过量氟化物致腰椎黄韧带的退变与骨化

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2015.33.011

摘要/Abstract

摘要：

背景：黄韧带是脊柱后部的重要连接结构，一旦出现退变导致其弹性下降，在各种影响因素作用下，可使椎管的有效空间更加减小，导致脊髓、神经根受压，出现神经症状，严重者可致瘫痪、病残。

目的：分析过量氟化物导致大鼠腰椎黄韧带退变与骨化的作用机制。

方法：选取雄性SD大鼠30只，随机分为两组，观察组饮用含NaF(质量分数为10^-4)蒸馏水，对照组给予等量的蒸馏水，分别于3，6个月后检测骨密度，血清、骨组织标本中Ca²⁺、P³⁺含量和血清碱性磷酸酶活性；且行大鼠腰段黄韧带标本X射线检查后组织病理观察。

结果与结论：观察组3个月后有5只大鼠下门牙开始出现白垩色条纹或斑点，6个月后大鼠均出现氟斑牙，表现为广泛的白垩色，且大鼠中腰椎骨密度显著增加(P < 0.05)；观察组大鼠在3个月和6个月时其血清Ca²⁺均显著高于对照组，P³⁺显著低于对照组，差异均有显著性意义(P < 0.05)；且血清碱性磷酸酶的活性在3个月和6个月时均显著高于对照组(P < 0.05)；6个月后X射线检查发现大鼠腰椎骨质密度明显增高；病理观察结果显示观察组大鼠黄韧带中弹力纤维数量进一步减少，胶原纤维大量增生，大量的成纤维细胞与钙盐沉积，且在椎板附着处可见韧带骨化形成。结果提示过量氟化物可造成SD大鼠腰椎黄韧带的退变、骨化，可能在黄韧带的骨化中可能起重要作用。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

关键词: 组织构建, 组织工程, 氟化物, 腰椎, 黄韧带, 退变, 骨化

Abstract:

BACKGROUND: The ligamentum flavum is important to connect the rear of the spine. If the flexibility of the ligamentum flavum is decreased due to degeneration, in the role of various factors, it can reduce the effective space of the spinal canal to induce spinal cord and nerve root compression, thereby resulting in neurological symptoms, even paralysis or residual disease.

OBJECTIVE: To study the mechanism of over-dose fluoride on the degeneration and ossification of the ligamentum flavum in rats.

METHODS: Thirty male Sprague-Dawley rats were randomly divided into two groups: experimental group was given distilled water containing NaF (mass fraction 10-4) and control group was given the same amount of distilled water. After 3 and 6 months, the bone mineral density, Ca2+ and P3+ contents in serum and bone tissue and serum alkaline phosphatase activity were detected, respectively. Meanwhile, the ligamentum flavum specimens were taken for X-ray examination and histopathological observation.

RESULTS AND CONCLUSION: In the experimental group, chalk stripes or spots occurred in the lower incisors of five rats at 3 months after treatment and dental fluorosis that was mostly in chalk color was found in all the rats at 6 months after treatment; moreover, the bone density of the lumbar spine significantly increased (P < 0.05). Compared with the control group, the contents of serum Ca2+ were significantly higher, while the contents of P3+ were significantly lower in the experimental group at 3 and 6 months after treatment (P < 0.05); the serum alkaline phosphatase activity was also significantly higher in the experimental group than the control group at 3 and 6 months after treatment (P < 0.05). X-ray films, at 6 months after treatment, showed that the bone density of the lumbar vertebra was increased obviously; pathological observation showed that the number of elastic fibers in the ligamentum flavum was reduced further, a large amount of collagen fibers, fibroblasts and calcium deposition were found, and the ossification of the ligamentum flavum was visible at the lamina attachment site. These findings indicate that the over-dose fluorides can lead to the degeneration and ossification of the ligamentum flavum in Sprague-Dawley rats, which may plan an important role in the ossification of the ligamentum flavum.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

Key words: Fluorine, Lumbar Vertebrae, Ligamentum Flavum

中图分类号:

R318

伊广坤，刘丽，李咸周. 过量氟化物致腰椎黄韧带的退变与骨化[J]. 中国组织工程研究, 2015, 19(33): 5301-5305.

Yi Guang-kun, Liu Li, Li Xian-zhou. Over-dose fluoride induces the degeneration and ossification of the ligamentum flavum[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2015, 19(33): 5301-5305.

