2.1  实验动物数量分析  6只实验犬全部存活至实验结束，植骨区软组织愈合良好，全部进入结果分析。

2.2  大体观察  ①块状皮质骨移植组术后3个月：块状皮质骨移植组移植骨的四周及表面可见骨吸收的痕迹。移植骨块边缘变得圆钝和受区基骨之间有新骨生长，交界线变得模糊；术后6个月：移植骨吸收较3个月更为明显，移植骨表面骨膜附着紧密，不易剥离。移植骨与受区基骨界面连接紧密，界面变得模糊。②皮质骨移植同期种植组术后3个月：移植骨和种植体均稳固，植体稳定不松动，移植骨块略有吸收；术后6个月种植体出现松动脱落，骨块吸收加剧。见图2。

2.3  组织学观察  块状皮质骨移植组术后3个月，石蜡切片苏木精-伊红染色可见：移植骨周围及表层骨板有部分吸收，新生毛细血管长入。移植骨磨片甲苯胺蓝染色可见，移植骨较新生骨染色浅，连接基骨和移植骨，移植骨、新生骨和受区基骨边界线明显(图3)。移植骨苏木精-伊红染色呈粉红色部分骨陷窝空虚，细胞核消失(图4)。在新生血管周围有新骨生成。在移植骨周边可见破骨细胞吸收移植骨,形成骨陷窝。偶见破骨细胞出现在新生骨小梁周围。

块状皮质骨移植术后6个月：移植骨的吸收较3个月明显，新生骨、移植骨与受区基骨已基本融为一体。甲苯胺蓝染色可见新生骨面积较3个月时面积大，移植骨面积逐渐减小(图5)。苏木精-伊红染色可见新生骨小梁红染，血管数量较多，可见较大的骨髓腔(图6)。

皮质骨移植同期种植组：术后3个月图片见图7，可见种植体与移植骨未发生骨结合，主要通过纤维连接(图7a中黄色区域)在一起，种植体主要是和受区基骨发生骨结合(图7a中紫色区域)。移植骨和基骨之间有新骨生成。

2.4  组织学测量分析  块状皮质骨移植组移植骨吸收率3，6个月分别为43.7%和70.8%；皮质骨移植同期种植组3，6个月骨块吸收率分别为41.6%和71.4%，6个月时全部种植体脱落。通过对皮质骨移植术后3个月和6个月移植骨吸收率及移植骨细胞孔隙率进行统计学分析，3，6个月间差异均有显著性意义(P < 0.05)。见表1，图8。

外伤、牙周炎、缺牙时间过长、肿瘤等因素常常导致种植区水平方向和垂直方向的骨量不足^[1]，此时需要采取相应的骨增量方式和骨移植材料来恢复种植区的骨量。目前，临床上较为常用的骨移植材料仍是自体骨，自体骨具有较高的生物相容性，避免移植后的排斥反应，是骨移植材料的金标准^[2]。临床上最常用的恢复骨缺损的手术方案是引导性骨再生术和自体骨移植。引导性骨再生术仅适用于小范围的骨缺损，对于较大范围的、骨高度和骨宽度严重不足的种植位点，则需要自体骨移植。但自体骨移植对临床医师有较高的技术要求，医师需具备良好的外科操作能力；自体骨移植后吸收的量不可控，吸收率在29%-46%之间^[3]；手术操作难度较大，术后有创口暴露的风险。有关自体骨移植后的愈合过程仍有争议，争议的焦点是：移植后的骨块是完全吸收还是能保留部分活性? PHEMISTER^[4]认为移植后的骨块被机体完全吸收，他提出了“爬行替代”观点：移植的自体骨块上的骨细胞会全部死亡，被新骨取代，骨块仅作为新细胞生长的支架。林成等^[5]认为移植骨块在移植后能保留部分活力，并非完全经历“爬行替代”的过程，他们通过实验研究得出如下结论：非血管化游离髂骨移植并非完全经历“爬行替代”，移植骨自身有很强的成骨能力。此次研究以Onlay移植的自体块状皮质骨为研究对象，探讨皮质骨移植的愈合过程，为临床上应用自体块状皮质骨恢复种植区骨量不足提供依据。同时，观察块状皮质骨植同期种植对种植体骨结合的影响及骨块的变化，为临床上Onlay植骨同期种植提供科学依据。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

