为阴性表达，说明AB血清和自体血清均能获得人骨髓基质干细胞稳定的生物学特性，纯化程度良好。本实验还进行细胞凋亡率检测，结果证实AB血清和自体血清保持了人骨髓基质干细胞正常凋亡率，表明AB血清和自体血清培养的人骨髓基质干细胞保持了良好的生长繁殖能力。

细胞增殖实验结果显示，AB血清和自体血清均能促进人骨髓基质干细胞增殖，AB血清促增殖效率最高，这与Kocaoemer等^[33]的报道是一致的，他们认为AB血清能稳定细胞转录水平，减少细胞的衰老，抑制细胞的分化。而Shahdadfar等^[34]则报道，采用AB血清培养人骨髓基质干细胞，细胞早期就逐渐停止生长，出现细胞凋亡。作者推断可能由于血清制备方法不同，而出现细胞凋亡。Hankey等^[35]采用未灭活的血清显著降低了成骨细胞的增殖率，未灭活的血清则能促进成骨细胞的增殖。他们认为血清经过56 ℃水浴处理，灭活了血清中的补体，最大限度减少了免疫排斥对细胞的损伤。本研究结果还发现，自体血清较胎牛血清更能促进人骨髓基质干细胞增殖，这与Kobayashi等^[36]报道一致，而与Kuznetsov等^[37]报道的结果相反。作者推测，AB血清与自体血清比较，前者富含的激素和促细胞生长因子更均衡，而有效避免了自体血清的个体间差异。本研究结果也表明了AB血清促人骨髓基质干细胞增殖效率最高。

碱性磷酸酶染色、茜素红染色和油红O染色结果表明，各血清组人骨髓基质干细胞均可保持成骨及成脂诱导分化能力，也反向证明了细胞存在多向分化能力，从而间接鉴定培养的细胞为人骨髓基质干细胞。3组成脂诱导分化能力相似，但成骨诱导分化能力不同，AB血清组的碱性磷酸酶染色和茜素红染色率较另外两组明显增多。碱性磷酸酶是成骨细胞的胞外酶，被认为是成骨细胞分化和功能的标志之一^[38-41]。研究证实没有碱性磷酸酶的存在，钙化就不会发生。本研究表明AB血清明显提高了碱性磷酸酶的活性及矿盐沉积的表达，其成骨诱导分化能力在3组中最强。这与Aldahmash等^[42]报道是一致的，他们采用同种异体血清替代胎牛血清培养间充质干细胞株，发现同种异体血清对该细胞株的增殖和成骨诱导分化效应均较胎牛血清增强。

综上所述，与自体血清、胎牛血清比较，AB血清对人骨髓基质干细胞促增殖效率最高。与自体血清相比较，AB血清来源充足，易获取，混合富集后能减少个体间差异。尽管仍有潜在的血源性疾病传播风险，但通过严格的质量控制，可实现安全、规模化生产，有望替代胎牛血清，构建适合骨组织工程临床需要的安全、高效、规范的体外培养体系。但血清的成分复杂，其准确的成分、含量及其相互作用机制尚不清楚，尤其是对其中一些多肽类生长因子、激素和脂类等尚未充分认识，有待进一步研究。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

同种异体与自体血清对骨髓基质干细胞的增殖效应

Effects of allogeneic versus autologous serum on the proliferation of bone marrow stromal stem cells

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