红景天多糖对精原干细胞体外增殖的影响

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2016.10.019

中国组织工程研究 ›› 2016, Vol. 20 ›› Issue (10): 1501-1507.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.10.019

• 干细胞培养与分化 stem cell culture and differentiation • 上一篇下一篇

红景天多糖对精原干细胞体外增殖的影响

李俊涛¹，张培海²，曲晓伟³，李郑生¹，李松伟⁴

河南省中医学院第一附属医院，¹男科，⁴风湿科，河南省郑州市 450000；²四川省中西医结合医院男科，四川省成都市 610000；³郑州人民医院泌尿科，河南省郑州市 450000

收稿日期:2016-01-18 出版日期:2016-03-04 发布日期:2016-03-04
通讯作者: 李郑生，主任医师，河南省中医学院第一附属医院男科，河南省郑州市 450000
作者简介:李俊涛，男，1978年生，河南省宜阳县人，汉族， 2014年成都中医药大学毕业，博士，主治医师，主要从事中西医结合男科方面研究。
基金资助:
国家自然科学基金面上项目(81573952)

Rhodiola polysaccharide effect on spermatogonial stem cell proliferation in vitro

Li Jun-tao¹, Zhang Pei-hai², Qu Xiao-wei³, Li Zheng-sheng¹, Li Song-wei⁴

¹Department of Andrology, ⁴Department of Rheumatism, First Affiliated Hospital of Henan University of Chinese Medicine, Zhengzhou 450000, Henan Province, China; ²Department of Andrology, Sichuan Hospital of Integrative Medicine, Chengdu 610000, Sichuan Province, China; ³Department of Urology, Zhengzhou People’s Hospital, Zhengzhou 450000, Henan Province, China

Received:2016-01-18 Online:2016-03-04 Published:2016-03-04
Contact: Li Zheng-sheng, Chief physician, Department of Andrology, First Affiliated Hospital of Henan University of Chinese Medicine, Zhengzhou 450000, Henan Province, China
About author:Li Jun-tao, M.D., Attending physician, Department of Andrology, First Affiliated Hospital of Henan University of Chinese Medicine, Zhengzhou 450000, Henan Province, China
Supported by:
the National Natural Science Foundation of China, No. 81573952

摘要/Abstract

摘要：

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文题释义：

精原干细胞：指位于曲精细管基膜上既能自我更新维持自身适量恒定，又能定向分化产生精母细胞的一类原始精原细胞，随着雄性动物的出生，原始生殖细胞转化为生殖母细胞，迁移到生精小管基膜部，并分化为精原干细胞。

红景天多糖：为红景天干燥根及茎的多糖提取物，由多种多糖组成，如葡萄糖、木糖、半乳糖、阿拉伯糖、鼠李糖等。红景天多糖具有抗氧化、抗衰老及抗凋亡等多种生物活性。药理实验研究显示，其对小鼠心肌细胞有明显的保护作用，并且有明显的抗伤害感受作用。

背景：体外建立快速、有效的培养方法以获得满足临床治疗应用的精原干细胞，是进行精原干细胞移植有待解决的主要问题。

目的：探讨红景天多糖对精原干细胞体外增殖的影响。

方法：无菌条件下从小鼠睾丸组织中分离精原干细胞和Sertoli细胞，将精原干细胞接种于Sertoli细胞饲养层上共培养后分为3组，分别为实验组1(单纯细胞培养基)，实验组2(细胞培养基+150 mg/L红景天多糖)和实验组3(细胞培养基+150 mg/L红景天多糖+1 U/L白血病抑制因子+10 μg/L胶质细胞源神经营养因子)。共培养7 d后，采用流式细胞术检测细胞体外增殖状态，计算细胞活性率以及精原干细胞已知抗原标志物GFRa-1、Thy-1和C-kit的阳性表达率。

