蛛网膜下腔阻滞不影响脐血单个核细胞向神经细胞的分化

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2014.19.014

中国组织工程研究 ›› 2014, Vol. 18 ›› Issue (19): 3036-3041.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2014.19.014

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蛛网膜下腔阻滞不影响脐血单个核细胞向神经细胞的分化

张毓文¹，张晓庆¹，周宁²，刘兴元²

上海市同济医院，¹麻醉科，²儿科，上海市 200065

修回日期:2014-03-05 出版日期:2014-05-07 发布日期:2014-05-07
通讯作者: 张晓庆，副教授，上海市同济医院麻醉科，上海市 200065
作者简介:张毓文，女，1984年生，黑龙江省鹤岗市人，汉族，2009年同济大学毕业，硕士，主治医师，主要从事围产期麻醉相关研究及小儿心脏手术相关研究。
基金资助:
上海市卫生局科研项目资助(2009139)

Subarachnoid block has no influence on neural differentiation potential of mononuclear cells in the cord blood

Zhang Yu-wen¹, Zhang Xiao-qing¹, Zhou Ning², Liu Xing-yuan²

¹Department of Anesthesiology, ²Department of Pediatrics, Tongji Hospital, Shanghai 200065, China

Revised:2014-03-05 Online:2014-05-07 Published:2014-05-07
Contact: Zhang Xiao-qing, Associate professor, Department of Anesthesiology, Tongji Hospital, Shanghai 200065, China
About author:Zhang Yu-wen, Master, Attending physician, Department of Anesthesiology, Tongji Hospital, Shanghai 200065, China
Supported by:
the Scientific Research Project of Shanghai Health Bureau, No. 2009139

摘要/Abstract

摘要：

背景：有学者认为麻醉状态可提高脐血采集分离质量，目前尚无蛛网膜下腔阻滞对脐血单个核细胞向神经干细胞及星形胶质细胞分化影响的研究。
目的：观察蛛网膜下腔阻滞对新生儿脐血单个核细胞向神经干细胞及星形胶质细胞方向分化的影响。
方法：选择顺产新生儿及蛛网膜下腔阻滞剖宫产新生儿脐血标本各20份，分别列为对照组及研究组，在胎儿娩出后抽取脐血分离接种脐血单个核细胞，并进行体外培养，每份标本常规培养3 d后分别进行非诱导分化培养和向神经细胞方向诱导分化培养。对培养前后细胞进行神经干细胞、星形胶质细胞标志性Nestin、GFAP抗原免疫组化鉴定。
结果与结论：蛛网膜下腔阻滞剖宫产新生儿脐血单个核细胞诱导分化培养后表达Nestin、GFAP抗原阳性细胞，与顺产新生儿比较差异无显著性意义(P > 0.05)。结果显示蛛网膜下腔阻滞对新生儿脐血单个核细胞向神经干细胞及星形胶质细胞方向分化没有影响。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

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关键词: 干细胞, 脐带脐血干细胞, 蛛网膜下腔阻滞, 新生儿, 脐血, 单个核细胞, 神经细胞, 星形胶质细胞

Abstract:

BACKGROUND: Some scholars believe that anesthesia can improve the quality of cord blood separation and collection, and subarachnoid block is commonly used in cesarean section, but there is no research on the influence of subarachnoid block on differentiation potential of mononuclear cells into neural stem cells and astrocytes.
OBJECTIVE: To study the influence of subarachnoid block on differentiation potential of mononuclear cells in the cord blood of neonates into neural stem cells and astrocytes.
METHODS: Mononuclear cells isolated from 20 neonates delivered spontaneously and 20 neonates born by cesarean delivery undergoing subarachnoid block were cultured in vitro, acting as control group and study group. After delivery, cord blood samples were taken to isolate and culture mononuclear cells in vitro. After 3 days of routine culture, the cells were subject to non-induced culture and induced differentiation into neural stem cells. The cultured cells were identified by the cell makers Nestin and glial fibrillary acidic protein with immunohistochemistry identification.
RESULTS AND CONCLUSION: The Nestin and glial fibrillary acidic protein showed no difference between the two groups after induced differentiation (P > 0.05), indicating subarachnoid block has no impact on the differentiation of mononuclear cells in the cord blood from neonates into neural stem cells and astrocytes.

