神经干细胞在新型复合支架中的生长和分化

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2016.19.018

中国组织工程研究 ›› 2016, Vol. 20 ›› Issue (19): 2857-2863.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.19.018

• 干细胞培养与分化 stem cell culture and differentiation • 上一篇下一篇

神经干细胞在新型复合支架中的生长和分化

邢冉^1，2，陈旭义²，朱祥^1，2，李瑞欣³，涂悦²

1天津中医药大学，天津市 300193
2武警后勤学院附属医院脑科医院脑创伤与神经疾病研究所天津市神经创伤修复重点实验室，天津市 300162
3军事医学科学院卫生装备研究所，天津市 300161

收稿日期:2016-03-02 出版日期:2016-05-06 发布日期:2016-05-06
通讯作者: 涂悦，教授，硕士生导师，武警后勤学院附属医院脑科医院，天津市 300162
作者简介:邢冉，女，1989年生，河北省石家庄市人，汉族，天津中医药大学在读硕士。
基金资助:
天津市科技支撑计划重点项目(14ZCZDGX00500)；武警后勤学院附属医院种子基金项目(FYZ201403)

Neural stem cells on a novel composite scaffold: growth and differentiation

Xing Ran^{1, 2}, Chen Xu-yi², Zhu Xiang^{1, 2}, Li Rui-xin³, Tu Yue²

1Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, Tianjin 300193, China
2Brain Hospital, Affiliated Hospital of Logistics University of People’s Armed Police Force, Institute of Brain Trauma and Neurological Disorders, Neurotrauma Repair Key Laboratory of Tianjin, Tianjin 300162, China
3Medical Equipment Institute of Military Medical Sciences Academy, Tianjin 300161, China

Received:2016-03-02 Online:2016-05-06 Published:2016-05-06
Contact: Tu Yue, Professor, Master’s supervisor, Brain Hospital, Affiliated Hospital of Logistics University of People’s Armed Police Force, Institute of Brain Trauma and Neurological Disorders, Neurotrauma Repair Key Laboratory of Tianjin, Tianjin 300162, China
About author:Xing Ran, Studying for master’s degree, Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, Tianjin 30019, China
Supported by:
the Key Projects of Tianjin Science and Technology Support Program, No. 14ZCZDGX00500; the Seeding Fund of the Affiliated Hospital of Logistics University of People’s Armed Police Force, No. FYM201432

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：
3-D打印技术：指在计算机控制下，根据物体的计算机辅助设计模型或计算机断层扫描等数据，通过材料的精确3-D堆积，快速制造任意复杂形状3-D物体的新型数字化成型技术。
神经干细胞：神经干细胞可以自我更新，分化为神经胶质细胞和神经元，其可以补充凋亡的神经元和胶质细胞，从而重新形成新的有功能的神经回路，是中枢神经组织工程理想的种子细胞。

摘要
背景：神经干细胞具有自我增殖和多向分化潜能，是中枢神经组织工程理想的种子细胞。胶原蛋白和丝素蛋白作为生物支架材料已得到广泛应用，但是两者单独使用时均具有不足。那么能否将二者结合起来构建一个新的神经组织工程支架？该新型支架对神经干细胞的生长和分化又会有什么影响呢？
目的：观察新型复合支架中神经干细胞的生长和分化情况。
方法：将大鼠胚胎神经干细胞接种于新型复合支架中，通过光镜和扫描电镜观察其在支架中生长和分化情况。以常规悬浮培养作为对照组，使用CCK-8检测两组中神经干细胞的活力。对神经干细胞与新型复合支架的三维空间复合体进行石蜡切片，并进行苏木精-伊红染色和免疫荧光染色，观察神经干细胞在材料表面及内部的生长、分化情况。
结果与结论：①新型复合支架中的神经干细胞可以很好地生长、分化，细胞与细胞之间形成突触；②CCK-8检测显示，神经干细胞在支架中生长良好，新型复合支架中神经干细胞活力要优于对照组(P < 0.05)；③石蜡切片的苏木精-伊红染色和免疫荧光染色进一步证明神经干细胞在支架中能够很好的生长和分化；④结果说明，制备的新型复合支架具有良好的生物相容性，有利于神经干细胞生长及分化，有良好的应用前景。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程
ORCID: 0000-0001-5312-7118(邢冉)