结果与结论：①共培养7 d后，细胞生长迅速，细胞生长形态呈集落样和葡萄串样，细胞团数量增加明显，符合精原干细胞的增殖特征。②精原干细胞中的GFRa-1、Thy-1和C-kit 蛋白均表达于细胞膜和细胞质中，主要表达于细胞膜中。③精原干细胞活性率、GFRa-1阳性率、Thy-1阳性率：实验组3>实验组2>实验组1，组间两两比较，差异均有显著性意义(P < 0.05)。④C-kit阳性率：实验组1与实验组2之间相比较，差异无显著性意义(P > 0.05)，实验组3高于实验组1及实验组2，差异均有显著性意义(P < 0.05)。⑤结果表明，红景天多糖单独或与白血病抑制因子、胶质细胞源神经营养因子联合应用，能增强精原干细胞体外增殖能力。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

ORCID: 0000-0001-7382-106X (李俊涛)

关键词: 干细胞, 培养, 红景天多糖, 精原干细胞, Sertoli细胞饲养层, 细胞增殖, 国家自然科学基金

Abstract:

BACKGROUND: To establish a rapid and effective method to obtain sufficient spermatogonial stem cells that can meet the clinical need is urgent to be solved in the spermatogonial stem cell transplantation.
OBJECTIVE: To study the effect of rhodiola polysaccharide on the proliferation of spermatogonial stem cells in vitro.
METHODS: Under sterile conditions, spermatogonial stem cells and Sertoli cells were isolated from the testis of mice, and spermatogonial stem cells were seeded onto the feed layer of Sertoli cells. Then, the co-cultured cells were assigned into experimental group 1 (simple cell culture medium), experimental group 2 (cell culture medium containing 150 mg/L rhodiola polysaccharide) and experimental group 3 (cell culture medium containing 150 mg/L rhodiola polysaccharide, 1 U/L leukemia inhibitory factor and 10 μg/L glial cell line-derived neurotrophic factor). After 7 days of co-culture, flow cytometry was used to detect cell proliferation in vitro, and cell viability and positive expression of GFRa-1, Thy-1 and C-kit were calculated.
RESULTS AND CONCLUSION: After 7 days of co-culture, the cells grew rapidly and presented with colony and thyrsiform growth, and the number of cell masses increased significantly, all of which were in line with the proliferative features of spermatogonial stem cells. The GFRa-1, Thy-1 and C-kit proteins were expressed in the cell membrane and cytoplasm, mainly in the cell membrane. The viability of spermatogonial stem cells and positive expression of GFRa-1 and Thy-1 were ranked as follows: experimental group 3 > experimental group 2 > experimental group 1, and there were significant differences between groups (P < 0.05). The positive expression of C-kit had no difference between experimental groups 1 and 2, but it was significantly higher in the experimental group 3 than the other two groups (P < 0.05). These findings indicate that rhodiola polysaccharide used alone or combined with leukemia inhibitory factor and glial cell line-derived neurotrophic factor can enhance the proliferative ability of spermatogonial stem cells in vitro.
中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

李俊涛，张培海，曲晓伟，李郑生，李松伟. 红景天多糖对精原干细胞体外增殖的影响[J]. 中国组织工程研究, 2016, 20(10): 1501-1507.

Li Jun-tao, Zhang Pei-hai, Qu Xiao-wei, Li Zheng-sheng, Li Song-wei. Rhodiola polysaccharide effect on spermatogonial stem cell proliferation in vitro[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2016, 20(10): 1501-1507.

