骨髓间充质干细胞在多发性骨髓瘤活动与缓解期具有不同的促血管生成能力

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2014.37.006

中国组织工程研究 ›› 2014, Vol. 18 ›› Issue (37): 5935-5941.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2014.37.006

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骨髓间充质干细胞在多发性骨髓瘤活动与缓解期具有不同的促血管生成能力

李香丽，张小影，臧立，王晓芳

天津医科大学肿瘤医院血液科，国家肿瘤临床医学研究中心，天津市“肿瘤防治”重点实验室，天津市 300060

修回日期:2014-07-30 出版日期:2014-09-03 发布日期:2014-09-03
通讯作者: 王晓芳，博士，研究生导师，天津医科大学肿瘤医院血液科，国家肿瘤临床医学研究中心，天津市“肿瘤防治”重点实验室，天津市 300060
作者简介:李香丽，女，1986年生，河南省开封市人，天津医科大学在读硕士，主要从事骨髓间充质干细胞相关方面的研究。
基金资助:
国家自然科学基金资助项目(81272562)

Different pro-angiogenesis ability of bone marrow mesenchymal stem cells in multiple myeloma in active and remissive state

Li Xiang-li, Zhang Xiao-ying, Zang Li, Wang Xiao-fang

Department of Hematology, Tianjin Medical University Cancer Institute and Hospital, National Clinical Research Center for Cancer, Key Laboratory of Cancer Prevention and Therapy, Tianjin 300060, China

Revised:2014-07-30 Online:2014-09-03 Published:2014-09-03
Contact: Wang Xiao-fang, M.D., Master’s supervisor, Department of Hematology, Tianjin Medical University Cancer Institute and Hospital, National Clinical Research Center for Cancer, Key Laboratory of Cancer Prevention and Therapy, Tianjin 300060, China
About author:Li Xiang-li, Studying for master’s degree, Department of Hematology, Tianjin Medical University Cancer Institute and Hospital, National Clinical Research Center for Cancer, Key Laboratory of Cancer Prevention and Therapy, Tianjin 300060, China
Supported by:
the National Natural Science Foundation of China, No. 81272562

摘要/Abstract

摘要：

背景：活动期和缓解期多发性骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞的血管生成能力有无差异目前尚不清楚。
目的：观察多发性骨髓瘤活动期及缓解期骨髓间充质干细胞促血管生成能力的差异。
方法：抽取13例多发性骨髓瘤患者治疗前和4个周期治疗后的骨髓，分离培养出骨髓间充质干细胞，采用ELISA方法测定骨髓间充质干细胞培养上清液中血管内皮生长因子、肝细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子的浓度；MTT检测骨髓间充质干细胞培养上清液对脐静脉内皮细胞增殖能力的影响；通过Transwell小室观察骨髓间充质干细胞培养上清液对脐静脉内皮细胞运动能力的影响；通过人工基底膜实验观察骨髓间充质干细胞体外促血管生成和成管能力。
结果与结论：活动期多发性骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞培养上清中血管内皮生长因子、肝细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子浓度明显高于缓解期(P < 0.05)；骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞上清对脐静脉内皮细胞增殖作用呈剂量依赖性，活动期明显强于缓解期(P < 0.05)；活动期骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞上清对脐静脉内皮细胞迁移作用明显高于缓解期(P < 0.05)；骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞体外具有明显成血管作用，活动期明显强于缓解期(P < 0.05)。结果提示多发性骨髓瘤活动期骨髓间充质干细胞促血管生成能力明显大于缓解期。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

全文链接：

关键词: 干细胞, 骨髓干细胞, 多发性骨髓瘤, 骨髓间充质干细胞, 细胞培养上清液, 细胞迁移, 直接成管能力, 血管生成能力, 脐静脉内皮细胞, 血管生成因子, 活动期, 缓解期, 国家自然科学基金

Abstract:

BACKGROUND: Recent studies have found that bone marrow mesenchymal stem cells play an important role in the development of multiple myeloma, especially for angiogenesis, but whether the pro-angiogenesis ability of bone marrow mesenchymal stem cells in multiple myeloma in active and remissive state is different is yet unclear.
OBJECTIVE: To investigate the difference in the pro-angiogenesis ability of bone marrow mesenchymal stem cells in multiple myeloma in active and remissive state.
METHODS: Bone marrow samples were extracted from 13 patients with multiple myeloma before treatment and after four therapeutic cycles to isolate bone marrow mesenchymal stem cells. ELISA assay was used to detect levels of vascular endothelial growth factor, hepatocyte growth factor and basic fibroblast growth factor in the supernatant of bone marrow mesenchymal stem cells. The proliferative ability and movement of human umbilical vein endothelial cells cultured in the supernatant of bone marrow mesenchymal stem cells were detected by MTT assay and Transwell assay, respectively. The pro-angiogenesis ability of bone marrow mesenchymal stem cells was measured by Matrigel in vitro.
RESULTS AND CONCLUSION: The levels of vascular endothelial growth factor, hepatocyte growth factor and basic fibroblast growth factor in the cell supernatant were significantly higher in active myeloma than those in remissive myeloma (P < 0.05). The supernatant of bone marrow mesenchymal stem cells of active myeloma more significantly promoted the proliferation, migration and blood vessel formation of human umbilical vein endothelial cells than that of remissive myeloma in a dose-dependent manner (P < 0.05). These findings indicate that bone marrow mesenchymal stem cells from active myeloma have stronger pro-angiogenesis ability than those from remissive myeloma.

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Key words: bone marrow, mesenchymal stem cells, multiple myeloma, cell movement

中图分类号:

R394.2

李香丽，张小影，臧立，王晓芳. 骨髓间充质干细胞在多发性骨髓瘤活动与缓解期具有不同的促血管生成能力[J]. 中国组织工程研究, 2014, 18(37): 5935-5941.

Li Xiang-li, Zhang Xiao-ying, Zang Li, Wang Xiao-fang. Different pro-angiogenesis ability of bone marrow mesenchymal stem cells in multiple myeloma in active and remissive state[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2014, 18(37): 5935-5941.

图/表（结果） 1

2.1 患者特征 收集天津市肿瘤医院化疗前后的13例多发性骨髓瘤患者，其中男9例，女4例；年龄51-62岁，中位年龄为56岁；根据国际分期系统，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期患者分别为1例(7.7%)、2例(15.4%)、10例(76.9%)；根据免疫球蛋白分型，IgG，IgA，λ轻链型分别为9例，3例，1例。根据国际骨髓瘤工作组统一标准^[13]，疗效评价分为完全缓解(Complete response，CR)、部分缓解(partial response，PR)、病情平稳(stable disease，SD)、疾病进展(Progressive disease，PD)，完全缓解+部分缓解和病情平稳+疾病进展分别为6例，7例。

2.2 流式细胞仪分析骨髓间充质干细胞的免疫表型 多发性骨髓瘤在活动期(治疗前+前病情平稳+疾病进展)及缓解期(完全缓解+部分缓解)骨髓间充质干细胞的免疫表型基本相似。都表达 CD106，CD105，CD29，CD44，不表达CD11a，CD11b，CD14，CD31，CD34，CD45，HLA-DR (表1)。

2.3 ELISA检测血管生成因子水平 多发性骨髓瘤活动期患者骨髓间充质干细胞培养上清中血管内皮生长因子、肝细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子的质量(P < 0.05，表2)；血管生成因子质量浓度在治疗前和活动期之间差异无显著性意义(P > 0.05)。浓度明显高于缓解期

2.4 骨髓间充质干细胞上清液对人脐静脉内皮细胞活性及增殖影响 用MTT实验测定骨髓间充质干细胞培养上清液在不同的体积下对人脐静脉内皮细胞生长的影响。结果显示，骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞上清对脐静脉内皮细胞增殖作用呈剂量依赖性，活动期明显强于缓解期(P < 0.05)。且治疗前组与病情平稳+疾病进展组间差异无显著性意义(P > 0.05，图1)。

2.5 骨髓间充质干细胞上清液对内皮细胞迁移影响 通过Transwell小室实验发现骨髓间充质干细胞上清液影响人脐静脉内皮细胞向基底膜迁移，迁移数量在骨髓瘤活动期明显大于缓解期；统计学结果为骨髓瘤活动期患者骨髓间充质干细胞上清对脐静脉内皮细胞迁移作用明显强于缓解期(P < 0.05，图2)。且治疗前组与病情平稳+疾病进展组间差异无显著性意义(P > 0.05)。

