骨髓间充质干细胞SCA-1+/CD45+/CD31+亚群的归巢能力

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2015.41.003

中国组织工程研究

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骨髓间充质干细胞SCA-1⁺/CD45⁺/CD31⁺亚群的归巢能力

贺继刚，李洪荣，桂龙升，李永武，严丹，王平

云南省第一人民医院心脏大血管外科，云南省昆明市 650032

出版日期:2015-10-01 发布日期:2015-10-01
通讯作者: 王平，硕士，主任医师，云南省第一人民医院心脏大血管外科，云南省昆明市 650032
作者简介:贺继刚，男，1980年生，河北省抚宁县人，汉族，2013年苏州大学毕业，博士，主治医师，主要从事干细胞在终末心脏病中的应用研究。
基金资助:
国家自然科学基金(81460073)；云南省科技厅-昆明医科大学应用基础研究联合专项(2014FB089)

Homing ability of the SCA-1⁺/CD45⁺/CD31⁺ subgroup of bone marrow mesenchymal stem cells

He Ji-gang, Li Hong-rong, Gui Long-sheng, Li Yong-wu, Yan Dan, Wang Ping

Department of Cardiovascular Surgery, First People’s Hospital of Yunnan Province, Kunming 650032, Yunnan Province, China

Online:2015-10-01 Published:2015-10-01
Contact: Wang Ping, Master, Chief physician, Department of Cardiovascular Surgery, First People’s Hospital of Yunnan Province, Kunming 650032, Yunnan Province, China
About author:He Ji-gang, M.D., Attending physician, Department of Cardiovascular Surgery, First People’s Hospital of Yunnan Province, Kunming 650032, Yunnan Province, China
Supported by:
the National Natural Science Foundation of China, No. 81460073; the Applied Basic Research Joint Project of Yunnan Provincial Science and Technology Department & Kunming Medical University, No. 2014FB089

摘要/Abstract

摘要：

背景：自2003年，美国 FDA率先批准自体骨髓干细胞移植治疗心肌梗死性疾病以来，已有大量临床及基础研究报道，但报道结果却不尽相同，其中很重要的一点就是干细胞无法有效到达心肌损伤部位(即干细胞归巢)。
目的：探讨小鼠骨髓间充质干细胞各亚群在心肌修复中的归巢能力。
方法：以小鼠心肌干细胞表面分化抗原筛查小鼠骨髓间充质干细胞，再以CD45、CD31为标准分选得到小鼠骨髓间充质干细胞4个亚群。采用Transwell小室检测各亚群组细胞的归巢能力。将各亚群细胞注入心肌梗死48 h小鼠体内，注射后48，96 h及7 d处死小鼠取其心脏完成小动物活体成像并检测其荧光强度。
结果与结论：小鼠骨髓间充质干细胞SCA-1⁺/CD45⁺/CD31⁺亚群归巢能力优于其他亚群。小动物活体成像提示干细胞注射48 h，96 h及7 d时SCA-1⁺/CD45⁺/CD31⁺亚群平均荧光强度优于其他亚群，SCA-1⁺/CD45⁺/ CD31⁺亚群迁移率最高，说明SCA-1⁺/CD45^-/CD31^-群体有向受损心肌归巢的趋势。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

关键词: 干细胞, 骨髓干细胞, 归巢, 骨髓间充质干细胞, 亚群, SCA-1, CD45, CD31, 小鼠, 心肌梗死, 荧光强度, 国家自然科学基金

Abstract:

BACKGROUND: Since the FDA was the first to approve autologous bone marrow stem cell transplantation for treatment of myocardial infarction in 2003, there has a large number of clinical and basic research reports. However, their conclusions are different and stem cell homing is a key point.
OBJECTIVE: To explore the homing abilities of different subgroups of mouse bone marrow mesenchymal stem cells in myocardial regeneration.
METHODS: After mouse bone marrow mesenchymal stem cells were detected using a mouse cardiac stem cell surface differentiation antigen, four cell subgroups were separated on the basis of CD45 and CD31. The homing abilities of the four subgroups were assayed in a Transwell chamber in vitro. The different cell subgroups were injected into the model mice suffering from myocardial infarction for 48 hours. The mice were sacrificed at 48 hours, 96 hours, and 7 days after injection; the hearts were taken and analyzed through whole-body imaging and fluorescence intensity detection.
RESULTS AND CONCLUSION: The SCA-1⁺/CD45⁺/CD31⁺ subgroup exhibited the strongest homing ability. The whole-body imaging indicated that the fluorescence intensity of SCA-1⁺/CD45⁺/CD31⁺ subgroup was higher than that of the other subgroups at 48 hours, 96 hours and 7 days after stem cell injection. The migration rate of SCA-1⁺/CD45⁺/CD31⁺ subgroup was also the highest. These findings indicate that the homing ability of the SCA-1⁺/CD45⁺/CD31⁺ subgroup of mouse bone marrow mesenchymal stem cells exhibit a homing trend to the damaged myocardial tissue.

