体外放散式冲击波促进脑梗死大鼠海马区神经干细胞增殖并抑制miR-124的表达

doi:10.12307/2021.140

中国组织工程研究 ›› 2021, Vol. 25 ›› Issue (31): 4981-4987.doi: 10.12307/2021.140

• 干细胞培养与分化 stem cell culture and differentiation • 上一篇下一篇

体外放散式冲击波促进脑梗死大鼠海马区神经干细胞增殖并抑制miR-124的表达

李杰，马跃文，康楠，张静，张瑜

中国医科大学附属第一医院康复医学科，辽宁省沈阳市 110001

收稿日期:2020-04-24 修回日期:2020-04-28 接受日期:2020-06-29 出版日期:2021-11-08 发布日期:2021-04-25
通讯作者: 马跃文，博士，教授，主任医师，中国医科大学附属第一医院康复医学科，辽宁省沈阳市 110001
作者简介:李杰，男，1995年生，河北省张家口市人，汉族，2020年中国医科大学毕业，硕士，主要从事神经康复方向研究。
基金资助:
辽宁省重点研发计划指导计划项目(2017225013)，项目负责人：马跃文；沈阳市科技计划项目(19-112-4-064)，项目负责人：马跃文

Radial extracorporeal shock wave therapy promotes the proliferation of neural stem cells in hippocampus of cerebral infarction rats and inhibits miR-124 expression

Li Jie, Ma Yuewen, Kang Nan, Zhang Jing, Zhang Yu

Department of Rehabilitation Medicine, the First Affiliated Hospital of China Medical University, Shenyang 110001, Liaoning Province, China

Received:2020-04-24 Revised:2020-04-28 Accepted:2020-06-29 Online:2021-11-08 Published:2021-04-25
Contact: Ma Yuewen, MD, Professor, Chief physician, Department of Rehabilitation Medicine, the First Affiliated Hospital of China Medical University, Shenyang 110001, Liaoning Province, China
About author:Li Jie, Master, Department of Rehabilitation Medicine, the First Affiliated Hospital of China Medical University, Shenyang 110001, Liaoning Province, China
Supported by:
the Liaoning Provincial Key R & D Program Guidance Project, No. 2017225013 (to MYW); Shenyang Science and Technology Plan Project, No. 19-112-4-064 (to MYW)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：

体外放散式冲击波疗法：该研究采用的气压弹道放散式冲击波是一种利用压缩空气使得射弹撞击治疗传导头的机械性脉冲波，在肌肉骨骼疾病中已广泛应用，近年来也发现其对多种干细胞增殖、分化具有促进作用。
大脑中动脉栓塞模型：线栓法用于制作局灶性脑缺血模型的实验研究，其基本原理是用线栓阻闭大脑中动脉起始部，造成大脑中动脉供血区缺血，从而使大鼠发生局灶性脑缺血。此方法的特点是稳定性好、重复性好、损伤小、梗死部位确切和成功率高。
背景：miR-124在神经干细胞的增殖中发挥重要作用，并且脑梗死后在脑组织及血液中的表达发生变化，提示其是脑梗死后内源性神经再生的核心调控因子之一。体外放散式冲击波可以促进神经干细胞增殖，但是否与miR-124有关目前尚不明确。
目的：探讨体外放散式冲击波对脑梗死后海马区miR-124表达的影响及其促进神经干细胞的增殖是否与miR-124有关。
方法：建立大鼠大脑中动脉栓塞模型，脑梗死大鼠随机分为体外放散式冲击波组与对照组。体外放散式冲击波组在脑梗死后72 h干预缺血侧头部，每3 d 干预1次，于造模成功后的11，20，29，38 d进行大鼠神经功能评分；采用RT-qPCR法检测脑梗死大鼠患侧海马miR-124与Nestin mRNA的表达；Western blot和免疫荧光技术检测患侧海马Nestin蛋白的表达。
结果与结论：①大鼠脑梗死后，患侧海马miR-124表达逐渐增加；②大脑中动脉栓塞后11，20，29，38 d，体外放散式冲击波组大鼠改良神经功能缺损评分均低于对照组(P < 0.05)，患侧海马Nestin表达均高于对照组(P < 0.05)；③大脑中动脉栓塞后11，20，29 d，体外放散式冲击波组脑梗死大鼠患侧海马miR-124表达低于对照组(P < 0.05)；④结果表明，脑梗死大鼠患侧海马miR-124表达增高，冲击波直接干预脑梗死大鼠患侧头部可降低miR-124表达，促进神经干细胞数目增多，改善受损神经功能。
https://orcid.org/0000-0003-4232-5957(马跃文)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

