六味地黄丸对椎间盘体外退变模型椎间盘细胞外基质组分的影响

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2017.16.007

中国组织工程研究 ›› 2017, Vol. 21 ›› Issue (16): 2495-2501.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2017.16.007

• 软骨组织构建 cartilage tissue construction • 上一篇下一篇

六味地黄丸对椎间盘体外退变模型椎间盘细胞外基质组分的影响

徐无忌¹，杨康²，刘思华³

¹湖南中医药大学第二附属医院脊柱科，湖南省长沙市 410005；²岳阳市中医院骨伤科，湖南省岳阳市 414000；³桃江县人民医院骨二科，湖南省桃江县 413400

修回日期:2017-01-06 出版日期:2017-06-08 发布日期:2017-07-06
作者简介:徐无忌，男，1978年生，湖南省祁东县人，土家族，2008年广州中医药大学毕业，博士，副主任医师，讲师，主要从事脊柱疾患中医药防治研究。
基金资助:
国家自然青年科学基金课题(81302993)；湖南中医药科技计划重点项目(201317)

Effect of Liuwei Dihuang Pills on the extracellular matrix components of intervertebral disc degeneration models in vitro

Xu Wu-ji¹, Yang Kang², Liu Si-hua³

¹Department of Spine Surgery, the Second Affiliated Hospital of Hunan University of Chinese Medicine, Changsha 410005, Hunan Province, China; ²Department of Traumatology and Orthopaedics, Yueyang Hospital of Traditional Chinese Medicine, Yueyang 414000, Hunan Province, China; ³Second Department of Orthopaedics, Taojiang People’s Hospital, Taojiang 413400, Hunan Province, China

Revised:2017-01-06 Online:2017-06-08 Published:2017-07-06
About author:Xu Wu-ji, M.D., Associate chief physician, Lecturer, Department of Spine Surgery, the Second Affiliated Hospital of Hunan University of Chinese Medicine, Changsha 410005, Hunan Province, China
Supported by:
the National Natural Science Foundation for the Youth of China, No. 81302993; the Key Science and Technology Program for Traditional Chinese Medicine in Hunan Province, No. 201317

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：
肿瘤坏死因子α：肿瘤坏死因子有几十种之多，肿瘤坏死因子α是肿瘤坏死因子家族中发现最早研究较多的一种。它由单核细胞和巨噬细胞产生，不仅具有选择性杀伤某些肿瘤细胞的功能，而且有多种免疫调节作用，尤其是参与炎症反应。目前许多研究结果显示，椎间盘退变时椎间盘组织中肿瘤坏死因子α表达增多，且向兔椎间盘内注射外源性肿瘤坏死因子α时可加速影响蛋白聚糖含量的变化而导致椎间盘退变。

摘要
背景：六味地黄丸作为补益肝肾名方，临床应用其治疗腰痛已取得良好的效果，而有关六味地黄丸治疗肾虚型腰痛的作用机制尚不明确。
目的：观察六味地黄丸对兔椎间盘体外退变模型细胞外基质组分的影响，探讨六味地黄丸防治椎间盘退变的疗效。
方法：将20只新西兰兔带终板的L1-L6椎间盘100个随机分为空白对照组、肿瘤坏死因子α组、p38-JNK/SAPK阻断组、六味地黄丸组、肿瘤坏死因子α+六味地黄丸组，每组20个。肿瘤坏死因子α组培养液中含10 mg/L 肿瘤坏死因子α 2 μL，p38-JNK/SAPK阻断组培养液中含p38MAPK特异性阻断剂SB203580，JNK特异性阻断剂SP600125各20 μmol/L 10 μL，六味地黄丸组培养液中含体积分数为10%六味地黄丸血清，肿瘤坏死因子α+六味地黄丸组含10 mg/L 肿瘤坏死因子α 2 μL和体积分数为10%六味地黄丸血清，分别于培养的第2，4，8，14天收集标本待测。
结果与结论：在培养基中加入肿瘤坏死因子α能明显上调Ⅰ型胶原mRNA和蛋白的表达，下调糖胺多糖含量、硫酸软骨素/硫酸角质素比值、透明质酸含量，蛋白多糖mRNA和蛋白的表达、Ⅱ型胶原mRNA和蛋白的表达(P < 0.05)，六味地黄丸含药血清可部分对抗肿瘤坏死因子α所导致的改变，提示六味地黄丸可在一定程度上延缓了椎间盘退变。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程
ORCID: 0000-0001-9509-6874(徐无忌)