2.6 体外血管形成能力 体外成血管实验显示，骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞上清在体外具有明显成血管作用，活动期明显强于缓解期(P < 0.05)。骨髓间充质干细胞上清的体外成血管能力在治疗前组与病情平稳+疾病进展组间差异无显著性意义(P > 0.05，图3A)。此外，多发性骨髓瘤活动期骨髓间充质干细胞体外直接成管作用明显强于缓解期(P < 0.05，图3B)，且治疗前组与病情平稳+疾病进展组间差异无显著性意义(P > 0.05)。

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引言

多发性骨髓瘤(multiple myeloma，MM)为发生于骨髓B淋巴细胞的恶性浆细胞瘤，是恶性血液病中很常见的一种疾病，主要以骨破坏、贫血、肾脏损伤等为主要临床表现。多发性骨髓瘤的发生发展机制比较复杂，涉及相关基因突变、蛋白表达异常等。目前肿瘤微环境逐渐成为研究肿瘤的热点，在多发性骨髓瘤中，浆细胞与微环境相互作用，骨髓血管的不断形成，并不断促进瘤细胞的增生、演变和转移^[1]。骨髓瘤中新生血管的形成已成为骨髓瘤不良预后的一个重要指标。多发性骨髓瘤中血管生成病理机制较复杂，涉及骨髓瘤细胞、细胞因子及微环境中的基质细胞^[2]。最近研究发现，间充质干细胞在肿瘤发展中起重要作用，尤其对新生血管生成^[3-4]。间充质干细胞是来自于早起胚胎具多潜能的干细胞，具有自我增殖和多向分化的特性，可分化为平滑肌、骨、软骨和血管内皮细胞等多种组织和细胞^[5]。间充质干细胞表达促血管因子、生长因子、细胞因子和纤溶酶原激活物，包括血管生成素1、血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、成纤维细胞生长因子2、成纤维细胞生长因子7、白细胞介素6和肿瘤坏死因子a。以上因子能协同内皮细胞促进血管形成^[6]。进一步研究证实，间充质干细胞可分化为内皮细胞直接参与血管形成^[7]。Beckermann等^[8]研究发现在胰腺癌中，间充质干细胞上清液能促进脐静脉内皮细胞生长，间充质干细胞通过与血管内皮细胞相互作用，使胰腺癌中血管密度增加。另有研究显示，骨髓微血管密度在多发性骨髓瘤活动期明显高于缓解期^[9]。课题组前期研究发现，与正常对照相比，多发性骨髓瘤中间充质干细胞上清液能明显促进脐静脉内皮细胞的增殖、趋化、毛细血管形成。但是关于多发性骨髓瘤患者中间充质干细胞在疾病活动期及缓解期促血管生成能力的比较，目前尚未相关报道^[10]。

本文主要研究骨髓间充质干细胞在多发性骨髓瘤活动期与缓解期促血管能力是否存在差异。通过研究发现多发性骨髓瘤活动期患者骨髓间充质干细胞培养上清中血管内皮生长因子、肝细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子浓度明显高于缓解期；骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞上清对脐静脉内皮细胞增殖作用呈剂量依赖性，活动期明显强于缓解期；骨髓瘤活动期患者的骨髓间充质干细胞上清对脐静脉内皮细胞迁移作用明显高于缓解期；体外成管实验提示，骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞体外具有明显成管作用，活动期明显强于缓解期。最后总结为多发性骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞血管生成能力在活动期明显高于缓解期。这进一步解释了多发性骨髓瘤患者在疾病活动期比缓解期生成血管多的原因，也为不同阶段多发性骨髓瘤的治疗开拓新方向。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程
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材料方法

设计：细胞学体内外实验。

时间及地点：实验于2013年1至12月在天津市“肿瘤防治”重点实验室完成。

材料：

骨髓组织：抽取13例多发性骨髓瘤患者治疗前和4个周期治疗后的骨髓，治疗方案均相同，患病个体均签署“知情同意书”。

实验方法：

骨髓间充质干细胞的分离及培养：所研究患者均行长春新碱、阿霉素和地塞米松诱导方案，4个周期相同方案化疗后进行评价疗效。取10 mL骨髓血于肝素抗凝管中，PBS等倍稀释后混匀，采用Ficoll(密度1.077 g/mL)分离液阶梯分离单个核细胞，加入DMEM/F12完全培养基(含体积分数10%胎牛血清、青霉素100 U/mL、链霉素100 U/mL)，吹打均匀并移入75 cm培养瓶内，置 37 ℃、含体积分数为5%的CO₂饱和湿度恒温培养箱培养。3 d后更换培养基，弃去未贴壁细胞，细胞培养至80%融合时，用0.25% Trypsin- 0.02%EDTA消化，调整细胞浓度至5×10⁵ L^-¹分瓶接种，按1∶2或1∶3比例进行传代接种培养，继续培养，收集第2代细胞。

