5-氟尿嘧啶对人舌鳞癌Tca8113中肿瘤干细胞的富集作用

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2015.10.002

中国组织工程研究 ›› 2015, Vol. 19 ›› Issue (10): 1482-1487.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2015.10.002

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5-氟尿嘧啶对人舌鳞癌Tca8113中肿瘤干细胞的富集作用

徐望，季平

重庆医科大学附属口腔医院，口腔疾病与生物医学重庆市重点实验室，重庆市高校市级口腔生物医学工程重点实验室，重庆市 400030

出版日期:2015-03-05 发布日期:2015-03-05
通讯作者: 季平，博士，教授，重庆医科大学附属口腔医院，口腔疾病与生物医学重庆市重点实验室，重庆市高校市级口腔生物医学工程重点实验室，重庆市 400030
作者简介:徐望，男，1988年生，重庆市人，汉族，硕士，主要从事颌面部肿瘤相关研究。
基金资助:
2013年重庆高校创新团队建设计划资助项目；重庆市高校市级口腔生物医学工程重点实验室资助项目

5-Fluorouracil enriches cancer stem cells in tongue squamous cell carcinoma Tca8113

Xu Wang, Ji Ping

Stomatological Hospital of Chongqing Medical University, Chongqing Key Laboratory of Oral Diseases and Biomedical Sciences, Chongqing Municipal Key Laboratory of Oral Biomedical Engineering of Higher Education, Chongqing 400030, China

Online:2015-03-05 Published:2015-03-05
Contact: Ji Ping, M.D., Professor, Stomatological Hospital of Chongqing Medical University, Chongqing Key Laboratory of Oral Diseases and Biomedical Sciences, Chongqing Municipal Key Laboratory of Oral Biomedical Engineering of Higher Education, Chongqing 400030, China
About author:Xu Wang, Master, Stomatological Hospital of Chongqing Medical University, Chongqing Key Laboratory of Oral Diseases and Biomedical Sciences, Chongqing Municipal Key Laboratory of Oral Biomedical Engineering of Higher Education, Chongqing 400030, China
Supported by:
the Innovative Team Construction Plan of Universities in Chongqing in 2013; the grant from the Chongqing Municipal Key Laboratory of Oral Biomedical Engineering of Higher Education

摘要/Abstract

摘要：

背景：肿瘤对于化疗药物具有耐药性，而耐药性产生又与肿瘤干细胞密切相关。因此，如何靶向杀伤肿瘤干细胞，将成为口腔鳞癌治疗的关键。

目的：探讨5-氟尿嘧啶对舌鳞癌Tca8113肿瘤细胞生物学特性的影响。

方法：利用CCK-8实验检测不同质量浓度5-氟尿嘧啶对Tca8113细胞活性的影响，筛选相对较好的药物质量浓度和作用时间进行后续实验，以不添加5-氟尿嘧啶为对照组，流式细胞仪检测细胞周期及肿瘤细胞中侧群细胞比例的变化，划痕实验检测肿瘤细胞迁移能力变化。

结果与结论：CCK-8检测显示：5-氟尿嘧啶对舌鳞癌Tca8113细胞系细胞的活性抑制呈时间及药物浓度的正相关关系，50 mg/L 5-氟尿嘧啶作用48 h时，细胞活性抑制效果相对较好。流式细胞仪细胞周期检测显示：实验组G₀/G₁期细胞比例较对照组明显升高(P=0.01)，S期细胞较对照组下降(P=0.244)，实验组G₂/M期细胞完全消失(P=0.00)。5-氟尿嘧啶处理后侧群细胞比例较处理前明显升高(P=0.00)。细胞划痕实验显示实验组划痕愈合能力较对照组增强。结果表明5-氟尿嘧啶药物筛选人舌鳞癌Tca8113细胞可以作为富集类肿瘤干细胞的方法之一。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

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关键词: 干细胞, 肿瘤干细胞, 舌鳞癌, 5-氟尿嘧啶, 侧群细胞, 化疗耐药性, 流式细胞, 细胞周期, 划痕实验, CCK-8, 肿瘤干细胞标志物

Abstract:

BACKGROUND: Tumor cells are resistant to chemotherapeutic drugs, and drug resistance is closely correlated with tumor stem cells. Therefore, how to kill tumor stem cells will become the key to the treatment of oral squamous cell carcinoma.

OBJECTIVE: To study the effect of 5-fluorouracil on biological characteristics of tongue squamous cell carcinoma Tca8113 cells.

