复合多糖抑制紫外线诱导皮肤细胞的光老化

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.1804

中国组织工程研究 ›› 2019, Vol. 23 ›› Issue (29): 4707-4713.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.1804

• 干细胞基础实验 basic experiments of stem cells • 上一篇下一篇

复合多糖抑制紫外线诱导皮肤细胞的光老化

杨凯业¹，汪丽萍²，王冰心²，卢颖裕²，冯姣¹，吴美音³，施琬³，侯少贞²

¹广东省无限极(中国)有限公司，广东省广州市 510663；²广州中医药大学中药学院，广东省广州市 510006；³广东省广州宏韵医药科技股份有限公司，广东省广州市 510663

修回日期:2019-04-21 出版日期:2019-10-18 发布日期:2019-10-18
通讯作者: 侯少贞，教授，广州中医药大学中药学院，广东省广州市 510006
作者简介:杨凯业，男，1990年生，广东省中山市人，汉族，2015年华南理工大学毕业，硕士，助理工程师，主要从事护肤多糖研究。
基金资助:
广东省省级科技计划科技应用型科技研发专项资金项目(2015B020234008)，项目参与人：侯少贞

Inhibitory effect of complex polysaccharides on ultraviolet-induced photoaging of skin cells

Yang Kaiye¹, Wang Liping², Wang Bingxin², Lu Yingyu², Feng Jiao¹, Wu Meiyin³, Shi Wan³, Hou Shaozhen²

¹Guangdong Infinitus (China) Co., Ltd., Guangzhou 510663, Guangdong Province, China; ²College of Chinese Materia Medica, Guangzhou University of Chinese Medicine, Guangzhou 510006, Guangdong Province, China; ³Guangzhou Hongyun Pharmaceutical Technology Co., Ltd., Guangzhou 510663, Guangdong Province, China

Revised:2019-04-21 Online:2019-10-18 Published:2019-10-18
Contact: Hou Shaozhen, Professor, College of Chinese Materia Medica, Guangzhou University of Chinese Medicine, Guangzhou 510006, Guangdong Province, China
About author:Yang Kaiye, Master, Assistant engineer, Guangdong Infinitus (China) Co., Ltd., Guangzhou 510663, Guangdong Province, China
Supported by:
Guangdong Provincial Applied Science and Technology Research & Development Special Fund Project, No. 2015B020234008 (to HSZ [project participant])

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：
光老化：皮肤光老化属于皮肤的外源性老化，是由外界环境因素或生活方式所引起的皮肤衰老，其以太阳中的紫外线辐射为主要致病因素。光老化是皮肤过早老化的过程，是由于皮肤持续长时间暴露于紫外线辐射所产生，并以晒斑、粗皱纹、失去弹性和光化性角化病为临床特征。光老化可导致严重后果，其与多种皮肤病甚至于皮肤肿瘤的发生息息相关，约80%以上的暴露部位美容问题均由皮肤光老化引起。
超氧化物歧化酶：是生物体内重要的抗氧化酶，广泛分布于各种生物体内，其具有特殊的生理活性，是生物体内清除自由基的首要物质。超氧化物歧化酶可对抗与阻断因氧自由基对细胞造成的损害，并及时修复受损细胞，从而延缓衰老。

