脐血间充质干细胞移植治疗多发性肌炎/皮肌炎：Th细胞因子的变化

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2015.14.010

中国组织工程研究 ›› 2015, Vol. 19 ›› Issue (14): 2186-2191.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2015.14.010

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脐血间充质干细胞移植治疗多发性肌炎/皮肌炎：Th细胞因子的变化

赖勤¹，余莲¹，邱永荣²，陈隆天¹，黄建清¹，李玉闽³，张力⁴，吴维颢¹，吴爱瑜¹，罗必华¹，田畔¹

福建医科大学附属龙岩第一医院，龙岩市第一医院，¹血液风湿科，²骨科，³输血科，⁴妇产科，福建省龙岩市 364000

修回日期:2015-03-13 出版日期:2015-04-02 发布日期:2015-04-02
通讯作者: 余莲，主任医师，教授，硕士生导师，福建医科大学附属龙岩第一医院，龙岩市第一医院血液风湿科，福建省龙岩市 364000 邱永荣，主任医师，教授，福建医科大学附属龙岩第一医院，龙岩市第一医院骨科，福建省龙岩市 364000
作者简介:赖勤，男，1969年生，福建省永定县人，汉族，1992年福建医科大学毕业，副主任医师，主要从事风湿免疫性疾病的临床及实验研究。并列第一作者：余莲，女，1962年生，汉族，主任医师，教授，硕士生导师，主要从事血液风湿病临床与实验研究。
基金资助:
福建省医学创新课题(2011-CXB-29)；福建医科大学非直属附属医院科学研究发展专项基金(FZS13011Y)；福建省龙岩市重点科技项目(2012LY116)

Umbilical cord blood mesenchymal stem cells transplantion for polymyositis/dermatomyositis: variation of Th cytokines

Lai Qin¹, Yu Lian¹, Qiu Yong-rong², Chen Long-tian¹, Huang Jian-qing¹, Li Yu-min³, Zhang Li⁴, Wu Wei-hao¹, Wu Ai-yu¹, Luo Bi-hua¹, Tian Pan¹

¹Department of Hematology and Rheumatology, ²Department of Orthopedics, ³Department of Blood Transfusion, ⁴Department of Obstetrics, Longyan First Hospital, Affiliated Longyan First Hospital of Fujian Medical University, Longyan 364000, Fujian Province, China

Revised:2015-03-13 Online:2015-04-02 Published:2015-04-02
Contact: Yu Lian, Department of Hematology and Rheumatology, Longyan First Hospital, Affiliated Longyan First Hospital of Fujian Medical University, Longyan 364000, Fujian Province, China Qiu Yong-rong, Chief physician, Professor, Department of Orthopedics, Longyan First Hospital, Affiliated Longyan First Hospital of Fujian Medical University, Longyan 364000, Fujian Province, China
About author:Lai Qin, Associate chief physician, Department of Hematology and Rheumatology, Longyan First Hospital, Affiliated Longyan First Hospital of Fujian Medical University, Longyan 364000, Fujian Province, China Yu Lian, Chief physician, Professor, Master’s supervisor, Department of Hematology and Rheumatology, Longyan First Hospital, Affiliated Longyan First Hospital of Fujian Medical University, Longyan 364000, Fujian Province, China Lai Qin and Yu Lian contributed equally to this work.
Supported by:
Fujian Medical Innovation Subject, No. 2011-CXB-29; the Special Fund for Non-Affiliated Hospitals of Fujian Medical University, No. FZS13011Y; Key Technology Projects of Longyan City, No. 2012LY116

摘要/Abstract

摘要：

背景：近年来，应用干细胞治疗免疫性疾病已成为研究热点，国内外有关脐血间充质干细胞移植治疗多发性肌炎/皮肌炎的报道较少。

目的：观察脐血间充质干细胞移植治疗多发性肌炎/皮肌炎患者血清干扰素γ、白细胞介素4、白细胞介素17水平变化，探讨Th细胞因子在多发性肌炎/皮肌炎发生发展中的免疫机制。