图/表（结果） 7

2.1 实验动物数量分析 1周龄SPF级健康雄性昆明小白鼠20只，全部进入实验，无脱失。

2.2 体外培养的精原干细胞生长形态精原干细胞于培养箱中培养7 d，细胞生长快速，数量增长明显，细胞形成克隆团，碱性磷酸酶染色呈红棕色，细胞生长形态呈集落样和葡萄串样，细胞团数量增加明显，符合精原干细胞的增殖特征，见图1。

2.3 精原干细胞已知抗原的表达免疫组化荧光显示精原干细胞中GFRa-1、Thy-1和C-kit 蛋白均表达于细胞膜和细胞质中，主要表达于细胞膜中(图2-4)。在体外培养7 d的精原干细胞与同批小鼠睾丸组织内的精原干细胞的形态学及生物学特征一致。体外培养的精原干细胞状态以未分化型细胞为主，仅有少量状态呈现为分化型精原干细胞；以不加一抗的磷酸盐缓冲液作为空白对照组，结果显示染色细胞呈阴性。

2.4 RT-PCR检测精原干细胞与睾丸组织中标志基因表达精原干细胞分离培养7 d后C-kit、GFRa-1及Thy-1标志基因mRNA 表达与同批次小鼠睾丸组织相一致，见图5。

2.5 精原干细胞生长增殖状况

精原干细胞活性率：实验组1为(60.44±4.41)%，实验组2为(86.31±0.79)%，实验组3为(98.24±1.68)%，组间相比较，差异均有显著性意义(P < 0.05)，见表2。

精原干细胞标志物GFRa-1阳性率：实验组1为(6.81±1.89)%，实验组2为(11.39±1.33)%，实验组3为(2.45±0.58)%，组间相比较，差异均有显著性意义(P < 0.05)，见表3。

精原干细胞标志物Thy-1阳性率：实验组1为(30.29± 0.31)%，实验组2为(38.06±0.10)%，实验组3为(44.54± 1.64)%，组间相比较，差异均有显著性意义(P < 0.05)，见表4。

精原干细胞标志物C-kit阳性率：实验组1为(8.09±0.38)%，实验组2为(9.81±2.30)%，实验组3为(17.92±1.60)%，实验组1与实验组2相比较，差异无显著性意义(P > 0.05)，实验组3与实验组1及实验组2相比较，差异均有显著性意义(P < 0.05)，见表5。

参考文献

[1] Takehashi M, Kanatsu-Shinohara M, Inoue K, et al. Adenovirus-mediated gene delivery into mouse spermatogonial stem cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 2007;104(8):2596-2601.

[2] Oatley JM, Brinster RL. Spermatogonial stem cells. Methods Enzymol. 2006;419:259-282.

[3] Hamra FK, Schultz N, Chapman KM, et al. Defining the spermatogonial stem cell. Dev Biol. 2004;269(2): 393-410.

[4] Matzuk MM. Germ-line immortality. Proc Natl Acad Sci U S A. 2004;101(47):16395-16396.

[5] Kanatsu-Shinohara M, Ogonuki N, Inoue K, et al. Restoration of fertility in infertile mice by transplantation of cryopreserved male germline stem cells. Hum Reprod. 2003;18(12):2660-2667.

[6] Oatley JM, Brinster RL. Spermatogonial stem cells. Methods Enzymol. 2006;419:259-282.

[7] Kai T, Spradling A. Differentiating germ cells can revert into functional stem cells in Drosophila melanogaster ovaries. Nature. 2004;428(6982):564-569.

[8] 罗利攀,钟国辉,田发益,等.不同产地大花红景天多糖的单糖组成分析[J].食品与发酵工业,2013,39(4):213-215.

[9] 黄冰洋,郭靖,魏海,等.红景天多糖研究进展[J].吉林医药学院学报,2012,32(2):108-111.

[10] 中华人民共和国科学技术部.关于善待实验动物的指导性意见.2006-09-30.

[11] 刘明成,张得钧. 红景天药理作用研究进展[J]. 亚太传统医药,2013,9(6):65-69.

[12] 罗利攀,钟国辉,田发益,等.红景天多糖研究进展[J].山东林业科技,2013,1:91-95.

[13] 杨斌.红景天甙对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞Wnt信号通路的影响及其意义[D].重庆:第三军医大学,2010.

[14] 王苏华,陆静尔. 红景天多糖对四氧嘧啶诱导高血糖大鼠胰腺的保护作用[J]. 中华中医药学刊,2013,31(5): 1176-1177, 1225.

