体外磁共振观察胎鼠神经干细胞的标记

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2015.32.026

摘要/Abstract

摘要：

背景：神经干细胞移植后的细胞存活、识别和迁移需动态监控。
目的：通过体外磁共振技术对胎鼠神经干细胞体外标记，为神经干细胞在神经系统修复中的应用提供依据。
方法：采用胎鼠神经干细胞的分离与培养标记、染色剂鉴定及神经干细胞的活性检测，构建大鼠脑缺血再灌注模型，采用超顺磁性氧化铁颗粒体外标记胎鼠的神经干细胞并移植至模型大鼠左侧脑内，未标记的胎鼠神经干细胞移植至右侧脑中，对标记的细胞进行普鲁士蓝染色，观察其定植和迁移情况，并通过磁共振示踪动态的监测神经干细胞在活体移植之后的信号改变情况。
结果与结论：超顺磁性氧化铁颗粒体外标记胎鼠神经干细胞的方法效率达95%以上，电镜结果显示超顺磁性氧化铁颗粒体外标记胎鼠的神经干细胞内含铁颗粒，且集中在溶酶体和内涵体当中，磁共振结果显示胎鼠标记的神经干细胞呈现低信号改变，细胞活性的影响与未标记组差异无显著性意义，但标记的胎鼠神经干细胞T2WI 与 T2*WI信号降低。证实超顺磁性氧化铁颗粒体外标记胎鼠的神经干细胞可高效表达，磁共振的监控可以用于神经干细胞的活体示踪。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

关键词: 干细胞, 培养, 超顺磁性氧化铁颗粒, 体外标记, 胎鼠, 神经干细胞, 磁共振, 活体示踪, 普鲁士蓝染色, 脑缺血再灌注损伤, 活体移植成像

Abstract:

BACKGROUND: It is necessary to dynamically monitor the survival, recognition and migration of neural stem cells after implantation.
OBJECTIVE: To in vitro label fetal rat neural stem cells using MRI technology so as to provide applied evidence of neural stem cells in nervous system repair.
METHODS: Fetal rat neural stem cells were isolated, cultured and labeled followed by identification and cell viability detection. A rat model of cerebral ischemia-reperfusion injury was established. Fetal neural stem cells labeled by superparamagnetic iron oxide particles in vitro were transplanted into the left brain of model rats, and unlabeled fetal rat neural stem cells transplanted into the right brain. Prussian blue staining was used to observe the colonization and migration of implanted neural stem cells. MRI tracing was employed to monitor the signal changes of neural stem cells dynamically after in vivo transplantation.
RESULTS AND CONCLUSION: Over 95% fetal rat neural stem cells were labeled successfully by superparamagnetic iron oxide particles, and under electron microscope, there were iron particles in labeled neural stem cells, which were concentrated in the lysosome and endosome. MRI results showed that the labeled neural stem cells had a changing trend of low signals. No difference was found in the cell viability between labeled and unlabeled cells, but T2WI and T2*WI signals were reduced in labeled neural stem cells. These findings confirm that superparamagnetic iron oxide-labeled fetal rat neural stem cells can highly express, and MRI tracing can be used for in vivo monitoring of neural stem cells.

Key words: Magnetite Nanoparticles, Neural Stem Cells, Magnetic Resonance Imaging

中图分类号:

R394.2

郑兆凤，王荣芳，王琦. 体外磁共振观察胎鼠神经干细胞的标记[J]. 中国组织工程研究, 2015, 19(32): 5225-5230.

Zheng Zhao-feng, Wang Rong-fang, Wang Qi. In vitro labeled neural stem cells of fetal rats: MRI observation[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2015, 19(32): 5225-5230.