METHODS: Viability of Tca8113 cells treated with different concentrations of 5-fluorouracil was determined by cell counting kit-8, and the best drug concentration and time were screened for subsequent experiments. Tca8113 cells without 5-fluorouracil acted as control group. Then the cell cycle and percentage of the side population cells in Tca8113 cells were determined by flow cytometry. Scratch test was used to determine the migration ability of Tca8113 cells.

RESULTS AND CONCLUSION: Results from cell counting kit-8 showed that 5-fluorouracil inhibited the viability of Tca8113 cells positively in a time- and dose-dependent manner. Tca8113 cells under intervention with 50 mg/L 5-fluorouracil for 48 hours showed lowest cell viability. Flow cytometry results showed that in the experimental group, G₀/G₁ phase cells increased significantly compared with the control group (P=0.01), S phase cells decreased significantly compared with the control group (P=0.244), and G₂/M phase cells disappeared completely. After treatment with 5-fluorouracil, the percentage of side population cells was increased significantly (P=0.00). The scratch test showed that in the experimental group, the cells had better ability of wound healing than those in the control group. In conclusion, 5-fluorouracil can enrich the cancer stem cell population in Tca8113 cells.

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Key words: Neoplastic Stem Cells, Fluorouracil, Cell Cycle

中图分类号:

R394.2

徐望，季平. 5-氟尿嘧啶对人舌鳞癌Tca8113中肿瘤干细胞的富集作用[J]. 中国组织工程研究, 2015, 19(10): 1482-1487.

Xu Wang, Ji Ping. 5-Fluorouracil enriches cancer stem cells in tongue squamous cell carcinoma Tca8113[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2015, 19(10): 1482-1487.

图/表（结果） 5

参考文献

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引言

头颈部肿瘤(head and neck cancer，HNC)是世界范围内最常见的十种恶性肿瘤之一，而口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma，OSCC)是其中最主要的肿瘤类别，约占95%，位于人类最常见肿瘤类型的第4位^[1]。目前口腔鳞状细胞癌的治疗方式主要以手术结合化疗为主，但其复发率较高，治疗效果仍不令人满意，其根本原因是肿瘤对于化疗药物具有耐药性，而耐药性产生又与肿瘤干细胞密切相关^[2]。因此，如何靶向杀伤肿瘤干细胞，将成为口腔鳞癌治疗的关键。

干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞，在一定条件下，它可以分化成多种不同功能的细胞^[3]。然而在肿瘤细胞中也有这样一群具有干细胞特性的细胞亚群，称之为肿瘤干细胞(tumor stem cells，TSCs)。自从1994年，Lapidot等^[4]首次从人急性髓性白血病中分离出了具有CD4⁺/CD8^-表型的细胞亚群，并证实其具有肿瘤干细胞特性。之后几十年间，医学科研工作者们又陆续在肺癌、胃癌、乳腺癌、肝癌等肿瘤干细胞表面标志物研究中取得进展。肿瘤干细胞理论被不断证实及完善^[5]，给口腔鳞状细胞癌干细胞的相关研究提供了指导意义。

目前口腔鳞癌研究表明，CD44、CD133、ALDH高表达的细胞亚群，以及利用Hoechst33342染色分选出的SP细胞亚群均具有肿瘤干细胞的特性^[6-8]。但想要准确地识别口腔颌面部鳞癌肿瘤干细胞，单纯依靠无特异性的肿瘤干细胞标志物是不够的，还需要找出其独有的标志物才行。然而肿瘤干细胞在肿瘤中所占比例稀少，为0.01%-4%^[9]，这给深入研究舌鳞癌肿瘤干细胞带来了不小的阻碍。以往通过无血清培养等方式已经提高了肿瘤干细胞的比例^[9]，但仍无法满足实验需求。因此需要进一步富集舌鳞癌肿瘤干细胞。

5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil，5-FU)是现今广泛应用于颌面部恶性肿瘤的一线化疗药物。当5-氟尿嘧啶进入体内，会抑制肿瘤细胞DNA的合成，导致增殖期肿瘤细胞死亡^[10]。以往研究显示：5-氟尿嘧啶是S期的抗代谢药物，能够杀死增殖期的肿瘤细胞，而处于G₀与G₁期的细胞则能够逃逸5-氟尿嘧啶药物的杀伤^[11]。此外细胞周期检测显示：肿瘤干细胞与组织干细胞相似，大多数处于静息状态，也就是细胞周期的G₀/G₁期。因此可以把5-氟尿嘧啶看成是一种筛选工具，处于G₀/G₁期的类肿瘤干细胞在这次筛选中得以“保留”，从而达到富集类肿瘤干细胞的目的。