[15] 关爽.红景天苷的抗炎作用及其对炎症信号转导通路的调控[D].长春:吉林大学,2011.

[16] Guan K, Nayernia K, Maier LS, et al. Pluripotency of spermatogonial stem cells from adult mouse testis. Nature. 2006;440(7088):1199-1203.

[17] 张卫星,韩广业,王瑞,等.大鼠精原干细胞的分离纯化[J].郑州大学学报:医学版,2009,44(3):497-500.

[18] Jiang FX, Short RV. Male germ cell transplantation in rats: apparent synchronization of spermatogenesis between host and donor seminiferous epithelia. Int J Androl. 1995;18(6):326-330.

[19] Reding SC, Stepnoski AL, Cloninger EW, et al. THY1 is a conserved marker of undifferentiated spermatogonia in the pre-pubertal bull testis. Reproduction. 2010; 139(5):893-903.

[20] Shinohara T, Avarbock MR, Brinster RL. beta1- and alpha6-integrin are surface markers on mouse spermatogonial stem cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 1999;96(10):5504-5509.

[21] Kanatsu-Shinohara M, Ogonuki N, Inoue K, et al. Long-term proliferation in culture and germline transmission of mouse male germline stem cells. Biol Reprod. 2003;69(2):612-616.

[22] Izadyar F, Spierenberg GT, Creemers LB, et al. Isolation and purification of type A spermatogonia from the bovine testis. Reproduction. 2002;124(1):85-94.

[23] Hofmann MC, Narisawa S, Hess RA, et al. Immortalization of germ cells and somatic testicular cells using the SV40 large T antigen. Exp Cell Res. 1992;201(2):417-435.

[24] Goossens E, De Rycke M, Haentjens P, et al. DNA methylation patterns of spermatozoa and two generations of offspring obtained after murine spermatogonial stem cell transplantation. Hum Reprod. 2009;24(9):2255-2263.

[25] Kanatsu-Shinohara M, Morimoto T, Toyokuni S, et al. Regulation of mouse spermatogonial stem cell self-renewing division by the pituitary gland. Biol Reprod. 2004;70(6):1731-1737.

[26] Bucci LR, Meistrich ML. Effects of busulfan on murine spermatogenesis: cytotoxicity, sterility, sperm abnormalities, and dominant lethal mutations. Mutat Res. 1987;176(2):259-268.

[27] Stellflug JN, Green JS, Leathers CW. Antifertility effect of busulfan and procarbazine in male and female coyotes. Biol Reprod. 1985;33(5):1237-1243.

[28] Kim JH, Jung-Ha HS, Lee HT, et al. Development of a positive method for male stem cell-mediated gene transfer in mouse and pig. Mol Reprod Dev. 1997; 46(4):515-526.

[29] Moisan AE, Foster RA, Betteridge KJ, et al. Dose-response of RAG2-/-/gammac-/- mice to busulfan in preparation for spermatogonial transplantation. Reproduction. 2003;126(2):205-216.

[30] Kim Y, Selvaraj V, Dobrinski I, et al. Recipient preparation and mixed germ cell isolation for spermatogonial stem cell transplantation in domestic cats. J Androl. 2006;27(2):248-256.

[31] Dobrinski I, Avarbock MR, Brinster RL.Transplantation of germ cells from rabbits and dogs into mouse testes. Biol Reprod. 1999;61(5):1331-1339.

[32] Nagano M, McCarrey JR, Brinster RL. Primate spermatogonial stem cells colonize mouse testes. Biol Reprod. 2001;64(5):1409-1416.