摘要
背景：皮肤光老化除受年龄因素影响外，与日光照射亦有直接关系，由日光照射引起的皮肤老化称为光老化。近年来，越来越多的研究发现多糖类物质对皮肤光老化具有一定的抑制作用，主要作用机制可能与其具有抗氧化、保湿、抗辐射等作用相关。
目的：明确复合多糖抑制皮肤细胞光老化的作用是否优于单一多糖。
方法：利用紫外灯照射诱导人皮肤成纤维细胞(HSF)、人永生化角质形成细胞(HaCaT)(均购自中国科学院上海生科院细胞资源中心)出现老化损伤。在此基础上，采用MTT法和生化试剂盒分别检测相同浓度下4种单一多糖(铁皮石斛多糖、褐藻多糖、灵芝多糖、竹荪多糖)和4种多糖混合物(即复合多糖)对2种光老化表皮细胞存活率及超氧化物歧化酶、丙二醛和羟脯氨酸水平的影响。
结果与结论：①与模型组相比，铁皮石斛多糖、褐藻多糖、灵芝多糖、竹荪多糖在50 mg/L的质量浓度下，对光老化人皮肤成纤维细胞模型及人永生化角质形成细胞模型的抑制效果均不显著，仅有个别生化指标改善程度显著(P < 0.01或P < 0.05)；4种单一多糖对光老化细胞模型的保护作用相近；②与模型组比较，同样在多糖质量浓度为50 mg/L时，复合多糖能够显著提高2种光老化细胞模型的存活率(P < 0.01)、超氧化物歧化酶及羟脯氨酸水平(P < 0.01或P< 0.05)，降低丙二醛水平(P < 0.01或P < 0.05)；③结果表明，在对抗皮肤成角质细胞和成纤维细胞光老化实验中，4种单一多糖抗皮肤细胞光老化的效果不显著，而其混合物复合多糖(铁皮石斛多糖+褐藻多糖+灵芝多糖+竹荪多糖)抗皮肤细胞光老化的作用显著，提示复合多糖抑制皮肤细胞光老化的作用优于单一多糖。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程
ORCID: 0000-0002-5159-0886(侯少贞)

关键词: 铁皮石斛多糖, 褐藻多糖, 灵芝多糖, 竹荪多糖, 成角质细胞, 成纤维细胞, 超氧化物歧化酶, 羟脯氨酸, 丙二醛

Abstract:

BACKGROUND: In addition to aging, skin photoaging is directly related to sunlight exposure. Photoaging refers to skin aging caused by sunlight. In recent years, increasing evidence has shown that polysaccharides can certainly inhibit skin photoaging, as they have antioxidant, moisturizing, anti-radiation functions.
OBJECTIVE: To explore whether complex polysaccharides are superior to single polysaccharides to inhibit photoaging of skin cells.
METHODS: Irradiation by ultraviolet light was conducted to damage human skin fibroblasts (HSF) and human immortalized keratinocytes (HaCaT). Both kinds of cells were purchased from the Cell Bank of Shanghai Institutes for Biological Sciences, Chinese Academy of Sciences. On the basis of this, MTT assay and biochemical kits were used to detect the survival rate, superoxide dismutase, malondialdehyde and hydroxyproline levels in HSF and HaCaT photoaging cell models after treated with four kinds of single polysaccharides (polysaccharide from Dendrobium officinale, polysaccharide from Phaeophyta, polysaccharide from Ganoderma Lucidum and polysaccharide from Dictyophora indusiata) and four kinds of polysaccharide mixtures (i.e., complex polysaccharides) at the same concentration.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) Compared with the model group, the interventional results of single-component polysaccharides on HSF and HaCaT photoaging cells showed a significant improvement in some but not all biochemical indicators (P < 0.01 or P < 0.05). Four kinds of single polysaccharides had similar protective effects on photoaging cell models. (2) Compared with the model group, complex polysaccharides at 50 mg/L could significantly increase the cell survival rate and levels of superoxide dismutase and hydroxyproline, and decrease malondialdehyde level in HSF and HaCaT photoaging cell models (P < 0.01 or P < 0.05). To conclude, in the anti-ultraviolet-induced HSF and HaCaT photoaging experiments, the complex polysaccharides (polysaccharide from Dendrobium officinale+polysaccharide from Phaeophyta+polysaccharide from Ganoderma Lucidum+polysaccharide from Dictyophora indusiata) were better than the single polysaccharide of each component at the same intervention concentration.