本实验利用一定剂量的5-氟尿嘧啶作用于舌鳞癌Tca8113肿瘤细胞，并对药物处理后的细胞进行细胞活性、细胞周期以及SP细胞亚群的鉴定分析，旨在发现5-氟尿嘧啶对舌鳞癌肿瘤细胞生物学特性的影响，了解5-氟尿嘧啶能否达到富集类干细胞的作用，为进一步研究舌鳞癌肿瘤干细胞特性并最终找到肿瘤干细胞特异性表面标志物奠定基础。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程
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材料方法

设计：分子水平、细胞水平体外观察实验。

时间及地点：于2014年1至6月在重庆医科大学附属口腔医院实验室完成。

材料：人舌鳞癌Tca8113细胞系(由重庆医科大学提供，原由上海交通大学医学院附属第九人民医院口外肿瘤实验室惠赠)。胎牛血清、RPMI1640培养基购自美国Gibco公司，CCK-8试剂盒购自中国贝博生物公司，细胞周期试剂盒购自苏州跃亚生物技术有限公司，Hoechest33342液(10 mg/L)、5-氟尿嘧啶粉末购自重庆博培生物技术有限公司。

实验方法：

常规培养Tca8113细胞：人舌鳞癌Tca8113细胞系细胞用含体积分数为10%胎牛血清+1%双抗的RPMI1640培养基培养，置于37 ℃，体积分数为5% CO₂恒温箱中孵育，待培养液颜色由桃红色逐渐变为黄色时换液，当细胞覆盖培养瓶瓶底80%-100%时传代。

不同质量浓度5-氟尿嘧啶对Tca8113细胞活性的影响：常规培养Tca8113细胞，待细胞处于对数生长期时，0.25%胰蛋白酶消化后，以每孔5 000个细胞接种于96孔板中，接种后6 h更换含不同质量浓度5-氟尿嘧啶培养液 (50，25，1，0 mg/L)，每孔100 μL，每组细胞设置7个复孔。同时设置3个检测时间点(分别为5-氟尿嘧啶药物作用24，36，48 h)，检测时每孔加入CCK-8 10 μL，继续孵育4 h后，酶标仪450 nm波长处检测每孔吸光度值，以时间为横坐标、吸光度值为纵坐标绘制图表。根据图表找出最大细胞活性抑制效果下的最短药物作用时间及最小药物作用浓度，以此作为接下来实验的药物终时间及终浓度。

检测5-氟尿嘧啶处理前后Tca8113细胞的细胞周期：常规培养Tca8113细胞，细胞分为实验组及对照组。待细胞贴壁生长后实验组更换含50 mg/L 5-氟尿嘧啶的培养液。然后0.25%胰蛋白酶消化，离心(800 r/min，5 min)，去尽上层清液，调整每管细胞个数至1×10⁶，加入预冷体积分数为70%乙醇固定细胞，4 ℃冰箱保存过夜。次日细胞离心(800 r/min，5 min，4 ℃)，预冷PBS洗1遍，再次离心(800 r/min，5 min)，离心后吸尽上层清液。按照细胞周期试剂盒说明进行操作：向离心管内加入细胞周期试剂A(胰蛋白酶)100 μL，轻轻混匀，室温静止10 min，不需离心。再向离心管内加入细胞周期试剂B(胰蛋白酶抑制剂)100 μL，轻轻混匀，室温静止10 min，不需离心。再向离心管内加入细胞周期试剂C(PI染料)150 μL，轻轻混匀，避光4 ℃静置15 min，不需离心；300目过滤网过滤细胞液后，应用流式细胞仪检测细胞周期，检测结果采用modfit软件分析。

检测5-氟尿嘧啶处理前后Tca8113细胞中SP细胞：常规培养Tca8113细胞，细胞分为实验组及对照组。待细胞贴壁生长后实验组更换含50 mg/L 5-氟尿嘧啶的培养液。 48 h后0.25%胰蛋白酶消化，离心(800 r/min，5 min)，调整细胞浓度为1×10⁹ L^-¹。分别加入Hoechest33342染料(质量浓度为10 mg/L)至终质量浓度为5 mg/L，放置于37 ℃恒温水浴箱中避光水浴90 min，每隔15 min晃动1次使其充分混匀。水浴后离心(800 r/min，5 min，4 ℃)，重悬于4 ℃含体积分数为2%胎牛血清的1 mL PBS中，加入终质量浓度20 mg/L PI染料，4 ℃避光染色15 min。300目过滤网过滤细胞液后，流式细胞仪检测SP细胞。去除PI阳性死细胞后，Hoechest33342激发光波长为355 nm，发光偏弱的细胞即为SP细胞，检测结果采用BD FACS Software分析。