图/表（结果） 3

2.1 实验动物数量分析实验选用大鼠30只，分为2组，实验过程无脱失，全部进入结果分析。 2.2 不同时间段两组大鼠牙釉质改变情况观察组3个月后有5只大鼠下门牙开始出现白垩色条纹或斑点，6个月后大鼠均出现氟斑牙，表现为广泛的白垩色，而对照组在3个月和6个月时均未出现牙釉质的改变，两组大鼠在3个月及6个月时氟斑牙发生率相比，差异有显著性意义(P < 0.05)。 2.3 不同时间段两组大鼠腰椎X射线改变情况观察组大鼠在3个月未见椎间孔后缘有明显的骨化影，但在6个月后X射线检查发现大鼠腰椎骨质密度明显增高，见图1。

2.4 不同时间段两组大鼠Ca²⁺、P³⁺含量和血清碱性磷酸酶活性水平比较观察组大鼠在3个月和6个月时其血清Ca²⁺均显著高于对照组，P³⁺显著低于对照组，差异均有显著性意义(P < 0.05)；且血清碱性磷酸酶的活性在3个月和6个月时均显著高于对照组，差异有显著性意义(P < 0.05)，见表1。

2.5 不同时间段两组大鼠骨密度比较经含氟蒸馏水喂养后，观察组大鼠腰椎骨密度在6个月时显著高于对照组，差异有显著性意义(P < 0.05)；而在3个月未出现显著改变，且全身骨密度在3 个月及6 个月时均未发生明显改变，见表2。

2.6 两组大鼠6个月后黄韧带苏木精-伊红染色结果观察组大鼠在6个月后，黄韧带中弹力纤维数量进一步减少，胶原纤维大量增生，大量的成纤维细胞与钙盐沉积，且在椎板附着处可见韧带骨化形成，见图2A，而对照组大鼠黄韧带增生、弹力纤维数量下降，排列分布杂乱，胶原纤维大量增生，在椎板附着处可见钙盐沉积，见图2B。