关键词: 干细胞, 神经干细胞, 体外放散式冲击波, miR-124, 微小RNA, 脑缺血, 脑梗死, 大脑中动脉栓塞, 大鼠

Abstract: BACKGROUND: miR-124 plays an important role in the proliferation of neural stem cells and changes in brain tissue and blood expression after cerebral infarction, suggesting that it is one of the core regulators of endogenous nerve regeneration after cerebral infarction. Radial extracorporeal shock wave therapy can promote neural stem cell proliferation, but whether it is related to miR-124 is currently unclear.
OBJECTIVE: To investigate the effect of radial extracorporeal shock wave therapy on the expression of miR-124 in the hippocampus after cerebral infarction and whether the promotion of neural stem cell proliferation is related to miR-124.
METHODS: A model of middle cerebral artery occlusion in rats was established. Rats were randomly divided into radial extracorporeal shock wave group and control group. The radial extracorporeal shock wave group was subjected to radial extracorporeal shock wave therapy intervention, with the ischemic head 72 hours after the cerebral infarction, once every 3 days. At 11, 20, 29, and 38 days after model establishment, modified neurological function scores were assessed in rats. Then RT-qPCR was used to detect the expressions of miR-124 and Nestin mRNA in the hippocampus of cerebral infarction rats. Western blot assay and immunofluorescence were used to detect the expression of Nestin protein in the hippocampus of the ischemic side.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) After cerebral infarction in rats, the expression of miR-124 gradually increased in the hippocampus of the ischemic side. (2) At 11, 20, 29, and 38 days after middle cerebral artery occlusion, the neurological scores of the rats were lower in the radial extracorporeal shock wave group than those in the control group (P < 0.05). The expression of Nestin was higher on the ischemic side of the hippocampus than that in the control group (P < 0.05). (3) At 11, 20 and 29 days after middle cerebral artery occlusion, the expression of miR-124 in hippocampus of cerebral infarction rats on the affected side in the radial extracorporeal shock wave group was lower than that of the control group (P < 0.05). (4) Results suggest that expression of miR-124 in the hippocampus of cerebral infarction rats is increased. Radial extracorporeal shock wave therapy directly interfering with the head of the affected side can reduce the expression of miR-124, increase the number of neural stem cells, and improve impaired nerve function.

Key words: stem cells, neural stem cells, radial extracorporeal shock wave therapy, miR-124, microRNAs, cerebral ischemia, cerebral infarction, middle cerebral artery occlusion, rats

中图分类号:

李杰, 马跃文, 康楠, 张静, 张瑜. 体外放散式冲击波促进脑梗死大鼠海马区神经干细胞增殖并抑制miR-124的表达[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(31): 4981-4987.

Li Jie, Ma Yuewen, Kang Nan, Zhang Jing, Zhang Yu. Radial extracorporeal shock wave therapy promotes the proliferation of neural stem cells in hippocampus of cerebral infarction rats and inhibits miR-124 expression[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2021, 25(31): 4981-4987.