Key words: polysaccharide from Dendrobium officinale, polysaccharide from Phaeophyta, polysaccharide from Ganoderma Lucidum, polysaccharide from Dictyophora indusiata, keratinocyte, fibroblast, superoxide dismutase, hydroxyproline, malondialdehyde

中图分类号:

杨凯业，汪丽萍，王冰心，卢颖裕，冯姣，吴美音，施琬，侯少贞 . 复合多糖抑制紫外线诱导皮肤细胞的光老化[J]. 中国组织工程研究, 2019, 23(29): 4707-4713.

Yang Kaiye, Wang Liping, Wang Bingxin, Lu Yingyu, Feng Jiao, Wu Meiyin, Shi Wan, Hou Shaozhen. Inhibitory effect of complex polysaccharides on ultraviolet-induced photoaging of skin cells[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2019, 23(29): 4707-4713.

图/表（结果） 6

2.1 紫外线诱导的人皮肤成纤维细胞(HSF)、人永生化角质形成细胞(HaCaT)光老化损伤模型 正常情况下，人皮肤成纤维细胞贴壁生长，为束状或纤维状，数量较多，见图1A。随着紫外辐射时间的延长，细胞数量减少，形态逐渐变得不规则，见图1B。正常情况下，人永生化角质形成细胞为牢固贴壁生长的不规则细胞，多为椭圆形和多角形，见图1C；随着紫外照射时间的延长，人永生化角质形成细胞数量逐渐减少，细胞肿胀，细胞碎片增多且部分漂浮于培养液中形态不易辨认，见图1D。无论是人皮肤成纤维细胞还是人永生化角质形成细胞，当紫外照射时间超过15 s，大部分细胞死亡，形态难以分辨。根据文献[21]报道和前期预实验结果，采用紫外线照射15 s诱导细胞光老化，人皮肤成纤维细胞、人永生化角质形成细胞的存活率分别约为70%，45%。

2.2 单一多糖对光老化人皮肤成纤维细胞(HSF)存活率及生化指标的影响 如图2及表1所示，紫外灯照射人皮肤成纤维细胞15 s时，模型组细胞存活率为67%，显著低于正常组(P < 0.01)。在相同多糖质量浓度下(50 mg/L)，各多糖干预组光老化人皮肤成纤维细胞的存活率高低排列如下：铁皮石斛多糖组>灵芝多糖组>竹荪多糖组>褐藻多糖组。

人皮肤成纤维细胞光老化模型组超氧化物歧化酶水平相较于正常组有显著性下降(P < 0.01)，4种多糖干预组上清液中超氧化物歧化酶水平相较于模型组有所提高(P < 0.05)，各组超氧化物歧化酶活性高低排列如下：褐藻多糖组>铁皮石斛多糖组>竹荪多糖>灵芝多糖。模型组丙二醛水平相较于正常组有显著性升高(P < 0.05)，4种多糖干预组上清液中丙二醛水平相较于模型组，差异无显著性意义(P > 0.05)。模型组羟脯氨酸水平相较于正常组有显著性下降(P < 0.01)，4种多糖干预组中仅褐藻多糖组、灵芝多糖组上清液中羟脯氨酸水平相较于模型组有明显提高，差异有显著性意义(P < 0.01)。

2.3 单一多糖对光老化人永生化角质形成细胞(HaCaT)存活率及生化指标的影响 如图3及表2所示，紫外灯照射人永生化角质形成细胞15 s时，模型组细胞存活率为42%，显著低于正常对照组(P < 0.01)。在相同多糖质量浓度下(50 mg/L)，各多糖干预组光老化人永生化角质形成细胞存活率高低不同，其中铁皮石斛干预组的细胞存活率最高，与模型组比较差异有显著性意义(P < 0.01)。

人永生化角质形成细胞光老化模型组超氧化物歧化酶、羟脯氨酸水平相较于正常组有显著性下降(P < 0.01)，丙二醛水平显著升高(P < 0.01)。4种多糖干预组与模型组相比，仅铁皮石斛多糖干预组的改善作用较为明显，羟脯氨酸水平均显著性升高(P < 0.05)，丙二醛水平显著下降 (P < 0.05)。