参考文献

[1] 何勍,阮狄克,侯黎升,等.单纯减压与减压融合内固定术治疗伴Ⅰ度退行性滑脱的腰椎管狭窄症的疗效比较[J].中国脊柱脊髓杂志, 2012,22(5):412-417．
[2] 马超,吴继彬,赵猛,等.不同手术方法治疗老年退变性腰椎滑脱合并腰椎管狭窄症疗效的比较[J].中华医学杂志,2012,92(9): 620-623．
[3] 许勇,陈仙,李利平,等.经皮椎间孔镜治疗腰椎管狭窄症的体会[J].中国骨与关节损伤杂志,2013,28(7):651-652．
[4] Lin Q, Zhou X, Wang X, et al. A comparison of anterior cervical discectomy and corpectomy in patients with multilevel cervical spondylotic myelopathy.Eur Spine J.2012;(03): 474-481.
[5] 张骁青,贾力,陈振. 两种内固定方法治疗Schatzker Ⅵ型胫骨平台骨折的临床分析[J].中国医药导报,2012,9(3):48-49.
[6] 曾志华. 锁定钢板内固定治疗胫骨平台骨折的疗效分析[J].中外医学研究,2012,10(1):32-33.
[7] 李强,赵建民,张元智,等.腰椎退变黄韧带中炎性细胞因子的表达[J].中国脊柱脊髓杂志,2011,21(1):63-66.
[8] 阮狄克.脊柱外科医师需重视防范腰椎手术并发症[J].临床误诊误治,2015,28(1):31-33.
[9] 黄聪超. 复杂性胫骨平台骨折手术治疗的临床分析[J].中国社区医师:医学专业,2012,14(2):122-123.
[10] 谭占超.黄韧带肥厚机制研究进展[J].医学综述,2012,18(6): 896-898.
[11] Altinkaya N,Yildirim T,Demir S. Factors associated with the thickness of the ligamentum flavum:is ligamentum flavum thickening due to hypertrophy or buckling.Spine(Phila Pa 1976).2011;(16):E1093-E1097.
[12] Li M,Meng H,Du J,et al. Management of thoracic myelopathycaused by ossification of the posterior longitudinal ligament combinedwith ossification of the ligamentum flavum-a retrospectivestudy.Spine J.2012;12(12):1093-1102．
[13] 袁海峰,乔永东,王自立,等.骨化的胸椎黄韧带中骨形成蛋白的表达、CT值测定与骨化成熟度的研究[J].中华外科杂志, 2006, 11(8):1381-1384.
[14] 赵伟光,刘振武,刘利,等.胸椎黄韧带骨化症与骨形态发生蛋白4基因单核苷酸多态性的关联[J].中国组织工程研究, 2012, 16(24): 4376-4380.
[15] 金蔚涛.人骨形态发生蛋白受体IA基因单核苷酸多态性与脊柱后纵韧带骨化的遗传关联及其成骨作用机制研究[D].首都医科大学,2013.
[16] Liu FJ,Chai Y,Shen Y,et al．Posterior decompression with transforaminal interbody fusion for thoracic myelopathy due toossification of the posterior longitudinal ligament and the ligamentum flavum at the same level.J Clin Neurosci.2013；20(4):570-575.
[17] Wang LF, Liu FJ, Zhang YZ,et al.Clinical results and intramedullary signal changes of posterior decompression with transforaminal interbody fusion for thoracic myelopathy caused by combined ossification of the posterior longitudinal ligament and ligamentum flavum. Chin Med J (Engl).2013; 126(20):3822-3827.
[18] 冯法博,孙垂国,陈仲强.胸椎黄韧带骨化症临床特点及定位诊断进展[J].中华骨科杂志,2015,35(1):83-90.
[19] Schneider GM, Jull G, Thomas K, et al. Intrarater and interrater reliability of select clinical terts in patients referred for diagnosticfacet joint blocks in the cervical spine.Arch Phys Med Rehabil.2013;94,(8):1628-1634.
[20] Hyun SJ, Riew KD, Rhim SC.Range of motion loss after cervicallaminoplasty: a prospective study with minimum 5-year follow updata. Spine.2013;13 (4):384-390.
[21] 上官磊,樊星,罗卓荆.黄韧带退变病理特点及机制的研究进展[J].中国矫形外科杂志,2009,17(7):512-514.
[22] 孟祥宇,夏建龙,杨挺,等.椎间盘退变的机制及修复[J].中国组织工程研究,2015,19(11):1768-1773.
[23] 张永利,王琦,郭亚茹.地方性氟骨症的脊柱MRI表现[J].中华放射学杂志,2004,38(10):1051-1055.
[24] 李玉洁,谢敏.针刺夹脊穴配合重灸督脉治疗地方性氟骨病1例[J].医学信息,2014,27(23):645-645.
[25] Pain B,Telfeian AE.A retrospective evaluation of the clinical successof transforaminal endoscopic discectomy with foraminotomy in geriatricpatients.Pain physician. 2013;16(3): 225-229.
[26] Gabriele P,Gina M,Albert E.Transforaminal endoscopic discectomy with foraminoplasty for the treatment of spondylolisthesis.Pain Physician.2014;17(6):E703-E710.
[27] 聂志红,孔凡磊,赵素香,等.单侧椎弓根螺钉对侧关节突螺钉固定黄韧带保留治疗腰椎退变性疾病的临床疗效[J].河北医科大学学报,2014,35(9):1015-1017.
[28] 黄卫国,海涌.退行性腰椎滑脱症与峡部裂性腰椎滑脱症患者的手术疗效比较[J].中国骨与关节杂志,2014,3(6):460-465.
[29] 杨林,鹿洪辉.椎间孔镜技术与开放手术在治疗伴有骨质疏松的腰椎管狭窄症的疗效及安全性比较[J].中华老年多器官疾病杂志,2014,13(7):507-511．
[30] 杨勇,刘刚,苏义拉图.单纯减压和减压内固定治疗退行性腰椎管狭窄症术后近期效果的比较[J].中国医药导报,2015,12(15): 84-87.
[31] 袁海峰,王自立,丁惠强等.骨桥蛋白在胸椎黄韧带骨化中的定位表达及其病因学意义[C].第九届西部骨科论坛，银川，2013.
[32] 张益民,姜鑫,郭永智,等.腰椎间盘退变与炎症介质[J].实用骨科杂志,2008,14(9):534-535.
[33] 王晓平,马华松,陆明,等.腰椎间盘退变中的细胞因子及炎症递质:文献分析与临床应用[J].中国组织工程研究,2012,16(33): 6239- 6243.
[34] 梁春祥,魏富鑫,刘少喻,等.颈椎后路双开门术式治疗外伤性无骨折脱位型颈脊髓损伤的效果[C].第二十四届全国脊柱脊髓学术会议,长春,2012.
[35] 马治国,娄宏亮,黄鑫,等.前后路联合手术治疗无骨折脱位型颈脊髓损伤合并颈椎间盘突出临床疗效观察[J].中国骨与关节损伤杂志,2012,27(1):40-41.
[36] 王哲,张俊华,王全平,等．胸椎黄韧带骨化与腰椎黄韧带退变的组织病理与超微结构比较研究[J].第四军医大学学报, 2002, 23(2): 177-178.
[37] 侯志攀,唐桂阳,沈景寿,等.胸椎黄韧带骨化症手术的远期疗效及其影响因素分析[J].医学信息,2015,28(4):257-258.
[38] 毛兆光,范顺武,赵凤东,等.退行性腰椎滑脱黄韧带病理组织学和免疫组织化学的观察[J].中国骨伤杂志,2009,18(1):32-34.
[39] 吴方云.双醋瑞因对大白兔肥厚黄韧带作用机制的病理免疫组化研究[J].实用医药杂志,2015,(6):535-537.
[40] 俞海明,李毅中.炎症在腰椎间盘退变、突出、吸收发病机制中的作用[J].国际骨科学杂志,2006,27(4):248-150.
[41] 李解,黄国付.水通道蛋白在腰椎间盘退变过程中作用的研究进展[J].中国康复,2015,30(3):233-235.
[42] 尚琦松,黄擘,盛文辉,等．炎性因子TNF-α及IL-18与椎间盘退变的相关性研究[J].中国矫形外科杂志,2009,17(5):386-387.
[43] 孙灰灰,吴小涛.TNF-α与椎间盘退变关系的研究进展[J].东南大学学报:医学版,2015,40(3):448-452.
[44] 赵序列.椎间盘退变的病因研究[J].中国矫形外科杂志, 2002, 9(3):273-274.
[45] 康新桂,吴小涛.碱性成纤维生长因子在椎间盘退变中作用的研究进展[J].东南大学学报:医学版,2015,40(3):425-428.