图/表（结果） 4

参考文献

[1] Tsuchiya K, Chen Q, Ushida A, et al. The effect of coculture of chondrocytes with mesenchymal stem cells on their cartilaginous phenotype in vitro. Mater Sci Eng C. 2012; 24(3): 391-396.
[2] Hill JM, Dick AJ, Raman VK, et al. Serial cardiac magnetic resonance imaging of injected mesenchymal stem cells. Circulation. 2003;108(8):1009-1014.
[3] Weissleder R. Molecular imaging: exploring the next frontier. Radiology. 1999;212(3):609-614.
[4] Katritsis DG, Sotiropoulou PA, Karvouni E, et al. Transcoronary transplantation of autologous mesenchymal stem cells and endothelial progenitors into infarcted human myocardium. Catheter Cardiovasc Interv. 2005;65(3):321-329.
[5] Baklanov DV, Demuinck ED, Thompson CA, et al. Novel double contrast MRI technique for intramyocardial detection of percutaneously transplanted autologous cells. Magn Reson Med. 2004;52(6):1438-1442.
[6] Schächinger V, Aicher A, Döbert N, et al. Pilot trial on determinants of progenitor cell recruitment to the infarcted human myocardium. Circulation. 2008;118(14):1425-1432.
[7] Sutton EJ, Henning TD, Pichler BJ, et al. Cell tracking with optical imaging. Eur Radiol. 2008;18(10):2021-2032.

[8] Lee SW, Padmanabhan P, Ray P, et al. Stem cell-mediated accelerated bone healing observed with in vivo molecular and small animal imaging technologies in a model of skeletal injury. J Orthop Res. 2009;27(3):295-302.
[9] Neri M, Maderna C, Cavazzin C, et al. Efficient in vitro labeling of human neural precursor cells with superparamagnetic iron oxide particles: relevance for in vivo cell tracking. Stem Cells. 2008;26(2):505-516.
[10] Santamaria-Martínez A, Barquinero J, Barbosa-Desongles A, et al. Identification of multipotent mesenchymal stromal cells in the reactive stroma of a prostate cancer xenograft by side population analysis. Exp Cell Res. 2009;315(17):3004-3013.
[11] Frank JA, Miller BR, Arbab AS, et al. Clinically applicable labeling of mammalian and stem cells by combining superparamagnetic iron oxides and transfection agents. Radiology. 2003;228(2):480-487.
[12] Friedenstein AJ. Precursor cells of mechanocytes. Int Rev Cytol. 1976;47:327-359.
[13] Zhang RP,Zhang K,Li JD,et al.In vivo tracking of neuronal-like cells by magnetic resonance in rabbit models of spinal cord injury.Neural Regen Res. 2013;8(36): 3373-3381.
[14] Markus A, Patel TD, Snider WD. Neurotrophic factors and axonal growth. Curr Opin Neurobiol. 2002;12(5):523-531.
[15] Pittenger MF, Mackay AM, Beck SC, et al. Multilineage potential of adult human mesenchymal stem cells. Science. 1999;284(5411):143-147.
[16] Campagnoli C, Roberts IA, Kumar S, et al. Identification of mesenchymal stem/progenitor cells in human first-trimester fetal blood, liver, and bone marrow. Blood. 2001;98(8): 2396-2402.
[17] Mahmood A, Lu D, Wang L, et al. Intracerebral transplantation of marrow stromal cells cultured with neurotrophic factors promotes functional recovery in adult rats subjected to traumatic brain injury. J Neurotrauma. 2002;19(12):1609- 1617.
[18] Saito T, Kuang JQ, Lin CC, et al. Transcoronary implantation of bone marrow stromal cells ameliorates cardiac function after myocardial infarction. J Thorac Cardiovasc Surg. 2003; 126(1):114-123.