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Key words: subarachnoid space, anesthesia, obstetrical, fetal blood, glial fibrillary acidic protein, intermediate filament proteins

中图分类号:

R394.2

张毓文，张晓庆，周宁，刘兴元 . 蛛网膜下腔阻滞不影响脐血单个核细胞向神经细胞的分化[J]. 中国组织工程研究, 2014, 18(19): 3036-3041.

Zhang Yu-wen, Zhang Xiao-qing, Zhou Ning, Liu Xing-yuan. Subarachnoid block has no influence on neural differentiation potential of mononuclear cells in the cord blood[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2014, 18(19): 3036-3041.

图/表（结果） 2

2.1 常规培养下脐血单个核细胞形态学观察和生长特点 脐血单个核细胞于贴壁前为类圆形细胞，透光度好。接种后24 h左右开始变扁并贴壁。通过体外单层培养及更换为分化培养液时适当洗涤培养板除去不贴壁的红细胞及活性差的细胞等杂细胞，余下生长的细胞为活性好的脐血单个核细胞(图1A，B)。细胞贴培养板壁均匀生长。

2.2 分化培养下细胞形态学观察和生长特点 分化培养后细胞逐渐发生形态改变，可见间充质样细胞、破骨样细胞及神经元样细胞出现。通过体外培养，在一定的诱导分化条件下可以使脐血单个核细胞发生显著形态学改变。细胞在分化培养24 h后即开始出现延长，部分呈成纤维样细胞。后续培养过程中，细胞形态渐呈多样化，部分细胞胞浆不规则突起，呈神经元样改变。而继续常规培养的对照组未见明显胞浆突起样细胞。

连续动态观察培养板内细胞生长特点：倒置相差显微镜下观察，刚接种的脐血单个核细胞呈小的圆形或椭圆形，大小较均一。接种24 h后可见三四个变扁、贴壁的细胞；刚贴壁时呈单个、分散细胞，接种后72 h大部分细胞贴壁。细胞贴壁后改为分化培养基培养，培养24 h后部分细胞体积增大，部分出现小的胞浆突起，呈圆形、卵圆形或“逗号”样。分化培养72 h后大多数贴壁细胞长出胞浆突起，并可见细胞分裂，研究组更为明显。随着分化培养时间延长，研究组细胞突起增多，部分突起进一步延长，部分长出次级突起，渐呈神经元样细胞。对照组仅大多数表现为细胞变长以梭形细胞为主，胞浆丰富，细胞核大、居中，核仁明显，呈成纤维样细胞形态，平行生长或漩涡生长者居多，培养板中渐出现粒细胞样、破骨细胞样形态不规则细胞。图1-3为倒置相差显微镜下观察不同培养时间培养板内细胞形态。

2.3 蛛网膜下腔阻滞对脐血单个核细胞中神经干细胞的影响 对照组及研究组免疫组化结果显示，脐血单个核细胞Nestin抗原阳性细胞组间差异无显著性意义(P > 0.05)。

2.4 蛛网膜下腔阻滞对脐血来源细胞向神经干细胞及星形胶质细胞分化能力的影响 分化培养第10天，两组非诱导分化培养后神经干细胞表面标志Nestin抗原阳性细胞比例较培养前上升，两组诱导分化培养后上升更显著。对照组非诱导分化培养与诱导分化培养后相比差异有显著性意义(P < 0.01)；研究组非诱导分化培养与诱导分化培养后相比差异有显著性意义(P < 0.01)。对照组诱导分化培养与研究组诱导分化培养后比较差异无显著性意义(P > 0.05)，见表1，图1，2。

对照组脐血单个核细胞不表达星状胶质细胞表面标志GFAP抗原，分化培养第10天两组非诱导分化培养后仅少数细胞表达GFAP抗原，两组诱导分化培养后部分细胞表达GFAP抗原。对照组非诱导分化培养与诱导分化培养相比差异有显著性意义(P < 0.01)；研究组非诱导分化培养与诱导分化培养相比差异有显著性意义(P < 0.01)。研究组诱导分化培养与对照组诱导分化培养比较差异无显著性意义(P > 0.05)，见表1，图3。