引言

黄韧带是脊柱后部的重要连接结构，位于相邻的椎弓之间，主要由弹力纤维构成，具有维持脊柱稳定的作用^[1]。一旦黄韧带退变导致其弹性下降，当脊柱后伸时黄韧带可出现皱褶或折叠而突入椎管，使椎管容积减少，尤其伴有椎间盘突出或关节突增生肥大时，在这些因素的共同作用下，可使椎管的有效空间更加减小，导致脊髓、神经根受压，出现神经症状，严重者可致瘫痪、病残^[2-3]。目前国内外对于该病的治疗主要以手术为主，同时辅助药物进行治疗，但术中减压加剧了病椎相邻椎体间的不稳定^[4]，从而对患者需要实施内固定治疗^[5-6]，给患者的日常生活带来严重的不便。且研究发现，并非所有患者术后都能获得满意的治疗效果^[⁷^]，据目前国内外报道腰椎术后失败综合征的发生率5%-20%不等^[8-9]，给患者带来极大的痛苦。近年来，黄韧带退行病变在椎管的发病学方面日益受到学者的重视^[10-11]，并且随着学科之间的交替发展，也从某种角度促进了学者对黄韧带的病理学及病因学的深入研究^[¹²^]。研究表明，椎管内黄韧带骨化是导致椎管狭窄的常见病因^[¹³^]，且认为黄韧带的退变与机体的老化、创伤、代谢异常和家族遗传等众多因素有关^[14-15]。尽管目前有许多相关黄韧带的研究，但黄韧带退变的病因至今仍尚未清楚^[^16-17^]。故黄韧带退变的病因及治疗是目前基础和临床研究的热点和重点^[18]。据文献报道，韧带骨化与氟中毒密切相关^[19]，提示氟化物参与韧带骨化。因此，阐明黄韧带退变的机制，探寻一种行之有效的预防和保守治疗方法，减少手术率，具有极大的社会效益和经济效益。本组研究采用SD雄性大鼠为研究对象，观察氟化物对大鼠腰椎黄韧带退变与骨化的作用，现将结果报道如下。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

材料方法

设计：随机对照动物实验。

时间及地点：实验于2014年4月至2015年4月在山东省济宁市第一人民医院完成。

材料：

实验动物：选取雄性SD大鼠30只，体质量100-150 g，按体质量均衡分组，实验组15只大鼠，自由进食，但饮用含NaF(质量分数为10^-4)蒸馏水，对照组自由进食，并给予等量的蒸馏水。