检测5-氟尿嘧啶处理Tca8113细胞后侵袭能力：常规培养Tca8113细胞，细胞分为实验组及对照组。待细胞贴壁生长后实验组更换含50 mg/L 5-氟尿嘧啶的培养液。 48 h后0.25%胰蛋白酶消化，制备细胞悬液后接种于6孔板上(6孔板底部记号笔划5条间隔均匀的横线)，每孔接种细胞数量为5×10⁵。次日待细胞铺满孔底，用200 μL枪头于6孔板内划痕，每孔划5条，并更换为含体积分数为2%胎牛血清培养基继续孵育培养。分别于0，12，24，48 h倒置显微镜下观察划痕内细胞迁移情况。

主要观察指标： ①不同质量浓度5-氟尿嘧啶作用不同时间后的Tca8113细胞活性。②流式细胞仪检测5-氟尿嘧啶处理后Tca8113细胞周期变化及SP细胞比例。③划痕实验观测5-氟尿嘧啶处理后一定视野范围内划痕处Tca8113细胞迁移数目。

统计学分析：所有数据采用x(_)±s形式表示，两组间均数比较采用t 检验，使用SPSS 20软件分析，P < 0.05为差异有显著性意义。

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讨论

鳞状细胞癌占口腔颌面部恶性肿瘤80%以上，易发生区域性淋巴结转移，晚期亦可发生远处转移。目前经治疗后患者的5年生存率为64%左右，但对中晚期的口腔鳞癌患者，其5年生存率仅为30%左右^[12]。目前口腔鳞状细胞癌主要以手术治疗结合化疗等其他辅助治疗手段的综合治疗方案为原则，称之为综合序列治疗^[13-14]。其中化学治疗在术前、术中及术后都广泛应用，在肿瘤治疗领域取得了肯定的疗效。随着化疗药物的广泛应用，随之也暴露了诸多问题，例如化疗药物的毒副反应、用药剂量无法适时调节、疗效难以准确评估等，其中十分受关注的一点是肿瘤对化疗药物的耐药性。化学耐药性的存在导致无法根本性地清除肿瘤细胞。如何去解决化疗药物的耐药性问题，至今仍然是医学界的难题。

5-氟尿嘧啶主要作用的是G₂/M期的肿瘤细胞，然而肿瘤干细胞大多数处于细胞周期的G₀/G₁期。因此，可以设想5-氟尿嘧啶就好比一个筛漏，G₂/M期的肿瘤细胞都被过滤掉，而留下了G₀/G₁期的富含肿瘤干细胞的肿瘤细胞。而肿瘤能够无限制地迅速的发生发展，最根本的原因就在于肿瘤干细胞的存在。因此当不断的进行同一类化疗药物的治疗，无异于在富集体内的肿瘤干细胞，这也使得体内耐受该类化疗药物的肿瘤细胞越来越多，疗效也越发不佳，耐药性就随之产生。

本次实验中采用的CCK-8检测了不同质量浓度5-氟尿嘧啶以及不同药物作用时间下Tca8113细胞的细胞活性，结果显示当5-氟尿嘧啶药物质量浓度为50 mg/L，作用48 h时，肿瘤细胞增殖能力抑制最明显，因此可以认为此时的非肿瘤干细胞杀伤效果最佳，以此作为筛选条件所富集的肿瘤干细胞才最多。此外，利用PI染色法检测了5-氟尿嘧啶处理前后的Tca8113细胞的细胞周期变化情况，结果显示：5-氟尿嘧啶处理后的细胞，G₂期完全消失，S期较未处理组明显下降，而肿瘤干细胞主要存在的G₁/G₀期细胞较对照组明显增高。通过PI染色流式细胞仪检测细胞周期，证明了一定质量浓度的5-氟尿嘧啶可以成功富集G₁/G₀期的Tca8113细胞群，为接下来验证G₁/G₀期细胞与肿瘤干细胞关系打下了基础。实验利用Hoechst33342染料来分别检测5-氟尿嘧啶处理前后的SP细胞比例，结果显示经5-氟尿嘧啶处理的实验组SP细胞比例明显高于对照组，也因此证实了利用一定质量浓度的5-氟尿嘧啶可以富集Tca8113细胞中的肿瘤干细胞。同时，作者也提出了肿瘤耐药性与肿瘤干细胞关系的猜想：G₀/G₁期的富含肿瘤干细胞的肿瘤细胞逃逸了5-氟尿嘧啶的杀伤，从而不断地被富集，最终产生耐药性。本系列实验最后还利用划痕实验检测了5-氟尿嘧啶处理的实验组与未经5-氟尿嘧啶处理的对照组的Tca8113细胞系细胞迁移能力，结果显示：实验组划痕愈合能力较对照组快。因此，可以认为经过5-氟尿嘧啶药物的作用，Tca8113细胞系的肿瘤侵袭性相对增强，而肿瘤干细胞的比例也相对增加。

