丝素蛋白/羟基磷灰石支架对成骨诱导脂肪干细胞活性及成骨性能的影响

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2015.45.002

中国组织工程研究 ›› 2015, Vol. 19 ›› Issue (45): 7224-7229.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2015.45.002

• 脂肪干细胞 adipose-derived stem cells • 上一篇下一篇

丝素蛋白/羟基磷灰石支架对成骨诱导脂肪干细胞活性及成骨性能的影响

刘浩，褚亚伟，丁涛，程力，朱浩明

南京医科大学附属无锡市人民医院，江苏省无锡市 214023

收稿日期:2015-08-07 出版日期:2015-11-05 发布日期:2015-11-05
通讯作者: 丁涛，博士，副主任医师，南京医科大学附属无锡市人民医院骨科，江苏省无锡市214023
作者简介:刘浩，男，1990年生，江苏省建湖县人，汉族，在读硕士，主要从事骨科学基础与临床研究。
基金资助:
无锡市医院管理中心医学技术重大项目(YGZX1111)

Effect of silk fibroin/hydroxyapatite scaffold on the viability and osteogenic properties of adipose-derived stem cells under osteogenic induction

Liu Hao, Chu Ya-wei, Ding Tao, Cheng Li, Zhu Hao-ming

Department of Orthopedics, Wuxi People’s Hospital Affiliated to Nanjing Medical University, Wuxi 214023, Jiangsu Province, China

Received:2015-08-07 Online:2015-11-05 Published:2015-11-05
Contact: Ding Tao, M.D., Associate chief physician, Department of Orthopedics, Wuxi People’s Hospital Affiliated to Nanjing Medical University, Wuxi 214023, Jiangsu Province, China
About author:Liu Hao, Studying for master’s degree, Department of Orthopedics, Wuxi People’s Hospital Affiliated to Nanjing Medical University, Wuxi 214023, Jiangsu Province, China
Supported by:
the Medical Technology Project of Hospital Management Center of Wuxi, No. YGZX1111

摘要/Abstract

摘要：

背景：成骨诱导后的脂肪干细胞与可降解丝素蛋白/羟基磷灰石支架复合，可望研制出一种具有良好生物相容性及成骨性能的新型骨融合材料。
目的：探讨丝素蛋白/羟基磷灰石支架对成骨诱导脂肪干细胞增殖活性及成骨性能的影响。
方法：获取大鼠脂肪干细胞后体外贴壁培养、扩增，将第3代细胞用条件培养液进行成骨方向的定向诱导培养、扩增，然后接种到预湿的丝素蛋白/羟基磷灰石材料上作为实验组，以相同条件下置入盖玻片和脂肪干细胞培养作为对照组。倒置相差显微镜观察细胞在材料中的生长情况，MTT法检测材料对细胞增殖活性的影响，碱性磷酸酶活性测定评价其成骨能力。
结果与结论：成骨诱导后的脂肪干细胞在丝素蛋白/羟基磷灰石材料上能够良好地黏附和增殖。实验组和对照组细胞增殖活性及碱性磷酸酶活性比较，差异无显著性意义(P > 0.05)，证实脂肪干细胞活性及成骨性能不受材料影响，说明丝素蛋白/羟基磷灰石复合材料具有良好的细胞相容性。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

关键词: 干细胞, 脂肪干细胞, 丝素蛋白, 羟基磷灰石, 生物相容性, 支架材料, 成骨性, 复合型支架

Abstract:

BACKGROUND: Adipose-derived stem cells under osteogenic induction can be combined with biodegradable silk fibroin/hydroxyapatite scaffold, which is expected to develop a new biocompatible and osteogenic bone fusion material.

OBJECTIVE: To study the effect of silk fibroin/hydroxyapatite composite on the viability and osteogenic properties of adipose-derived stem cells after osteogenic induction.