骨髓间充质干细胞的免疫表型：用间接免疫荧光法检测细胞的免疫表型。一抗为小鼠抗人的单克隆抗体CD11a，CD11b，CD14，CD29，CD31，CD34，CD44，CD45，CD105，CD106 和HLA-DR，CD138抗体检测残留浆细胞，二抗为FITC标记的羊抗鼠抗体。采用流式细胞仪免疫荧光分析。

骨髓间充质干细胞培养上清的制备：将骨髓间充质干细胞接种于含体积分数为10%胎牛血清的DMEM培养基中，待细胞80%-90%融合时，更换为无血清DMEM，培养48 h后取培养上清，并采用直径0.22 µm过滤器滤过，用于后续实验。

ELISA法测定血管生成因子水平：将骨髓间充质干细胞于37 ℃培养24 h后，4 ℃ 2 000 r/min离心5 min，收集上清-80 ℃冻存备用。用酶联免疫吸附实验(ELISA)测定上清中碱性成纤维细胞生长因子、血管内皮生长因子和肝细胞生长因子的浓度。

细胞活力及增殖实验：96孔培养板每孔接种5×10³个人脐静脉内皮细胞，培养24 h，待其贴壁后，以无血清培养基洗涤2次，再用含体积分数为1%胎牛血清的M199培养基继续培养12 h后开始进行实验处理。分别加入缓解期及活动期多发性骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞培养上清，以PBS作为对照，培养24 h后，每孔加入MTT至终浓度为500 mg/L，继续培养4 h，弃培养液，加入二甲基亚砜150 μL，振荡使结晶溶解后酶标仪读取A_{490 nm}值^[11]。

细胞迁移实验：取直径为6.5 mm，孔径为8 μm的聚碳酸盐膜分离上下两室的24孔Transwell(Invitrogen公司产品)，实验前在膜的下表面涂布10 g/L的明胶，超净工作台内风干备用。在下室内加入600 μL含不同浓度骨髓间充质干细胞培养上清液的DMEM，并以含体积分数为2%胎牛血清的DMEM培养液为阴性对照，用胰蛋白酶将人脐静脉内皮细胞消化，调整细胞浓度为5×10⁹ L^-¹，上室内添加1×10⁹ L^-¹的人脐静脉内皮细胞悬液100 μL，37 ℃、体积分数为5% CO₂培养6 h后甲醇固定，瑞特染色，用棉棒轻擦去膜上表面未迁移的细胞，显微镜(×200)下计数迁移到膜下表面的细胞数。每组设3个重复孔，每张膜计数10个视野^[12]。

骨髓间充质干细胞上清体外血管形成：将50 µL生长因子减少型的基质胶加入96孔板中，37 ℃度温育1 h使其凝固成胶，胰蛋白酶消化人脐静脉内皮细胞，用不同体积的多发性骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞上清的DMEM培养液调整人脐静脉内皮细胞浓度为5×10⁶ L^-¹，以2×10³/孔接种于基质胶上，37 ℃、体积分数为5%CO₂条件下培养20 h后显微镜观察血管样结构形成，倒置显微镜(×40)下观察摄像，软件程序分析(Photoshop；Adobe，San Jose，CA)。

骨髓间充质干细胞体外直接血管形成：取96孔培养板，每孔加入50 µL生长因子减少型的基质胶，37℃ 培养箱内温育1 h使其凝固成胶，将活动期及缓解期骨髓间充质干细胞以2×10³/孔接种于基质胶上，37 ℃ 、体积分数为5%CO₂条件下培养20 h后倒置显微镜(×40)下观察摄像，软件程序分析(Photoshop；Adobe，San Jose，CA)。