引言

材料方法

1.1 设计随机对照细胞学实验。

1.2 时间及地点于2014年5月至2015年5月在河南省中医学院第一附属医院实验室完成。

1.3 材料 8周龄SPF级健康昆明小白鼠20只，雄性，体质量40-45 g，由西安交通大学医学院实验动物中心提供。实验过程中对动物处置严格按照2006年科学技术部发布的《关于善待实验动物的指导性意见》执行^[10]，符合国家相关规定。红景天多糖样品为实验室自制。

1.4 实验方法

1.4.1 精原干细胞的分离与纯化每次实验取幼鼠5只，颈椎脱臼处死，置于体积分数为75%乙醇溶液中浸泡消毒5 min，无菌操作条件下取出小鼠睾丸组织，用无菌级磷酸盐缓冲液冲洗，再去除附睾、白膜等，将散开的曲细精管用剪刀剪成小段，用无菌级磷酸盐缓冲液反复洗涤、吹打3次，沉淀后弃去上清液，加入10倍量睾丸组织的1 g/L Ⅳ型胶原酶溶液和少量的1 g/L的Dnase Ⅰ溶液，置于37 ℃条件下消化30 min(期间每5 min振摇几下)，再加入等量0.25%胰蛋白酶溶液消化10 min，最后加入等量的含体积分数为10%胎牛血清的培养基终止消化。将细胞悬液以1 000 r/min低温离心5 min，弃去上清液，用磷酸盐缓冲液反复吹打、洗涤2次，弃去上清液，加入10倍量的0.25%胰蛋白酶和0.03% EDTA于37 ℃条件下再消化10 min，再加入含体积分数为10%胎牛血清的等量DMEM终止消化。将细胞悬液以1 000 r/min低温离心5 min，弃去上清液，用磷酸盐缓冲液反复吹打、洗涤2次，弃去上清液，加入等量含双抗、体积分数为10%胎牛血清的培养基悬浮制成单细胞悬液。用400目细胞筛过滤除去未消化完全的睾丸组织，滤液置于37 ℃、体积分数为5%CO₂及饱和湿度培养箱中孵育，根据培养基颜色变化及细胞贴壁速度进行再纯化。

1.4.2 Sertoli细胞饲养层的制备根据培育过程中精原干细胞贴壁速度不同，培育4 h后将未贴壁细胞除去，同时吸去培养液，加入含体积分数为10%胎牛血清的DMEM培养液于37 ℃、体积分数为5%CO₂及饱和湿度培养箱中培养48 h，加入低渗Tris-HCl缓冲液(20 mmol/L)处理5 min，用Hank’s液洗涤2次，再加入培养液于培养箱中培养。取生长密集的Sertoli细胞培养皿，除去培养液，加入10倍体积丝裂霉素C(10 μg/L)于培养箱中培养细胞3 h，再加入等量0.25%胰蛋白酶溶液消化10 min，重新加入培养基，将细胞接种于孔板中，于培养箱中培养，待细胞贴壁后作为饲养层。

1.4.3 精原干细胞与Sertoli细胞的体外共培养及实验分组将分离获得的精原干细胞制备成悬液，以细胞密度1×10⁵/cm²将精原干细胞接种于Sertoli细胞饲养层上，2 d换培养液1次。根据预实验结果，在细胞培养液中加入红景天多糖的终质量浓度为0，150，300，400，500 mg/L，每个终浓度处理分为3个平行组，每24 h观察细胞培养形态及增殖状况，最终选择150 mg/L为最佳实验质量浓度。实验分为3组，分别为实验组1(单纯细胞培养基)，实验组2(细胞培养基+150 mg/L红景天多糖)和实验组3(细胞培养基+150 mg/L红景天多糖+1 U/L白血病抑制因子+10 μg/L胶质细胞源神经营养因子)。

1.4.4 碱性磷酸酶染色检测细胞培养7 d后，将待染色的精原干细胞用磷酸盐缓冲液洗涤3次，每次5 min，常温下用40 g/L多聚甲醛固定20 min，磷酸盐缓冲液洗涤3次，每次5 min，加入pH 9.0的Tris-HCl溶液25 mL洗涤1次，然后用BCIP/NBT底物显色试剂盒按说明书操作步骤进行染色，避光条件下培育30 min，用磷酸盐缓冲溶液洗涤终止反应，于倒置显微镜下观察细胞形态。