关键词: 组织构建, 组织工程, 六味地黄丸, 椎间盘退变, 细胞外基质, 蛋白多糖, 糖胺多糖, 硫酸软骨素, 硫酸角质素, 透明质酸, Ⅰ型胶原, Ⅱ型胶原, 国家自然科学基金

Abstract:

BACKGROUND: Liuwei Dihuang Pills (LWPs), a famous Chinese prescription for replenishing the liver and kidney, have achieved good effect in the treatment of backache. However, the mechanism underlying LWPs treating backache with kidney deficiency is unclear.
OBJECTIVE: To observe the effect of LWPs on extracellular matrix components of rabbit intervertebral disc degeneration models in vitro, and to explore the effect of LWPs in the prevention and treatment of intervertebral disc degeneration.
METHODS: Totally 100 L1-6 intervertebral discs with endplate removed from 20 New Zealand rabbits were randomly divided into control, tumor necrosis factor α (TNF-α), p38-JNK/SAPK blocked, LWPs, and combination groups (n=20 per group). 2 μL of 10 mg/L TNF-α, 10 μL of 20 μmol/L SB203580 (specific inhibitor of p38MAPK) and SP600125 (inhibitor of JNK), 10% LWPs serum, 10% LWPs combined with 2 μL of 10 mg/L TNF-α were added into the medium of the corresponding group. Samples were collected at 2, 4, 6 and 14 days of culture.
RESULTS AND CONCLUSION: The addition of TNF-α significantly upregulated the mRNA and protein expression levels of collagen type I, while significantly downregulated the levels of glycosaminoglycan and hyaluronic acid, chondroitin sulfate/keratan sulfate ratio, as well as the protein and mRNA expression levels of proteoglycan and collagen type II (P < 0.05). LWPs could partly reverse the changes caused by TNF-α, indicating that LWPs can alleviate intervertebral disc degeneration to a certain extent.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

Key words: Intervertebral Disk Degeneration, Tumor Necrosis Factor-alpha, JNK Mitogen-Activated Protein Kinases, p38 Mitogen-Activated Protein Kinases, Drugs, Chinese Herbal, Tissue Engineering

中图分类号:

R318

徐无忌，杨康，刘思华. 六味地黄丸对椎间盘体外退变模型椎间盘细胞外基质组分的影响[J]. 中国组织工程研究, 2017, 21(16): 2495-2501.

Xu Wu-ji, Yang Kang, Liu Si-hua. Effect of Liuwei Dihuang Pills on the extracellular matrix components of intervertebral disc degeneration models in vitro[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2017, 21(16): 2495-2501.

图/表（结果） 3

参考文献

[1] O'Connell GD, Leach JK, Klineberg EO. Tissue Engineering a Biological Repair Strategy for Lumbar Disc Herniation. Biores Open Access. 2015;4(1):431-445.

[2] Dagenais S, Caro J, Haldeman S. A systematic review of low back pain cost of illness studies in the United States and internationally. Spine J. 2008;8(1):8-20.

[3] Asche CV, Kirkness CS, McAdam-Marx C, et al. The societal costs of low back pain: data published between 2001 and 2007. J Pain Palliat Care Pharmacother. 2007;21(4):25-33.

[4] Haschtmann D, Stoyanov JV, Ettinger L, et al. Establishment of a novel intervertebral disc/endplate culture model: analysis of an ex vivo in vitro whole-organ rabbit culture system. Spine (Phila Pa 1976). 2006;31(25):2918-2925.

[5] 贺石林,王键,王净净.中医科研设计与统计学[M]. 长沙:湖南科学技术出版社,2008:49-50.

[6] Baillet A, Grange L, Trocmé C, et al. Differences in MMPs and TIMP-1 expression between intervertebral disc and disc herniation. Joint Bone Spine. 2013;80(3):341-342.

[7] 陶帅,姜宏,李晓春,等.基质金属蛋白酶与腰椎间盘退变的研究进展[J].颈腰痛杂志,2013,34(2):162-164.