参考文献

[1] Park KI. Transplantation of neural stem cells: cellular & genetherapy for hypoxic-ischemic brain injury. Yonsei Med J. 2000; 41:825-835.
[2] 栾佐,尹国才,胡晓红,等.人神经干细胞移植治疗重度新生儿缺氧缺血性脑病一例[J].中华儿科杂志, 2005,43(8): 580-583.
[3] 屈素清,栾佐,尹国才,等.新生鼠缺氧缺血性脑损伤后经脑室人神经干细胞移植的实验研究[J].中华儿科杂志,2005,43(8): 576-579.
[4] 屈素清,栾佐,尹国才,等.新生鼠缺氧缺血性脑损伤后内源性神经干细胞的增殖及迁移[J].中华小儿外科杂志,2005,26(5): 260-263.
[5] 栾佐.新生动物及其缺血性脑损伤神经干细胞移植的研究现状[J].中华儿科杂志,2004,42(4):305-307.
[6] Lee MW, Choi J, Yang MS,et al. Mesenchymal stem cells from cryopreserved human umbilical cord blood. Biochem Biophys Res Commun. 2004;320(1):273-278.
[7] 杜江榕,谢君辉,张军宏,等.人脐带血采集数量和质量的影响因素研究[J].吉林医学, 2007, 28(5): 641-642.
[8] Bieback K, Kern S, Klüter H,et al. Critical parameters for the isolation of mesenchymal stem cells from umbilical cord blood. Stem Cells. 2004;22(4):625-634.
[9] Reynolds BA, Weiss S.Generation of neurons and astrocytes from isolated cells of the adult mammalian central nervous system.Science. 1992;255(5052):1707-1710.
[10] Buzańska L, Machaj EK, Zab?ocka B,et al.Human cord blood-derived cells attain neuronal and glial features in vitro.J Cell Sci. 2002;115(Pt 10):2131-2138.
[11] 许遵鹏,廖灿,刘斌,等.脐血库建立中脐血筛选标准的制定及意义[J].中华器官移植杂志,2001,22(6):342-344.
[12] Shibata M, Kato T, Awaya T,et aChronic immune-mediated axonal polyneuropathy following umbilical cord blood transplant for childhood-onset cerebral adrenoleukodystrophy.Pediatr Transplant. 2012;16(8):E388-391.
[13] Gärtner A, Pereira T, Alves MG,et al.Use of poly(DL-lactide-ε-caprolactone) membranes and mesenchymal stem cells from the Wharton's jelly of the umbilical cord for promoting nerve regeneration in axonotmesis: in vitro and in vivo analysis.Differentiation. 2012;84(5):355-365.
[14] Taguchi A, Soma T, Tanaka H,et al.Administration of CD34+ cells after stroke enhances neurogenesis via angiogenesis in a mouse model.J Clin Invest. 2004;114(3):330-338.
[15] Atanassova V, Atanassova M, Nikolov A,et al.Influence of obstetric factors on the quality of cord blood units collected for allogeneic transplantation.Akush Ginekol (Sofiia). 2012;51(2): 11-16.
[16] 杜冀晖,张鲍虎,李蓉,等.人脐血干细胞蛛网膜下腔移植向神经干细胞分化的初步研究[J].国际检验医学杂志,2008,29(8): 676-678.
[17] 李静,王春芳,王晓霞,等.人脐血间充质干细胞诱导分化为神经细胞的研究[J].中国组织化学与细胞化学杂志,2007,16(6):625- 630.
[18] 王磊.脐血间充质干细胞定向诱导分化为神经细胞的研究进展[J].中国微侵袭神经外科杂志,2013,18(7):334-336.
[19] 潘丽杰,陈妍,袁杰,等.脐血间充质干细胞的分离培养鉴定及诱导分化研究[J].中国美容医学,2013,22(7):735-738.
[20] 武晓华,陈乃耀.人脐血间充质干细胞向多巴胺能神经元分化的体外诱导[J].中国组织工程研究,2012,16(49):186-19.
[21] 陈镭,陈冰,谢福堂.诱导脐血间充质干细胞向神经元样细胞分化[J].中国组织工程研究,2012,16(23):4335-4338.
[22] 赵迪诚,杜鹃,陈红,等.脐血间充质干细胞诱导向神经元样细胞分化的实验研究[J].现代生物医学进展,2011,11(24):4837-4840.
[23] 喻永涛,姜志峰,冯素银,等.人脐血间质干细胞向神经元样细胞诱导分化促进大鼠脊髓损伤神经恢复[J].江苏医药,2011,37(22): 2609-2612.
[24] 陈乃耀,张江,王大力,等.维甲酸联合脑源性神经生长因子体外诱导人脐血间充质干细胞向神经样细胞定向分化的实验研究[J].中国全科医学,2010,13(9):947-949.
[25] 黄伟,苗宗宁,陈镭,等.脑源性神经营养因子和睫状神经营养因子单独或联合体外诱导人脐带血来源的间充质干细胞向神经样细胞分化[J].中国组织工程研究与临床康复,2010,14(19):3606- 3610.
