肿瘤坏死因子α调控ERK1/2信号通路促进长骨骨样细胞凋亡

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2810

中国组织工程研究 ›› 2020, Vol. 24 ›› Issue (29): 4593-4598.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2810

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肿瘤坏死因子α调控ERK1/2信号通路促进长骨骨样细胞凋亡

史方富，崔红旺，孙博

海南医学院第一附属医院脊柱骨病外科，海南省海口市 570102

收稿日期:2019-11-18 修回日期:2019-11-21 接受日期:2020-02-19 出版日期:2020-10-18 发布日期:2020-09-11
通讯作者: 崔红旺，博士，副主任医师，海南医学院第一附属医院脊柱骨病外科，海南省海口市 570102
作者简介:史方富，男，1985年生，海南省文昌市人，主治医师，主要从事骨科方面的研究。
基金资助:
海南省自然科学基金项目(817326)

Tumor necrosis factor alpha promotes apoptosis in long bone-like cells via ERK1/2 signaling pathway

Shi Fangfu, Cui Hongwang, Sun Bo

Department of Spinal Surgery, the First Affiliated Hospital of Hainan Medical University, Haikou 570102, Hainan Province, China

Received:2019-11-18 Revised:2019-11-21 Accepted:2020-02-19 Online:2020-10-18 Published:2020-09-11
Contact: Cui Hongwang, MD, Associate chief physician, Department of Spinal Surgery, the First Affiliated Hospital of Hainan Medical University, Haikou 570102, Hainan Province, China
About author:Shi Fangfu, Attending physician, Department of Spinal Surgery, the First Affiliated Hospital of Hainan Medical University, Haikou 570102, Hainan Province, China
Supported by:
the Natural Science Foundation of Hainan Province, No. 817326

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：

肿瘤坏死因子α：是一种主要由巨噬细胞和单核细胞产生的促炎细胞因子，并参与正常炎症反应和免疫反应。

MAPK信号通路：生物体内重要的信号转导系统之一，参与介导细胞生长、发育、分裂和分化等多种生理及病理过程，ERK是MAPK通路中极其重要的组成部分之一。激活的ERK1/2通过核转位进入细胞核，激活其下游的相关转录因子或激活胞质和胞核激酶等调控细胞的生存、增殖和分化。

背景：肿瘤坏死因子α作为促炎因子可诱导成骨细胞凋亡，增强破骨细胞功能，从而造成炎症性骨破坏，但是其作用机制尚不明确。

目的：探讨炎症因子肿瘤坏死因子α对长骨骨样细胞MLO-Y4增殖、凋亡的影响及可能机制。

方法：将MLO-Y4细胞分为对照组、肿瘤坏死因子α组、ERK1/2抑制剂组。肿瘤坏死因子α组用含50 μg/L肿瘤坏死因子α的α-MEM完全培养基孵育24 h，ERK1/2抑制剂组用含50 μmol/L PD98059的α-MEM完全培养基孵育24 h，对照组单纯采用α-MEM完全培养基孵育24 h，采用MTT法检测细胞增殖能力，流式细胞术检测细胞凋亡情况，丙二醛、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶试剂盒检测细胞氧化应激水平，用Western blot法测定PCNA、cleaved caspase-3、p-ERK1/2、ERK1/2的蛋白水平。

结果与结论：①与对照组相比，50 μg/L肿瘤坏死因子α处理24 h后，细胞增殖能力下降，凋亡率上升；细胞脂质过氧化物丙二醛水平显著增加，而抗氧化物酶超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性显著降低；②与对照组相比，肿瘤坏死因子α组细胞增殖相关蛋白PCNA的表达显著降低，细胞凋亡相关蛋白cleaved caspase-3的表达显著升高，p-ERK1/2的表达降低，而总蛋白ERK1/2的表达基本保持不变。ERK1/2抑制剂组上述指标与肿瘤坏死因子α组无显著差异；③结果表明，50 μg/L肿瘤坏死因子α可使长骨骨样细胞MLO-Y4增殖能力下降，细胞凋亡增多，其作用机制可能与抑制MAPK-ERK1/2信号通路的活化有关。

ORCID: 0000-0003-0863-8618(史方富)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

关键词: 肿瘤坏死因子α, ERK1/2抑制剂, MLO-Y4细胞, 细胞增殖, 细胞凋亡, ERK1/2

Abstract:

BACKGROUND: Tumor necrosis factor α (TNF-α) is a pro-inflammatory factor that can induce osteoblast apoptosis and enhance osteoclast function, resulting in inflammatory bone destruction. However, the specific mechanism is unclear.