1.4.5 荧光免疫鉴定已知抗原的表达将培养7 d后的精原干细胞接种于玻片上，在细胞与玻片融合达70%时，PBS漂洗2次，用40 g/L多聚甲醛溶液在常温下孵育15 min，0.1 % Tris X-100进行破膜处理10 min，PBS漂洗，牛血清蛋白封闭。一抗在4 ℃条件下孵育过夜，PBS漂洗，加入二抗室温孵育1 h，PBS漂洗，用DAPI复染核10 min，使用荧光猝灭剂封固，荧光显微镜下进行观察。Thy-1抗原检测中的一抗为Thy-1单克隆抗体，二抗为Cy2标记的IgG；c-Kit抗原检测中的一抗为c-Kit单克隆抗体，二抗为Alexa Fluor 488；GFRa-1抗原检测中的一抗为GFRa-1多克隆抗体，二抗为Cy3标记的IgG。

1.4.6 检测标记基因表达取培养1周左右的精原干细胞，使用RNA提取试剂盒抽提细胞总RNA，同时 Trizol法提取与所培养细胞同一批小鼠睾丸组织中的总RNA。PCR反应条件：按说明书操作步骤先于94 ℃预变性3 min，94 ℃再变性30 s，58 ℃退火40 s， 72 ℃延伸1 min，30个循环，72℃终末延伸5 min。然后以β-actin基因为内参照，用1%琼脂糖电泳检测获得的RT-PCR产物，相关基因的引物序列见表1。

1.4.7 精原干细胞生长增殖状况细胞培养7 d后，用流式细胞仪检测各组细胞的生长周期判断细胞增殖状况。用胰酶消化液对细胞进行消化，PBS洗2次，收集细胞清洗液，加入FITC标记的Annexin-V室温避光孵育30 min，加入PI试剂，避光孵育5 min，加入适量缓冲溶液，按照试剂盒说明书在流式细胞仪上进行检测。

1.5 主要观察指标 ①精原干细胞体外培养生长形态及增殖状况。②精原干细胞标记基因表达。③精原干细胞已知抗原的表达。

1.6 统计学分析采用SPSS 17.0软件进行统计学分析，计量资料以x(_)±s表示，进行单因素方差分析和t 检验，P < 0.05为差异有显著性意义。

讨论

实验研究发现，红景天多糖具有抗氧化、抗衰老及抗凋亡等多种生物活性^[11]。药理实验研究显示，其对小鼠心肌细胞有明显的保护作用，可以显著增强小鼠心肌血液中的超氧化物歧化酶活性^[12-13]，并且有明显的抗伤害感受作用^[14-15]。猪生殖系统保护研究方面显示，红景天多糖可以明显提高猪精子的抗氧化能力，明显保持猪冷冻精子的品质^[16]。

实验分离精原干细胞的方式有很多，如Percoll密度梯度离心法^[17]、流式细胞仪分选^[18-20]、MACS磁珠分选等，体外培养所用的培养基也有不同，如基础培养基^[21]、培养基添加剂^[22]、细胞因子、饲养层等，所用动物睾丸也有多种种属^[23-29]。体外处理精原干细胞的方式也有不同，如射线处理^[30]，移植方式有同种异体移植，异基因移植^[31-32]。