METHODS: Adipose-derived stem cells were obtained from rat’s fat tissue, then adherently cultured, proliferated and passaged in vitro. Passage 3 cells were cultured in conditioned medium for osteogenic induction, and then seeded onto silk fibroin/hydroxyapatite scaffold as experimental group. Adipose-derived stem cells cultured on the cover glasses at the same condition acted as control group. The cellular morphology, proliferation and differentiation were assessed respectively by means of phase contrast microscope, MTT assay and alkaline phosphatase activity measurement.

RESULTS AND CONCLUSION: After osteogenic induction, adipose-derived stem cells could adhere to the scaffold material and proliferate on the surface of silk fibroin/hydroxyapatite scaffold normally. No significant difference was found in cell proliferation and alkaline phosphatase activity between the experimental and control groups (P > 0.05), suggesting the cellular activity and function were not affected by the material. These findings indicate that silk fibroin/hydroxyapatite composite material has good cytocompatibility.
中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

Key words: Silk, Hydroxyapatites, Stem Cells, Adipose Tissue, Biocompatible Materials, Tissue Engineering

刘浩，褚亚伟，丁涛，程力，朱浩明. 丝素蛋白/羟基磷灰石支架对成骨诱导脂肪干细胞活性及成骨性能的影响[J]. 中国组织工程研究, 2015, 19(45): 7224-7229.

Liu Hao, Chu Ya-wei, Ding Tao, Cheng Li, Zhu Hao-ming. Effect of silk fibroin/hydroxyapatite scaffold on the viability and osteogenic properties of adipose-derived stem cells under osteogenic induction[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2015, 19(45): 7224-7229.

图/表（结果） 11

2.1 细胞形态学观察

2.1.1 原代细胞及传代细胞形态原代培养12 h后可见贴壁细胞，初始阶段为小圆形，48 h后可见短梭形、梭形及多角形，细胞突起相互连接，八九天后单层细胞融合接近90%(图3)。传代细胞培养2 h即可贴壁、生长迅速，多数为类成纤维细胞，圆形细胞逐渐减少，7 d后细胞即可融合。分选的第3代细胞形态均为梭形，接近融合状态(图4)，观察至第5代时，发现细胞形态特征无明显变化。

2.1.2 成骨诱导分化细胞形态当加入成骨诱导条件培养液后，细胞继续生长，6-8 h贴壁完全，形态仍然保持梭形，有数个突起；第3，4天部分细胞由梭形转变为纺锤型，5-7 d后细胞汇合成单层，细胞突起互相连接；八九天后细胞长满开始密集重叠生长，无接触抑制性；10-12 d时细胞进一步密集生长，趋化形成结节；第14天时出现细胞结节钙化斑(图5)。第14天时加入常规培养液作对照组的细胞虽密集生长，但不形成矿化结节(图6)。

2.1.3 接种于丝素蛋白/羟基磷灰石支架上细胞生长形态细胞接种前形态良好，生长旺盛。丝素蛋白/羟基磷灰石材料不透光，其表面的细胞生长情况在倒置显微镜下不容易观察，但在边缘可见细胞生长活跃，形态正常。随着时间延长，细胞逐渐增多，7 d左右细胞融合成簇，形成克隆。细胞生长状态及细胞形态与接种前相似，未观察到细胞衰老及异常分裂现象(图7)。

2.2 MTT法测定实验组及对照组细胞增殖活性从细胞增殖活性吸光度值所描绘的生长曲线来看，实验组及对照组细胞增殖活性随时间延长逐渐增加，4-6 d为快速增长期，6-8 d到达顶峰，以后达到平顶期，14-16 d有下降趋势(图8)。2-12 d各时间点实验组与对照组吸光度值差异无显著性意义(P > 0.05)，第14天及第16天时实验组与对照组吸光度值差异有显著性意义(P < 0.05)，见表1。

2.3 实验组及对照组细胞碱性磷酸酶活性实验组与对照组的碱性磷酸酶活性比较，各时间点差异无显著性意义(P > 0.05)(图9)。定量法检测碱性磷酸酶活性显示，实验组和对照组培养基中的碱性磷酸酶活性开始较低，第6天增高明显，以后数天内基本维持这一水平(表2)。

参考文献

[1] 李小军,王文礼,刘海波.椎弓根钉系统固定结合经椎弓根自体骨移植治疗胸腰椎爆裂性骨折疗效分析[J].四川医学, 2012,33(9): 1597-1599.