[26] 范亚珍,王军, 陈海,等.脐血单个核细胞体外向神经干细胞的诱导及Foxg1基因的表达[J].山东医药,2010,50(11):13-15.
[27] 王晓莉,赵岩松,李耀武,等.人脐血单个核细胞移植在缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑内的迁移及分化[J].中国组织工程研究与临床康复,2009,13(32):6259-6262.
[28] 李晓丰,侯萍,李革飞,等.人脐血单个核细胞体外定向诱导向神经干细胞分化[J].中国组织工程研究与临床康复,2008,12(51): 10142-10146.
[29] 向静,王昌铭,王景周.脐血单个核细胞体外定向分化为神经干细胞及其致瘤性的实验研究[J].中国医药导报,2007,4(26): 14-16,22.
[30] 徐虹,马希峰,阮丽荣,等.人脐血间充质干细胞体外诱导分化为神经元样细胞[J].基础医学与临床,2007,27(3):298-301.
[31] Warwick RM, Barbara JA.Safety aspects of cord blood banking.Bone Marrow Transplant. 1998;21 Suppl 3:S40-42.
[32] McGuckin CP, Forraz N, Allouard Q,et al.Umbilical cord blood stem cells can expand hematopoietic and neuroglial progenitors in vitro.Exp Cell Res. 2004;295(2):350-359.
[33] 徐蓉,刘波,段答,等.脐血单个核细胞移植治疗痉挛型小儿脑性瘫痪的安全性[J].中国组织工程研究,2012,16(41):7787-7790.
[34] 杜玲,杨华强,王娜,等.脐血间充质干细胞移植治疗儿童型脊肌萎缩症1例[J].中国组织工程研究与临床康复,2011,15(36): 6837-6840.
[35] 杨万章,吴芳,张敏,等.脐血源神经干细胞移植治疗神经系统疾病临床总结和分析[J].中西医结合心脑血管病杂志,2009,7(3): 287-290.
[36] 吴芳,杨佳勇,张敏,等.脐血间充质干细胞移植对脑性瘫痪儿童神经系统功能的影响:20例分析[J].中国组织工程研究与临床康复, 2008,12(16):3198-3200.
[37] 王利培,姜红.人脐血干细胞向神经细胞定向诱导及移植治疗大鼠缺氧缺血性脑损伤[J].中国组织工程研究与临床康复,2007, 11(7):1317-1320.
[38] 周毅,王景周.神经系统疾病中应用人脐血细胞对损伤的修复作用[J].中国临床康复,2005,9(9):153-155.
[39] 尚凤伟,王军,侯艳艳,等.神经干细胞移植对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织Foxg1基因表达的影响[J].中华物理医学与康复杂志,2013,35(5):337-341.
[40] 颜小华,余珍,刘伟,等.脐血间充质干细胞移植修复缺氧缺血损伤新生大鼠的脑功能[J].中国组织工程研究,2012,16(45): 8445- 8452.
[41] 朱登纳,张博爱,王军,等.脐血源性神经干细胞移植对缺血缺氧性脑损伤新生大鼠的治疗作用[J].江苏医药,2010,36(24):2932- 2934.
[42] Fan CG, Zhang QJ, Tang FW,et al. Human umbilical cord blood cells express neurotrophic factors.Neurosci Lett. 2005; 380(3):322-325.
[43] Lee OK, Kuo TK, Chen WM,et al. Isolation of multipotent mesenchymal stem cells from umbilical cord blood.Blood. 2004;103(5):1669-1675.
[44] Lendahl U, Zimmerman LB, McKay RD.CNS stem cells express a new class of intermediate filament protein.Cell. 1990;60(4):585-595.
[45] Reynolds BA, Weiss S.Generation of neurons and astrocytes from isolated cells of the adult mammalian central nervous system.Science. 1992;255(5052):1707-1710.
[46] Buzańska L, Machaj EK, Zab?ocka B,et al.Human cord blood-derived cells attain neuronal and glial features in vitro.J Cell Sci. 2002;115(Pt 10):2131-2138.
[47] Bieback K, Kern S, Klüter H,et al.Critical parameters for the isolation of mesenchymal stem cells from umbilical cord blood.Stem Cells. 2004;22(4):625-634.
[48] 周毅,王景周,周萍,等.人脐血单个核细胞中Nestin阳性细胞表达及其临床意义[J].第三军医大学学报,2005,27(8):773-775.
[49] Jacobs VR, Niemeyer M, Gottschalk N,et al.Private umbilical cord blood banking does not reduce the number of samples for scientific stem cell research.Z Geburtshilfe Neonatol. 2005;209(6):223-227.
[50] Brazelton TR, Rossi FM, Keshet GI,et al.From marrow to brain: expression of neuronal phenotypes in adult mice. Science. 2000;290(5497):1775-1779.