图/表（结果） 6

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引言

脑卒中作为当今危害人类健康的主要原因之一，具有高致死率与高致残率，其中缺血性脑卒中的发病率约占全部脑卒中的70%[1-2]，目前主要的治疗方法有溶栓、取栓、抗凝治疗以及康复训练等[3-4]，但因溶栓、取栓的时间窗较短，康复训练所需时间较长且枯燥[5]，目前仍有大量患者遗留不同程度的功能障碍，给家庭和社会带来很大的负担。近年来，研究发现存在于大脑侧脑室下区与海马齿状回颗粒下层的神经干细胞[6-8]，在中枢神经系统受到某种损伤后(如缺血性脑卒中)开始增殖分化，迁徙到损伤区，参与修复损伤区的神经功能[9]，这可能是脑梗死后神经功能修复的重要途径[10-12]。但由于成熟的神经元细胞不能再增殖以及体内不利于神经再生的微环境等原因导致脑损伤后所诱导的神经发生能力有限，不足以完全修复受损神经功能[13-14]。如何增加内源性神经干细胞数目，改善受损神经功能，是目前治疗缺血性脑卒中的研究热点。
体外放散式冲击波是一种利用压缩空气使得射弹撞击传导头的机械性脉冲波[15]，现已广泛应用于肌肉骨骼系统疾病，如外伤后骨不连[16]、肌肉损伤[17]、钙化性肩关节炎[18]、腕管综合征[19]、慢性下腰痛等退化性疾病[20]，并取得令人满意的疗效。目前已发现冲击波可以促进多种干细胞增殖，合适剂量的冲击波作用于马脂肪间充质干细胞，显著提高了细胞增殖率，为对照组的1.5倍左右[21]；剂量为0.16 mJ/mm2，500个脉冲，1 Hz的冲击波干预股骨头缺血性坏死患者的骨髓间充质干细胞，也显著促进了干细胞的增殖[22]。在肥胖导致的大鼠糖尿病阴茎勃起障碍模型中，剂量为0.02 mJ/mm2，3 Hz，500 pulses的低剂量冲击波干预，可以促进阴茎内源性干细胞在大鼠海绵体中增殖和分化为功能细胞，进而修复功能[23]；在兔骨软骨缺损模型中，应用体外放散式冲击波也有效促进了兔膝关节软骨干细胞的再生，支架联合冲击波干预显著改善了软骨缺损状态[24]。体外放散式冲击波作为冲击波的新一代产品，具有能量更均匀、更加安全的特点，将体外放散式冲击波作用于神经干细胞，发现其可以促进神经干细胞的增殖[25]，而将其应用于脑梗死大鼠头部可以改善局部脑血流并促进神经功能缺损症状的恢复[26]，但其具体机制尚不明确。
miRNAs作为一种相对分子质量为20-25的非编码RNA，在特定条件下能够与靶基因的3'端配对相结合，并可成功启动转录抑制或者mRNA降解，从而调节细胞分化、增殖、凋亡和迁移等一系列生物学过程[27]。研究发现miRNAs参与了缺血性脑卒中的病理生理过程，在调控神经再生、神经保护等方面扮演重要角色[28]。miR-124作为大脑中特殊表达的miRNA，其脑内表达丰度较高[29]，并参与神经发生、发育等过程[30-33]。研究者在大鼠海马中检测到miR-124表达增加[34]，并抑制神经干细胞增殖[35]。当大脑发生缺血24 h后，miR-124在缺血半暗带表达增加[36-37]，并可以透过血脑屏障，在血液中表达增加[38]。此外也有研究发现运动疗法可通过降低miR-124表达来减轻创伤性脑损伤[39]；中药以及梓酚通过降低miR-124表达促进了脑梗死后的神经功能恢复等[40-41]。有研究者认为miR-124是脑梗死后内源性神经再生核心调控之一[42]。该实验初步探讨体外放散式冲击波对miR-124表达的影响，以及体外放散式冲击波促进脑梗死大鼠神经干细胞数目增加是否与miR-124有关，为体外放散式冲击波促进脑梗死后神经功能恢复提供一定的理论依据。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