[2] 林博文,黎伟凡,王华,等.异体骨移植在髋关节翻修术中应用的10年随访[J].中华关节外科杂志,2012,6(4):523-529.

[3] 郑华,何盛江,王群波.锁定钢板加同种异体骨移植治疗老年肱骨近端骨折[J].创伤外科杂志, 2012,14(2):130-132.

[4] 张大伟,田清业,刘光军,等.骨膜瓣复合异体骨移植修复大段骨缺损[J].组织工程与重建外科杂志,2012,8(1):26-31.

[5] 胡堃,刘斌. 骨移植材料发展趋势[J]. 生物骨科材料与临床研究, 2010,7(3):32-38.

[6] 王迎军,杜昶,赵娜如,等.仿生人工骨修复材料研究[J].华南理工大学学报:自然科学版, 2012,40(10):51-58.

[7] 闵理,刘立岷,宋跃明,等.不同种类骨移植在青少年特发性脊柱侧凸后路矫形术中的中长期疗效评价[J].中国骨与关节外科, 2012, 5(5):382-388.

[8] Fraser JK, Wulur I, Alfonso Z, et al. Fat tissue: an underappreciated source of stem cells for biotechnology. Trends Biotechnol. 2006;24(4):150-154.

[9] Cirillo B, Morra M, Catapano G. Adhesion and function of rat liver cells adherent to silk fibroin/collagen blend films. Int J Artif Organs. 2004;27(1):60-68.

[10] 赵天源,孙红.骨组织工程支架材料及其血管化的研究进程[J].中国组织工程研究, 2013, 17(38): 6832-6838.

[11] Rodrigues CV, Serricella P, Linhares AB, et al. Characterization of a bovine collagen-hydroxyapatite composite scaffold for bone tissue engineering. Biomaterials. 2003;24(27):4987-4997.

[12] Hutmacher DW. Scaffolds in tissue engineering bone and cartilage. Biomaterials. 2000;21(24):2529-2543.

[13] Brittberg M, Nilsson A, Lindahl A, et al. Rabbit articular cartilage defects treated with autologous cultured chondrocytes. Clin Orthop Relat Res. 1996;(326):270-283.

[14] Itoh S, Kikuchi M, Takakuda K, et al. The biocompatibility and osteoconductive activity of a novel hydroxyapatite/collagen composite biomaterial, and its function as a carrier of rhBMP-2. J Biomed Mater Res. 2001;54(3):445-453.

[15] 陈晓庆,杨惠林,干旻峰,等. 丝素蛋白对磷酸钙骨水泥抗压强度及注射性的影响[J]. 中国组织工程研究与临床康复,2008, 12(45): 8985-8988.

[16] Zuk PA, Zhu M, Mizuno H, et al. Multilineage cells from human adipose tissue: implications for cell-based therapies. Tissue Eng. 2001;7(2):211-228.

[17] 覃杰,闫翠,陈极锋,等.碱性成纤维生长因子对脂肪干细胞分化为心肌细胞的影响[J].中山大学学报:医学科学版,2015,36(3): 346-351.

[18] 刘志,关键,段峰,等. 载辛伐他汀纳米羟基磷灰石支架材料对兔下颌骨缺损修复的影响[J]. 口腔颌面外科杂志, 2013, 23(1): 14-17.

[19] Nerem RM, Sambanis A. Tissue engineering: from biology to biological substitutes. Tissue Eng. 1995;1(1):3-13.

[20] Mosmann T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays. J Immunol Methods. 1983;65(1-2):55-63.

[21] 朱文菁,金慰芳,张丽丽,等. MTT法分析培养成骨细胞的存活和增殖能力[J]. 上海医科大学学报, 1995, 22(4): 254-257.

[22] 胡江伟,王亮,马远征,等. Wnt3a 信号分子对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化过程中端粒酶活性的影响[J]. 中国骨质疏松杂志, 2014, 20(1): 33-37.