[19] Coenegrachts K, Matos C, ter Beek L, et al. Focal liver lesion detection and characterization: comparison of non-contrast enhanced and SPIO-enhanced diffusion-weighted single-shot spin echo echo planar and turbo spin echo T2-weighted imaging. Eur J Radiol. 2009;72(3):432-439.
[20] Santoro L, Grazioli L, Filippone A, et al. Resovist enhanced MR imaging of the liver: does quantitative assessment help in focal lesion classification and characterization? J Magn Reson Imaging. 2009;30(5):1012-1020.
[21] Liu ZH,Li SL,Liang ZB,et al.Targeting β-secretase with RNAi in neural stem cells for Alzheimer’s disease therapy.Neural Regen Res. 2013;8(33): 3095-3106.
[22] Grazioli L, Bondioni MP, Romanini L, et al. Superparamagnetic iron oxide-enhanced liver MRI with SHU 555 A (RESOVIST): New protocol infusion to improve arterial phase evaluation--a prospective study. J Magn Reson Imaging. 2009;29(3):607-616.
[23] 谭延斌,武新英,张景峰,等.超顺磁性氧化铁对血管内皮细胞的生物学影响及其磁共振成像效应[J].浙江大学学报(医学版),2010, 39(2):118-124.
[24] 谢辉,朱艳红,杨海,等.偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒对大鼠脑胶质瘤的成像研究[J].生物物理学报,2009(S1):309-311.
[25] 张勤惠,姜启玉,顾海鹰.超顺磁性氧化铁对肝脏MR成像效果的影响[J].中国医学影像技术,2010,26(10):1809-1813.
[26] Frank JA, Miller BR, Arbab AS, et al. Clinically applicable labeling of mammalian and stem cells by combining superparamagnetic iron oxides and transfection agents. Radiology. 2003;228(2):480-487.
[27] Bulte JW, Zhang S, van Gelderen P, et al. Neurotransplantation of magnetically labeled oligodendrocyte progenitors: magnetic resonance tracking of cell migration and myelination. Proc Natl Acad Sci U S A. 1999;96(26): 15256-15261.
[28] Arbab AS, Bashaw LA, Miller BR, et al. Characterization of biophysical and metabolic properties of cells labeled with superparamagnetic iron oxide nanoparticles and transfection agent for cellular MR imaging. Radiology. 2003;229(3):838- 846.
[29] Ishii K, Yoshida Y, Akechi Y, et a l. Hepatic differentiation of human bone marrow-derived mesenchymal stem cells by tetracycline-regulated hepatocyte nuclear factor 3beta. Hepatology. 2008;48(2):597-606.
[30] 刘佳,赵江民,张蕾,等.超顺磁性氧化铁标记大鼠骨髓间充质干细胞的研究[J].同济大学学报,2010,31(5):31-35.
[31] 陈舒怿,古宏晨,吴强,等.超顺磁性铁纳米颗粒标记对视网膜前体细胞体外培养的影响[J].国际眼科杂志,2008,8(5):913-915.
[32] 何庚戌,要彤,幺雯,等.超顺磁性氧化铁作为细胞标记试剂的可行性研究[J].华北国防医药,2009,21(2):9-11.
[33] 陈长青,王小宜,陈晨,等.SPIO标记脂肪干细胞移植治疗大鼠脑梗死的磁共振示踪成像研究[J].磁共振成像,2010,1(2):50-54.
[34] Sun JH, Zhang YL, Qian SP, et al. Assessment of biological characteristics of mesenchymal stem cells labeled with superparamagnetic iron oxide particles in vitro. Mol Med Rep. 2012;5(2):317-320.
[35] Kim TH, Kim JK, Shim W, et al. Tracking of transplanted mesenchymal stem cells labeled with fluorescent magnetic nanoparticle in liver cirrhosis rat model with 3-T MRI. Magn Reson Imaging. 2010;28(7):1004-1013.
[36] 许杰华,李丹,于春鹏,等.SPIO标记下大鼠骨髓间充质干细胞生物学特性及多向分化潜能及体外MR成像[J].中山大学学报(医学科学版),2009,30(2):142-147.
[37] Chen YC, Hsiao JK, Liu HM, et al. The inhibitory effect of superparamagnetic iron oxide nanoparticle (Ferucarbotran) on osteogenic differentiation and its signaling mechanism in human mesenchymal stem cells. Toxicol Appl Pharmacol. 2010;245(2):272-279.
[38] Kostura L, Kraitchman DL, Mackay AM, et al. Feridex labeling of mesenchymal stem cells inhibits chondrogenesis but not adipogenesis or osteogenesis. NMR Biomed. 2004;17(7): 513-517.
[39] Ju S, Teng G, Zhang Y, et al. In vitro labeling and MRI of mesenchymal stem cells from human umbilical cord blood. Magn Reson Imaging. 2006;24(5):611-617.