方法：81例多发性肌炎/皮肌炎患者，其中44例为常规治疗组，给予糖皮质激素联合免疫抑制剂治疗，37例为脐血间充质干细胞移植组，静脉输注脐血间充质干细胞(3.5-5.2)×10⁷，用药方案与常规治疗组相同。随访治疗后1，3，6 个月肌酸激酶、肌力变化及治疗后3，6个月肺部影像学改变，并在治疗前及治疗后3，6个月检测移植组Th细胞因子水平。

结果与结论：①两组治疗后1，3，6个月与治疗前比较肌酸激酶值明显下降、肌力评分明显增高(均P < 0.001)；移植组治疗后各时间点肌酸激酶值较常规治疗组低、肌力评分较常规治疗组高(均P < 0.001)。②脐血间充质干细胞移植治疗能明显改善肺部影像学异常，且安全性好。③移植治疗后6个月干扰素γ水平显著升高，而白细胞介素4水平显著下降(均P < 0.01)；移植治疗后 3，6 个月白细胞介素17水平显著下降(均P < 0.01)。④移植治疗后6个月白细胞介素4、白细胞介素17水平与肌酸激酶水平成正相关(r=0.467和0.488，均P < 0.05)；干扰素γ水平与肌酸激酶水平无明显相关(r=0.213，P > 0.05)。结果表明给予糖皮质激素及免疫抑制剂治疗同时，联合脐血间充质干细胞移植治疗多发性肌炎/皮肌炎安全、有效，可调节多发性肌炎/皮肌炎患者免疫网络效应、改善免疫耐受。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

全文链接：

关键词: 干细胞, 移植, 多发性肌炎/皮肌炎, 脐血间充质干细胞, Th细胞因子, 干扰素γ, 白细胞介素4, 白细胞介素17

Abstract:

BACKGROUND: In recent years, the application of stem cells to treat autoimmune diseases has become a hot spot. But, studies on umbilical cord blood mesenchymal stem cells transplantation for the treatment of polymyositis/dermatomyositis are rarely reported.

OBJECTIVE: To explore the immunologic mechanism of Th cytokines on the occurrence and development of polymyositis/dermatomyositis by observing the changes in serum interferon-γ, interleukin-4 and interleukin-17 in patients after umbilical cord blood mesenchymal stem cells transplantation.

METHODS: Eighty-one polymyositis/dermatomyositis patients were selected and divided into conventional therapy group (n=44) undergoing glucocorticoid and immunosuppressants therapy and cell transplantation group (n=37) undergoing intravenous infusion of umbilical cord blood mesenchymal stem cells at a density of (3.5-5.2 )×10⁷. Dosing regimen was same in the two groups. After follow-up of 1, 3, 6 months, the changes of creatine kinase and myodynamia were evaluated; after follow-up of 3 and 6 months, lung imaging was evaluated; in the cell transplantation group, interferon-γ, interleukin-4 and interleukin-17 levels were detected before treatment and at 3 and 6 months after treatment.

RESULTS AND CONCLUSION: At 1, 3, 6 months after treatment, the creatine kinase level was significantly decreased, and the muscle force grade was significantly increased in both groups (both P < 0.001). Compared with the conventional therapy group, the creatine kinase level was lower and the muscle force grade was higher in the cell transplantation group (both P < 0.001). Results from lung imaging test showed a remarkable improvement after cell transplantation, and it indicated that umbilical cord blood mesenchymal stem cells transplantation had good stability. At 6 months after transplantation, the level of interferon-γ was significantly increased, while the interleukin-4 level was decreased significantly (both P < 0.01); at 3, 6 months after cell transplantation, the levels of interleukin-17 were significantly decreased (P < 0.01). Levels of interleukin-4 and interleukin-17 were positively correlated with the level of creatine kinase at 6 months after cell transplantation (r=0.467, 0.488, both P < 0.05), but there was no obvious correlation between the levels of interferon-γ and creatine kinase (r=0.213, P > 0.05). These findings indicate umbilical cord blood mesenchymal stem cells transplantation combined with glucocorticoid and immunosuppressants therapy can adjust immune network effects and improve the immune tolerance in polymyositis/dermatomyositis patients, which is safe and effective.