材料方法

1.1 设计完全随机对照研究。
1.2 时间及地点实验于2018年5月至2020年2月在中国医科大学附属第一医院动物实验部、普外实验室、中心实验室等完成。
1.3 材料
1.3.1 实验动物与分组实验方案经中国医科大学动物实验伦理委员会批准(批准号：2020004)，实验动物均在麻醉下进行所有手术，并尽一切努力最大限度地减少其疼痛、痛苦和死亡。清洁级健康雄性SD大鼠137只(辽宁长生生物技术有限公司提供)，6-8周龄，体质量240-260 g，生产许可证为：SCXK(辽)2015-0001。实验动物分为2个部分：第一部分含57只大鼠，3只正常大鼠即正常组，30只对照组大鼠分别于大脑中动脉栓塞后1，3，5，7，9，11，13，15，20，29 d取材检测，24只体外放散式冲击波组大鼠分别于大脑中动脉栓塞后5，7，9，11，13，15，20，29 d取材检测，每个时间点3只大鼠；第二部分含80只大脑中动脉栓塞大鼠，随机分为对照组与体外放散式冲击波组(rESWT组)，于大脑中动脉栓塞后11，20，29，38 d进行检测，每组每个时间点10只大鼠。
1.3.2 实验试剂 Trizol(Invitrogen, Carlsbad, CA)；miRNA反转录试剂盒(TaKaRa Code No.638315 )；mRNA反转录试剂盒(TaKaRa Code No.RR047A)；扩增试剂盒(TaKaRa Code No.RR820)；PCR引物(生工生物工程(上海)股份有限公司)；Nestin 抗体(abcam，ab11306)；GAPDH 抗体(proteintech 60004-1-Ig)；3400型线栓(广州佳灵生物技术有限公司)；山羊抗小鼠二抗(中杉金桥ZDR-5307)；山羊抗小鼠cy3花青染料荧光素荧光二抗(赛维尔生物GB21301)。
1.4 实验方法
1.4.1 制作大脑中动脉栓塞模型术前动物禁食水，SD大鼠置于诱导盒中进行气体麻醉(氧气2 L/min+异氟烷4 L/min)。参照Zea Longa线栓法[43]，四肢及头部仰卧固定于消毒后固定板上，充分暴露颈部，备皮消毒，分离暴露并结扎右侧颈总动脉、颈外动脉，夹闭颈内动脉，在颈总动脉斜剪“V”形切口并插入线栓，此时在颈外动脉近游离端连同线栓一起结扎但不系紧(以免调整角度后继续插入困难)；调整角度和方向后继续将线栓插入颈内动脉(18.0±0.5) mm(至感觉有少许阻力)，2 h后拔出线栓至标记处造成缺血再灌注损伤。对大鼠进行Longa评分，评分标准：不能完全伸展对侧前爪(1分)；行走时向对侧转圈(2分)；站立或行走时向对侧倾倒(3分)；不能自发行走，意识丧失(4分)，评分为2分或3分大鼠纳入实验。

1.4.2 体外放散式冲击波治疗在前期实验中，于大脑中动脉栓塞后3 d开始，采用表面探头，剂量为0.1 MPa，10 Hz，200点的体外放散式冲击波(MASTERPULS MP100气体驱动弹道式冲击波，瑞士STORZ MEDICAL 公司)干预脑梗死大鼠缺血侧头部(具体位置是双耳连线与双眼连线，脑头部中线右侧，见图1)，每3 d治疗1次，未出现颅内出血和神经功能改变等不良反应[26]。因此该实验继续应用此剂量对体外放散式冲击波组脑梗死大鼠进行干预，在患侧头部涂抹耦合剂，冲击波接触干预[26]。对照组则进行假刺激治疗，即大鼠头部涂抹耦合剂后，冲击波探头不直接接触大鼠患侧头部的相同剂量治疗。5 d组进行1次治疗，7 d组进行2次治疗，9 d组进行3次治疗，11 d组治疗3次治疗，13 d组进行4次治疗，15 d组进行5次治疗，20 d组进行6次治疗，29 d组进行9次治疗，38 d组进行12次治疗。

1.4.3 大鼠神经功能评分及取材处理治疗结束后，每组每个时间点10只大鼠，分别在大脑中动脉栓塞模型成功后的11，20，29，38 d进行改良神经功能缺损评分，评分人员对所评大鼠组别及时间未知。评分结束后，采用气体深度麻醉进行取材。每组每个时间点取5只大鼠经左心室依次灌注生理盐水和40 g/L多聚甲醛溶液，随后迅速断头取脑，经过灌流固定的脑组织浸泡于40 g/L多聚甲醛溶液中，24 h后常规梯度乙醇脱水、二甲苯透明、石蜡包埋，做连续冠状脑切片，切片厚5 μm。余下大鼠分离缺血侧海马组织，-80 ℃保存，以备提取蛋白和RNA。

1.4.4 荧光定量PCR检测miR-124以及Nestin mRNA表达 Trizol法提取总RNA，miRNA加尾法，mRNA按说明书反转录。反应体系包括 Green taqⅡ10 μL、上游引物(10 μmol)、下游引物(10 μmol)各0.8 μL，Roxfence DyeⅡ(5x)0.4 μL、RNA模板2 μL、无核酸酶水 6 μL，反应条件按照TaKaRa说明书进行。采用2-ΔΔCt法计算相对表达量。引物序列见表1(miR下游通用引物及U6引物由反转录试剂盒提供，大鼠源内参GAPDH购买自生工生物工程(上海)股份有限公司)。