引言

新生儿缺氧缺血性脑病是危及新生儿健康，关系到人口素质的一个重大疾病。所有引起新生儿窒息的原因都可导致新生儿缺氧缺血性脑病。对重度缺氧缺血性脑病患儿而言，在临床上尚无有效的药物和特殊治疗方法，2003年中国新生儿缺氧缺血性脑病第二次多中心治疗总结中指出，按照标准的《新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)治疗方案(试行稿)》治疗后，缺氧缺血性脑病患儿总的预后不良率为5.15%，其中重度预后不良率为20.8%，中度为2.22%，轻度为0。因此，新生儿缺氧缺血性脑病的治疗任重而道远，积极探索缺氧缺血性脑病的治疗方法，寻找新的有效的治疗手段，具有十分重要的意义。而神经干细胞移植为缺氧缺血性脑病治疗指出了一个新的方向。

近年有关新生动物神经干细胞移植的实验研究取得了很大突破。供体来源的细胞迁移并广泛整合到新生动物脑缺血区域，分化成神经元和小胶质细胞，且外源性神经干细胞在内源性神经干细胞的引导下完成迁移^[1]。2005年5月17日，栾佐等进行了国内外首例重度缺氧缺血性脑病患儿经侧脑室神经干细胞脑移植^[2-5]。但是所有上述研究均面临两个问题的挑战：伦理学问题和异基因神经干细胞移植的免疫排斥反应。这是阻碍干细胞移植治疗新生儿缺氧缺血性脑病的重要问题。而自体脐血干细胞移植能使这些问题迎刃而解。

人脐血细胞中富含间充质祖细胞和内皮前体细胞。脐血细胞中含有许多未成熟干祖细胞，具有广泛的增殖能力和分化潜能^[6-7]，作为一种重要的造血干细胞来源，已应用于临床治疗各种血液系统疾病及中枢系统疾病^[8]。脐血干细胞移植的广泛开展，有赖于建立符合临床移植要求的脐血库。自从美国纽约血液中心(NYBC)于1992年9月建立了国际第一个脐血库以来，世界许多国家都相继建立了脐血库。国外Warwick、国内许遵鹏等学者强调脐血筛选对脐血库质量的重要性^[9-11]。移植成功率与脐血采集质量及脐血细胞分化能力密切相关，有研究表明麻醉状态下血管扩张等因素利于提高脐血的采集分离质量^[12-13]。蛛网膜下腔阻滞可以导致血管扩张，也是临床剖宫产及脐血采集时最常用的麻醉方法，而这种麻醉方法是否会对脐血单个核细胞向神经细胞方向分化产生影响，尚未见报道。本研究拟通过不同来源的脐血对比，探讨其对脐血质量是否有影响。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程
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材料方法

设计：细胞学，体外对比观察实验。

时间及地点：于2008年10月至2012年1月在复旦大学卫生部新生儿重点实验室及上海市同济医院科研楼实验室完成。

材料：脐血采自同济大学附属上海市同济医院产科母亲无病理性妊娠顺产新生儿及应用临床常用剂量0.5%布比卡因8-10 mg行蛛网膜下腔阻滞择期剖宫产新生儿，共40份，其中顺产新生儿脐血标本20份为对照组，蛛网膜下腔阻滞剖宫产新生儿脐血标本20份为研究组，两组产妇年龄、体质量、胎龄和胎儿出生体质量差异无显著性意义。此项研究通过本院伦理委员会批准，并获得产妇和家属的知情同意。