肿瘤干细胞的富集分选方式很多，但并没有一种确切的、惟一的分选方式。近年来，Singh等^[15]用添加了生长因子的无血清培养基培养脑肿瘤，从中培育出了脑肿瘤细胞球，并证实其为脑肿瘤中的干细胞群。课题组前期实验证实，同样可以采用无血清培养法富集到人舌鳞癌肿瘤中的干细胞^[16]。该实验研究结果显示：常规小牛血清培养基培养后的细胞中SP细胞较少，约为0.2%。利用无血清培养基培养人舌鳞癌细胞株Tca8113细胞，细胞中SP含量约为0.4%，增高约1倍。而本次实验利用5-氟尿嘧啶作为分选工具，流式细胞仪检测结果显示：5-氟尿嘧啶处理后Tca8113细胞的SP细胞比例(0.52±0.02)%，较处理前(0.24±0.02)%增高了1.17倍。与无血清培养基分选法相比，5-氟尿嘧啶分选富集肿瘤干细胞作用效果略微更佳。然而这两种富集SP肿瘤细胞的方式作用原理并不相同，因此可以在接下来的实验中探讨采用无血清培养基+5-氟尿嘧啶联合作用，是否能达到更好的富集SP细胞的效果。

有研究表明肿瘤干细胞具有自我更新、无限增殖的能力^[17-18]。因此，肿瘤干细胞被认为是肿瘤发生、发展的根源。目前关于头颈部肿瘤中肿瘤干细胞表面标志物的研究已成为热点。近年发现的肿瘤标志物有以下几种：①CD44是细胞表面的跨膜蛋白。Shigeishi等^[19]报道过，CD44⁺的头颈部鳞状细胞癌细胞具有很强的肿瘤始发能力，研究人员认为头颈部肿瘤中CD44⁺肿瘤细胞群内包含肿瘤干细胞。②CD133同样也是细胞表面的跨膜蛋白，Canis等^[20]发现CD133在原发性头颈部肿瘤的表达与淋巴结转移呈正相关，因此CD133可能参与了肿瘤的发生、发展。③乙醛脱氢酶(ALDH)是一种胞内酶。有报道称只需要3 000个ALDH⁺细胞即可在裸鼠体内移植成瘤^[21-22]。④侧群细胞简称为SP细胞，它具有外排荧光染料Hoechst33342的能力。据报道，从头颈部肿瘤分离的SP细胞具有连续传代的能力^[23-26]。在与拓扑异构酶Ⅰ抑制剂共同培养条件下，与亲代细胞相比显示较强的体内致瘤能力^[27]。⑤ABCG2即三磷酸腺苷结合转运蛋白G2，位于细胞膜上。有研究显示ABCG2高表达的细胞中SP细胞含量较高，口腔黏膜白斑向癌的转型可能与ABCG2有关，ABCG2可以作为肿瘤干细胞的标记^[28-29]。

实验中采用的是5-氟尿嘧啶单一药物作用Tca8113细胞，但临床中所常用的化疗药物并不局限于这一种。口腔颌面癌瘤中常见的化疗抗癌药物按其化学性质分类有细胞毒素类、抗代谢类、抗生素、激素类、植物类等，而它们对细胞周期的影响也存在差异^[12]。因此作者设想：多重化疗药物的共同作用是否有利于肿瘤干细胞的富集？在接下来的实验中，可以利用不同类别的化疗药物作用Tca8113细胞，了解其对细胞活性、细胞周期的影响以及检测肿瘤干细胞特性的表达差异，同时也可以探索多重耐药性产生的机制并进行效果分析。