[8] 关圆,倪家骧.椎间盘源性腰痛的细胞病理学研究进展[J].中国康复医学杂志,2012,27(7):683-686.

[9] 夏根,付斌,尚雁冰,等.Cathepsin G对人腰椎间盘退变的研究[J].宁夏医学杂志,2016,38(3):241-243.

[10] Benz K, Stippich C, Fischer L, et al. Intervertebral disc cell- and hydrogel-supported and spontaneous intervertebral disc repair in nucleotomized sheep. Eur Spine J. 2012;21(9):1758-1768.

[11] Lotz JC, Hadi T, Bratton C, et al. Anulus fibrosus tension inhibits degenerative structural changes in lamellar collagen. Eur Spine J. 2008;17(9):1149-1159.

[12] 胡明,张传森.退变椎间盘细胞外基质的改变[J].局解手术学杂志, 2004,13(1):55-57.

[13] 林建平,陈少清,林先钊,等.“三步五法”对椎间盘胞外基质系统的调控作用[J].中华中医药杂志,2015,30(11):4087-4090.

[14] Vonk LA, Kroeze RJ, Doulabi BZ, et al. Caprine articular, meniscus and intervertebral disc cartilage: an integral analysis of collagen network and chondrocytes.Matrix Biol. 2010;29(3):209-218.

[15] Ahsan R, Tajima N, Chosa E, et al. Biochemical and morphological changes in herniated human intervertebral disc. J Orthop Sci. 2001;6(6):510-518.

[16] Smith LJ, Martin JT, Szczesny SE, et al. Altered lumbar spine structure, biochemistry, and biomechanical properties in a canine model of mucopolysaccharidosis type VII.J Orthop Res. 2010;28(5):616-622.

[17] Kobayashi S, Baba H, Takeno K, et al. Fine structure of cartilage canal and vascular buds in the rabbit vertebral endplate. Laboratory investigation. J Neurosurg Spine. 2008;9(1):96-103.

[18] Urano T, Narusawa K, Shiraki M, et al. Single-nucleotide polymorphism in the hyaluronan and proteoglycan link protein 1 (HAPLN1) gene is associated with spinal osteophyte formation and disc degeneration in Japanese women. Eur Spine J. 2011;20(4):572-577.

[19] 陈伯华,郑洪军,吕振华,等.颈椎间盘蛋白多糖聚合体的分布及其意义[J].青岛大学医学院学报,2007,43(2):95-99.

[20] Boden SD, Kang J, Sandhu H, et al. Use of recombinant human bone morphogenetic protein-2 to achieve posterolateral lumbar spine fusion in humans: a prospective, randomized clinical pilot trial: 2002 Volvo Award in clinical studies.Spine (Phila Pa 1976). 2002;27(23):2662-2673.

[21] Kleeman TJ, Ahn UM, Talbot-Kleeman A. Laparoscopic anterior lumbar interbody fusion with rhBMP-2: a prospective study of clinical and radiographic outcomes. Spine (Phila Pa 1976). 2001;26(24):2751-2756.

[22] Chuang SY, Popovich JM Jr, Lin LC, et al. The effects of exogenous crosslinking on hydration and fluid flow in the intervertebral disc subjected to compressive creep loading and unloading. Spine (Phila Pa 1976). 2010;35(24): E1362-1366.

[23] Smith LJ, Nerurkar NL, Choi KS, et al. Degeneration and regeneration of the intervertebral disc: lessons from development. Dis Model Mech. 2011;4(1):31-41.

[24] Shinmei M, Kikuchi T, Yamagishi M, et al. The role of interleukin-1 on proteoglycan metabolism of rabbit annulus fibrosus cells cultured in vitro. Spine (Phila Pa 1976). 1988; 13(11):1284-1290.

[25] Yang SH, Wu CC, Shih TT, et al. Three-dimensional culture of human nucleus pulposus cells in fibrin clot: comparisons on cellular proliferation and matrix synthesis with cells in alginate. Artif Organs. 2008;32(1):70-73.

[26] Le Maitre CL, Hoyland JA, Freemont AJ. Studies of human intervertebral disc cell function in a constrained in vitro tissue culture system. Spine (Phila Pa 1976). 2004;29(11): 1187-1195.