Key words: headings, Myocardial Infarction, Bone Marrow, Mesenchymal Stem Cells, Cell Movement, Tissue Engineering

中图分类号:

R394.2

贺继刚，李洪荣，桂龙升，李永武，严丹，王平. 骨髓间充质干细胞SCA-1⁺/CD45⁺/CD31⁺亚群的归巢能力[J]. 中国组织工程研究, doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2015.41.003.

He Ji-gang, Li Hong-rong, Gui Long-sheng, Li Yong-wu, Yan Dan, Wang Ping. Homing ability of the SCA-1⁺/CD45⁺/CD31⁺ subgroup of bone marrow mesenchymal stem cells[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2015.41.003.

图/表（结果） 10

2.1 小鼠骨髓间充质干细胞形态 48 h内贴壁的细胞起初形态不甚均一、异质性大，有成纤维样细胞，也有小的圆形细胞等。大约4 d时，这些细胞开始增生，逐渐形成小的细胞集落。7 d时，不同大小的细胞集落明显增大，集落中的细胞生长浓密，呈梭形或多角形。细胞数量逐渐增加，体积增大，排列开始出现方向性，呈漩涡样生长。15 d左右间充质干细胞扩增至10⁷数量级。随着细胞的不断生长，细胞集落直径不断增加和邻近细胞互相连接，细胞形态比较均一。20 d左右细胞融合80%-90%，呈漩涡状。
传代培养的干细胞生长方式和原代细胞相似。细胞呈圆形，接种4 h开始贴壁，逐渐恢复为长梭形。24 h完全贴壁，形态与原代细胞相似，但增殖速度明显增快，不再以集落的方式生长，而是呈均匀分布的纺锤形细胞平均生长，5 d即可传代1次，且细胞形态单一均匀，融合后呈典型的极性，漩涡状生长。传代后间充质干细胞呈均匀分布生长，小而圆的细胞随着传代而逐渐减少。细胞形态开始呈比较均一的成纤维状。第7代小鼠骨髓间充质干细胞形态单一均匀，融合后呈典型的极性。细胞形态呈比较均一的成纤维状，连续传代，细胞形态无明显变化，说明骨髓间充质干细胞得到了进一步的纯化。部分贴壁细胞传代达20次以上，细胞并无衰老迹象。
2.2 小鼠骨髓间充质干细胞向脂肪、骨及软骨分化骨髓间充质干细胞汇合度约达90%时，加入成脂诱导液，培养22 d后进行油红O染色，可见红色脂滴，成脂阳性率约30%(图1A)；骨髓间充质干细胞汇合度约达70%时，加入成骨诱导液，培养22 d后进行茜素红染色，成骨诱导阳性率约达50%(图1B)；骨髓间充质干细胞汇合度约达70%时，加入成软骨诱导液，培养22 d后进行阿利辛蓝染色，成骨诱导阳性率约达80%(图1C)。

2.3 小鼠骨髓间充质干细胞流式鉴定结果小鼠骨髓间充质干细胞CD29(细胞整合素分子)表达率为99.71%、SCA-1(干细胞抗原1)表达率为97.74%、CD44(黏附分子) 表达率为97.28%，不表达造血祖细胞表面标志CD11b (0.34%)。
2.4 各细胞亚群的分选结果见图2。