引言

中枢神经系统的再生能力有限，由于创伤、退行性神经系统疾病的治疗仍是目前的一个难题，随着神经生物学研究的不断深入，神经干细胞的抑制修复成为了可能^[1-2]。大量研究证实，神经干细胞具有多项分化的潜能，可分化为神经胶质细胞及神经元等，参与神经损伤的修复，可作为组织工程修复的理想种子细胞^[3-5]。神经干细胞的体内定植和迁移问题是决定其发挥治疗作用的关键，也是近年来的热门研究问题^[3-5]。目前细胞示踪技术已应用于干细胞迁移定植的研究中，其中应用较多的为荧光染料标记，如溴脱氧尿苷及绿色荧光蛋白，但是该示踪方法不能提供活体的实时迁移动态信息，需要处死宿主才能获得实验结果^[6-8]。而在活体状态下运用细胞影像学技术对移植的干细胞进行监控，可更好的对干细胞的迁移定植及组织修复情况进行综合的评估，同时还可以进一步探索治疗的时间窗及细胞种类，提高治疗的效率^[9-10]。目前主要应用的影像学技术包括核磁共振、光学成像、核医学检测三类方法，都能了解细胞的归巢和迁移情况^[11-13]。良好的标记探针应当具备较长的半衰期，且能够长时间的成像，要求生物相容性较高，重要的是没有毒副反应，能够准确的标记到所需的靶细胞，准确定位是定量分析其效率的关键所在，同时还应当具有较强的分辨率及信噪比，以降低非特异性的信号干扰^[14]。核磁共振具有较强的分辨率及空间判断能力，且观察较为方便，可以选择任意层面的成像结果，采集信息较为全面，并且无放射性，已广泛应用于活体生物的干细胞移植后靶向迁移的观察监控^[15]。超顺磁性氧化铁的发明明显提高了动态观察活体示踪的能力，外加磁场通过超顺磁性氧化铁颗粒产生巨大的磁矩，磁离子随着运用使磁极方向重新随机排列，缩短了组织显像时间^[16]。超顺磁性氧化铁颗粒体外标记已通过了美国食品药品监督管理局的批准，其安全性和有效性已被证实，且在体内的分布存在一定特异性，通过标记之后，机体的血浆蛋白会与超顺磁性氧化铁颗粒体外标记物结合之后调节和识别内皮系统，该物质主要沉积在网状内皮细胞当中，因此可作为良好的内皮系统对比剂^[17]，但是在神经干细胞研究中报道较少，且目前采用超顺磁性氧化铁颗粒体外标记作为对比剂进行核磁成像的体外研究已经取得了较好的影像学效果^[15^，^18]，也为体内实验提供了一定的研究基础，但是体内研究还有待进一步证实。因此实验拟运用超顺磁性氧化铁颗粒体外标记的胎鼠神经干细胞，并移植于活体动物体内，通过磁共振示踪的方式进行观察以了解神经干细胞标记在磁共振成像中的可行性，旨在为神经干细胞移植修复神经损伤奠定基础。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

材料方法

设计：体内实验，磁共振动态评估。

时间及地点：实验于2014年6月至2015年6月在潍坊医学院神经分子实验室完成。

材料：

动物：约孕18 d的清洁级SD孕鼠15只用于胎鼠神经干细胞提取分离，四五周龄的SD大鼠40只(雌雄各半)，饲养环境：温度26 ℃，湿度70%，光照时间14 h，用于造局灶性脑缺血再灌注模型。实验动物均由潍坊医学院实验动物中心提供，动物许可证号SCXK(鲁)20050015。实验通过潍坊医学院动物伦理委员会的审核批准。

体外磁共振观察胎鼠神经干细胞的标记实验用主要试剂及仪器：
试剂及仪器	来源
鸡卵白蛋白，戊巴比妥钠	美国Sigma公司
DMEM培养基，胎牛血清	美国Gibco公司
SABC-FITC、SABC-CY3	Biolegend公司
PBS，流式试剂盒	武汉博士德生物有限公司
细胞培养超净台	苏州净化公司
细胞培养箱	美国Queue systems公司
光学显微镜	日本奥林巴斯公司
高转速冷冻离心机	德国BiofugeStratos公司
冰箱	日本松下公司
高压消毒箱	美国Tuttnauer公司
流式细胞仪	美国伯乐公司
计算机图像分析系统	澳大利亚Rotor-gene公司
头颅定向仪	西北光学仪器厂

方法：

胎鼠神经干细胞的分离与培养：孕鼠麻醉采用腹腔静脉麻醉的方法，经过医院动物伦理委员会申请通过允许本实验的开展，体外分离胎鼠大脑的海马组织，以DMEM培养基悬浮组织，1 000 r/min离心5 min，弃上清后采用完全培养基进行重悬，计数板计数之后，将细胞浓度调整到5×10⁹ L^-¹，接种在培养瓶中，放置于37 ℃，体积分数5%的CO₂培养箱单重进行贴壁培养，3 d换液1次，当融合至90%以上时进行传代培养，传代培养参照已有实验方法。