关键词: 干细胞, 分化, 神经干细胞, 生物材料, 胶原蛋白, 丝素蛋白, 生物相容性, 细胞分化, 神经组织工程, 3-D打印技术

Abstract:

BACKGROUND: Neural stem cells with self-proliferation and differentiation potential are the ideal seed cells for central nervous tissue engineering. Although collagen and silk fibroin as biological scaffold materials have been widely used, both of them used alone have certain shortcomings. Is it possible to combine the two materials to build a novel neural tissue-engineered scaffold? What is the effect of this novel scaffold on the growth and differentiation of neural stem cells?
OBJECTIVE: To observe the growth and differentiation of neural stem cells seeded onto the novel composite scaffold.
METHODS: The rat embryonic neural stem cells were inoculated onto new composite scaffolds, and then, their growth and differentiation were observed by light microscopy and scanning electron microscopy. Neural stem cells were cultured in conventional suspension culture as control group. Cell counting kit-8 assay was used to detect viability of neural stem cells in the two groups. Three-dimensional composite scaffolds carrying neural stem cells were sliced into paraffin sections to observe the growth and differentiation of neural stem cells by hematoxylin-eosin staining and immunofluorescence staining.
RESULTS AND CONCLUSION: Neural stem cells cultured on the new composite scaffold grew and differentiated well, and interconnected synapses were observed. Cell counting kit-8 assay showed that neural stem cells on the scaffold grew well, and the cell viability was significantly higher in the composite scaffold group than that in the control group (P < 0.05). Hematoxylin-eosin staining and immunofluorescence staining of paraffin sections further provided evidence for good growth and differentiation of neural stem cells on the scaffold. These results indicate that the novel composite scaffold with good biocompatibility benefits the growth and differentiation of neural stem cells, promising a favorable application prospect.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

Key words: Neural Stem Cells, Biocompatible Materials, Cell Differentiation, Tissue Engineering

中图分类号:

R394.2

邢冉，陈旭义，朱祥，李瑞欣，涂悦. 神经干细胞在新型复合支架中的生长和分化[J]. 中国组织工程研究, 2016, 20(19): 2857-2863.

Xing Ran, Chen Xu-yi, Zhu Xiang, Li Rui-xin, Tu Yue. Neural stem cells on a novel composite scaffold: growth and differentiation[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2016, 20(19): 2857-2863.

图/表（结果） 3

2.1 NSCs的培养 分离得到的NSCs在悬浮培养条件下聚集成球(图1A)。免疫荧光染色鉴定NSCs，可见Nestin染色阳性产物(见图1B-D)。流式细胞仪检测发现Nestin蛋白阳性率为90.7%(图2)。实验提示第3代培养所得细胞为NSCs，满足后续实验要求。

2.2 NSCs的诱导分化和鉴定 分化培养基诱导分化3 d后，光镜下可看到细胞贴壁并向四周延伸，7 d后，可以观察到单个细胞、神经球与神经球之间的突起形成相互连接，交错成网(图3A，B)。经免疫荧光鉴定显示，其能够分化成星形胶质细胞(GFAP阳性细胞图3C)和神经元(MAP-2阳性细胞图3F)。DAPI复染细胞核(图3D，G)后与GFAP、MAP-2阳性细胞重叠，进一步证实染色阳性细胞为星形胶质细胞和神经元细胞(图3E，H)。
2.3 胶原/丝素蛋白复合支架的形态观察结果 3-D打印制备的胶原/丝素蛋白复合支架呈表面光滑、吸水性良好，有弹性的网状结构(图4A-C)。扫描电镜下复合支架大体呈三维网状结构，内部为不规则的多孔结构，交通孔丰富、相通性好，孔径为98-260 μm(图4D-F)。

2.4 细胞活力检测 CCK-8检测显示随着培养时间的增长，实验组的细胞活力要高于对照组，培养8 d后两组细胞活力逐渐下降。总体来说，实验组的细胞活力要高于对照组。这说明胶原/丝素蛋白复合支架具有良好的生物相容性，利于NSCs的生长(图5)。