1.4.6 免疫荧光检测Nestin表达 ①切片烤片2 h后，进行脱蜡，二甲苯Ⅰ、Ⅱ各15 min，体积分数为100%乙醇Ⅰ、Ⅱ各10 min，体积分数为95%，85%，75%乙醇依次5 min，PBS清洗3次，每次5 min；②切片浸入0.1 mol/L，pH=6.0的枸橼酸钠抗原修复液中高温高压修复10 min，切片于容器中自来水冲至室温，然后用PBS洗去切片表面的抗原修复液，晾干，置于免疫荧光湿盒中，免疫组化笔画圈；③滴加体积分数为10%正常山羊血清于37 ℃封闭30 min或室温下封闭60 min，以封闭液能覆盖整张切片为标准；④吸去多余的封闭液，滴加一抗鼠抗Nestin (1∶200)，4 ℃冰箱过夜；⑤室温下复温1 h后PBST漂洗3次，每次5 min，晾干，避光滴加荧光二抗山羊抗小鼠cy3花青染料荧光素(1∶200)，室温下避光孵育1 h；⑥PBST漂洗3次，每次5 min，晾干；⑦滴加即用型4'，6-二脒基-2-苯基吲哚(4'6-diamidino-2-pheny-lindole，DAPI)复染细胞核，避光室温下孵育5 min，PBST漂洗3次，每次5 min；⑧滴加抗荧光淬灭封固剂封固；⑨阴性对照采用PBS代替一抗，余步骤不变；⑩拍照保存，切片-20 ℃避光保存。
1.5 主要观察指标改良大鼠神经功能缺损评分以及海马组织Nestin、miR-124的表达。
1.6 统计学分析所得数据均以x±s表示，应用SPSS 25.0软件进行统计学处理，统计前进行正态分布检验和方差齐性检验，两组间则采用独立样本t 检验或Mann-Whitney U检验，检验水准α=0.05，P < 0.05为差异有显著性意义。