全文链接：

Key words: Polymyositis, Dermatomyositis, Cord Blood Stem Cell Transplantation, Interferon-gamma, Interleukin-4, Interleukin-17

中图分类号:

R394.2

赖勤，余莲，邱永荣，陈隆天，黄建清，李玉闽，张力，吴维颢，吴爱瑜，罗必华，田畔. 脐血间充质干细胞移植治疗多发性肌炎/皮肌炎：Th细胞因子的变化[J]. 中国组织工程研究, 2015, 19(14): 2186-2191.

Lai Qin, Yu Lian, Qiu Yong-rong, Chen Long-tian, Huang Jian-qing, Li Yu-min, Zhang Li, Wu Wei-hao, Wu Ai-yu, Luo Bi-hua, Tian Pan. Umbilical cord blood mesenchymal stem cells transplantion for polymyositis/dermatomyositis: variation of Th cytokines[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2015, 19(14): 2186-2191.

图/表（结果） 5

2.1 参与者数量分析及临床信息 81例多发性肌炎/皮肌炎患者，治疗后2个月内死亡4例，其中移植组1例于移植1个月后死于心力衰竭；常规治疗组3例于治疗后2个月内死于呼吸衰竭2例、死于心力衰竭1例。77例患者(移植组36例，常规治疗组41例)均获得随访，随访时间6-12个月，平均8.5个月，均进入结果分析。

2.2 脐血间充质干细胞移植疗效评估

2.2.1 脐血间充质干细胞移植前后血清肌酸激酶变化移植组和常规组治疗前血清肌酸激酶值比较，差异无显著性意义(P > 0.05)；治疗后1，3，6个月两组血清肌酸激酶值比较，差异均有显著性意义(均P < 0.001)。治疗后各时间点两组肌酸激酶值均较治疗前显著下降，差异有显著性意义(均P < 0.001)，见表1。

2.2.2 脐血间充质干细胞移植前后肌力变化两组患者治疗后肌无力症状均有不同程度的改善。采用炎性疾病的手工肌力评分法，即MMT8法进行肌力评分^[10]。两组治疗前患者肌力评分比较，差异无显著性意义(P > 0.05)；治疗后1，3，6个月两组肌力评分比较，差异均有显著性意义(均P < 0.001)。治疗后各时间点两组肌力评分均较术前显著降低，差异均有显著性意义(均P < 0.001)，见表2。

2.2.3 脐血间充质干细胞移植治疗对肺间质性病变的影响 77例多发性肌炎/皮肌炎患者治疗前后肺部高分辨CT检查，治疗前符合肺间质性病变：常规组21例，移植组24例。治疗6个月复查肺间质病变明显改善：常规组6例(29%，6/21)，移植组16例(67%，16/24)，移植组治疗效果明显优于常规组(P < 0.05)，见图1。

2.3 Th细胞血清因子检测

2.3.1 治疗前多发性肌炎/皮肌炎患者血清Th细胞因子水平 77例多发性肌炎/皮肌炎患者治疗前血清干扰素γ水平较健康组低(P < 0.05)，白细胞介素4、白细胞介素17水平均较健康组高(均P < 0.05)，见表3。

2.3.2 移植组治疗前后多发性肌炎/皮肌炎患者血清Th细胞因子水平变化 36例多发性肌炎/皮肌炎患者脐血间充质干细胞移植治疗后3个月干扰素γ水平升高，但差异无显著性意义(P > 0.05)，6个月显著升高，差异有显著性意义(P < 0.01)；治疗后3个月白细胞介素4水平下降，但差异无显著性意义(P > 0.05)，6个月显著下降，差异有显著性意义(P < 0.01)；治疗后 3，6 个月白细胞介素17水平较治疗前均明显下降(均P < 0.01)，见表4。

2.3.3 移植组治疗6个月后血清Th细胞因子与肌酸激酶水平相关性分析移植组36例治疗后血清白细胞介素4、白细胞介素17水平与肌酸激酶水平成正相关(r=0.467和0.488，均 P < 0.05)；干扰素γ水平与肌酸激酶水平无明显相关性(r=0.213，P > 0.05)。