主要观察指标：①骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞在疾病不同阶段的免疫表型。②骨髓瘤活动期及缓解期骨髓间充质干细胞上清中血管内皮生长因子、肝细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子的浓度。③骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞上清液对脐静脉内皮细胞的增殖及迁移影响。④骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞上清对体外血管生成作用及自身成管能力。

统计学分析：所有实验重复3次，结果以x(_)±s表示。通过单因素方差分析(ANOVA)组间及组内骨髓间充质干细胞对血管生成能力有无差异，P < 0.05为差异有显著性意义。

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讨论

血管生成过程比较复杂，主要包括从已有血管发芽生成新血管或一些内皮细胞分化成新生血管^[14-15]。血管生成对肿瘤的生长、转化、转移、预后至关重要。恶性肿瘤需要血管源源不断的供给营养物质，进而维持生长、增殖，同时肿瘤细胞通过基底膜进入血液循环发生远处转移，也是实体瘤及恶性血液病病情进展、恶化的重要因素。异常血管生成是肿瘤的重要特征之一，尤其在血液病中尤为明显。

多发性骨髓瘤是起源于骨髓中浆细胞的恶性肿瘤，约占所有肿瘤的1%，恶性血液病发病中居第二位^[16]，主要是以骨髓中血管形成和广泛的溶骨性病变特征为主。多发性骨髓瘤是血液病中第一次将血管形成作为预后不良因素的疾病，前期研究发现多发性骨髓瘤患者微血管密度明显高于意义未明的单克隆丙种球蛋白病^[17]。骨髓瘤中血管的形成与血管生成因子密切相关，通过测定患者骨髓血管密度发现一些生成因子如血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子及其受体水平均增加^[18]。一项临床试验研究发现，多发性骨髓瘤活动期和未治疗组促血管生成因子均高于治疗后，治疗后缓解组高于疾病进展组，骨髓瘤微血管密度情况与以上符合，Ⅰ期较Ⅱ、Ⅲ期血管形成因子低^[19]。还有相关研究发现多发性骨髓瘤中生长刺激因子，如干细胞因子、血管内皮生长因子和白细胞介素6均高出正常对照组^[20]。

肿瘤血管形成是瘤细胞与肿瘤微环境相互作用的结果。首先浆细胞本身可以分泌多种细胞因子，研究发现多发性骨髓瘤中浆细胞可分泌大量的血管内皮生长因子，通过血管内皮生长因子2和血管内皮生长因子1受体分别刺激内皮细胞、基质细胞增殖、趋化，受刺激的基质细胞分泌白细胞介素6和血管内皮生长因子，使血管生成因子增加，骨髓血管形成增加^[21-23]。碱性成纤维细胞生长因子、干细胞生长因子在浆细胞过表达，患者血清中碱性成纤维细胞生长因子、干细胞生长因子比正常增加40%^[24]。肿瘤微环境中，主要包括克隆性浆细胞、细胞外基质蛋白、骨髓基质细胞等，他们相互之间的作用决定浆细胞的增殖、迁移、生存和耐药^[2]。

间充质干细胞是肿瘤微环境中重要的基质细胞之一，肿瘤细胞可以分泌细胞因子，将间充质干细胞募集到血管生成部位，进而促进血管的生成^[25]，而肿瘤微环境中的间充质干细胞也可通过直接或间接途径影响血管的生成，从而影响肿瘤的生长^[26]。目前的研究发现间充质干细胞对肿瘤具有促进和抑制双重作用^[4]，在实体瘤研究中表明间充质干细胞促进肿瘤的生长与间充质干细胞影响肿瘤中血管的生成关系密切^[27]。在多发性骨髓瘤患者中发现，患者与正常人的间充质干细胞相比，患者骨髓间充质干细胞组成细胞癌巢保护浆细胞，促进浆细胞的增生，并使其失去分化为成骨细胞的能力^[28-29]。多发性骨髓瘤中间充质干细胞具有特异性的基因表达谱，这些基因都倾向于编码生长、血管生成因子，患者骨髓间充质干细胞中白细胞介素6表达较正常升高2.5倍，同时造血能力，免疫抑制性方面与正常也有所不同^[30-31]。由此猜测，多发性骨髓瘤患者中骨髓间充质干细胞与正常人相比从多方面存在不同，并倾向于表达对浆细胞增殖的促进作用，其与瘤细胞环境中血管的形成具也存在关系。但是有研究中只是发现骨髓瘤不同分期中骨髓间充质干细胞都存在异常，并未分析疾病不同阶段的骨髓间充质干细胞表达因子有无区别。关于骨髓瘤中骨髓间充质干细胞和血管生成之间在多发性骨髓瘤不同状态中的关系目前尚无相关报道。本文对该方面进行了进一步的研究。