胎鼠神经干细胞的体外标记：将1.5 g/L的多聚赖氨酸和20 g/L超顺磁性氧化铁颗粒加入到不含血清的培养基当中，使浓度分别到达预值，通过振荡器1 h的孵育之后，加入等体积的细胞培养基当中，多聚赖氨酸与超顺磁性氧化铁颗粒预值的浓度分别调整到200 mg/L以及0.75 mg/L，通过培养箱16 h的培养孵育之后，去除原有的培养基，并进行细胞洗涤之后，去除掉原有的转染试剂。

染色剂鉴定：取之前培养标记过的细胞(标记组)及未采用胎鼠神经干细胞体外标记的细胞(未标记组)，分别去除培养基后进行普鲁士蓝染色：4%戊二醛固定细胞，洗涤后用2%的亚铁氯化钾的盐酸溶液孵育30 min，胰酶消化，离心，2%的戊二醛固定，乙醇梯度脱水，环氧树脂包被，样品进行切片，切片厚度约为2 mm，枸橼酸铅及乙酸双氧铀双重染色，光镜观察。

神经干细胞的活性检测：细胞以PBS洗涤2次后，收集悬浮细胞，加入1 μL的Annexin V-FITC及5 μL PI，避光 10 min后，使用流式细胞仪检测细胞活性。

不同质量浓度超顺磁性氧化铁颗粒体外磁共振对胎鼠神经干细胞成像检测：检测不同浓度超顺磁性氧化铁颗粒对胎鼠神经干细胞磁共振成像的影响，分别将不同质量浓度(0，50，100，200，500，1 000 mg/L)的超顺磁性氧化铁颗粒加入到胎鼠神经干细胞中，运用琼脂糖悬浮，使用4.7T磁共振T2WI与 T2*WI轴成像进行检测，观察每组的信号强弱及变化情况。

缺血再灌注大鼠模型构建：采用线栓法制备脑缺血再灌注模型，取直径0.26-0.28 mm尼龙线60 mm，一端烧灼成光滑球面，并在距离球面18 mm处作标记，浸泡在体积分数75%的乙醇中备用。大鼠造模前禁食24 h，10%水合氯醛3 mL/kg腹腔注射麻醉后固定于手术台上，颈部正中切口，暴露右侧颈总动脉颈内动脉、颈外动脉。分离主干至翼腭动脉，并在其起始部和近心端各置一动脉夹。将颈外动脉残端轻拉向下，剪约0.2 mm小口，轻推尼龙线尾端沿颈内动脉入颅，至大脑中动脉，用玻璃分针调整方向，以便线栓顺利进入约18 mm，栓塞45 min拉出尼龙线，使血流再灌。缝合切口后，待苏醒后进行神经功能障碍评分以判断是否造模成功。

标记胎鼠神经干细胞移植后体内核磁成像检测：采用四五周龄的已造好局灶性脑缺血再灌注模型的SD大鼠进行水合氯醛麻醉，使用头颅定向仪进行固定后头颅钻孔，手术切开头皮，将矢状缝、冠状缝及硬脑膜暴露，将标记好的胎鼠的神经干细胞悬浮处理之后，浓度控制在1×10⁶通过定位注射50 μL到大鼠的左侧脑半球中，注射完毕之后留针5 min，钻孔处采用骨蜡封闭处理，在大鼠的另一侧半球进行同样浓度及剂量的未标记神经干细胞的注射，两侧均缝合处理。对大鼠注射免疫抑制剂环孢素A，并在移植后的1周内对脑部进行磁共振扫描。

主要观察指标：标记神经干细胞的形态及其在活体内的迁移变化。

统计学分析：所有采集的数据应用SPSS21.0统计软件进行分析。其中对符合正态分布资料的数据采用x(_)±s表示，遵循正态分布而且方差齐性，超顺磁性氧化铁颗粒标记对神经干细胞活性的影响的两两比较采用LSD检验，P < 0.05为差异有显著性意义。