2.5 支架表面的细胞形态变化 光镜下可以观察到NSCs在胶原/丝素蛋白复合支架表面黏附、生长及分化(图6A-C)。扫描电镜显示，NSCs在支架上向四周伸出伪足并向孔径内壁延伸，说明NSCs在支架上生长状态良好，细胞形态良好(图6D)。在分化培养基的作用下，NSCs在支架上分化(图6E，F)。以上均说明胶原/丝素蛋白复合支架具有良好的生物相容性。

2.6 细胞-支架复合体的苏木精-伊红染色结果 苏木精-伊红染色结果显示，支架内部呈多孔结构(图7A)。共培养14 d后，NSCs在支架表面和内径延伸生长(图7B-E)。少数NSCs向支架内部生长(图7F-H)。

2.7 细胞-支架复合体内NSCs的分化结果 见图8。

免疫荧光染色显示，NSCs在支架内分化为星形胶质细胞(GFAP阳性细胞，图8A)和神经元(MAP-2阳性细胞，图8D)。细胞之间形成突触(GAP43阳性，图8G)。DAPI复染细胞核(图8B，E，H)后与GFAP、MAP-2、GAP43阳性细胞重叠(图8C，F，I)。与悬浮培养组没有显著差异。

参考文献

[1] Ma T, Klann E. PERK: A novel therapeutic target for neurodegenerative diseases. Alzheimers Res Ther. 2014;6(3):30.

[2] Rice MA, Dodson BT, Arthur JA, et al. Cell-based therapies and tissue engineering. Otolaryngol Clin North Am. 2005;38(2):199-214.

[3] 邢冉.干细胞移植治疗脊髓损伤研究与临床应用[J]. 中风与神经疾病杂志, 2014,31(8):752-754.

[4] 吴婷,李朝晖,崔占峰,等.应用多种水凝胶支架材料构建三维神经干细胞培养模型[J].中国细胞生物学学报, 2015, 37(1):66-73.

[5] Bhardwaj N, Kundu SC. Chondrogenic diferentiation of rat MSCs on porous scaf olds of silk f broin/chitosan blends. Biomaterials. 2012;33(10):2848-2857.

[6] Lu Q, Hu K. Preparation of three-dimensional fbroin/ collagen scaf olds in various pH conditions. J Mat Sci. 2008;19(2):629-634.

[7] Feng XX, Zhang LL, Chen JY, et al. Preparation and characterization of novel nanocomposite films formed from silk f broin and nano-TiO2. Int J Biol Macromol. 2007;40(2):105-111.

[8] 衣昕.壳聚糖支架与神经干细胞生物相容性的研究[J].神经解剖学杂志,2007,23(5):506-510.

[9] 任荣梅.血管生成三维培养模型的研究进展[J]. 医学综述,2015,21(16):2881-2884.

[10] Tavares I. Human neural stem cell transplantation in spinal cord injury models: how far from clinical application. Stem Cell Res Ther. 2013;4(3):61.

[11] Kanemura Y, Kobayashi S, Kodama E, et al. Evaluation of in vitro proliferative activity of human fetal neural stem/progenitor cells using indirect measurements of viable cells based on cellular metabolic activity. J Neurosc Res. 2002;69(6):869-879.

[12] 徐宁,钟建.丝素蛋白对纳米羟基磷灰石晶体生长的调控作用[J].中国组织工程研究, 2013,17(3):427-432.

[13] 孔令玲.丝素蛋白支架的制备及其在组织工程中的应用[J].材料科学与工程学报,2013, 31(4):614-620.

[14] 周继辉.新型纳米支架与神经干细胞的凋亡[J].中国组织工程研究,2013,17(3):419-426.

[15] 刘琳,蔡玉荣.纳米羟基磷灰石/丝素蛋白复合支架材料的降解特性及生物相容性研究[J].化学学报, 2008,66(16): 1919-1923.

[16] Tripathi G. A porous hydroxyapatite scaffold for bone tissue engineering: Physico-mechanical and biological evaluations. Ceramics Int. 2012;38(1):341-349.

[17] 宁志刚. 胶原蛋白水凝胶在软组织工程中的应用期刊[J]. 中国骨伤, 2011,10(24):884-886.