引言

长久以来，骨修复方法主要有自体骨移植^[1]、同种异体骨移植^[2-4]、人工合成材料移植^[5-7]，其中人工合成材料能有效减少前两种方法对患者造成的痛苦以及取材上的不便。因此，人们不断深入研究，希望能找出一种具有良好力学性能、恰当生物相容性的材料来进行骨修复^[8]。

丝素蛋白(silk fibroin，SF)作为一种天然可降解的高分子纤维蛋白，提取自蚕丝^[9]，具有良好的生物相容性、力学性能和生物降解性等优点^[10]。羟基磷灰石(Hydroxyapatite，HA)纳米晶体是自然骨中的主要矿物成分，属于磷酸钙陶瓷，是一种比较典型的生物活性材料。人工合成的羟基磷灰石与自然骨有相似的晶体结构和元素组成，可以作为人体骨组织的替代。羟基磷灰石的优点主要包括^[11]：良好的生物相容性、化学稳定性，材料中有孔隙度，有利于骨组织长入，可以为新骨的沉积与再生提供优良的生理支架^[12]。丝素蛋白或羟基磷灰石单独作为骨组织工程种植材料时暴露出了诸如强度较低、韧性较差、力学性能不足等缺点^[13-14]，显著降低了其作为生物支架的潜能。复合型人工骨材料逐渐成为骨组织工程的研究热点，即利用组合材料的优点来克服单个材料的缺点^[15]。

脂肪干细胞最早由Zuk等^[16]从脂肪中提取出来，并通过一系列实验证实为多能干细胞，最近更是研究发现脂肪干细胞可以定向诱导分化为心肌细胞^[17]，这些发现证明了脂肪组织有非常重要的研究和应用价值，脂肪干细胞可以作为多种组织工程的种子细胞。

本实验获取SD大鼠脂肪干细胞并进行成骨诱导，然后接种到可降解丝素蛋白/羟基磷灰石复合支架上，观察二者的生物相容性。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

材料方法

1.1 设计细胞学观察实验。

1.2 时间及地点于2010年1月至2014年8月在苏州大学附属第一医院中心实验室完成。

1.3 材料

1.3.1 实验动物健康SD大鼠10只，6-8周龄，体质量150-200 g，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供。实验过程中对动物处置符合动物伦理学要求。

1.3.2 主要溶液的配制 ①0.1%Ⅰ型胶原酶消化液的配制：Ⅰ型胶原酶100 mg溶于100 mL DMEM-低糖培养基。②基础培养基：DMEM、体积分数为10%胎牛血清、双抗、谷氨酰胺。③成骨培养基：DMEM、体积分数为10%胎牛血清、双抗、谷氨酰胺、50 mg/L抗坏血酸、10 mmol/L β-甘油磷酸钠、1 μmol/L地塞米松。

脂肪干细胞与丝素蛋白/羟基磷灰石复合支架生物相容性检测所用材料和试剂：
材料和试剂	来源
丝素蛋白	苏州大学13级学生冯焘及姜磊惠赠
羟基磷灰石	美国Sigma公司
DMEM-低糖培养基	美国Hyclone公司
胎牛血清	美国Invitrogen公司
青链霉素	美国Gibco公司
Ⅰ型胶原酶、胰蛋白酶、BSA、地塞米松、维生素C、EDTA	美国Sigma公司
CCK-8试剂盒	日本同仁
Anti-CD44/CD45抗体	美国Abcam公司
体外反转录试剂盒	美国Thermo Scientific公司
碱性磷酸酶测试盒	南京建成生物工程研究所