Sun等^[32]研究发现将骨髓来源的间充质干细胞注射到具有人类恶性肿瘤的严重免疫缺陷的小鼠尾静脉中，间充质干细胞能在肿瘤血管床位置分化为内皮细胞，证明了间充质干细胞参与血管的形成。课题组前期研究发现多发性骨髓瘤间充质干细胞培养介质中血管生成因子的水平明显高于正常对照组，能够促进人脐静脉内皮细胞的增殖、趋化和血管形成^[10]。本实验结果显示多发性骨髓瘤患者活动期骨髓间充质干细胞上清液中血管形成因子浓度较缓解期高。多发性骨髓瘤在疾病不同阶段具有不同的临床表现，疾病在活动期病情较重，生活质量差，其中骨髓中血管密度增加是至关重要的因素^[17]。骨髓瘤本身表达多种促血管生成因子，通过旁分泌作用于骨髓间充质干细胞，使其表达血管生成因子增加，形成正反馈，从而促使肿瘤微环境中新生血管的形成。作者进一步研究发现，骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞上清对脐静脉内皮细胞增殖作用呈剂量依赖性，活动期明显强于缓解期(P < 0.05)；骨髓瘤活动期患者骨髓间充质干细胞上清对脐静脉内皮细胞迁移作用明显高于缓解期(P < 0.05)。骨髓瘤活动期骨髓间充质干细胞表达高水平的血管生成因子，在体外作用于脐静脉内皮细胞使其增殖，促血管因子与脐静脉内皮细胞相应受体结合，使其增殖能力、迁移能力增强^[33-35]，同时还有研究发现，在缺氧的情况下将骨髓间充质干细胞和脐静脉内皮细胞共培养，骨髓间充质干细胞可分泌大量的因子促进脐静脉内皮细胞的增生，减少其凋亡^[36]。骨髓瘤在活动期缺氧环境比较严重，可促使骨髓间充质干细胞分泌比缓解期较多的血管生成因子作用于脐静脉内皮细胞。体外成管实验发现骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞上清具有明显成管作用，活动期明显强于缓解期(P < 0.05)；骨髓瘤中间充质干细胞直接成管能力活动期明显高于缓解期(P < 0.05)。大量文献报道人骨髓间充质干细胞在体内外均可向血管内皮细胞分化，镜下可观察到血管样结构的形成^[37-38]，也有研究发现，多种动物来源的间充质干细胞在特定的培养条件下也可分化为内皮细胞^[39-40]。本实验结果证明在多发性骨髓瘤活动期骨髓间充质干细胞上清液促血管生成能力和直接成管能力均较缓解期强。

但是骨髓间充质干细胞成血管的机制尚不十分清楚。目前的观点一方面认为，骨髓间充质干细胞通过分泌细胞因子促进内皮细胞增殖，参与血管形成：骨髓间充质干细胞能分泌多种促血管生成因子，包括血小板衍生生长因子、血管内皮生长因子、白细胞介素6、碱性成纤维细胞生长因子和血管生成素等^[41]；另一方面考虑骨髓间充质干细胞还可直接参与血管形成：研究发现骨髓间充质干细胞能分化为内皮细胞和血管平滑肌细胞^[33]。多发性骨髓瘤在活动期和缓解期具有不同的肿瘤微环境，骨髓间充质干细胞所产生的相关因子及本身变化可能存在不同，进而影响骨髓中血管生成，本研究体外实验提示多发性骨髓瘤骨髓间充质干细胞在活动期促血管生成能力明显大于缓解期，但这种变化与间充质干细胞本身有关，还是多发性骨髓瘤与骨髓间充质干细胞相互作用有关，尚需进一步进行实验研究。

骨髓间充质干细胞在多发性骨髓瘤活动与缓解期具有不同的促血管生成能力

Different pro-angiogenesis ability of bone marrow mesenchymal stem cells in multiple myeloma in active and remissive state

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