2.4 复合多糖对对光老化人皮肤成纤维细胞(HSF)存活率及生化指标的影响 如图4及表3所示，与正常组比较，模型组光老化人皮肤成纤维细胞存活率显著下降(P < 0.01)；与模型组比较，复合多糖各干预组光老化人皮肤成纤维细胞的存活率明显上升(P < 0.01)，且各干预组间差异无显著性意义。

与正常组比较，模型组上清液超氧化物歧化酶和羟脯氨酸水平显著下降、丙二醛水平显著升高(P < 0.01)；与模型组比较，复合多糖各干预组上清液超氧化物歧化酶、羟脯氨酸水平显著升高、丙二醛水平显著下降(P < 0.01或P < 0.05)，其中复合多糖A3组整体效果最优。

2.5 复合多糖对光老化人永生化角质形成细胞(HaCaT)存活率及生化指标的影响 如图5及表4所示，与正常组比较，模型组光老化人永生化角质形成细胞的存活率显著下降(P < 0.01)；与模型组比较，复合多糖各干预组光老化人永生化角质形成细胞的存活率均显著提高(P < 0.01或P < 0.05)，且各组间的细胞存活率基本相近。

与正常组比较，模型组上清液超氧化物歧化酶、羟脯氨酸水平显著下降，丙二醛水平显著升高(P < 0.01)；与模型组比较，复合多糖各干预组上清液超氧化物歧化酶及羟脯氨酸水平均显著升高、丙二醛水平显著降低(P < 0.01或P < 0.05)，其中复合多糖A1组超氧化物歧化酶、羟脯氨酸及丙二醛水平的改善效果最为明显。

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引言

光老化是长期紫外线照射导致的慢性炎性损伤，长、中波紫外线可诱导皮肤损伤引起光老化^[1]。紫外线照射引起的成纤维细胞抗氧化损伤能力下降及基因调控异常等均参与光老化的形成。在光老化的形成因素中，人角质形成细胞除了与成纤维细胞有相似的作用机制外，在加重皮肤炎症反应方面也尤为突出。真皮中成纤维细胞的活力会影响胶原蛋白的分泌、胶原蛋白纤维的数量和质量，成纤维细胞受损会导致胶原蛋白的降解与合成失调、胶原纤维构造紊乱，导致皮肤失去弹性并形成皱纹。成纤维细胞体外培养技术成为研究皮肤老化的重要工具。因此，在抗皮肤光老化的护肤产品开发中，皮肤成纤维细胞和角质形成细胞是常用的工具细胞模型^[2-3]。

实验在参照文献[2-4]方法的基础上，拟采用紫外线诱导人皮肤成纤维细胞(HSF)和人皮肤角质形成细胞(HaCaT) 光老化模型，考察4种单一多糖(铁皮石斛多糖、褐藻多糖、灵芝多糖、竹荪多糖)及其混合物(复合多糖)抑制皮肤细胞光老化的作用。采用MTT法检测细胞存活率^{[5- 6]}，采用超氧化物歧化酶、丙二醛和羟脯氨酸试剂盒检测相关指标^[7-10]。细胞存活率是活细胞在细胞群体中所占的百分比，可直接反映细胞活性的高低。超氧化物歧化酶是生物体内重要的抗氧化酶，广泛分布于各种生物体内，其具有特殊的生理活性，是生物体内清除自由基的首要物质。超氧化物歧化酶可对抗与阻断氧自由基对细胞造成的损害，并及时修复受损细胞，从而延缓衰老。丙二醛是膜脂过氧化的终产物之一，能导致膜脂过氧化，损伤生物膜结构，从而影响一系列生理生化反应的正常进行，是导致机体衰老的重要因素。丙二醛水平可间接反映自由基对细胞及机体的损伤程度，是细胞衰老的检测指标之一。羟脯氨酸是胶原蛋白中特征性氨基酸，通过测定羟脯氨酸水平可了解细胞胶原蛋白分解代谢情况。因此，此实验通过检测以上4个指标，以期为客观评价复合多糖抗皮肤光老化的作用提供实验依据。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