讨论

冲击波作为一种非侵入式的物理因子治疗，包括聚焦式冲击波和体外放散式冲击波2种，二者在生成技术、物理特性及作用深度上存在区别。聚焦式冲击波利用液电、电磁或压电原理与特定形状的反射器，将声脉冲转换成聚焦的冲击波，在病理组织内的期望目标处形成最高压力点。体外放散式冲击波则是利用射弹击中引导管，并击中放置在接触处的金属喷头，首先在施加器中产生应力波，再将应力波转化为压力波传输到组织中，在接触表面达到最大压力。相对于聚焦式冲击波，体外放散式冲击波能量均匀，能量最强部位在接触表面，更为安全[16]，且传导头丰富，可应用不同的传导头以满足临床需求。近年来冲击波应用范围的不断拓展并应用于以往被视为“禁忌”的头部，LOHSE-BUSCH等[44]将冲击波安全应用于患者头部进行促醒；CHAI等[45]使用冲击波作用于脑梗死大鼠头部，应用后未对大鼠脑部造成损伤，表明冲击波在特定剂量下应用于头部是安全的。作者前期研究发现，体外放散式冲击波在一定剂量下应用于脑梗死大鼠头部是安全的，干预后脑梗死大鼠未出现脑部出血或神经功能异常等不良反应，且促进了脑梗死后神经功能恢复[26]。因此该实验仍选用该剂量的体外放散式冲击波干预脑梗死大鼠，并对其与miR-124的可能相关机制进行初步探讨。
miR-124作为内源性调节因子，在多种细胞增殖中起调节作用。研究发现miR-124可以抑制胶质瘤干细胞[46]、小鼠间充质细胞[47]、前列腺细胞[48]、血管平滑肌细胞等增殖[49]，并发现在部分组织缺血后miR-124表达增加。DING等[50]研究发现在心脏缺血后缺血区miR-124 表达增加，并加重了缺血再灌注损伤。GACOŃ等[51-52]发现在急性冠状动脉综合征相关梗死血管闭塞患者血液中miR-124表达增高。不仅如此，在大鼠大脑中动脉栓塞模型中，造模成功后24 h缺血半暗区miR-124表达增加[36-37]，但有趣的是，有一些实验与该研究的结果相反，比如LIU等[53]发现在缺血侧侧脑室下区神经祖细胞中的表达明显低于对侧，CHE等[54]发现在脑梗死后24 h脑梗死区域内miR-124表达降低。在缺血和非缺血条件下，miR-124对神经祖细胞作用不同，缺血时抑制了神经球的形成，非缺血时则促进了神经分化与成熟[55]，由此作者推论脑梗死后检测区域与时间点不同，miR-124的表达也不同。海马作为脑内神经干细胞主要存在场所之一，已有研究在海马区检测到了miR-124表达变化以及神经干细胞的增殖分化[34]，但之前的实验只进行了短时间内的研究，并没有探讨缺血侧海马miR-124的长期表达情况。该实验选择脑梗死大鼠患侧海马作为检测区域，探讨脑梗死后miR-124的表达变化，研究结果显示脑梗死后24 h海马区miR-124表达开始增加，直至29 d，提示miR-124在脑梗死神经功能恢复中可能起着重要的作用。结合miR-124对其他细胞和脑室下区神经祖细胞增殖的抑制作用以及其他研究发现miR-124可以促进神经干细胞分化[54]，并在神经分化过程中表达增加[56-57]，作者推测脑梗死海马区miR-124的表达升高可能抑制了神经干细胞的增殖，促进了分化，而在20-29 d表达迅速上升，可能是由于脑梗死后三四周时神经干细胞大量向神经元分化所致，这也与余剑等[58]发现大鼠脑梗死后4周神经分化达到高峰相一致。此外发现冲击波作用后降低了脑梗死海马区miR-124的表达，并且选取大脑中动脉栓塞后11，20，29，38 d与对照组相比，其中11，20，29 d差异有显著性意义，因此作者推测体外放散式冲击波可能通过改变miR-124表达发挥作用。伴随着miR-124的降低，Nestin的表达同步增高(P < 0.05)。
Nestin蛋白是一种巢蛋白，是未分化多能神经干细胞的抗原标志，在多能神经干细胞中表达[59]，Nestin的表达同步增高提示冲击波作用于大鼠头部可以促进脑梗死后海马区神经干细胞数量的增加，这也与前期ZHANG等[25]、KANG等[26]研究发现体外放散式冲击波可以促进体外神经干细胞与脑梗死大鼠缺血侧大脑神经干细胞增殖相一致。结合miR-124对神经干细胞的作用，作者推测miR-124可能抑制脑梗死后神经干细胞的增殖，而体外放散式冲击波可以降低miR-124的表达，从而促进了神经干细胞数目的增多。与此同时，脑梗死大鼠的神经功能恢复情况与神经干细胞数目的增多也呈现相关性[60]，体外放散式冲击波改善了脑梗死大鼠的神经功能缺损状态，降低了大鼠神经功能缺损评分。
大鼠神经功能缺损评分反映大鼠神经功能的改善，评分越低，说明神经功能越好。从时间上看，伴随大脑中动脉栓塞后疾病进程，对照组大鼠改良神经功能缺损评分也有一定降低，这提示对照组脑梗死大鼠神经功能也有一定的恢复，这是因为脑缺血也会激活脑内部分静止的神经干细胞，从而进行增殖分化迁移并替代受损神经元[61]，且可以分泌神经营养因子以减少神经死亡[62]，修复受损神经功能，但其修复能力有限。因此，对照组脑梗死大鼠神经功能仍有一定恢复，但恢复程度低于体外放散式冲击波组。体外放散式冲击波直接干预大鼠患侧头部有效降低改良神经功能缺损评分(P < 0.05)，与对照组相比均具有明显差异，提示体外放散式冲击波可迅速促进梗死功能恢复。结合冲击波对神经干细胞的增殖作用，可能是因为冲击波有效增加了脑梗死后神经干细胞的数量，更好地促进了神经功能的修复[63]。
该研究首次将体外放散式冲击波和miR-124联系在一起，检测了冲击波干预后患侧海马miR-124与Nestin的表达变化，初步探讨了冲击波促进神经干细胞数目增加可能与miR-124有关。不足的是未对miR-124具体通过什么途径促进神经干细胞数目的增加做进一步的研究和验证实验。
综上，体外放散式冲击波可明显促进海马区神经干细胞数量增多，改善脑梗死后神经功能，其机制可能与下调miR-124的表达有关。该研究为体外放散式冲击波治疗脑梗死提供一定的理论依据，并为脑梗死后促进神经干细胞增殖提供新的靶点。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

体外放散式冲击波促进脑梗死大鼠海马区神经干细胞增殖并抑制miR-124的表达

Radial extracorporeal shock wave therapy promotes the proliferation of neural stem cells in hippocampus of cerebral infarction rats and inhibits miR-124 expression

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