2.4 安全性评估 36例多发性肌炎/皮肌炎患者脐血间充质干细胞移植后未发生相关移植并发症，所有患者治疗后1，3，6个月随访查血常规、尿常规、肝肾功均在正常范围内。

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引言

特发性炎性肌病是一组以骨骼肌非化脓性炎症性伴肌纤维变性、坏死为特征的自身免疫性疾病，具有异质性和获得性，还可累及其他脏器，其中肺为最常受累的脏器，而且间质性肺病是影响预后的重要因素。特发性炎性肌病的确切病因和发病机制并不十分清楚，但众多研究提示免疫反应的异常可能是特发性炎性肌病发生、发展的中心环节，研究提示T淋巴细胞介导的细胞免疫可能是多发性肌炎肌肉组织损伤的主要发病机制^[1-2]，而T、B淋巴细胞参与的体液免疫在皮肌炎发病中可能起更主要的作用^[3]。多发性肌炎和皮肌炎为特发性炎性肌病的亚型^[4]。近年来，国外对多发性肌炎/皮肌炎中各种细胞因子的研究已成热点，人们试图从分子水平更深入地了解多发性肌炎/皮肌炎的发病机制，预测疾病活动度及相关临床意义。细胞因子是一类由各种免疫细胞和炎症反应活化的非免疫细胞产生的具有多种生物学功能的多肽和糖蛋白。近些年来研究发现，细胞因子在自身免疫性疾病中的作用是多方面的，表现为不同的细胞因子与不同的自身免疫性疾病的发生发展、严重程度、预后有关，同一种细胞因子在相同的自身免疫性疾病的不同阶段也有不同的作用。脐血间充质干细胞是具有高度自我更新和多向分化潜能的成体干细胞，它可以分化为肌肉、骨、血管、肝、胰的细胞等^[5]。Lu等^[6]发现脐血间充质干细胞不表达CD58、CD14、CD34、CD44、CD29、SH2、SH3、HLA-DR等造血干细胞的表面标志物，也不表达CD80、CD86，而CD80、CD86是移植物抗宿主病的最重要的共同刺激通路B7/CD28的信号分子，这就意味着脐血间充质干细胞具有免疫耐受特点。Hao等^[7]通过建立大鼠模型研究表明脐血间充质干细胞具有免疫调节能力。本研究通过Luminex液相芯片法检测多发性肌炎/皮肌炎患者脐血间充质干细胞移植前后与Th细胞相关的细胞因子水平，探讨Th细胞因子在多发性肌炎/皮肌炎发生发展中的免疫机制，为多发性肌炎/皮肌炎寻找新的治疗方法。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程
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材料方法

设计：临床对照观察。

时间及地点：于2011年4月至2015年2月在福建医科大学附属龙岩第一医院完成。

对象：选择住院的多发性肌炎/皮肌炎患者81例，其中多发性肌炎54例，皮肌炎27例。

诊断标准：所有患者均符合Bohan和Peter^[8]关于特发性炎性肌病的诊断标准：①对称性近端肌无力表现：肢带肌和颈前伸肌对称性无力，持续数周至数月，伴或不伴食道或呼吸道肌肉受累。②肌肉活检异常：肌纤维变性、坏死，细胞吞噬、再生、嗜碱变性，核膜变大，核仁明显，筋膜周围结构萎缩，纤维大小不一，伴炎性渗出。③血清肌酶升高：血清肌酶升高，如肌酸激酶、醛缩酶、丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶和乳酸脱氢酶。④肌电图示肌原性损害：肌电图有三联征改变，即时限短、小型的多相运动电位；纤颤电位，正弦波；插入性激惹和异常的高频放电。⑤典型的皮肤损害：a眶周皮疹：眼睑呈淡紫色，眶周水肿；b Gottron氏征：掌指及近端指间关节背面的红斑性鳞屑疹；c膝、肘、踝关节、面部、颈部和上半身出现的红斑性皮疹。