材料方法

1.1 设计 细胞学体外实验。

1.2 时间及地点 实验于2017年10月至2018年4月在广州中医药大学中药学院科研实验室完成。

1.3 材料

1.3.1 细胞株 人皮肤成纤维细胞(HSF)、人永生化角质形成细胞(HaCaT)均购于中国科学院上海生科院细胞资源中心。

1.3.2 实验试剂和供试品 超氧化物歧化酶测定试剂盒(南京建成生物科技有限公司，批号：20180105)；微量丙二醛测试盒(南京建成生物科技有限公司，生产批号：20180106)；羟脯氨酸测试盒(南京建成生物科技有限公司，生产批号：20180105)；二甲基亚砜(广州瑞舒生物有限公司，生产批号：20170401)；青霉素-链霉素双抗液(广州瑞舒生物有限公司，生产批号：1491907)；胎牛血清(美国Gibco公司，生产批号：1507D)；DMEM培养基(美国Gibco公司，生产批号：8117251)；四甲基偶氮唑蓝(MTT)(广州瑞舒生物有限公司，生产批号：20180501)。

实验所用供试品均由广州中医药大学中医药数理工程研究院制备。采用“水提醇沉”方法反复纯化各单一多糖^[11-13]，并采用苯酚-浓硫酸比色法测定各样品中多糖的含量。以无水葡萄糖(C₆H₁₂O₆)计，各多糖的含量如下：褐藻多糖70%、灵芝多糖80%、铁皮石斛多糖92%、竹荪多糖86%。

1.3.3 实验仪器 全波长酶标仪(1510，Thermo Fisher Scientific)；光学显微镜(ECLIPSE CI，尼康仪器(上海)有限公司)；超净工作台(YJ-VS-2，无锡一净净化设备有限公司)；二氧化碳培养箱(MCO-20AIC，日本三洋公司)。

1.4 实验方法

1.4.1 MTT法检测各组光老化皮肤细胞的存活率 人皮肤成纤维细胞、人永生化角质形成细胞融合度达70%-80%时，加入胰蛋白酶消化后用含体积分数为15%胎牛血清的DMEM培养液制成细胞浓度为1×10⁸ L^-1的细胞悬液，以每孔100 µL细胞悬液即每孔1×10⁴个细胞接种于96孔板中，将培养板移入孵育箱，在体积分数为5% CO₂，37 ℃条件下培养，24 h后吸除细胞培养液，根据预实验的“浓度-效果”关系曲线，分别给予含50 mg/L单一多糖、体积分数为15%优质胎牛血清和1%双抗的DMEM培养基继续培养，24 h后吸除细胞培养液，PBS洗3遍，每孔加入100 µL PBS，放置在距离紫外灯(波长254 nm) 30 cm下，设定15 s的紫外辐照时长，辐照结束后吸除PBS，每孔重新加入全新培养液，继续培养，24 h后每孔加入MTT溶液(5 g/L)20 µL，37 ℃继续培养4 h，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，每孔加入150 µL二甲基亚砜，振荡10 min，使结晶充分溶解。在紫外灯下照射、未进行单一多糖干预的细胞为模型组，未在紫外灯下照射、未进行单一多糖干预的细胞为空白组。用全功能酶标仪在波长490 nm处测定各多糖干预组的吸光度值(A值)，以示细胞增殖情况。按照下列公式计算细胞存活率(%)=干预组的吸光度值/空白组的吸光度值×100%。