[27] Chiba K, Andersson GB, Masuda K, et al. A new culture system to study the metabolism of the intervertebral disc in vitro. Spine (Phila Pa 1976). 1998;23(17):1821-1827.

[28] Haschtmann D, Stoyanov JV, Ettinger L, et al. Establishment of a novel intervertebral disc/endplate culture model: analysis of an ex vivo in vitro whole-organ rabbit culture system. Spine (Phila Pa 1976). 2006;31(25):2918-2925.

[29] 梁倩倩,梁茂新,王拥军,等.古今中医药治疗腰椎间盘突出症的比较研究[J].中国中医骨伤科杂志,2007,15(2):68-71.

[30] 翟献斌.补肾活血方延缓腰椎间盘退变的实验研究[J].中医正骨, 2009,21(5):18-22.

引言

材料方法

1.1 设计 随机分组、对比观察。

1.2 时间及地点 动物饲养及灌胃于2015年11月在湖南中医药大学实验动物中心完成，实验取材、培养及检测于2015年11月至2016年3月在长沙市维尔生物科技有限公司完成。

1.3 材料

1.3.1 实验动物 6月龄清洁级新西兰兔25只，雌雄不拘，体质量2.0-3.2 kg，其中5只兔给予六味地黄丸灌胃1周，以制作六味地黄丸含药血清制剂。

1.3.2 实验用药 六味地黄丸(浓缩丸)(国药准字号Z19993069)购自陕西盘龙药业集团股份有限公司，其主要成分为熟地黄、泽泻、茯苓、丹皮、山药、山萸肉。p38MAPK特异性阻断剂SB203580，JNK特异性阻断剂SP600125、肿瘤坏死因子α(上海沪峰生物科技公司)。

1.3.3 实验试剂和仪器 反转录试剂盒(北京康为世纪)；引物(南京金斯瑞)；台式冷冻离心机(德国eppendorf)；恒温水浴箱(河南金博)；荧光定量RCP仪(美国Thermo)。

1.4 实验方法

1.4.1 含药血清制备 以六味地黄丸悬液灌胃，按人和动物体表面积比计算动物等效给药量给药(75 mg) ^[4]，空白对照组灌以等量生理盐水。2次/d，共7 d，自然喂养，标准饲养环境。在最后一次灌胃4 h后，经胸部正中入路直达心脏，采取主动脉血液后离心、过滤、灭活后备用。

1.4.2 建立整体椎间盘体外培养体系 参照Haschtmann方法^[5]建立整体椎间盘体外培养体系。空气栓塞法处死20只未灌胃的新西兰兔，无菌条件下采用后正中入路或经腹腔前入路取出带终板的L₁-L₆椎间盘100个，随机分成5组：空白对照组、肿瘤坏死因子α组、p38-JNK/SAPK阻断组，六味地黄丸血清组、肿瘤坏死因子α+六味地黄丸血清组，每组20个。去除终板软骨上附着的其他组织，再用生理盐水溶液、聚烯吡酮磺溶液以及含55 mmol/L柠檬酸钠、50 mg/L庆大霉素的Hank’s液连续漂洗。椎间盘样本置于6孔板中，放在转速为10 r/h的转鼓上，用含体积分数为5%胎牛血清、50 mg/L 庆大霉素、20 mmol/L柠檬酸钠的DMEM/F12培养基进行培养，置于37 ℃、体积分数为5%CO₂、100%相对湿度温箱中过夜。将过夜后标本接种于6孔板，加入8 mL含体积分数为10%胎牛血清、50 mg/L庆大霉素、25 mg/L维生素C的DMEM/F12培养基，置于37 ℃、体积分数为5%CO₂、100%相对湿度温箱中培养，每2 d换液1次。肿瘤坏死因子α组培养液中含10 mg/L肿瘤坏死因子α 2 μL；p38-JNK阻断组培养液中含p38MAPK特异性阻断剂SB203580，JNK特异性阻断剂SP600125各 20 μmol/L 10 μL，10 mg/L肿瘤坏死因子α 2 μL，六味地黄丸血清组培养液中含体积分数为10%六味地黄丸血清；肿瘤坏死因子α+六味地黄丸血清组含10 mg/L 肿瘤坏死因子α 2 μL，体积分数为10%六味地黄丸血清。分别于培养的第2，4，8，14天收集标本待测。