多发性肌炎/皮肌炎判定标准：确诊多发性肌炎应符合所有①-④条标准；拟诊多发性肌炎应符合①-④条中的任何3条标准；可疑多发性肌炎符合①-④条中的任何2条标准。确诊皮肌炎应符合第5条加①-④条中的任何3条标准；拟诊肌炎应符合第5条及①-④条中的任何2条标准；可疑皮肌炎应符合第5条及①-④条中的任何1条标准。

多发性肌炎/皮肌炎疾病处于活动期的判断标准^[9]：①具备肌病活动的临床表现之一：a有明显的四肢近端肌痛和(或)肌无力；b新出现的与肌病相关的内脏受累表现，如胸闷、气促、吞咽困难等；c皮肌炎患者出现新的典型皮疹或原有皮疹加重。②肌病活动的实验室检查证据：血清肌酶谱包括肌酸激酶、醛羧酶、乳酸脱氢酶、丙氨酸转氨酶和天冬氨酸转氨酶中至少2项升高。③排除其他原因引起的肌无力和肌酶升高。

纳入标准：①所有研究对象均为福建医科大学附属龙岩市第一医院血液风湿科住院患者。②符合1975年Bohan/Peter的诊断标准。③处于疾病活动期。

排除标准：有哮喘、荨麻疹、湿疹、糖尿病、高血压、肝病、冠心病、器官移植、肿瘤、其他急慢性感染性疾病者。

受试对象根据患者自愿原则分配到脐血间充质干细胞移植治疗组(移植组)和常规治疗组(常规组)。移植组37例，男19例，女18例；年龄22-68岁，平均40岁；病程最短3个月，最长49个月，平均33个月。常规组44例，男19例，女25例；年龄18-70岁，平均38岁；病程最短2个月，最长53个月，平均31个月。

另选取健康体检志愿者36名作为健康对照组，男18名，女18名；年龄20-65岁，年龄、性别、种族与患者组相匹配。

试验方案和流程遵循1975年赫尔辛基宣言，并通过医院伦理委员会审批，所有受试者均签署知情同意书。

方法：

脐血供者(产妇)的选择：年龄在22-30周岁的孕妇，怀孕期间各项检查指标正常，无孕期并发症，健康表的各项指标合格，新生儿体质量≥3 000 g。

脐血采集前准备：

供者(产妇)知情：签署《脐带血采集知情同意书》，填写《孕妇健康调查表》。在采集过程中完善、填写《脐带血供者健康调查、脐带血采集记录表》。

采集前检查项目：梅毒、艾滋病病毒、EB病毒、G细胞病毒、甲、乙、丙肝病毒检测均阴性，血糖、肝肾功能均正常。

脐血采集方法：孕妇胎盘娩出后(剖腹产)清洁状态下迅速采集脐血80-150 mL于采血袋中，CPDA抗凝，迅速送至百级层流实验室，应用加拿大威尔森公司提供脐血细胞分离试剂盒采用密度梯度离心法严格按操作程序分离脐血间充质干细胞。干细胞制备完成后，取10 μL用全自动仪和配套标准的血培养瓶进行细菌和真菌检测。药用生理盐水洗涤3次后，用生理盐水重悬细胞制备成干细胞悬液制剂。

脐血间充质干细胞含量检测：采用溴芬蓝染色法计数活细胞数目，使用血常规计数仪计数单个核细胞总数。干细胞制备完成后，将细胞悬液用微量加样枪抽取少许，装 3 mL试管，流式细胞仪分析检测，鉴定干细胞表面标记CD90、CD105阳性率≥95%，CD14、CD34、CD45、HLA-DR等阳性率≤2%，计数获得脐血间充质干细胞为(3.5-5.2)×10⁷。

治疗方法：常规治疗组44例患者个体化以糖皮质激素为主，联合免疫抑制剂治疗6个月。移植组37例患者静脉输注脐血间充质干细胞(3.5-5.2)×10⁷，同时按常规治疗组药物使用方案。移植后均采用移植前原方案药物逐渐递减至维持剂量治疗。