OBJECTIVE: To investigate the effect of TNF-α on the proliferation and apoptosis of MLO-Y4 cells and the possible mechanism.

METHODS: MLO-Y4 cells were divided into control group, TNF-α group and ERK1/2 inhibitor group, followed by incubation with α-MEM complete medium containing nothing, 50 μg/L TNF-α, and 50 μmol/L PD98059 for 24 hours, respectively. Cell proliferation was detected by MTT method, and cell apoptosis were detected by flow cytometry. To assess the level of oxidative stress, malondialdehyde, superoxide dismutase, and glutathione peroxidase levels were detected. The protein levels of PCNA, cleaved Caspase-3, p-ERK1/2 and ERK1/2 were measured by western blot.

RESULTS AND CONCLUSION: Compared with the control group, treatment with 50 μg/L TNF-α for 24 hours reduced the cell proliferation ability and increased the apoptosis rate increased; levels of lipid peroxidase and malondialdehyde increased significantly, whereas the activities of superoxide dismutase and glutathione peroxidase decreased significantly. Compared with the control group, significantly decreased PCNA and p-ERK1/2 as well as significantly up-regulated cleaved caspase-3 were observed in the TNF-α group; however, the expression of total protein ERK1/2 remained unchanged. There was no significant difference between the ERK1/2 inhibitor group and TNF-α group. To conclude, 50 μg/L TNF-α can decrease the proliferation and increase the apoptosis of MLO-Y4 cells. The mechanism may be related to the inhibition of ERK1/2 signaling pathway.

Key words: tumor necrosis factor α, ERK1/2 inhibitor, MLO-Y4 cells, cell proliferation, apoptosis, ERK1/2

中图分类号:

史方富, 崔红旺, 孙博. 肿瘤坏死因子α调控ERK1/2信号通路促进长骨骨样细胞凋亡[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(29): 4593-4598.

Shi Fangfu, Cui Hongwang, Sun Bo. Tumor necrosis factor alpha promotes apoptosis in long bone-like cells via ERK1/2 signaling pathway[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2020, 24(29): 4593-4598.

图/表（结果） 6

2.1 MLO-Y4细胞形态倒置相差显微镜下观察，MLO-Y4细胞在培养24 h时均已贴壁生长，呈星状或树枝状形态，表面有多个突触与周围细胞相联系，见图1。

2.2 肿瘤坏死因子α对MLO-Y4细胞增殖的影响采用MTT法检测细胞增殖能力，50 μg/L肿瘤坏死因子α作用24 h后，细胞增殖能力下降，肿瘤坏死因子α组、ERK1/2抑制剂组吸光度值显著低于对照组，差异有显著性意义(P < 0.05)，肿瘤坏死因子α组吸光度值与ERK1/2抑制剂组比较，差异无显著性意义(P > 0.05)，见图2。

2.3 肿瘤坏死因子α对MLO-Y4细胞凋亡的影响流式细胞术检测50 μg/L肿瘤坏死因子α和ERK1/2抑制剂作用24 h后，细胞凋亡率明显增高，与对照组相比，差异有显著性意义(P < 0.05)，见图3。

2.4 肿瘤坏死因子α对MLO-Y4细胞氧化应激水平的影响 50 μg/L肿瘤坏死因子α和ERK1/2抑制剂处理MLO-Y4细胞24 h后，细胞脂质过氧化物丙二醛水平显著增加，而抗氧化物酶超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性显著降低，与对照组比较差异有显著性意义(P < 0.05)，肿瘤坏死因子α组与ERK1/2抑制剂组比较，差异无显著性意义(P > 0.05)，见表1。