实验方法：

取材：麻醉及手术过程中采取左侧斜30°体位，维持血压波动范围在基础血压20%以内，考虑到对循环影响较大剔除血压波动超出此范围病例。研究组在麻醉平面达到T₆-T₈时即刻行剖宫产术。在胎儿娩出后立即抽取脐血 50 mL，以肝素抗凝，采集后6 h内完成脐血单个核细胞的分离及接种。

细胞的分离及培养：接种前取少量标本进行细胞涂片、免疫组化鉴定，无菌条件下以1×10¹⁰ L^-¹的细胞浓度接种于12孔培养板中的8个孔内，置于37 ℃、饱和湿度、体积分数为5%CO₂培养箱中增殖培养3 d。常规培养3 d后对照组及研究组每份标本分别取孔1，2，3，4加入37 ℃增殖培养基进行非诱导分化培养；两组每份标本各另取孔5，6，7，8加入37 ℃新鲜神经分化培养基进行诱导分化培养，置于37 ℃、饱和湿度、体积分数为5%CO₂培养箱中培养至第10天。

细胞的免疫组化鉴定：

接种前细胞的免疫组化鉴定：将脐血单个核细胞悬液均匀涂于无菌载玻片上，将载玻片置于37 ℃、饱和湿度、体积分数为5% CO₂培养箱内孵育2 h。取出后，以40 g/L多聚甲醛固定细胞。细胞表面滴加一抗(GFAP、Nestin)后避光4 ℃冰箱中孵育过夜。详细步骤同分化培养后细胞鉴定方法一致。

分化培养第10天各组细胞免疫组化鉴定：分化培养第10天，每份标本取1块培养板，弃去培养液加入PBS洗涤。各培养孔以40 g/L多聚甲醛固定细胞25 min。用PBS充分洗涤5次。滴加1 g/L的Triton透化15 min，以PBS充分洗涤5次。滴加体积分数为3%双氧水浸润10 min，阻断细胞内过氧化物歧化酶，以PBS洗涤5次。鉴定过程中始终保持细胞全部被试剂浸润。

培养板各孔内滴加免疫组化试剂盒中的试剂A(正常马血清)避光常温孵育45 min封闭抗原，上4孔滴加浓度为 5 mg/L抗-Nestin抗体(一抗)，下4孔滴加抗-GFAP单克隆抗体(一抗)4 ℃避光孵育过夜。

取出过夜后标本，以PBS充分浸泡洗涤5 min×5次，每孔滴加试剂盒中试剂B(生物素标记的二抗)，室温避光孵育60 min，取出后以PBS充分浸泡洗涤5 min×5次。

每孔标本滴加试剂C(辣根-过氧化物酶复合物)室温孵育15 min后PBS充分洗涤5 min×5次。按照免疫组化试剂盒说明书现用现配DAB显色液。

每孔标本滴加现配DAB显色液显色3-6 min(显微镜下观察，控制显色时间、细胞着色程度)。双蒸水充分冲洗，苏木精复染，充分冲洗后，显微镜下观察、拍照，每孔取3个显微镜视野细胞总数至少200个，计免疫组化阳性细胞数及3个视野内细胞总数。每份标本未分化组和诱导分化组各有2孔，取两孔细胞数平均值。

主要观察指标：染色阳性细胞比例(免疫组化鉴定阳性细胞/细胞总数×100%)，细胞计数(细胞总数至少200个)。

统计学分析：所有数据均采用x(_)±s表示，采用SPSS 13.0软件进行F 检验，以P < 0.05为差异有显著性意义。

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讨论

干细胞广泛存在于全身结缔组织和器官间质中，有研究报道脐血来源的细胞可分化为神经干细胞和星形胶质细胞并作为干细胞来源的一种^[14-30]，收集的脐血可低温保存数十年，脐血细胞移植治疗部分神经系统疾病具有很大的优势^[31-41]。因此探讨包括麻醉方法等对脐血质量的影响，寻找更合适的脐血来源提高脐血移植成功率，成为研究的热点^[42]。但目前脐血采集时，临床最常用的蛛网膜下腔阻滞麻醉对脐血来源细胞向神经干细胞及星形胶质细胞方向分化影响的研究，尚未见报道。