脂肪干细胞与丝素蛋白/羟基磷灰石复合支架生物相容性检测所用仪器：
仪器	来源
超净工作台	苏州净化设备厂，YZ-875
低温冰箱	日本SANYO公司
恒温水浴箱	江苏常州国华仪器厂
手动移液枪、低温冷冻离心机	德国Eppendorf公司
振荡水浴箱	上海志诚分析仪器制造有限公司， ZHWY-100B 型
细胞培养箱	美国SHELLAB公司
电子天平	美国OHAUS公司
低温冷冻干燥仪	美国CHAIST公司
倒置相差显微镜	日本Olympus公司
流式细胞仪	美国Becton Dickson公司
超声震荡仪	宁波新芝公司，SB-3200D
培养板、培养瓶	美国Corning公司
1 000 μL无菌盒装吸头	美国Axygen公司

1.4 实验方法

1.4.1 脂肪干细胞的培养将SD大鼠处死后，浸泡于体积分数为75%的乙醇中待处理。在超净工作台中用无菌器械剪开皮肤，取腹股沟处脂肪组织，用PBS(含双抗)清洗组织3次，并切除肉眼可见的小血管和筋膜，剪成3 mm³左右组织小块，转移至10 mL离心管中，加入5倍体积的0.1%Ⅰ型胶原酶溶液，密封离心管。将离心管放入37 ℃的恒温振荡箱中，每20 min振荡1次。待绝大部分组织消化后，加过量的基础培养基终止消化，用300目不锈钢网过滤，然后以1 000 r/min离心5-8 min，弃去上清，PBS洗涤1次，加基础培养基重悬细胞，接种于培养皿中，置于37 ℃、体积分数为5% CO₂、饱和湿度培养箱中培养，记为原代。新分离的原代脂肪干细胞每3 d更换1次培养基，随着培养时间的延长，红细胞不贴壁死亡或随换液弃去，贴壁细胞逐日增多、增殖。当培养10 d左右，细胞基本长满单层，铺满瓶底，进行传代培养。

当原代细胞基本长满单层，铺满瓶底90%以上时，在37 ℃条件下用0.25%胰酶和0.02%的EDTA混合液(1︰1体积比)消化2-6 min。倒置显微镜下观察细胞分离、脱壁、回缩成圆形后，用含体积分数为15%胎牛血清的DMEM培养液终止消化，1 000 r/min离心5 min后弃上清，加基础培养基重悬细胞，1︰1分为2皿传代培养，并记为第1代。常规两三天换液1次，至细胞生长再次铺满瓶底汇合时，重复上述传代过程，传代细胞记为第2代，余类推，选取第3-5代细胞用于后续实验。

1.4.2 脂肪干细胞成骨诱导脂肪干细胞传代培养至第3代，更换为含成骨诱导剂的条件培养液，此后均用条件培养液换液，每隔3 d换液1次，进行成骨方向的定向诱导培养。待培养皿内单层细胞生长近汇合时，使用0.25%胰蛋白酶及0.02%EDTA溶液消化，使贴壁细胞脱壁，进行传代，继续使用条件培养液培养，共培养14 d。

1.4.3 丝素蛋白/羟基磷灰石支架的制备参照文献[18]，取1%丝素蛋白3 mL与480 mg纳米羟基磷灰石混合，经离心充分混合后(图1)，室温自然挥发72 h，干燥箱烘干(图2)。无菌条件下将支架置入24孔培养板(24孔，直径15.6 mm，生长面积1.9 cm²)中，以条件培养液浸泡24 h，自然干燥备用。

1.4.4 材料细胞复合培养将第3代脂肪干细胞经条件培养液诱导后进行消化、离心，以5×10¹⁰ L^-¹细胞浓度利用微量移液器接种到丝素蛋白/羟基磷灰石支架上。将复合细胞的材料放入CO₂培养箱中培养4 h，再加入适量条件培养液继续培养。以丝素蛋白/羟基磷灰石支架+脂肪干细胞为实验组，相同条件下置入盖玻片+脂肪干细胞培养作为对照组(盖玻片先洗净、晾干，用酸液浸泡6 h以上，流水冲洗，蒸馏水冲洗3-5次，晾干，高压消毒或盐酸乙醇泡24 h，放于多聚赖氨酸内30 min，置于超净工作台上晾干)。