2.5 Western blot检测增殖、凋亡蛋白和ERK通路相关蛋白的表达为了分析肿瘤坏死因子α抑制细胞增殖、促进细胞凋亡的作用机制，采用Western blot检测增殖、凋亡蛋白和ERK通路相关蛋白的表达，结果显示，与对照组相比，肿瘤坏死因子α组和ERK1/2抑制剂组细胞增殖相关蛋白PCNA的表达显著降低，细胞凋亡相关蛋白cleaved caspase-3的表达显著升高。当50 μg/L肿瘤坏死因子α和ERK1/2抑制剂组处理MLO-Y4细胞24 h可明显抑制p-ERK1/2的表达，而总蛋白ERK1/2的表达基本保持不变，与对照组比较，差异有显著性意义(P < 0.05)，见图4，5。

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引言

骨质疏松症是一种常见的全身性代谢性骨病，以单位体积内骨量减少及骨微结构改变为特征，其本身被视作是一种与年龄密切相关的骨量丢失，发生于女性绝经后骨质疏松更是如此^[1-2]。成骨细胞的骨形成作用和破骨细胞的骨吸收作用是骨代谢的两个基本过程，他们之间保持着动态平衡，成骨细胞活力降低是骨代谢改变的主要原因。最近几年，对于调控生理性及病理性骨更新过程的研究取得了重大的进展，研究表明骨丢失是一种常见的自身免疫及炎症性疾病状态^[3-4]。肿瘤坏死因子α在炎症性疾病中起着关键的作用，与糖尿病、冠心病、骨质疏松、类风湿性关节等疾病的病理过程相关^[5]，其作为促炎因子，可诱导成骨细胞凋亡，增强破骨细胞功能，从而造成炎症性骨破坏^[6-7]，但是其作用机制尚不明确。

小鼠长骨骨样细胞系MLO-Y4由美国德克萨斯大学BONEWALD教授1997年建立^[8-9]，来源于小鼠长骨，相对于原代骨细胞，MLO-Y4细胞系具有纯度高、增殖快等优点，多用于骨质疏松和空间骨丢失机制等研究，如CHEN等^[10]研究发现循环压应力可通过调控ERK1/2信号通路在MLO-Y4细胞中诱导白细胞介素6的分泌，其有助于骨质疏松和应力导致的病理性骨吸收的治疗；李洋等^[11]研究表明一定浓度的骨碎补总黄酮对MLO-Y4细胞的增殖、分化有一定的促进作用，并能够抑制其凋亡；KITASE等^[12]对MLO-Y4细胞施加流体剪切力可增加GSK-3β的磷酸化和PGE2的表达，进一步通过cAMP/PKA磷酸化GSK-3β，进而引起β-catenin的累积入核。该研究以长骨骨样细胞株MLO-Y4细胞为干预对象，用肿瘤坏死因子α刺激模拟炎症微环境，观察其对MLO-Y4细胞的损伤作用并探讨其相关分子机制，为探讨骨质疏松的发病机制提供实验依据。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

材料方法

1.1 设计细胞学体外实验。

1.2 时间及地点实验于2018年9月至2019年1月在海南医学院第一附属医院完成。

1.3 材料 MLO-Y4骨样细胞株(赛默飞生命科技有限公司，1×10⁶cells/T25培养瓶)；肿瘤坏死因子α(Sino Biological Inc.)；α-MEM培养基、胎牛血清、小牛血清(Gibco公司)；四甲基偶氮唑盐(MTT)试剂、二甲基亚砜(Sigma公司)；ERK1/2抑制剂PD98059(Sigma公司)；AnnexinV-FITC凋亡检测试剂盒(上海生工)；细胞裂解液、BCA 蛋白含量检测试剂盒、超氧化物歧化酶检测试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒、脂质过氧化物丙二醛检测试剂盒(南京建成生物科技有限公司)；抗PCNA抗体、抗cleaved caspase-3抗体、抗caspase-3抗体、抗p-ERK抗体、抗ERK抗体、抗GAPDH抗体(Cell Signaling Technology)；细胞培养箱(Heraeus公司)；倒置相差显微镜(Olympus公司)；流式细胞仪(BD公司)。