<题组利用CCK-8来检测Tca8113细胞在不同质量浓度5-氟尿嘧啶作用不同时间下的细胞活性，最终实验结果为50 mg/L 5-氟尿嘧啶作用48 h为最佳条件。但本次实验只是给出了一个相对合理的条件，并没有给出一个更为准确的条件区间范围。因此在接下来的实验中还需要继续去探索更为科学合理的5-氟尿嘧啶作用时间及浓度。

本实验已经证明Tca8113细胞在一定量的5-氟尿嘧啶选择压力下可以富集类肿瘤干细胞。5-氟尿嘧啶的作用机制主要是干扰增殖期肿瘤细胞核酸的合成，从而抑制其生长和繁殖^[10]。但5-氟尿嘧啶在作用增殖期肿瘤细胞的同时，也不可避免的会影响到G₀/G₁期的肿瘤细胞。作者猜测是否5-氟尿嘧啶已经对G₀/G₁期的细胞造成了影响，只是暂时处于休眠状态而被忽视？或者5-氟尿嘧啶对G₀/G₁期的细胞没有明显的影响，但当G₀/G₁期细胞进入M期之后，残留细胞内的5-氟尿嘧啶又会对细胞起抑制作用？又或者5-氟尿嘧啶虽然不会影响休眠期的细胞活性，但是否会造成其DNA的变异，而影响肿瘤干细胞特性的正常表达？总而言之，关于5-氟尿嘧啶对肿瘤细胞的作用机制，以及富集肿瘤干细胞的效果仍然需要进一步探讨和研究。

5-氟尿嘧啶对人舌鳞癌Tca8113中肿瘤干细胞的富集作用

5-Fluorouracil enriches cancer stem cells in tongue squamous cell carcinoma Tca8113

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[1]	林清凡, 解一新, 陈婉清, 叶振忠, 陈幼芳. 人胎盘源间充质干细胞条件培养液可上调缺氧状态下BeWo细胞活力和紧密连接因子的表达[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(在线): 4970-4975.
[2]	蒲锐, 陈子扬, 袁凌燕. 不同细胞来源外泌体保护心脏的特点与效应[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(在线): 1-.
[3]	张秀梅, 翟运开, 赵杰, 赵萌. 类器官模型国内外数据库近10年文献研究热点分析[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(8): 1249-1255.
[4]	王正东, 黄娜, 陈婧娴, 郑作兵, 胡鑫宇, 李梅, 苏晓, 苏学森, 颜南. 丁酸钠抑制氟中毒可诱导小胶质细胞活化及炎症因子表达增多[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1075-1080.
[5]	汪显耀, 关亚琳, 刘忠山. 提高间充质干细胞治疗难愈性创面的策略[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1081-1087.
[6]	万然, 史旭, 刘京松, 王岩松. 间充质干细胞分泌组治疗脊髓损伤的研究进展[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1088-1095.
[7]	廖成成, 安家兴, 谭张雪, 王倩, 刘建国. 口腔鳞状细胞癌干细胞的治疗靶点及应用前景[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1096-1103.
[8]	谢文佳, 夏天娇, 周卿云, 刘羽佳, 顾小萍. 小胶质细胞介导神经元损伤在神经退行性疾病中的作用[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1109-1115.
[9]	李珊珊, 郭笑霄, 尤冉, 杨秀芬, 赵露, 陈曦, 王艳玲. 感光细胞替代治疗视网膜变性疾病[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1116-1121.
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[11]	王诗琦, 张金生. 中医药调控缺血缺氧微环境对骨髓间充质干细胞增殖、分化及衰老的影响[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1129-1134.
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[13]	孔德胜, 何晶晶, 冯宝峰, 郭瑞云, Asiamah Ernest Amponsah, 吕飞, 张舒涵, 张晓琳, 马隽, 崔慧先. 间充质干细胞修复大动物模型脊髓损伤疗效评价的Meta分析[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1142-1148.
[14]	侯婧瑛, 于萌蕾, 郭天柱, 龙会宝, 吴浩. 缺氧预处理激活HIF-1α/MALAT1/VEGFA通路促进骨髓间充质干细胞生存和血管再生[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 985-990.
[15]	史洋洋, 秦英飞, 吴福玲, 何潇, 张雪静. 胎盘间充质干细胞预处理预防小鼠毛细支气管炎[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 991-995.