[18] 张振辉. 胶原蛋白/丝素蛋白的理化性质及静电纺胶原/丝素复合材料在骨组织工程中的应用[J].山东医药, 2014, 54(31):86-88.

[19] 谢亮. 丝素蛋白多孔支架在大鼠脊髓血管化中的实验研究[J]. 中国现代医药杂志,2012,14(4):1-5.

[20] Mauney JR, Cannon GM, Lovett ML,et al. Evaluation of gelspun silk-based biomaterials in a murine model of bladder augmentation. J Biomaterials.2011;32(3):808-818.

[21] 谢敏凯. 丝素蛋白材料在组织工程中的新进展[J]. 中国组织工程研究, 2012,16(43):8105-8110.

[22] 孔令玲. 丝素蛋白支架的制备及其在组织工程中的应用[J]. 材料科学与工程学报, 2013,31(4):614-620.

引言

材料方法

1.1 设计 细胞学体外实验。

1.2 时间及地点 于2014年3月至2015年4月在天津市武警后勤学院附属医院脑创伤与神经疾病研究所完成。

1.3 材料

实验动物：孕14-16 d的清洁级Sprague-Dawley (SD)大鼠，平均体质量400 g，购自军事医学科学院动物中心。

1.4 实验方法

1.4.1 NSCs的分离培养及鉴定 取孕14-16 d的SD大鼠，吸入性乙醚麻醉，体积分数75%乙醇浸泡消毒。超净工作台内，剖腹，取出串珠状胚胎，于冰盘上暴露整个脑部，取大脑皮质脑组织，仔细剔除脑膜和血管。将分离出的脑组织剪碎，反复轻柔吹打，过200目筛网。加入0.25%胰蛋白酶消化，随后加入含体积分数10%胎牛血清的培养基终止消化，1 000 r/min，离心5 min。重悬细胞，加入完全培养基(含20 μg/L 表皮生长因子、20 μg/L碱性成纤维生长因子、2%B27的DMEM/F12培养基)调整细胞浓度为1×10⁸ L^-¹接种到培养瓶中培养。倒置显微镜下观察NSCs的细胞形态和生长情况。细胞培养并传代至第3代备用。进行nestin免疫荧光染色和流式细胞术检测。

1.4.2 NSCs的分化鉴定 取第3代NSCs，以适当的浓度接种到多聚赖氨酸包被过的盖玻片上，培养基更换为分化培养基(含20 μg/L 表皮生长因子、20 μg/L碱性成纤维生长因子、2%B27、体积分数10%胎牛血清的DMEM/F12培养基)置于培养箱中培养，每隔3 d半量换液1次，期间显微镜下观察细胞的生长、分化。培养7 d后进行GFAP、MAP-2免疫荧光染色鉴定，倒置荧光显微镜下观察并拍照。

1.4.3 胶原/丝素蛋白复合支架制备和形态观察 胶原/丝素蛋白复合凝胶由军事医学科学院卫生装备研究所提供。脑创伤与神经疾病研究所提供3-D打印机制备复合支架。用2.5%戊二醛溶液固定支架24 h后，不同梯度乙醇逐级脱水，真空干燥，表面喷金，扫描电镜观察其微观结构。并随机选择不同区域，测量支架孔径。

1.4.4 细胞活力检测 以CCK-8方法检测NSCs与胶原/ 丝素蛋白复合支架共培养时的活力。采用96孔板检测，具体操作方法按照CCK-8说明书进行，NSCs细胞浓度为1×10⁹ L^-¹，每组共有6个培养孔，每孔加入100 μL，在培养0，2，4，6，8，10，12 d后，每孔加入10 μL CCK-8 在培养箱中培养3 h，用酶标仪测定450 nm的吸光度值(A)。

1.4.5 NSCs与胶原/丝素蛋白复合支架共培养 将胶原/丝素蛋白复合支架制成大小约5 mm×5 mm×2 mm，于6孔板中，0.1 g/L多聚赖氨酸包被过夜。收集第3代NSCs，调整细胞浓度为1×10¹⁰ L^-¹，将细胞悬液接种到胶原/丝素蛋白复合支架上进行复合，每块支架滴加100 μL，置于培养箱内孵育4 h以利于细胞和支架的进一步黏附。加入分化培养基，每孔2 mL，置于培养箱内进行复合培养，每两至三天半量换液。光镜下观察细胞与支架黏附及生长、分化等情况。