1.4 实验方法

1.4.1 细胞培养从液氮灌中取出装有MLO-Y4细胞的冻存管，立即置于37 ℃水浴箱中迅速振荡复温，待细胞融化后迅速转移到15 mL离心管中，以1 000 r/min离心8 min，弃上清液，用细胞完全培养液重悬细胞，接种于预先用鼠尾Ⅰ型胶原(0.15 g/L)包被的培养瓶中，使用含体积分数为2.5%胎牛血清、体积分数为2.5%小牛血清、1%青链霉素双抗的α-MEM培养液，在37 ℃，体积分数为5%CO₂孵箱中培养，每天在倒置相差显微镜下观察细胞状态和生长情况，每3 d更换1次培养液，待细胞密度达到80%-90%时，用含0.02%EDTA的0.25%胰酶消化传代。

1.4.2 MTT法检测细胞增殖能力将MLO-Y4细胞悬液接种于96孔板内，每孔100 µL(2×10⁵/孔)，细胞分3组：肿瘤坏死因子α组用含50 μg/L肿瘤坏死因子α的α-MEM完全培养基孵育24 h^[13]，ERK1/2抑制剂组用含50 μmol/L PD98059的α-MEM完全培养基孵育24 h^[14]，对照组单纯采用α-MEM完全培养基孵育24 h，然后每孔加入5 g/L MTT 20 μL，继续培养4 h，吸去上清液，每孔加150 μL二甲基亚砜，振摇10 min，使结晶充分溶解，在酶标仪上检测490 nm波长处的吸光度值。

1.4.3 流式细胞仪检测细胞凋亡情况取处于对数生长期状态良好的细胞，0.25%胰酶消化后按2×10⁵/孔细胞密度接种于6孔板中，置于37 ℃，体积分数为5%CO₂孵箱培养24 h，细胞分3组：肿瘤坏死因子α组用含50 μg/L肿瘤坏死因子α的α-MEM完全培养基孵育24 h，ERK1/2抑制剂组用含50 μmol/L PD98059的α-MEM完全培养基孵育24 h，对照组单纯采用α-MEM完全培养基孵育24 h，PBS洗涤2次，0.25%胰酶消化，1 500 r/min离心5 min，收集细胞，用预冷的PBS重悬后再次离心弃上清，加入500 μL结合缓冲液(binding buffer)悬浮细胞，转移到流式管中，加入5 μL Annexin V-FITC和5 μL碘化丙啶混匀，室温避光反应 15 min，上流式细胞仪检测细胞凋亡情况。

1.4.4 氧化应激指标检测按上述分组干预24 h后收集细胞，PBS清洗3次，用化学裂解法破碎细胞，收集细胞裂解液，15 000×g离心30 min取上清，按相应试剂盒说明检测氧化应激指标，即采用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶活性，硫代巴比妥酸法测定丙二醛水平，二硫代二硝基苯甲酸比色法测定谷胱甘肽过氧化物酶活性。

1.4.5 Western blot检测增殖、凋亡蛋白和ERK通路相关蛋白的表达按上述分组干预24 h后收集细胞，PBS清洗2次，加入细胞裂解液10 min，离心，提取细胞总蛋白，取5 µL蛋白样品利用BCA方法检测蛋白浓度。取蛋白样品10 µL，加入适量浓缩的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液，100 ℃或沸水浴加热3-5 min；冷却到室温后，把蛋白样品直接上样到SDS-PAGE胶加样孔内，恒压120 V电泳90 min；选用PVDF膜，使用Bio-Rad的标准湿式转膜装置转膜60 min，设定转膜电流为300 mA；取出PVDF膜，放入含1%脱脂牛奶的TBST封闭液中室温孵育1 h；加入一抗(抗PCNA抗体、抗cleaved caspase-3抗体、抗p-ERK1/2抗体、抗ERK1/2抗体、抗GAPDH抗体)孵育过液，TBST洗膜3次，加入HRP标记的羊抗兔二抗室温孵育1 h，TBST清洗3次，增强型ECL发光试剂法检测不同样品蛋白表达情况。Western blot条带采用图像处理软件Image J进行灰度分析。