过量氟化物大鼠腰椎黄韧带的退变与骨化列出主要试剂及仪器：
试剂及仪器	来源
DEX - IQ 型双光子骨密度仪	美国Lunar公司
试剂A、B、C、D，PBS、苏木精染液、各种抗体	Sigma公司

实验方法：

骨与血清标本相关指标的检测：在大鼠饲养3，6个月时，采用乙醚麻醉。待大鼠完全麻醉(全身肌肉比较松弛)后，腹腔内动脉抽血，检测血清中Ca²⁺、P³⁺含量以及血清碱性磷酸酶活性，血清F-与P³⁺分别采用氟离子选择电极法与磷钼兰比色法测，血清Ca²⁺采用Zeeman火焰原子吸收光谱分析法测定，血清碱性磷酸酶活性采用IFCC推荐法(相关参数：测定波长：405 nm；分析类型：连续监测法，扣除试剂空白；孵育时间：1 min；延迟时间： 1 min；读数时间：3 min；第1试剂/样本/第2试剂比例：200/4/50)测定^[²⁰^]。

骨密度测定：大鼠处死前1 d，两组各随机抽取5只大鼠，采用乙醚麻醉，待大鼠完全麻醉(全身肌肉比较松弛)后，采用美国Lunar公司生产的DEX-IQ 型双光子骨密度仪(放射源为241 AM)进行全身扫描、记录、计算机自动分析骨矿密度(BMD)^[^21-22^]。

苏木精-伊红染色及镜下观察黄韧带：大鼠处死后，切除的黄韧带剔除骨、脂肪及筋膜等组织，修成约2 cm× 1.5 cm×0.3 cm，立刻放入体积分数4%甲醛溶液中固定24-48 h，取出后制备成石蜡切片。

按苏木精-伊红染色步骤及免疫组织化学染色(SP法)流程染色，固定后分别在低倍镜(×100)下观察两组苏木精-伊红切片。

苏木精-伊红染色步骤：将石蜡切片入二甲苯A中 15 min；二甲苯B中15 min；无水乙醇A中10 min；无水乙醇B中10 min；体积分数95%乙醇10 min；80%乙醇 10 min；流动的自来水冲洗5 min，不挂水珠为止；过中性PBS缓冲液；苏木精染液5-10 min；流动的自来水冲洗 5 min；1%盐酸乙醇溶液分化0.5-1.0 min；流动的自来水冲洗10 min；伊红水溶液1 min；流动的自来水冲洗5 min；体积分数80%乙醇30 s；95%乙醇A中2 min；95%乙醇B中5 min；无水乙醇A中15 min；无水乙醇B中15 min；二甲苯A中10 min；二甲苯B中10 min；用中性树胶一两滴封固，后进行镜下观察^[^23-24^]。

免疫组织化学染色步骤：将石蜡切片脱蜡和水化后，用PBS(pH为7.4)冲洗3次，3 min/次；用柠檬酸盐抗原修复液，微波处理，高温高压充分修复抗原，取出冷却至室温；每张切片滴加一滴或50 μL体积分数3%H₂O₂(试剂A)，室温下孵育10 min，以阻断内源性过氧化物酶；PBS冲洗3次，3 min/次；甩取PBS残留液，每张切片滴加一滴非免疫动物血清(试剂B)，室温下孵育10 min；甩取血清，每张切片滴加1滴第一抗体，室温下孵育60 min或4 ℃过夜；PBS冲洗3次，5 min/次；甩取残留的PBS液，每张切片滴加一滴第二抗体(试剂C)，室温下孵育10 min；PBS冲洗3次，3 min/次；甩取PBS液，每张切片滴加一滴50 μL的链霉菌抗生物素-过氧化物酶溶液(试剂D)，室温下孵育10 min；PBS冲洗3次，3 min/次；甩取PBS液，每张切片滴加2滴100 μL的DAB显色液，显微镜下观察3-10 min；自来水冲洗，苏木精复染，0.1%HCl分化，PBS冲洗返蓝；梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固^[^25-26^]。