1.4.5 细胞在材料上黏附生长情况每日在倒置显微镜下观察细胞在材料上的攀附生长情况及形态特点。

1.4.6 MTT法测定细胞活性细胞与材料联合培养后第2，4，6，8，10，12，14，16天行MTT检测，每天实验组及对照组各取4孔，每孔加入MTT溶液(5 g/L)100 μL，37 ℃、体积分数为5%CO₂孵育箱中孵育4 h终止培养，仔细吸取孔内培养上清液。每孔再加入1 mL二甲基亚砜，振荡15 min裂解细胞，使结晶沉淀物充分溶解，将材料充分洗涤后取出，选择570 nm波长，紫外分光光度计测定每孔的吸光度值，描绘曲线。

1.4.7 碱性磷酸酶活性测定细胞与材料联合培养后第2，4，6，8，10，12天行碱性磷酸酶活性检测，每天实验组及对照组各取4孔，吸净原培养液，PBS洗涤3次，加入裂解液(Triton X-100)孵育4 h，转移上清液至96孔板中(各22孔)，加入新鲜配制的碱性磷酸酶底物，置37 ℃水浴箱内1 h。用分光光度计于520 nm、1 cm光径比色条件下，测定吸光度值，以Triton X-100为空白对照调零。计算公式为：碱性磷酸酶活性(金氏单位/100 mL)=(测量值/标准值)×0.005×(100/0.05)，标准值=0.319。金氏单位定义：100 mL血清在37 ℃与基质作用15 min产生1 mg酚为一个金氏单位。计算出细胞在不同时间碱性磷酸酶活性值，以时间为横坐标，碱性磷酸酶活性值为纵坐标绘制曲线。

1.5 主要观察指标实验组及对照组细胞增殖活性以及碱性磷酸酶活性。

1.6 统计学分析采用SPSS 13.0软件进行统计学分析，数据采用x(_)±s表示，运用随机区组方差分析，P < 0.05为差异有显著性意义。

讨论

1987年，美国国家科学基金会提出了“组织工程”这一概念，即利用生物活性物质，通过体外培养或构建的方法，再造或者修复器官及组织的技术^[19]。此后，随着细胞生物技术和生物材料技术的发展，组织工程技术也迅速成长起来。1995年Crane等首次提出了骨组织工程的概念，为骨缺损领域的研究带来了新的方向。骨组织工程基本思路中，支架材料作为信号因子和种子细胞的载体，为种子细胞的增殖及最终诱导成骨提供了一个合适的环境。理想的支架材料应具备以下特征^[11]：①三维形态下的多孔网络结构，具有高孔隙率(> 90%)且这些孔互相连通，以利于细胞增殖时有适宜的空间以及代谢废物和营养物质的运输。②对人体的生物相容性好，即支架材料可以适应人体内环境变化的同时对人体组织没有不良影响。③合适的生物降解性，即在人体正常组织生长的同时等量逐步分解。④支架材料的表面积大，表面理化性质适合细胞黏附增殖和分化，生长因子等生物信号分子能有效负载其上。⑤具有一定的生物力学性能，能在体内生物力学环境中保持结构稳定性和完整性，并为植入细胞提供合适的微应力环境。⑥特定的三维外形，可以形成所需的组织或器官形状。

MTT法又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。最早由Mosmann^[20]提出，其检测对象为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶，原理为能使外源性噻唑蓝还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒并沉积在细胞中，其溶解后在560-610 nm中有一个较宽的最大吸收峰，用分光光度仪可定量测定其吸光度值，从而判断活细胞数量，吸光度值越大，细胞活性越强^[21]。该方法简单、灵敏，广泛应用于生物学实验中细胞增殖及细胞活性测定。本实验使用MTT法检测种子细胞在丝素蛋白/羟基磷灰石上的增殖能力。在各时间点上除了第14，16天外，实验组与对照组在统计学上差异无显著性意义，即说明细胞的生长增殖未受影响。第14，16天两组吸光度值均有所下降，可能与细胞的衰老有关，因此可证明支架与细胞复合物在体外培养过程中存在着随时间推移活性下降的问题，也可能与支架无法分泌细胞活性因子有关。