精原干细胞表面的特异性标志物有很多，目前用来鉴定精原干细胞最常用的标志物为Thy-1、GFRa-1以及C-kit，其中Thy-1、GFRa-1属未分化型表面标志物，C-kit则属于分化型表面标志物。精原干细胞培养7 d，细胞生长迅速，数量增长明显，细胞生长形态呈集落样和葡萄串样，细胞团数量增加明显，符合精原干细胞的增殖特征。精原干细胞中的GFRa-1、Thy-1和C-kit 蛋白均表达于细胞膜和细胞质中，主要表达于细胞膜中。体外培养的精原干细胞状态以未分化型细胞为主，仅有少量状态呈现为分化型精原干细胞；精原干细胞分离培养7 d后C-kit、GFRa-1及Thy-1 标志基因mRNA 表达与同批次小鼠睾丸组织相一致。与空白组相比，无论是单独红景天多糖给药还是联合用药，都能显著增强精原干细胞活性。红景天多糖联合白血病抑制因子、胶质细胞源神经营养因子对精原干细胞3种蛋白表达作用显著，红景天多糖单独应用对C-kit蛋白表达无显著影响，提示红景天多糖单独应用对精原干细胞的作用机制与联合用药机制存在一定差异。

实验结果发现精原干细胞接种于Sertoli细胞饲养层上共培养，在红景天多糖单独或联合白血病抑制因子、胶质细胞源神经营养因子作用下，对精原干细胞体外增殖具有一定的促进作用，说明实验建立的精原干细胞体外培养方法可有效达到体外扩增的目的。

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Rhodiola polysaccharide effect on spermatogonial stem cell proliferation in vitro

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[1]	林清凡, 解一新, 陈婉清, 叶振忠, 陈幼芳. 人胎盘源间充质干细胞条件培养液可上调缺氧状态下BeWo细胞活力和紧密连接因子的表达[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(在线): 4970-4975.
[2]	蒲锐, 陈子扬, 袁凌燕. 不同细胞来源外泌体保护心脏的特点与效应[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(在线): 1-.
[3]	张秀梅, 翟运开, 赵杰, 赵萌. 类器官模型国内外数据库近10年文献研究热点分析[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(8): 1249-1255.
[4]	刘聪, 刘肃. miR-17-5p调控低氧诱导因子1α介导脂肪细胞分化及血管生成的分子机制[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1069-1074.
[5]	王正东, 黄娜, 陈婧娴, 郑作兵, 胡鑫宇, 李梅, 苏晓, 苏学森, 颜南. 丁酸钠抑制氟中毒可诱导小胶质细胞活化及炎症因子表达增多[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1075-1080.
[6]	汪显耀, 关亚琳, 刘忠山. 提高间充质干细胞治疗难愈性创面的策略[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1081-1087.
[7]	万然, 史旭, 刘京松, 王岩松. 间充质干细胞分泌组治疗脊髓损伤的研究进展[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1088-1095.
[8]	廖成成, 安家兴, 谭张雪, 王倩, 刘建国. 口腔鳞状细胞癌干细胞的治疗靶点及应用前景[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1096-1103.
[9]	谢文佳, 夏天娇, 周卿云, 刘羽佳, 顾小萍. 小胶质细胞介导神经元损伤在神经退行性疾病中的作用[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1109-1115.
[10]	李珊珊, 郭笑霄, 尤冉, 杨秀芬, 赵露, 陈曦, 王艳玲. 感光细胞替代治疗视网膜变性疾病[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1116-1121.
[11]	焦慧, 张一宁, 宋雨晴, 林宇, 王秀丽. 乳腺癌类器官研究进展及临床应用前景[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1122-1128.
[12]	王诗琦, 张金生. 中医药调控缺血缺氧微环境对骨髓间充质干细胞增殖、分化及衰老的影响[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1129-1134.
[13]	曾燕华, 郝延磊. 许旺细胞体外培养及纯化的系统性综述[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1135-1141.
[14]	孔德胜, 何晶晶, 冯宝峰, 郭瑞云, Asiamah Ernest Amponsah, 吕飞, 张舒涵, 张晓琳, 马隽, 崔慧先. 间充质干细胞修复大动物模型脊髓损伤疗效评价的Meta分析[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1142-1148.
[15]	侯婧瑛, 于萌蕾, 郭天柱, 龙会宝, 吴浩. 缺氧预处理激活HIF-1α/MALAT1/VEGFA通路促进骨髓间充质干细胞生存和血管再生[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 985-990.