1.4.3 RT-PCR检测蛋白多糖、Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原的mRNA含量 将保存在液氮中的椎间盘组织锤碎放入研钵中，倒入液氮磨成粉末，取半勺粉末放入已加入1 mL Trizol的无菌无酶的离心管中，混匀后室温裂解，配制成RNA溶液，取2 mL置于石英比色杯中，紫外分光光度计测定浓度和纯度。制作RNA的琼脂糖凝胶并进行电泳，凝胶成像系统下观察。以组织总mRNA为模板，反转录cDNA。按照PCR反应试剂盒说明书要求操作，以cDNA为模板进行PCR反应，引物序列见表1。

引物设计：在NCBI上搜索目的基因的序列，运用primer5软件设计引物，由南京金斯瑞合成引物。

1.4.4 Western blot检测蛋白多糖、Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原蛋白的表达 取出保存在液氮中的椎间盘组织并锤碎，磨成粉末，取0.01 g组织粉末溶于300 μL RIPA裂解液并制作成样品，参照BCA蛋白定量试剂盒步骤测定蛋白浓度，灌胶后进行电泳，待溴酚蓝电泳至胶底部时终止电泳，分别切胶并转膜，将膜封闭，进行一抗、二抗孵育后，ECL显色曝光。

1.4.5 酶联免疫法检测椎间盘终板糖胺多糖(glycosaminoglycan，GAG)总量、硫酸软骨素(chondroitin sulfate，CS)和硫酸角质素(keratan sulfate，KS)比值 标准品按一定浓度差稀释后，设置空白组和待测样品组分别加样于酶标板孔底部，封板膜封板后温育，用稀释30倍的洗涤液洗涤酶标板孔并重复5次；每孔加入酶标试剂50 μL，空白组除外，再次按之前步骤温育及洗涤后，避光下加显色剂显色；加终止液终止反应，15 min内依次测定各孔的吸光度值，将吸光度值带入方程式计算出样品浓度，再根据稀释倍数算出实际浓度。

1.4.6 放射免疫法检测透明质酸含量 将椎间盘标本磨成粉末，加入PBS反复冻融，12 000 r/min离心10 min取上清，用物理方法提取蛋白。在酶标包被板上设空白孔、待测样品孔，标准品孔按一定浓度梯度依次稀释，在待测样品孔中依次加样品稀释液及待测样品，摇匀，封板并温育。用稀释20倍的稀释液洗涤酶标板孔并重复5次，将酶标试剂50 μL加入待测样品孔。温育，洗涤，每孔中依次加入显色剂A 50 μL和B 50 μL并将之摇匀，避光显色，加终止液50 μL于每孔，待蓝色立转黄色即终止反应，15 min内依序测量各孔的吸光度值。

1.5 主要观察指标 ①酶联免疫法测定椎间盘终板糖胺多糖总量、硫酸软骨素和硫酸角质素比值；②放射免疫法测定透明质酸含量；③RT-PCR和Western Blot检测蛋白多糖、Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原mRNA和蛋白的表达。

1.6 统计学分析 实验数据以x(_)±s表示，采用SPSS21.0统计学软件进行分析，满足正态性和方差齐性，用单因素方差分析(ANOVA)，组间两两比较采用LSD检验；不满足正态性和方差齐性，采用秩和检验；检验水准取α=0.05，P < 0.05为差异有显著性意义。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