1.1  设计  同体对照动物实验。

1.2  时间及地点  实验于2017年10月至2018年9月在大连医科大学完成。

1.3  材料

1.3.1  实验动物  比格犬6只(大连医科大学提供)，年龄1至2岁，雌雄不限，体质量10 kg左右。许可证号：SCXK(辽)2018-0007。

1.3.2  实验用主要仪器  无菌手术器械(由大连医科大学口腔医学院提供)；Frious UnitS种植机(由大连医科大学口腔医学院实验室提供)；Leica EG1150石蜡包埋机(由大连医科大学口腔医学院实验室提供)；Leica RM2235石蜡切片机(由大连医科大学口腔医学院实验室提供)；Olympus显微镜(由大连医科大学口腔医学院实验室提供)；DIO种植体及配套工具盒(韩国植体公司)；LeicaScan2000图像分析系统(德国Leica公司)。

1.4  实验方法

1.4.1  实验动物分组并建立动物模型  实验犬按取材时间随机分为2组，每组3只。实验犬陆眠宁0.12 mL/kg肌肉注射麻醉，口内口周消毒铺巾，拔除两侧上颌前磨牙，并在拔牙位点根方制造约10 mm×5 mm×2 mm的骨缺损。两侧下颌磨牙区膜龈联合处切开，全层翻开粘骨膜瓣，于外斜线处取相应大小的皮质骨块(图1)，根据骨缺损大小和形态对皮质骨快进行调整以保证骨块与受区吻合。取左侧下颌颊侧皮质骨植入同侧骨缺损区并用螺钉固定，取右侧下颌颊侧皮质骨植入同侧骨缺损区并用螺钉固定同期植入种植体，种植体进入基骨3.0-4.0 mm以保证初期稳定性。缝合关闭创口。

1.4.2  实验动物取材  分别于术后3，6个月麻醉后处死实验犬，于前磨牙区切开暴露植骨区，去除表面软组织后用裂钻扩大0.5 cm取下植骨材料及周围受植区基骨，游标卡尺测量移植骨大小并将标本标记好后放入体积分数4%中性甲醛固定液中固定，一组标本制作石蜡切片用苏木精-伊红染色，另一组标本制作硬组织磨片用甲苯胺蓝染色。

1.4.3  大体观察  以游标卡尺测量移植骨块长度、宽度、厚度，计算移植骨块体积，并与移植前比较体积变化，计算移植骨块吸收率。植骨同期种植侧取材时要观察植入的种植体是否稳定，和移植骨是否发生了骨结合等植骨区移植骨块变化。

1.4.4  组织学观察  取下植骨区组织样本，将标本标记好之后固定并制备石蜡切片、用苏木精-伊红染色观察移植骨块的吸收情况，光学显微镜下观察移植骨块的吸收情况及移植骨陷窝空虚数量。

1.4.5  组织学测量分析将标本进行磨片，甲苯胺蓝染色，光学显微镜下观察移植骨块、种植体和基骨之间的连接方式。使用ImagePro Plus6.0软件进行图像的处理分析：①移植骨块吸收率=取材时移植骨块的面积/植入时移植骨块的面积×100%；②骨陷窝孔隙率=(骨陷窝孔隙数目/移植骨骨陷窝总数目)×100%。

1.5  主要观察指标  ①移植骨块大体观察；②移植骨块组织学观察；③移植骨块组织学测量分析。

1.6  统计学分析  使用SPSS 17.0统计软件对所得数据进行分析，使用单因素方差分析比较各组材料移植骨块吸收率，移植骨陷窝空虚百分比是否有统计学差异，当 P < 0.05时表明差异有显著性意义。

自体骨块游离移植是临床常用的颌骨缺损的修复方式。研究证实，自体骨块在移植后早期，表现为炎性反应,植骨床有新生毛细血管长入，血凝块形成^[6-7]。在移植术后的2周，炎症反应减弱，移植骨内的骨细胞因营养不良发生坏死，形成骨陷窝^[8]。在移植后3个月进入新骨生成阶段，边缘部位因血供优于中心部位，其新骨生成速度较快^[9]。在术后6个月新骨生成速度减慢，一般在24个月左右移植骨才能改建完成，皮质骨较松质骨移植后愈合时间长，说明血供对移植骨的愈合时间有很大影响，血运的重建是移植骨愈合的关键^[10-11]。