1.4.2 各单一多糖对光老化皮肤细胞超氧化物歧化酶、丙二醛和羟脯氨酸水平的影响 上述50 mg/L单一多糖干预皮肤细胞24 h后，吸除细胞培养基，PBS洗3遍，每孔加入100 µL PBS，放置在距离紫外灯(波长254 nm)30 cm下，设定15 s的紫外辐照时长，辐照结束后吸除PBS，每孔重新加入全新培养液，继续培养，24 h后收集每孔的培养基上清液于离心管中，离心，取上清液于-20 ℃保存用以生化指标检测。按照试剂盒说明书，检测细胞培养基上清液中超氧化物歧化酶、丙二醛和羟脯氨酸水平。

1.4.3 复合多糖对光老化皮肤细胞存活率、超氧化物歧化酶、丙二醛和羟脯氨酸水平的影响 为了进一步考察不同多糖混合后抗皮肤光老化的作用，实验增设了不同复合多糖配伍组，具体组合比例如下：复合多糖A1、A2、A3、A4、A5组分别按以下比例混合，铁皮石斛多糖∶褐藻多糖∶灵芝多糖∶竹荪多糖=(A1)1∶1∶1∶1、(A2)2∶1∶1∶1、(A3)1∶2∶1∶1、(A4)1∶1∶2∶1、(A5)1∶1∶1∶2。参考1.4.1和1.4.2的实验方法，选择50 mg/L复合多糖溶液干预光老化皮肤细胞，测定不同比例的复合多糖对光老化细胞存活率、超氧化物歧化酶、丙二醛和羟脯氨酸水平的影响。

1.5 主要观察指标 单一多糖、复合多糖干预后光老化细胞的存活率、超氧化物歧化酶、丙二醛和羟脯氨酸水平。

1.6 统计学分析 所有数据均用x(_)±s表示，采用SPSS 17.0软件进行统计学分析，两组间比较用独立样本t 检验，多组间差异比较用one-way ANOVA进行分析，P < 0.01为差异有显著性意义。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

讨论

随着人口老龄化的增长，紫外线引起的皮肤光老化损伤成为一个严重的问题，因此预防和延缓皮肤衰老已成为医学科学特别是美容医学研究的热点之一。随着对皮肤光老化发生机制的进一步了解，各种改善和修复皮肤光老化的药物和化妆品研发在不断更新进步，这为皮肤光老化提供了很好的防治措施。

紫外线辐射可以诱导活性氧包括超氧阴离子、过氧化氢(H₂O₂)、羟自由基(·OH)和单态氧(O₂)等的大量产生，其主要机制是紫外线激活细胞表面生长因子受体和细胞因子受体，使其与相应配体结合并激发下游信号分子，导致还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸激活，从而产生活性氧^[14]。细胞内的非酶抗氧化系统(维生素C、维生素 E、谷胱甘肽、微量元素铜、锌、硒等)和酶抗氧化系统(超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶等)被过量的活性氧消耗，打破了体内氧化与抗氧化系统之间的动态平衡，使机体对活性氧的清除能力下降，从而导致活性氧增加，并在体内进一步累积。大量的活性氧会对细胞内生物大分子(如核酸、脂质及蛋白质等)产生氧化损伤，诱导线粒体DNA的损伤和细胞凋亡的发生^[15]。由于角质形成细胞和真皮成纤维细胞位于皮肤表皮层，是紫外线B波长能量作用的主要靶部位。因此，该实验采用紫外灯照射角质形成细胞(HaCaT细胞)和真皮成纤维细胞(HSF细胞)，诱导皮肤细胞光老化模型。这2种细胞模型是考察护肤产品抗皮肤衰老最常用的体外模型。在相同的造模条件下，人永生化角质形成细胞的存活率明显低于人皮肤成纤维细胞，提示人永生化角质形成细胞对紫外线可能更为敏感。