讨论

神经干细胞是来源确切且具有免疫伦理等优势的干细胞，已有研究发现通过移植神经干细胞可以用于修复中枢神经系统^{[4-5，19-21]}。利用核磁共振影像学手段在活体示踪干细胞的研究是近年来深入探讨干细胞修迁移复作用的重要方法^[22-24]。随着影像学技术的不断发展，核磁共振成像技术已经广泛应用于临床当中且取得了长足的进展，在扫描种类、图像质量、时间分辨率等方面都具有其独特的优势^[25-28]。对比剂作为成像机制的重要方面，可以通过增强与周围组织的差异对比，实现早期诊断疾病的目的。超顺磁性氧化铁是目前研究较为热门的核磁成像对比剂，具有较高的组织相容性及典型的晶体结构，可以明显缩短靶组织对T2值的反应时间^[29-30]。其表面带有负电荷，可与带负电荷的细胞膜相互接触产生排斥反应，在非处理条件进行标记效果更为理想。目前主要采用转染试剂、受体、脂质体介导的方法对超顺磁性氧化铁颗粒进行修饰以提高标记的效率。研究表明超顺磁性氧化铁颗粒只是特异性存在于标记的细胞内，随着时间延长其含量表达会随之减弱，通过多聚赖氨酸等正电荷转染包被后，可以提高标记的效率，适用范围较广泛，细胞代谢及细胞活性并不受影响^[31-33]。鉴于以上研究基础，本实验采用多聚赖氨酸包被超顺磁性氧化铁颗粒，中和细胞表面负电荷以减少对细胞膜的排除作用，明显提高超顺磁性氧化铁颗粒标记的效率。接着通过普鲁士蓝染色，电镜观察和磁共振监控等方法来；评价超顺磁性氧化铁颗粒的标记效果及磁共振显示表达差异性。实验结果显示，普鲁士蓝在标记后的神经干细胞中具有较高的染色效率，可能与其胞吞作用有关，同时还考虑到标记后氧化铁对细胞生物学产生一定的影响^[34]。本实验通过不同浓度的刺激，在凋亡实验中并未产生生物学损伤。以往研究发现分裂快的细胞标记浓度应当增加，这样可以满足示踪的要求，同时减轻染料对细胞的影响^[35]。神经干细胞标记后的活体示踪目的是为了观察在活体内的干细胞迁移和表达情况，通过核磁共振的信号强弱的变化对干细胞的凋亡及分布情况进行监控，以进一步了解其对神经系统的修复情况^[36]。通过体外模拟环境，对超顺磁性氧化铁颗粒标记后的神经干细胞进行标记，通过体外的核磁共振扫描，以了解核磁共振信号会随着浓度的增加而减弱的规律性，初步证实超顺磁性氧化铁颗粒的标记使用与核磁共振的相关序列扫描，但是当浓度达到一定高度时却别并不明显，考虑可能与细胞内氧化铁质量浓度即将达到饱和有关^[37]。已有研究发现细胞外游离的超顺磁性氧化铁颗粒与细胞内的超顺磁性氧化铁颗粒之间的比较在磁共振的信号值的表达上是存在一定的差异性的，与细胞内铁的含量有着密切的相关性^[38-39]。本实验通过体外到体内的标记磁共振成像实验，发现在1周的时候磁共振的信号一直处于较低的水平，提示了超顺磁性氧化铁颗粒在活体部位仍然存在，其具有较长的半衰期，同时超顺磁性氧化铁颗粒的量随着细胞代谢及分类而表现出不断减少，一些细胞还出现了凋亡分解，考虑与铁离子游离到细胞之外有关。铁离子可能被其他的巨噬细胞吞噬造成假低信号的出现，但是考虑在机体正常铁离子也会被肝脏代谢，脾脏吸收的，所以由吞噬造成的影响可能性较小。本实验通过观察脑缺血再灌注大鼠脑内标记的细胞核磁共振信号情况，对干细胞的迁移定植情况进行了初步的探查，结果显示神经干细胞超顺磁性氧化铁颗粒标记方法阳性染色率达95%以上，电镜结果显示超顺磁性氧化铁颗粒体外标记胎鼠的神经干细胞内含铁颗粒，且集中在溶酶体和内涵体当中，磁共振结果显示胎鼠标记的神经干细胞呈现低信号改变，细胞活性的影响与未标记组比较无统计学差异，标记之后胎鼠神经干细胞T2WI与T2*WI信号降低。标记与未标记之间具有可靠的对比性，且在观察的1周内未发现神经干细胞有明显的迁移现象，也说明了干细胞的趋化性，对特异性损伤部位的修复能力，也可能与大鼠脑组织中缺乏微环境的趋化因子有一定关系。将会在接下来的研究中进一步探讨移植标记神经干细胞在脑缺血再灌注模型中分化和迁移研究，对神经干细胞移植治疗研究提供依据。
杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；中国组织工程研究组织工程