2.5 心肌梗死模型小鼠一般情况直视下完成小鼠心肌梗死造模，冠脉结扎术后小鼠精神萎靡呈蜷缩状、活动较少、呼吸浅促、抓起时反抗较轻，毛发枯槁呈黄白色、多见倒竖，进食量明显减少，左前降支冠脉结扎成功标志为左心室前壁及心尖周围心肌组织立即出现颜色苍白和运动减弱(图3)。心肌梗死后48 h超声心动图检测，可见左室前壁已明显变薄，左室射血分数下降(图4)。

2.6 体外实验检测各组亚群细胞的归巢能力采用Transwell小室检测SCA-1⁺/CD45⁺/CD31^-、SCA-1⁺/CD45^-/ CD31^-、SCA-1⁺/CD45⁺/CD31⁺、SCA-1⁺/CD45^-/CD31⁺、未分选组细胞的归巢能力(图5-7)。每个亚群细胞及未分选群取3个高倍镜视野，镜下细胞计数，每组细胞重复3次，见表1。

2.7 体内通过小动物活体成像证明SCA-1⁺/CD45⁺/ CD31⁺亚群具有更强的归巢能力心肌梗死48 h，将SCA-1⁺/CD45^-/CD31^-，SCA-1⁺/CD45^-/CD31⁺，SCA-1⁺/ CD45⁺/CD31^-，SCA-1⁺/CD45⁺/CD31⁺及未分选群细胞采用Dir荧光染色经小鼠尾静脉注入小鼠体内，于48，96 h，7 d后处死小鼠取心脏行小动物活体成像检测其荧光强度(图8A-C)。SCA-1⁺/CD45⁺/CD31⁺归巢能力优于其他亚群及未分选群(图9)。

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引言

自1976年，Friedenstein首次提供了较为直接的证据，证明骨髓中可能存在间质细胞的前体细胞。1984年，Owen首先将这种贴壁生长的骨髓单个核细胞定义为骨髓间充质干细胞。1987年，Friedenstein等又发现在塑料培养皿中培养的贴壁骨髓单个核细胞在特定的条件下可分化为成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞和成肌细胞，并且扩增20-30代后仍保持其多向分化潜能。2003年，美国FDA率先批准自体骨髓干细胞移植治疗心肌梗死性疾病，随后世界各地均开展了干细胞治疗研究，而应用最为广泛及成熟的是骨髓间充质干细胞，目前已经开展了应用骨髓间充质干细胞治疗肝、胰、神经、血管、心脏等器官病变的研究，而利用骨髓间充质干细胞治疗自身免疫性疾病也已进入临床应用阶段。不可否认的是，骨髓间充质干细胞虽有一定的治疗效果，但远没有达到人们的期望。尤其许多基础和临床试验相继表明干细胞移植能够修复损伤的心肌，促进血管新生，缩小心肌梗死面积，改善心功能。不同研究机构对最终骨髓间充质干细胞能在多大程度上改善心功能存有争议。
针对此现状，作者认为可能是由于骨髓间充质干细胞是一群多克隆的细胞群体，不同的克隆亚群具有不同的功能或不同的定向分化方向。能否有效寻找到不同功能的亚群，成为迫在眉睫需要解决的问题。2002年，Daniele Torella等首先从小鼠心脏中分离出一种固有的心肌干细胞，从而打破了人们以往认为心肌细胞属于永生细胞，不可再生的概念。进一步研究发现通过其表面不同的分化抗原，可以分为6个亚群，且6个亚群细胞均可向心肌细胞定向分化，并认为心肌干细胞来源于骨髓干细胞池。在以上研究基础上，作者考虑利用已知的小鼠心肌干细胞的表面分化抗原对小鼠骨髓间充质干细胞进行筛选，希望能够发现归巢能力更强的骨髓间充质干细胞克隆亚群。