疗效评价：两组患者于治疗前后对临床表现、肺部影响学表现、移植相关并发症及试验室检查指标如血常规、尿常规、肌酶谱、肝功能、肾功能等方面进行评价。

Th相关细胞因子检测：

采集样本和分离血清：无菌采集77例多发性肌炎/皮肌炎患者治疗前及治疗3，6个月时和健康对照组静脉血5 mL，室温静置2 h，待其析出血清，离心(500 r/min，共10 min)后吸取上层血清，分装至Eppendorf管中，置于-80 ℃冰箱保存。

Luminex液相芯片法检测干扰素γ、白细胞介素4、白细胞介素17水平：按说明书中所述操作步骤用Human Cytokine Magnetic Bead Panel Kit(德国MILLIPLEX公司)检测。

主要观察指标：①脐血间充质干细胞移植后血清肌酸激酶水平，肌力和肺间质性病变改善情况。②脐血间充质干细胞移植后多发性肌炎/皮肌炎患者血清Th细胞因子水平变化。

统计学分析：采用SPSS 17.0统计软件包进行分析。符合正态分布的计量资料数据以x(_)±s表示，组间比较采用配对t 检验，计数资料用χ²检验，P < 0.05为差异有显著性意义。不符合正态分布的计量资料采用中位数(四分位间距)表示。细胞因子水平的比较不符合正态分布，方差不齐，采用非参数检验(Kruskal Wallis Test)；相关细胞因子与肌酸激酶水平相关性采用Spearman直线相关分析，P < 0.05为差异有显著性意义。

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讨论

间充质干细胞是具有高度自我更新和多向分化潜能的成体干细胞，来源于中胚层，广泛存在于全身结缔组织和器官间质中。2000年时Erics等^[11]最早报道了脐血间充质干细胞，它是中胚层发育的早期细胞，具有多向分化潜能，形态和生物学特点与骨髓源性间充质干细胞相似，且脐血间充质干细胞有别于造血干细胞的独特免疫调节特性。Hao等^[7]通过建立急性移植物抗宿主病大鼠模型，对人类脐血间充质干细胞移植组和对照组大鼠 MHC-Ⅱ、MHC-Ⅰ、CD11、CD80、CD86、DC、CD4⁺T淋巴细胞的表达水平和生存期进行了比较，结果显示人类脐血间充质干细胞具有免疫调节能力。研究表明自身免疫性疾病是造血干细胞异常导致的一组异常多克隆T、B淋巴细胞病，所以通过造血干细胞移植，破坏原来的异常免疫系统，恢复正常的免疫机制，有可能从根本上治愈自身免疫性疾病，且在临床上取得了一定的效果^[12-13]。

多发性肌炎/皮肌炎是一种自身免疫性疾病，目前发病机制仍不明确，有研究认为其发病与Th细胞作用有一定关系，根据Th细胞分泌的相关细胞因子不同，可将其分为Th1、Th2亚群，它们之间的平衡在免疫应答的调节中起着关键的作用。Th1型细胞主要介导与细胞毒和局部炎症有关的免疫应答，参与细胞免疫及迟发型超敏性炎症，主要分泌肿瘤坏死因子α、干扰素γ和白细胞介素2等，以干扰素γ为主；Th2细胞主要刺激B细胞增生，产生抗体，参与体液免疫，主要分泌白细胞介素4、白细胞介素5、白细胞介素6、白细胞介素10等，以白细胞介素4为主。在健康人体中Th1/Th2型细胞处于平衡状态，多发性肌炎/皮肌炎患者表现出Th2亚群优势^[14-15]。本研究观察到患者在脐血间充质细胞移植治疗后3个月干扰素γ水平上升，6个月显著升高，白细胞介素4水平显著下降，这种变化是在脐血间充质干细胞移植治疗后出现的，推测此时的Th1亚群及分泌的某个相关促炎因子下调，白细胞介素4水平上升预示着可能同时Th2在上调，说明脐血间充质干细胞可以调整Th亚型细胞的平衡，对多发性肌炎/皮肌炎患者临床症状的缓解起促进作用。