在前期预实验中，通过细胞实验初筛了4种能明显促进人皮肤成纤维细胞、人永生化角质形成细胞增殖的多糖，即褐藻多糖、灵芝多糖、铁皮石斛多糖、竹荪多糖。但是这4种多糖外用能否防治紫外线诱导的细胞光老化，目前尚不清楚。抗氧化作用是缓解皮肤光老化的重要途径之一。因此，实验进一步通过体外实验先验证这4种多糖用于防治皮肤光老化的可行性。

根据预实验结果，选择合适、相同的多糖干预质量浓度，即50 mg/L，考察单一多糖对表皮细胞生存率和生化指标的影响。在人皮肤成纤维细胞光老化模型上，4种单一多糖的整体药效结果差异不大；而在人永生化角质形成细胞光老化模型上，铁皮石斛多糖整体抗光老化的效果较其他3种多糖更为突出，提示不同多糖抗皮肤细胞光老化的作用有所不同，特别是对于角质形成细胞的干预作用可能存在差异。

从各单一多糖对2种光老化细胞模型的存活率及超氧化物歧化酶、羟脯氨酸、丙二醛水平的影响，可以发现这4种多糖的改善程度并非十分理想，特别是与正常对照组的水平差距较大。理论上不同多糖的活性应该有所不同，多种多糖混合后可能产生协同作用。因此，进一步检测4种多糖混合后的复合多糖(竹荪多糖+石斛多糖+灵芝多糖+褐藻多糖)的抗光老化活性。同样在50 mg/L的质量浓度下，复合多糖对2种皮肤细胞光老化模型的保护作用均要比单一多糖突出，表现为光老化细胞的存活率大幅度提高，超氧化物歧化酶、羟脯氨酸水平的改善程度也较为明显，甚至有些指标已经接近正常对照组水平。这证实了不同来源的单一多糖混合后可产生协同作用，即复合多糖抗皮肤细胞光老化的作用进一步增强。

褐藻多糖主要来自海带、巨藻、泡叶藻、墨角藻等海藻^[16-19]。一些海藻中的硫酸多糖包括褐藻糖胶和褐藻淀粉等都有明显的抗氧化能力，包括DPPH自由基清除、脂类过氧化物的抑制、一氧化氮的清除、ABTS自由基的清除、过氧化物和羟基自由基的清除等。灵芝多糖具有清除超氧阴离子自由基和羟自由基的能力^[20-24]，多糖可以捕捉脂质过氧化链式反应中产生的活性氧，减少脂质过氧化反应链的长度，阻断或减缓脂质过氧化的进行。对于·OH而言，可快速地攫取多糖碳氢链上的氢原子结合成水，而多糖的碳原子上则留下一个成单电子，成为碳自由基，进一步氧化形成过氧自由基，最后分解成对机体无害的产物；对于·O₂^-，多糖可与其发生氧化反应，达到清除的目的。铁皮石斛多糖也能够较好地清除DPPH自由基，对羟基自由基表现出高清除活性，金属螯合活性也高^[22-23]。竹荪多糖对自由基的清除效果与丁化羟基甲苯基本相当，对DPPH自由基也有一定的清除作用^[24-25]。因此，作者推测4种单一多糖混合后，可从多个抗氧化途径缓解紫外线诱导的皮肤细胞光老化，从而产生协同抗光老化作用。

非常有意思的是，在复合多糖的配比上即使存在一定的差异，但是各复合多糖组间检测结果的差异并不显著。那么增加复合多糖组成中单一多糖的种类(例如增加动物多糖)或数量，是否有利于进一步提高抗皮肤光老化作用，值得后续的体外实验和体内实验进一步验证。

总之，在对抗皮肤成角质细胞和成纤维细胞光老化实验中，复合多糖(石斛多糖+褐藻多糖+灵芝多糖+竹荪多糖)抗皮肤细胞光老化较其各组分单一多糖的效果好，推荐采用复合多糖防治皮肤光老化。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

复合多糖抑制紫外线诱导皮肤细胞的光老化

Inhibitory effect of complex polysaccharides on ultraviolet-induced photoaging of skin cells

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