材料方法

1.1 设计细胞水平实验研究。
1.2 时间及地点实验于2015年1至6月在云南省第一人民医院基础研究所完成。
1.3 材料
1.3.1 实验动物 SPF级4周龄雄性C57BL/6小鼠10只，体质量(25.0±6.3) g，用于细胞培养。SPF级4周龄雄性C57BL/6小鼠100只，体质量(24.6±4.3) g，用于造模。以上动物均由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供[SCXK (沪)2007-0005]。所有动物的喂养、观察均按照GLP(非临床研究管理规范)规定执行。
1.3.2 主要试剂和仪器 C57BL/6小鼠骨髓间充质干细胞培养基、小鼠骨髓间充质干细胞脂肪分化试剂盒、骨及软骨分化试剂盒均购于美国Cyagen Biosciences。CD45、CD31、CD11b MicroBeads购于Miltenyi公司。多模式小动物活体成像系统购于美国柯达公司。
1.4 实验方法
1.4.1 小鼠骨髓间充质干细胞的分离取健康4周龄SPF级C57BL/6 小鼠，脱颈处死，体积分数为75%乙醇浸泡 15 min，取出股骨和胫骨，再以体积分数为75%乙醇浸泡1.0-2.0 min，置于生理盐水中，两端剪断暴露骨髓腔。用含有1 mL生理盐水的注射器冲出骨髓，然后将股骨和胫骨夹碎反复冲洗，收集至无菌离心管中，以1 500×g离心   10 min，然后以含体积分数为10%胎牛血清的C57BL/6小鼠骨髓间充质干细胞培养基重悬细胞制备细胞悬液，以2×10⁶/cm²密度接种至25 cm²塑料培养瓶，置于37 ℃、体积分数为5% CO₂培养箱中培养，并标记为原代。
1.4.2 小鼠骨髓间充质干细胞的传代培养 72 h后首次全量换液去除未贴壁细胞，以后每3 d全量换液。每日在倒置显微镜下观察细胞的形态及生长情况。待细胞融合达80%-90%后，用1 mL 0.25%胰蛋白酶-EDTA消化3-     5 min，待细胞形态开始皱缩，用1.5 mL含体积分数为10%胎牛血清终止消化，并加入3-5 mL生理盐水，反复轻轻吹打，移入离心管，1 500 r/min离心5 min，弃上清，加入含体积分数为10%胎牛血清的C57BL/6小鼠骨髓间充质干细胞培养基。细胞计数后按1︰2比例传代培养。传代后细胞平均每3 d换液1次，直至贴壁细胞接近80%-90%融合，再重复上述操作，反复传代扩增，至第3代时，消化细胞以CD11b (Microglia) MicroBeads进行细胞负选纯化，纯化后的细胞继续贴壁传代培养至第7代。
1.4.3 小鼠骨髓间充质干细胞三系分化鉴定(向骨、脂肪及软骨分化) 骨、脂肪及软骨分化试剂盒购买自美国Cyagen Biosciences，按说明书完成实验。
1.4.4 小鼠骨髓间充质干细胞分化抗原流式鉴定 ①取生长至第7代骨髓间充质干细胞，待细胞融合达80%-90%，用0.25%胰蛋白酶消化2-4 min，用血清终止消化，吸管仔细吹打使之形成细胞悬液。②细胞悬液经1 500 r/min离心 5 min。弃上清，用生理盐水洗涤2次，以生理盐水重悬制成(1-5)×10⁵的细胞悬液，将细胞悬液分装至7支样品管中。锥虫蓝染色计数活细胞数，要求活细胞数 >90%。③每管再分别加入1︰100稀释的FITC-LgG，PE-LgG同型对照；PE-CD44单抗5 μL进行1︰20稀释至100 μL；PE-CD29单抗5 μL进行1︰40稀释至100 μL；PE/Cy5-CD11b 5 μL进行1︰20稀释至100 μL；37 ℃下避光反应20 min。每管加入生理盐水1 mL混匀，2 000 r/min离心10 min，洗去未标记上的抗体。按量于各个样品管内加入相对应的二抗，用最大量程为200 μL的移液枪小心吹打混匀。④弃上清，每管再加入生理盐水，0.5 mL重新混悬细胞，用流式细胞仪检测细胞表面标志抗原CD44、CD29、CD11b的表达。
1.4.5 采用磁珠分选细胞亚群方法