讨论

椎间盘内含有大量的细胞外基质，椎间盘的形态及功能正常都需依赖于细胞外基质的动态平衡^[6-7]。椎间盘退变导致椎间盘软骨终板、髓核以及纤维环变性，椎间盘细胞外基质破坏增加，基质合成发生改变^[8-9]。胶原蛋白是椎间盘的主要成分，在髓核中胶原占其干质量的20%，纤维环中胶原蛋白约占其干质量的60%^[10]，椎间盘中胶原蛋白种类繁多，包括Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅸ、Ⅹ及Ⅺ型胶原，髓核中以Ⅱ型胶原为主，纤维环中以Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原为主，软骨终板中以Ⅱ型胶原为主，其中Ⅰ型和Ⅱ型胶原约占椎间盘胶原的80%左右^[11-12]。Ⅰ型胶原因其纤维较粗且溶解度小，排列整齐致密，使得纤维环具有良好的张力和抗剪能力，有组织修复功能代偿作用，是椎间盘承受压应力的主要功能胶原；Ⅱ型胶原与具有吸水特性的黏多糖蛋白结合共同维护髓核的容积和性质稳定，使髓核具有维持水分、吸收振荡及抗压形变能力^[13]。研究发现退变椎间盘中髓核胶原的变化最为明显，髓核细胞内出现Ⅰ型胶原阳性杂交信号，且Ⅱ型胶原mRNA表达明显减弱^[14]，整个椎间盘的Ⅰ型胶原持续上升，Ⅱ型胶原持续下降，髓核中

Ⅱ型胶原的含量减少并出现Ⅰ型胶原，这一总的含量变化趋势与椎间盘退变程度呈正相关^[15]。纤维环及髓核内胶原含量的变化，使得椎间盘组织水分丢失、硬度增加，抗压形变能力减弱，最终纤维环破裂、变性而使得髓核脱出。

蛋白多糖是由核心蛋白与糖胺多糖链结合形成的生物大分子，在维持椎间盘的正常代谢、生物结构及应力的均匀分布等方面具有重要作用^[16]。糖胺多糖分子结构主要由透明质酸、硫酸软骨素以及硫酸角质素等组成。蛋白多糖与透明质酸结合形成聚合体，是细胞外基质的重要组成成分。硫酸软骨素比硫酸角质素多含一个带负电荷的硫酸基，故硫酸软骨素比硫酸角质素能吸附更多的水分。一定总量的蛋白多糖和硫酸软骨素/硫酸角质素比值维持了椎间盘内的固定电荷密度、离子浓度及高渗透压等，并控制带电溶质在组织内的转运和分布，这一独特特性能够使椎间盘保持黏弹性、吸收震荡及流体动力学的生物特征^[17-18]。椎间盘中蛋白多糖的含量随着年龄的变化及部位的不同会有一定差异，首先表现在聚合体的变化^[19]。成年后，椎间盘纤维环、髓核的聚合体因受外源性透明质酸的影响而稳定性降低，蛋白多糖总量明显减少，尤以髓核更为显著，发生聚合的比例下降，而在髓核中聚合体数量变化最早出现，这与基质降解酶活性升高，使得聚合体降解为单体的数量增加有关，且随着年龄增加，蛋白多糖聚合体的体积也逐渐减小，主要存在椎间盘纤维环中，由于酶的作用，核心蛋白结构明显缺失，阻碍了新的聚合体形成^[20-22]。在蛋白多糖数量及体积变化的过程中，硫酸软骨素不断丢失，而硫酸角质素浓度增加，水合性能减弱，椎间盘内环境改变导致椎间盘组织内水分丧失，高度下降、组织黏弹性降低等特征的改变。

动物模型的选择对实验研究的影响至关重要，目前人们普遍把大白兔及鼠类等小动物作为动物模型的最佳选择^[23]。为进一步研究退变椎间盘细胞及细胞外基质分子学机制以及生化特征，出现了椎间盘体外培养系统^[24]，目前椎间盘体外培养技术大致可分为单层培养、三维培养^[25]。三维培养包括球状培养、植块培养和藻酸盐凝胶培养。植块培养虽与人体内自然环境最接近，但该种方法因椎间盘组织和细胞肿胀等影响而较难获得成功^[26-27]。Haschtmann等^[28]通过研究发现将含有软骨终板的兔椎间盘进行整体培养，可使椎间盘细胞活力、基质构成以及结构完整性保持良好达4周以上，而细胞外基质中Ⅰ型胶原表达上调，Ⅱ型胶原和蛋白聚糖表达下调，这与退变椎间盘的病理过程相似。