碱性磷酸酶是成骨细胞的一种表型特征，其表达是成骨细胞分化的重要标志^[22]。本实验中两组的碱性磷酸酶活性差异无显著性意义，证明了细胞在支架材料上生长时仍具有单独培养时所具有的成骨活性。

综上所述，以大鼠成骨分化后的脂肪干细胞作为检测丝素蛋白/羟基磷灰石支架生物相容性的种子细胞，通过对细胞形态和生长状况的动态观察，发现细胞能在材料表面正常地增殖和分化，说明了丝素蛋白/羟基磷灰石作为人工骨材料具有良好的细胞相容性。由于实验条件有限，未观察到材料在动物体内的生长状况，有待以后的实验进一步探讨。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

丝素蛋白/羟基磷灰石支架对成骨诱导脂肪干细胞活性及成骨性能的影响

Effect of silk fibroin/hydroxyapatite scaffold on the viability and osteogenic properties of adipose-derived stem cells under osteogenic induction

PDF

可视化

被引次数

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

图/表（结果） 11

参考文献

相关文章 15

引言

材料方法

讨论

文章快阅

延伸阅读

编辑推荐

Metrics

本文评价

[1]	蒲锐, 陈子扬, 袁凌燕. 不同细胞来源外泌体保护心脏的特点与效应[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(在线): 1-.
[2]	林清凡, 解一新, 陈婉清, 叶振忠, 陈幼芳. 人胎盘源间充质干细胞条件培养液可上调缺氧状态下BeWo细胞活力和紧密连接因子的表达[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(在线): 4970-4975.
[3]	张秀梅, 翟运开, 赵杰, 赵萌. 类器官模型国内外数据库近10年文献研究热点分析[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(8): 1249-1255.
[4]	王正东, 黄娜, 陈婧娴, 郑作兵, 胡鑫宇, 李梅, 苏晓, 苏学森, 颜南. 丁酸钠抑制氟中毒可诱导小胶质细胞活化及炎症因子表达增多[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1075-1080.
[5]	汪显耀, 关亚琳, 刘忠山. 提高间充质干细胞治疗难愈性创面的策略[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1081-1087.
[6]	万然, 史旭, 刘京松, 王岩松. 间充质干细胞分泌组治疗脊髓损伤的研究进展[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1088-1095.
[7]	廖成成, 安家兴, 谭张雪, 王倩, 刘建国. 口腔鳞状细胞癌干细胞的治疗靶点及应用前景[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1096-1103.
[8]	谢文佳, 夏天娇, 周卿云, 刘羽佳, 顾小萍. 小胶质细胞介导神经元损伤在神经退行性疾病中的作用[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1109-1115.
[9]	李珊珊, 郭笑霄, 尤冉, 杨秀芬, 赵露, 陈曦, 王艳玲. 感光细胞替代治疗视网膜变性疾病[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1116-1121.
[10]	焦慧, 张一宁, 宋雨晴, 林宇, 王秀丽. 乳腺癌类器官研究进展及临床应用前景[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1122-1128.
[11]	王诗琦, 张金生. 中医药调控缺血缺氧微环境对骨髓间充质干细胞增殖、分化及衰老的影响[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1129-1134.
[12]	曾燕华, 郝延磊. 许旺细胞体外培养及纯化的系统性综述[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1135-1141.
[13]	孔德胜, 何晶晶, 冯宝峰, 郭瑞云, Asiamah Ernest Amponsah, 吕飞, 张舒涵, 张晓琳, 马隽, 崔慧先. 间充质干细胞修复大动物模型脊髓损伤疗效评价的Meta分析[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1142-1148.
[14]	侯婧瑛, 于萌蕾, 郭天柱, 龙会宝, 吴浩. 缺氧预处理激活HIF-1α/MALAT1/VEGFA通路促进骨髓间充质干细胞生存和血管再生[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 985-990.
[15]	史洋洋, 秦英飞, 吴福玲, 何潇, 张雪静. 胎盘间充质干细胞预处理预防小鼠毛细支气管炎[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 991-995.