1.4.6 扫描电镜观察观察共培养后细胞的黏附与分化NSCs与复合支架共培养7 d后，将细胞-支架复合体用2.5%戊二醛固定24 h，经过不同体积分数的乙醇梯度逐级脱水，自然干燥后，真空喷金，扫描电镜观察细胞在支架上的黏附、生长和分化情况。

1.4.7 细胞-支架复合体的苏木精-伊红染色 NSCs与复合支架共培养14 d后，将细胞-支架复合体用体积分数10%中性甲醛液固定24 h，石蜡包埋，8 μm连续切片。切片经过脱蜡至水、抗原修复后，苏木精-伊红常规染色，光镜下观察。

1.4.8 细胞-支架复合体内NSCs分化测定 石蜡切片脱蜡至水、微波抗原修复后进行GFAP、MAP-2、GAP43免疫荧光染色，倒置荧光显微镜下观察并拍照。

1.5 主要观察指标 NSCs在胶原/丝素蛋白复合支架中的细胞活力和黏附情况；NSCs在材料表面及内部的生长、分化情况。

1.6 统计学分析 数据以x(_)±s表示，采用SPSS 17.0软件进行统计学处理。P < 0.05为差异有显著性意义。

讨论

组织工程的核心是建立由细胞和生物材料构成的三维空间复合体^[8]。该三维空间复合能够模拟细胞在体内生存环境，是细胞生长更接近体内的生长状态，为细胞提供获取营养、气体交换、排泄废物和生长代谢的场所，也是形成新的具有形态和功能的组织、器官的物质基础^[8-9]。正如很多研究所述，NSCs可以自我更新，可以分化为神经胶质细胞和神经元，其可以补充凋亡的神经元和胶质细胞，从而重新形成新的有功能的神经回路^[10]，是中枢神经组织工程理想的种子细胞。实验从大鼠胚胎的大脑皮质中提取NSCs。提取的NSCs可以多次传代扩增，免疫荧光染色显示表达NSCs标志物Nestin，流式细胞术说明传至第3代的NSCs纯度较高，可以作为种子细胞进行下一步研究。

研究表明，理想的神经组织工程生物支架应具备以下条件^[4^，^11-13]：①一定的三维立体空间、孔隙结构以利于细胞黏附、生长。②很好的生物相容性、稳定性。③良好的生物机械性能。④良好的生物降解性。⑤能成为携带促进神经生长分子的释放系统，维持较长时间对神经修复所需因子的供应。⑥促进细胞生长的细胞外基质成分。胶原在动物体内广泛存在，易于提取、加工及塑形。作为细胞外基质的主要成分，其具有良好的生物相容性及生物可降解性，是应用最早的天然生物材料^[14]。当前，国内外相关骨组织工程材料研究中，选用的胶原蛋白大多为Ⅰ型胶原蛋白，这是因为天然骨组织中Ⅰ型胶原蛋白是含量最多的有机基质^[15]。但是胶原单独使用时存在降解速度过快、新生组织塑形欠佳、机械强度较低等不足^[16-17]。丝素蛋白是从蚕丝中提取的天然的高分子纤维蛋白，具有良好的理化特征和生物性能，在生物医学有广泛的应用^[18-20]。有研究者认为丝素蛋白具有以下优点：机械强度高、良好的生物相容性、生物降解性缓慢、制备方法多样易得，能够支持多种细胞的黏附、分化和生长^[21-22]。然而，实际应用中发现丝素降解较慢、干燥时易破裂。实验将上述两种材料共混制备的复合支架可以弥补各自的不足，有利于细胞的生长。

传统支架的制作多采用低温成型和模型注塑，步骤繁琐，过程精度不易把握，制作出来的支架性能差异很大，且不能随意改变支架的走向和孔隙。3-D 打印技术的出现为上述问题的解决提供了可能。3-D打印的最大优点在于其能够精确、快速实现支架复杂的宏观外形与内部微细结构的一体化构建，实现个性化生产，这是其他的传统支架成型方法所不可企及的。本研究利用3-D生物打印机制备的复合支架为网状多孔结构，具有高度连通性，结果显示其能很好地黏附细胞，具有良好的生物相容性。