盘源性腰痛属于中医“痹症”、“腰腿痛”的范畴，具有腰背部疼痛及下肢放射痛等特点，疼痛部位的脏腑、经络归属是治疗盘源性腰痛的基础。梁倩倩等^[29]查阅关于腰椎间盘突出症的文献后，发现以肝肾亏虚证、气滞血瘀证、寒湿证应用比较频繁。治法上以补益肝肾、活血止痛、祛风除湿为主。翟献斌^[30]的实验研究发现补肾活血方能促进Ⅰ型胶原mRNA的表达，Ⅰ型胶原蛋白含量增加可以起到延缓和对抗椎间盘组织退化的作用。证实了六味地黄丸具有保护椎间盘细胞外基质作用，为中医补肾法治疗椎间盘源性腰痛提供了实验依据，也为解决椎间盘源性腰痛提供新的治疗思路与方法。

实验通过研究六味地黄丸对兔椎间盘体外退变模型椎间盘细胞外基质组分的影响，证实了六味地黄丸能延缓椎间盘体外退变模型中蛋白多糖含量、糖胺多糖含量、硫酸软骨素/硫酸角质素比值、透明质酸含量的下降，有效地稳定椎间盘退变模型中Ⅰ型胶原以及Ⅱ型胶原的表达，降低椎间盘胶原蛋白总体含量下降速率，一定程度延缓了椎间盘退变。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

六味地黄丸对椎间盘体外退变模型椎间盘细胞外基质组分的影响

Effect of Liuwei Dihuang Pills on the extracellular matrix components of intervertebral disc degeneration models in vitro

PDF

可视化

被引次数

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

图/表（结果） 3

参考文献

相关文章 15

引言

材料方法

讨论

文章快阅

延伸阅读

编辑推荐

Metrics

本文评价

[1]	张皓博, 赵宇楠, 杨学军. 细胞焦亡在椎间盘退变中的作用及治疗意义[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(9): 1445-1451.
[2]	姚晓玲, 彭建城, 许岳荣, 杨志东, 张顺聪. 可变角度零切迹前路椎间融合内固定系统治疗脊髓型颈椎病：30个月随访[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(9): 1377-1382.
[3]	安维政, 何萧, 任帅, 刘建宇. 肌源干细胞在周围神经再生中的潜力[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(7): 1130-1136.
[4]	张璟琳, 冷敏, 朱博恒, 汪虹. 干细胞源外泌体促进糖尿病创面愈合的机制及应用[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(7): 1113-1118.
[5]	许磊, 韩晓强, 张锦涛, 孙海飚. 关节软骨细胞周围透明质酸产生、转化和功能特征[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(5): 768-773.
[6]	乐国平, 张明, 席立成, 罗瀚文. 盐酸万古霉素@聚乳酸-羟基乙酸共聚物-壳聚糖-透明质酸复合缓释微球的制备及体外评价#br#[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(4): 528-534.
[7]	何云影, 李玲婕, 张舒淇, 李雨舟, 杨生, 季平. 聚丙烯酸/琼脂糖三维培养构建细胞球的方法[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(4): 553-559.
[8]	何冠宇, 徐宝山, 杜立龙, 张同星, 霍振鑫, 申力. 天然丝素蛋白构建仿生取向微通道纤维环支架[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(4): 560-566.
[9]	陈晓旭, 罗雅馨, 毕浩然, 杨琨. 脱细胞支架制备及其在组织工程和再生医学中的应用[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(4): 591-596.
[10]	康坤龙, 王新涛. 生物支架材料促进骨髓间充质干细胞成骨分化的研究热点[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(4): 597-603.
[11]	沈佳华, 付勇. 基于石墨烯的纳米材料可否在干细胞领域应用[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(4): 604-609.
[12]	张通, 蔡金池, 袁志发, 赵海燕, 韩兴文, 王文己. 基于透明质酸的复合水凝胶修复骨关节炎软骨损伤：应用与机制[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(4): 617-625.
[13]	李辉, 陈良龙. 植骨材料在脊柱结核治疗中的应用与特征[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(4): 626-630.
[14]	高仓健, 杨振, 刘舒云, 李浩, 付力伟, 赵天元, 陈威, 廖志垚, 李品学, 眭翔, 郭全义. 静电纺丝技术在肩袖损伤修复中的应用[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(4): 637-642.
[15]	关健, 贾燕飞, 张葆鑫, 赵国中. 4D生物打印在组织工程的应用[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(3): 446-455.