1.5 主要观察指标 ①肿瘤坏死因子α处理后MLO-Y4细胞增殖、凋亡情况以及氧化应激水平；②Western blot检测增殖、凋亡蛋白和ERK通路相关蛋白的表达。

1.6 统计学分析采用SPSS 18.0统计软件进行统计分析。所有数据用x(_)±s表示，各实验重复3次，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用t 检验。P < 0.05为差异有显著性意义。

讨论

成骨细胞作为骨形成的主要功能细胞，其通过合成和分泌骨基质，在骨的矿化和重建中发挥重要作用。成骨细胞的功能障碍导致骨形成相对减少，骨吸收增加，骨量减少，骨质疏松和骨折的风险增加。在体内组织再生的过程中，成骨细胞暴露于炎性环境中影响其功能发挥，改善成骨细胞所处的微环境越来越受到研究者的关注^[15-16]。

1975年，CARSWELL等在小鼠血清中发现了一种对肿瘤细胞具有杀伤作用并且能够导致肿瘤组织坏死的物质，称为肿瘤坏死因子，包括肿瘤坏死因子α和肿瘤坏死因子β两种类型，其中肿瘤坏死因子α研究较多。肿瘤坏死因子α抑制成骨细胞分化和增强破骨细胞生成，在骨重建中发挥重要作用。王有为^[17]以正常成骨分化培养基培养的大鼠骨髓间充质干细胞为对照组，成骨分化培养基中加入不同浓度肿瘤坏死因子α(0.1，1，10，100 μg/L)为实验组，结果显示中、高浓度肿瘤坏死因子α(10，100 μg/L)组细胞增殖活性显著降低，碱性磷酸酶活力显著降低，钙结节含量减少。蒙超龙等^[18]观察不同浓度肿瘤坏死因子α(0. 1，1，10，50 μg/L)对人牙周膜干细胞增殖及分化的影响，结果发现在50 μg/L肿瘤坏死因子α作用下，细胞增殖活性显著低于对照组，而低浓度(10 μg/L以下)肿瘤坏死因子α作用 3 d时并未抑制细胞增殖活性，由此可见，炎症微环境中不同浓度肿瘤坏死因子α可对细胞增殖活性及分化产生不同的影响。小鼠骨细胞系MLO-Y4已被证明是研究控制骨细胞功能信号通路的有用模型^[19-20]。骨质疏松症的病理状态与血浆炎性细胞因子如肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β和白细胞介素6的升高有关，这些细胞因子对骨细胞的影响尚未被广泛研究。WEHMEIER等^[13]用小鼠骨细胞系MLO-Y4研究了肿瘤坏死因子α对骨细胞胆固醇代谢的影响，50 μg/L肿瘤坏死因子α处理MLO-Y4细胞24 h后通过抑制翻译后ABCA1水平以p38-MAP激酶依赖的方式调节骨细胞胆固醇代谢。

该实验采用50 μg/L肿瘤坏死因子α处理MLO-Y4细胞24 h，发现细胞增殖能力下降，同时细胞凋亡率明显升高，结果提示高浓度的肿瘤坏死因子α能明显抑制成骨细胞增殖，诱导细胞凋亡。近年来，骨质疏松与氧化应激的相关性受到了广泛关注，丙二醛、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶是反映机体氧化应激状态的常用指标^[21-22]，可反映细胞损伤的程度和清除氧自由基的能力，该研究结果显示，肿瘤坏死因子α组细胞脂质过氧化物丙二醛水平显著增加，而抗氧化物酶超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性显著降低，与对照组比较差异有显著性意义(P < 0.05)，推测肿瘤坏死因子α可能通过诱导成骨细胞的氧化应激反应，进而导致其增殖减少及细胞凋亡增多。