主要观察指标：在不同的时间段观察两组大鼠牙釉质改变情况，同时在3个月和6个月时采用X射线观察大鼠腰椎的改变。同时分别于3，6个月后检测骨密度，血清、骨组织标本中Ca²⁺、P³⁺含量和血清碱性磷酸酶活性，并对两组大鼠黄韧带进行病理切片，苏木精-伊红染色镜下观察。

统计学分析：所有数据均采用x(_)±s表示，采用SPSS 17.0统计软件进行数据分析。组间比较采用t 检验进行数据分析，以α=0.05为检验水准，以P < 0.05为差异有显著性意义。

讨论

近年来，对黄韧带退行病变的研究越来越多，但其效果一般^[27-28]。黄韧带退行病变是指黄韧带退变为弹力纤维明显减少和胶原纤维的增生为主要组织病理学特征的增生肥厚改变，区别于黄韧带骨化和钙化^[^29-30^]。但目前对于黄韧带退变发生发展的机制仍然不是十分清楚^[31]。目前临床研究显示，黄韧带一旦退变或骨化，其失去正常柔软及预张力的特性，变为坚厚的纤维组织，甚至可厚达8-16 mm，并可皱褶或折叠而突入椎管，引起椎管狭窄，导致神经受压，严重时可致瘫痪^[^32-33^]。

目前临床研究证实，对于黄韧带退变和骨化的治疗，可能在手术的基础上配合药物治疗有一定的效果^[34-35]，但手术的适应症要求严格，部分患者因适应症的不符合而只能进行药物对症治疗；部分患者接受手术治疗后，其手术后的风险较高，因此给患者及社会带来巨大的影响。故及时了解病变的机制，如何治疗，是目前临床和基础研究的重点所在。已有研究证实，氟中毒有可能是黄韧带退行病变潜在致病因素之一^[^36-37^]，文献报道，在胸椎黄韧带骨化患者中，其中氟骨症患者占50%作用^[^38-39^]，且非氟骨症性骨化患者的黄韧带中，其氟含量较正常对照组显著增高，这说明氟含量的升高与韧带骨化相关。本组研究为进一步探讨氟化物在腰椎黄韧带退变和骨化中作用，对SD大鼠给予含NaF(质量分数为10^-⁴)蒸馏水进行饮用，结果发现，大鼠在3个月和6个月时其血清Ca²⁺均显著高于对照组，P³⁺显著低于对照组，差异均有显著性意义(P < 0.05)；且血清碱性磷酸酶的活性在3个月和6个月时均显著高于对照组，差异有显著性意义(P < 0.05)。这与临床氟骨症患者髂骨的骨化学分析结果一致。为观察氟化物对腰椎骨化情况，对两组大鼠进行骨密度的检查，结果发现，给予氟化物组的大鼠腰椎骨密度在6个月时显著高于对照组，差异有显著性意义(P < 0.05)；而在3个月未出现显著改变，且全身骨密度在3 个月及6 个月时均未发生明显改变，这说明氟化物对腰椎的作用较为显著，也提示氟化物可能通过降低腰椎的骨密度而导致黄韧带的骨化。为进一步明确过量的氟化物对腰椎黄韧带的影响，本组研究对给予过量氟化物的大鼠6个月后进行黄韧带的病理苏木精-伊红染色观察，结果发现，观察组大鼠黄韧带中弹力纤维数量进一步减少，胶原纤维大量增生，大量的成纤维细胞与钙盐沉积，且在椎板附着处可见韧带骨化形成。因此推测，氟可能是通过刺激退变黄韧带骨附着处增生小血管周围的未分化细胞，向成骨细胞分化、增殖从而导致韧带骨化的发生^[^40-41^]，从而对腰椎等椎骨有着显著的影响，也可能是腰椎增生性病理病变的基础。目前对于黄韧带退变发生发展的机制仍然不是十分清楚。研究发现：黄韧带肥厚程度与纤维化程度、弹性纤维减少程度均呈正相关^[^42-43^]。从而说明黄韧带的改变对要腰椎的退行性改变及炎症性改变有着重要的作用。而本组研究及前期的文献报道^[^44-45]，过量氟化物可能对黄韧带的蜕变和骨化有着显著的意义，从而说明过量氟化物可造成SD大鼠腰椎黄韧带的退变、骨化，可能在黄韧带的骨化中可能起重要作用。综上所述，过量氟化物可造成SD大鼠腰椎黄韧带的退变、骨化，可能在黄韧带的骨化中可能起重要作用，为后期如何进行药物的干预提供理论基础。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程