3D支架培养方法是将细胞接种到特定的支架上支持细胞在3D空间生长。本研究中NSCs与胶原/丝素蛋白复合支架共培养后构建的三维空间复合体，为NSCs的增殖、分化和生长提供了足够的空间。实验结果显示NSCs在胶原/丝素蛋白复合支架中培养能够增殖、分化，与悬浮培养的NSCs相比，复合支架对于NSCs的分化没有影响。

综上所述，3-D打印的胶原/丝素复合支架有利于NSCs的生长。但是由于其表面的平滑性，多数NSCs只能在其表面生长和分化，只有少部分细胞能够进入支架内部生长，不利于三维空间复合体的实际应用。这是由于单独采用材料作为打印原料，支架成型后再引入细胞构建细胞-支架复合物。这种方法存在支架内细胞浓度较低且分布不均。为使支架内部尤其是支架中心区域能够进入细胞，实现支架内细胞间相互信号传导及血管的长入，需要不断的深入研究和突破。

神经干细胞在新型复合支架中的生长和分化

Neural stem cells on a novel composite scaffold: growth and differentiation

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[1]	蒲锐, 陈子扬, 袁凌燕. 不同细胞来源外泌体保护心脏的特点与效应[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(在线): 1-.
[2]	林清凡, 解一新, 陈婉清, 叶振忠, 陈幼芳. 人胎盘源间充质干细胞条件培养液可上调缺氧状态下BeWo细胞活力和紧密连接因子的表达[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(在线): 4970-4975.
[3]	张秀梅, 翟运开, 赵杰, 赵萌. 类器官模型国内外数据库近10年文献研究热点分析[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(8): 1249-1255.
[4]	王正东, 黄娜, 陈婧娴, 郑作兵, 胡鑫宇, 李梅, 苏晓, 苏学森, 颜南. 丁酸钠抑制氟中毒可诱导小胶质细胞活化及炎症因子表达增多[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1075-1080.
[5]	汪显耀, 关亚琳, 刘忠山. 提高间充质干细胞治疗难愈性创面的策略[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1081-1087.
[6]	万然, 史旭, 刘京松, 王岩松. 间充质干细胞分泌组治疗脊髓损伤的研究进展[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1088-1095.
[7]	廖成成, 安家兴, 谭张雪, 王倩, 刘建国. 口腔鳞状细胞癌干细胞的治疗靶点及应用前景[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1096-1103.
[8]	谢文佳, 夏天娇, 周卿云, 刘羽佳, 顾小萍. 小胶质细胞介导神经元损伤在神经退行性疾病中的作用[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1109-1115.
[9]	李珊珊, 郭笑霄, 尤冉, 杨秀芬, 赵露, 陈曦, 王艳玲. 感光细胞替代治疗视网膜变性疾病[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1116-1121.
[10]	焦慧, 张一宁, 宋雨晴, 林宇, 王秀丽. 乳腺癌类器官研究进展及临床应用前景[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1122-1128.
[11]	王诗琦, 张金生. 中医药调控缺血缺氧微环境对骨髓间充质干细胞增殖、分化及衰老的影响[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1129-1134.
[12]	曾燕华, 郝延磊. 许旺细胞体外培养及纯化的系统性综述[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1135-1141.
[13]	孔德胜, 何晶晶, 冯宝峰, 郭瑞云, Asiamah Ernest Amponsah, 吕飞, 张舒涵, 张晓琳, 马隽, 崔慧先. 间充质干细胞修复大动物模型脊髓损伤疗效评价的Meta分析[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1142-1148.
[14]	侯婧瑛, 于萌蕾, 郭天柱, 龙会宝, 吴浩. 缺氧预处理激活HIF-1α/MALAT1/VEGFA通路促进骨髓间充质干细胞生存和血管再生[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 985-990.
[15]	史洋洋, 秦英飞, 吴福玲, 何潇, 张雪静. 胎盘间充质干细胞预处理预防小鼠毛细支气管炎[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 991-995.