MAPK是真核生物信号转导网络中最重要的途径之一，在基因表达调控和胞质功能调节等多种信号转导途径中起着重要作用，ERK是MAPK通路中极其重要的组成部分之一。李冰等^[23]使用PD98059抑制ERK通路后，表皮干细胞增殖率下降，克隆形成减少，细胞分化加强；过表达MEK1或者使用PMA激活ERK通路后，表皮干细胞增殖率上升，克隆形成能力增强，细胞分化受到抑制。BILAL等^[24]表明ZO-1蛋白以ERK1/2依赖的方式增加MDCK细胞的通透性。LIU等^[25]提示高糖可引起原代培养的许旺细胞损伤，并可能通过ERK信号激活对许旺细胞分化和髓鞘形成产生抑制作用。ERK1/2信号通路经典的激活途径：Ras→Raf→MEK1/2→ERK1/2。激活的ERK1/2通过核转位进入细胞核，激活其下游的相关转录因子或激活胞质和胞核激酶等调控细胞的生存、增殖和分化。钟海波等^[26]研究表明葛根素在骨细胞周期过程中通过ERK1/2和p38 MAPK信号通路对骨分化和骨形成起到了调控作用。WU等^[27]研究表明胰高血糖素样肽1受体激动剂利拉鲁肽通过PI3K/Akt、ERK1/2和CAMP/PKA信号途径促进MC3T3-E1细胞增殖和分化。结合上述研究可以发现ERK1/2与成骨细胞增殖和分化有关。

凋亡是细胞中区别于坏死的一种死亡机制，目前的研究尚未能揭示出能够导致细胞发生凋亡的确切信号传导途径，只是发现许多基因及生物活性物质与凋亡有关^[28-29]。Caspase家族又称半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶，可通过线粒体通路、死亡受体通路调节细胞凋亡，Caspase-3为核心成员，是调节细胞凋亡的关键蛋白酶，是目前已知的凋亡最后执行因子。Cleaved Caspase-3是Caspase-3活化过程中经剪切产生的活性片段，其表达程度可反映Caspase-3的活性和细胞凋亡情况^[30-33]。该实验发现，肿瘤坏死因子α能够通过激活Caspase-3途径来引起细胞凋亡。PCNA由MIYACHI等于1978年在系统性红斑狼疮患者的血清中首次发现并命名，因其只存在于正常增殖细胞及肿瘤细胞内而得名，以后的研究发现PCNA与细胞DNA合成关系密切^[34-36]，在细胞增殖的启动上起重要作用，是反映细胞增殖状态的良好指标。实验发现，肿瘤坏死因子α组细胞增殖相关蛋白PCNA的表达显著降低，说明细胞增殖能力下降。为了证明肿瘤坏死因子α抑制MLO-Y4细胞增殖、促进MLO-Y4细胞凋亡这一作用通路，通过对MLO-Y4细胞给予ERK1/2特异性抑制剂PD98059干预24 h进行验证，结果显示ERK1/2抑制剂组有效抑制MAPK-ERK1/2信号通路的活化，发现反映细胞增殖的PCNA蛋白表达抑制，反映细胞凋亡cleaved caspase-3蛋白表达显著升高，p-ERK1/2蛋白表达降低，而总蛋白ERK1/2表达基本保持不变，上述指标在肿瘤坏死因子α 组和ERK1/2抑制剂组无显著差异。这些结果表明肿瘤坏死因子α磷酸化了MAPK通路中的ERK1/2，抑制细胞增殖和促进细胞凋亡过程。Caspase-3、PCNA等细胞因子与MAPK成员的激活之间有着密切的相关性^[37-38]，它们可以协同作用或彼此独立地调节细胞增殖、凋亡^[39-40]。

综上所述，该实验初步表明炎症微环境中较高浓度的肿瘤坏死因子α通过抑制MAPK-ERK1/2信号通路的活化，引起MLO-Y4细胞的增殖能力下降，凋亡增加，进而促进氧化损伤。实验不足之处：实验各组均用α-MEM完全培养基孵育24 h，没有进行更长时间孵育导致结果可能有一定偏差，另外此次实验选择了MAPK(ERK1/2)通路，而JNK和P38信号通路还需进行进一步研究。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

肿瘤坏死因子α调控ERK1/2信号通路促进长骨骨样细胞凋亡

Tumor necrosis factor alpha promotes apoptosis in long bone-like cells via ERK1/2 signaling pathway

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