样本准备：第7代骨髓间充质干细胞培养于T75培养瓶中，加入4.5 mL胰酶消化，当细胞变圆脱落时加入1.5 mL血清终止反应，并计数细胞。
磁珠标记：①在磁珠标记前，将细胞通过70 μm的细胞滤器，可以有效的去除细胞栓子，这些栓子可能会阻塞柱子，在使用前应该用缓冲液湿润柱子。②每10⁷的细胞添加2 μL的磁珠，混合均匀后在2-8 ℃下孵育15 min。③每107细胞添加1.0-2.0 mL缓冲液，以30×g的速度离心 10 min，完全吸出上清液(重复2次)，再添加缓冲液重悬。注意：当应用生物素标记磁珠分选时，应用FcR阻断剂情况下，细胞应重悬80 μL缓冲液中。
细胞分选：①将大细胞分选柱与23G的流体阻力器相连。②放入细胞，而后加入500 μL脱气泡的缓冲液。③阴选部分的细胞可用缓冲液冲洗。④移除分选器及阻力器，更换新的收集装置。⑤添加1 mL缓冲液，利用推塞冲出细胞，可使用一个新的分选柱重复上述步骤，以获得更高细胞纯度。⑥将分选后的细胞以1 500 r/min离心10 min，加   5 mL培养基置于T25培养瓶中。
1.4.6 体外Transwell小室实验将Matrigel稀释液均匀包被Transwell小室膜内侧面，上室内分别加入各组细胞悬液(SCA-1⁺/CD45^-/CD31⁺、SCA-1⁺/CD45⁺/CD31^-、SCA-1⁺/ CD45⁺/CD31⁺、SCA-1⁺/CD45^-/CD31^-及未分选组)100 μL，下室内加入含血清的C57BL/6小鼠完全培养基600 μL(内含SDF-1 100 μg/L)。于37 ℃，体积分数为5% CO₂条件下继续培养24 h，1%结晶紫溶液染色20 min。×400放大倍数下随机选取3个视野，分别计数穿过细胞个数，计算并记录各组平均值。
1.4.7 心肌梗死模型制作小鼠称质量后腹腔注射10%水合氯醛(1.5 mL/kg)进行麻醉。麻醉满意后置于手术台，四肢及头部仰卧固定于手术台上，四肢皮下连接心电图电极，颈部皮肤备皮消毒，胸骨上窝上正中切开皮肤2 cm，向上钝性分离推开甲状腺，沿气管前肌走行方向顿性分开肌肉，使气管在没有任何拉钩牵引的情况下能充分显露，气管过牵引线，于环状软骨下气管环间采用0.7 mm小儿静脉穿刺针行气管穿刺，插入气管插管，深度为1.5-2.0 cm。气管插管与小动物呼吸机连接，潮气量0.8-0.9 mL，呼吸频率120次/min，呼吸比1︰1。观察胸廓起伏情况，再次调整气管插管的深度。胸部备皮，体积分数为75%乙醇消毒3次。在左前上肢下方1.0-2.0 cm作一弧形切口，前起胸骨左缘，切口长约2.0 cm。依次切开皮肤、深浅筋膜、胸大肌、前锯肌，暴露第3，4肋骨。由第3肋间剪断肋间肌，剪开胸膜，进入胸腔，用自制拉钩撑开胸腔。轻压右侧胸腔，充分暴露心脏、血管。以肺动脉圆锥与左心耳右缘之间交点和心尖的假想连线为小鼠冠状动脉前降支走行标志，以8/0缝线于左心耳根部下方1.0-2.0 mm处入针，进针深度0.5-1.0 mm，宽约1 mm，以肺动脉圆锥左缘出针。缝扎的方向和左心耳的下缘平行。结扎成功标志为左心室前壁及心尖周围心肌组织运动减弱。缝合肋骨，关闭肋间隙，最后一针加大潮气量排除胸腔内残气，然后收紧缝线、打结，逐层缝合肌肉、皮肤，逐层关胸。脱离呼吸机，缝合气管静脉穿刺处伤口及颈部切开的皮肤。术后小鼠腹腔内注入5×10⁴ U青霉素。
1.4.8 体内小动物活体成像心肌梗死48 h，将SCA-1⁺/CD45^-/CD31^-，SCA-1⁺/CD45^-/CD31⁺，SCA-1⁺/ CD45⁺/CD31^-，SCA-1⁺/CD45⁺/CD31⁺及未分选群采用Dir荧光染色经尾静脉注入小鼠体内，于48 h，96 h，7 d后处死小鼠取心脏行小动物活体成像检测其荧光强度。
1.5 主要观察指标 ①Transwell小室通过细胞数量。②心脏彩超评估心功能。③小动物活体成像评估心脏荧光强度。
1.6 统计学分析使用SPSS 15.0软件进行统计分析，数据以x±s表示；各细胞亚群间比较采用单因素方差分析，统计假设检验均为双侧。