皮质骨移植是自体骨移植的一种，是具有刚性的片状结构，其在压缩或张力下不会变形。这种独特的特点允许其应用于需要刚性固定的骨缺损区^[12]，其骨形态发生蛋白的浓度较高，具有良好的骨诱导性能^[13]。在植入后的6个月内，皮质骨逐渐被吸收，在12个月左右恢复结构及强 度^[14]。皮质骨移植稳定的内环境是影响移植骨存活的重要因素^[15]。在未受干扰的、刚性固定的情况下进行初始愈合过程，有利于新血管生成，这是皮质骨移植后的初始血运重建阶段^[16]。血管除了运送氧气和营养物质，带走细胞代谢产物^[17-18]。受体部位为移植物提供的充足血供是移植物移植后能够存活的关键^[19]。非血管化移植物中的成骨细胞和骨原细胞的存活取决于它们在移植后的最初几天内从受体床获得代谢物的能力^[20]。虽然表面骨细胞最有可能在移植过程中较深层细胞更容易存活，但它们在收获和储存过程中可能会受到损害^[21]。

移植后3个月苏木精-伊红染色可见存活的骨细胞数量减少。在移植骨和宿主骨的界面发现少量破骨细胞。移植骨的边缘变得圆钝，说明移植骨发生的骨塑形和骨改建。到6个月时，在供体和受体的骨之间发现一个仍可看到界限。新形成的骨较3个月相对成熟，新骨沿着吸收的移植骨被观察到。这些观察证实了自体骨移植具有骨诱导潜能。6个月时骨陷窝孔隙率较3个月时降低(P < 0.05)，并非表示移植骨块内有活性的的骨细胞数量增加，而是说明随着时间的延长,血供相对较差的部位被吸收，存活的骨细胞数量基本没有变化，移植骨块内活细胞比例增加，表现为骨陷窝孔隙率降低。

硬组织磨片甲苯胺蓝染色后也观察到移植骨近骨膜处及移植骨与受区基骨连接处出现淡蓝色的新生骨、在破骨细胞吸收后形成的骨陷窝内有活的骨细胞存在，这些变化表面在移植骨吸收的同时伴有新骨生成。术后6个月，移植骨体积较3个月时明显缩小。

经组织学观察分析可知，皮质骨移植同期种植组在术后3个月可见种植体与移植骨主要通过纤维连接在一起，种植体主要是和受区基骨发生骨结合，移植骨和基骨之间有新骨生成，说明皮质骨移植同期种植因其血供原因，骨结合效果不是特别理想。皮质骨移植同期种植术后6个月种植体出现松动脱落，并发现移植骨大部分已被吸收，植体周围有大量肉芽组织。究其原因，考虑是因为植体植入影响血液供应,造成移植物吸收加剧，最终导致植体松动脱落。

综上所述，实验通过分析不同时间点移植骨的组织学变化，发现自体块状皮质骨在移植后，虽然移植骨内有大量骨细胞坏死，但仍有部分骨细胞存活，存活的细胞参与移植骨的改建与重塑，自体皮质骨移植后并非完全“爬行替代”，能保留部分活力。同时提示了植骨和种植体植入要分期进行效果更佳。将来需要解决的问题是如何减少自体皮质骨移植后的骨吸收，可考虑与富血小板生长因子或骨髓浓缩物联合使用^[22-23]，或者在截骨和取骨手术中利用3D打印制作导板进行手术也会减短手术时间，增加移植骨块在植骨区的吻合度^[24]，其结果还需进一步研究。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

文题释义：

自体块状皮质骨：自体块状皮质骨具有刚性的板层状结构，毛细血管的含量较低，因此移植后很难维持具有活性的成骨细胞或骨祖细胞，致密的矿化基质导致血管重建和长入的速度相对缓慢，但其空间维持能力强，生物相容性好，其中含有的成骨细胞和生长因子对骨再生起促进作用，是骨移植材料的“金标准”。

Onlay植骨：于两侧下颌外斜线处取长方形皮质骨块，在上颌左侧骨缺损区植入皮质骨块，右侧骨缺损区植骨同期植入种植体。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

种植修复目前已经成为牙列缺损后常见的修复方法，种植手术之前往往需要植入骨替代品恢复骨量。目前，临床应用中骨移植材料种类繁多，大体上可分为自体骨、同种异体骨、异种骨和异质骨。但现有大部分骨移植材料仅具有骨引导作用，只有自体骨同时具有骨引导、骨诱导、骨生成等作用。

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