Park和Harrington等在2005年认识到Th17是一种独特的CD4⁺T细胞亚群，在某些抗感染免疫和诱导自身免疫性炎症中发挥关键作用^[16]，如类风湿关节炎、系统性硬化等^[17-18]。Th17细胞通过分泌其最重要效应分子白细胞介素17参与介导免疫调节、宿主防御和自身免疫。Th17细胞与其他 CD4⁺T细胞亚型之间存在复杂的相互调控网络^[19]，特别是Th17细胞和Treg细胞间存在着复杂密切的交互关系，它们可以在功能上相互拮抗，在分化发育过程中相互联系。有研究表明，人体外周循环中的Foxp3⁺Treg细胞可表达Th17细胞系特异性转录因子RORYt，并可在激活状态下产生白细胞介素17，且Tregs产生白细胞介素17的同时伴随着免疫抑制功能的丧失，也有研究表明促炎细胞因子环境可以促使Foxp3⁺Treg向分泌白细胞介素17因子的细胞转变^[20]，且白细胞介素17水平可以使Th17/Treg平衡发生变化，在自身免疫性疾病中发挥重要作用，如类风湿性关节炎^[21-22]。目前有研究发现肌炎患者肌肉组织有较高的白细胞介素17表达，而且依肌肉组织炎性程度的不同，白细胞介素17也有不同程度的表达，炎性程度越重，白细胞介素17表达越多^[23]。本研究发现脐血间充质干细胞治疗后3，6 个月白细胞介素17较治疗前明显下降，且白细胞介素17与肌酸激酶成正相关，基于Th17/Treg的关系，可间接反应输注脐血间充质干细胞可以上调Treg，调节多发性肌炎/皮肌炎患者的免疫耐受，这对于患者自身病态免疫网络有重要的调控作用。

间质性肺疾病是多发性肌炎/皮肌炎最常见的并发症，可在疾病发生过程中的任何时候出现^[24]，其发生率为23.1%-65%^[25]，是影响患者预后的最重要因素之一，国外文献报道间质性肺疾病是多发性肌炎/皮肌炎最常见死亡原因^[26-28]。目前临床上以常规的激素联合免疫抑制剂治疗的疗效不尽如人意。本研究应用脐血间充质干细胞移植治疗多发性肌炎/皮肌炎合并肺间质病变6个月后复查能明显改善肺部影像学异常，说明脐血间充质干细胞移植治疗多发性肌炎/皮肌炎合并肺间质病变有较好的疗效。

多发性肌炎/皮肌炎治疗以糖皮质激素为主，维持剂量较大，且联合免疫抑制剂治疗后不良反应更为明显。而间充质干细胞通过其免疫抑制作用可以很好的改善其临床症状，正如本次研究显示移植组治疗后各时间点肌酸激酶值较常规治疗组低，肌力评分较常规治疗组高。另外多发性肌炎/皮肌炎患者用常规的治疗方案会出现免疫功能低下，易发生感染，诱导抗原特异性的移植耐受才是克服移植排斥反应最理想方式。间充质干细胞具有的低免疫原性，属于未分化的干细胞，同种异体移植无排斥反应或反应较弱。国内学者报道应用脐血间充质干细胞治疗严重性系统红斑狼疮、类风湿性关节炎等自身免疫性疾病取得了较好的疗效^[29-31]。本研究通过随访观察到脐血间充质细胞治疗患者减少了糖皮质激素及免疫抑制剂的不良反应，且所有患者治疗前及治疗后1，3，6个月随访查血常规、尿常规、肝肾功均在正常范围内，可得出脐血间充质干细胞移植安全性好。

综上所述，Th1、Th2、Th17等细胞功能紊乱在多发性肌炎/皮肌炎发生、发展中起着重要作用，是T细胞分泌不同细胞因子相互作用的网络效应，参与了免疫病理过程，因此重点研究细胞因子调节网络效应，及进一步了解脐血间充质干细胞以何种途径在免疫网络效应中发挥的作用，更有助于阐明多发性肌炎/皮肌炎的免疫发病机制，进而了解间充质干细胞治疗多发性肌炎/皮肌炎有效作用的机制，为多发性肌炎/皮肌炎寻找新的治疗方法。

脐血间充质干细胞移植治疗多发性肌炎/皮肌炎：Th细胞因子的变化

Umbilical cord blood mesenchymal stem cells transplantion for polymyositis/dermatomyositis: variation of Th cytokines

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