讨论

骨髓间充质干细胞进入体内分布一直是干细胞研究的热点。2012年Wu等^[1]研究在大鼠心肌梗死模型中应用骨髓间充质干细胞治疗策略，发现骨髓间充质干细胞经静脉注射后，在肝部分布量最大，而在心、脾则有相对较少的分布量，经左心室注射与之相比，肺的分布量减少而心的分布增加。他们认为扩增后的骨髓间充质干细胞体积相对较大，激活并表达黏附分子，因此无法通过肺毛细血管网^[2-3]。注射后1周，骨髓间充质干细胞只分布在心脏缺血区，其认为骨髓间充质干细胞被吸引并停留在缺血组织中，损伤组织分泌特定的受体或配体促进骨髓间充质干细胞黏附、浸润到该组织。2011年Ghadge等^[4-5]在人骨髓间充质干细胞中联合转导端粒酶反转录酶和绿色荧光蛋白基因，获得永生化并且带有荧光标记的细胞系，然后将该细胞经尾静脉注射到免疫耗竭小鼠体内观察其在全身各组织器官的分布、定植和存活情况，结果表明输注的细胞在首过即被微血管系统有效“扣留”，只有很少的细胞在移植4周后仍然存在于肺、心和肾脏^[6-8]。研究认为骨髓间充质干细胞修复心肌损伤面临两个非常重要的问题：①细胞凋亡，导致细胞无法充分修复心肌损伤。②细胞归巢，使细胞到达心肌损伤局部的量较少，而影响了修复效果。目前通过对骨髓间充质干细胞采取预处理，包括：缺血预处理、药物预处理、热休克预处理、干细胞因子预处理，或对其进行基因修饰，包括：促使干细胞表达生长因子、通过转基因方式促其过表达加强骨髓间充质干细胞抗凋亡^[9-12]。通过促其过表达CXCR4等因子或静默连接蛋白的表达完成促其归巢^[13]。
所谓干细胞的“归巢”应该包括两个方面：①细胞的趋化、迁移。②细胞的侵袭^[14-15]。采用Transwell小室内铺Matrigel胶，结晶紫染色检测穿过细胞的数量评价细胞归巢，可见SCA-1⁺/CD45⁺/CD31⁺亚群归巢能力优于其他亚群。小动物活体成像提示干细胞注射48 h，96 h及7 d时SCA-1⁺/CD45⁺/CD31⁺亚群平均荧光强度优于其他亚群，SCA-1⁺/CD45⁺/CD31⁺亚群迁移率最高。SCA-1⁺/CD45^-/ CD31^-群体有向受损心肌归巢的趋势。目前国内外对骨髓间充质干细胞归巢的机制趋于一致：主要是依靠炎性趋化轴完成的，包括两大轴系：CXCL2/5-MCP-1；CXCR4-SDF-1^[16]；造成本实验各亚群细胞迁移出现差异，推测可能与细胞表达上述两大轴系的受体(CXCL2/5或CXCR4)不同而导致^[17]，拟进一步行基因芯片检测从基因水平阐明SCA-1⁺/CD45⁺/CD31⁺亚群优于其他亚群的归巢能力。
综上所述，可以发现小鼠骨髓间充质干细胞是一群多克隆的细胞群体，SCA-1⁺/CD45⁺/CD31⁺归巢能力优于其他亚群细胞。

骨髓间充质干细胞SCA-1⁺/CD45⁺/CD31⁺亚群的归巢能力

Homing ability of the SCA-1⁺/CD45⁺/CD31⁺ subgroup of bone marrow mesenchymal stem cells

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骨髓间充质干细胞SCA-1+/CD45+/CD31+亚群的归巢能力

Homing ability of the SCA-1+/CD45+/CD31+ subgroup of bone marrow mesenchymal stem cells

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骨髓间充质干细胞SCA-1⁺/CD45⁺/CD31⁺亚群的归巢能力

Homing ability of the SCA-1⁺/CD45⁺/CD31⁺ subgroup of bone marrow mesenchymal stem cells