Nestin抗原为神经干细胞表面标志物，广泛用于神经干细胞的鉴定^[43-48]。脐血单个核细胞表达Nestin抗原表明脐血中可能存在少量神经干细胞，其来源不明，有可能为脐血单个核细胞横向分化而来，也可能是进一步分化得到的^[49-50]。经过免疫组化鉴定发现研究组与对照组相比较脐血单个核细胞Nestin抗原阳性的细胞差异无显著性意义(P > 0.05)，表明蛛网膜下腔阻滞对脐血中神经干细胞无影响。

研究组与对照组脐血单个核细胞体外培养后诱导分化组及非诱导分化组均可表达Nestin抗原，诱导分化组与非诱导分化组相比抗原阳性细胞数明显要多，差异具有显著性意义(P < 0.05)。表明本实验条件可以使得脐血单个核细胞向Nestin抗原阳性细胞分化。研究组与对照组相比诱导分化培养后Nestin抗原阳性细胞经免疫组化鉴定证实在蛋白表达水平上差异无显著性意义(P > 0.05)。表明蛛网膜下腔阻滞对脐血单个核细胞向神经细胞方向分化的能力没有影响。

本实验发现脐血单个核细胞不表达星形胶质细胞特有的GFAP抗原。表明两组研究对象脐血中不存在星形胶质细胞。培养后研究组与对照组非诱导分化组只有少数培养孔的极少数细胞免疫组化鉴定显示GFAP抗原阳性，诱导分化组表达GFAP抗原阳性细胞较非诱导分化组明显升高。表明对照组及研究组脐血单个核细胞有分化为星形胶质细胞的潜能。另外，研究组与对照组相比较，诱导分化组之间GFAP抗原阳性表达的细胞数差异无显著性意义 (P > 0.05)。表明蛛网膜下腔阻滞对脐血单个核细胞向星形胶质细胞方向的分化没有影响。

综上所述，临床剖宫产时采集脐血最常用的蛛网膜下腔阻滞，对脐血中神经干细胞无影响，对脐血来源细胞的神经干细胞及星形胶质细胞分化方向无影响，是一种安全的麻醉方法。

蛛网膜下腔阻滞不影响脐血单个核细胞向神经细胞的分化

Subarachnoid block has no influence on neural differentiation potential of mononuclear cells in the cord blood

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[1]	林清凡, 解一新, 陈婉清, 叶振忠, 陈幼芳. 人胎盘源间充质干细胞条件培养液可上调缺氧状态下BeWo细胞活力和紧密连接因子的表达[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(在线): 4970-4975.
[2]	蒲锐, 陈子扬, 袁凌燕. 不同细胞来源外泌体保护心脏的特点与效应[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(在线): 1-.
[3]	张秀梅, 翟运开, 赵杰, 赵萌. 类器官模型国内外数据库近10年文献研究热点分析[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(8): 1249-1255.
[4]	王正东, 黄娜, 陈婧娴, 郑作兵, 胡鑫宇, 李梅, 苏晓, 苏学森, 颜南. 丁酸钠抑制氟中毒可诱导小胶质细胞活化及炎症因子表达增多[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1075-1080.
[5]	汪显耀, 关亚琳, 刘忠山. 提高间充质干细胞治疗难愈性创面的策略[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1081-1087.
[6]	万然, 史旭, 刘京松, 王岩松. 间充质干细胞分泌组治疗脊髓损伤的研究进展[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1088-1095.
[7]	廖成成, 安家兴, 谭张雪, 王倩, 刘建国. 口腔鳞状细胞癌干细胞的治疗靶点及应用前景[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1096-1103.
[8]	谢文佳, 夏天娇, 周卿云, 刘羽佳, 顾小萍. 小胶质细胞介导神经元损伤在神经退行性疾病中的作用[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1109-1115.
[9]	李珊珊, 郭笑霄, 尤冉, 杨秀芬, 赵露, 陈曦, 王艳玲. 感光细胞替代治疗视网膜变性疾病[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1116-1121.
[10]	焦慧, 张一宁, 宋雨晴, 林宇, 王秀丽. 乳腺癌类器官研究进展及临床应用前景[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1122-1128.
[11]	王诗琦, 张金生. 中医药调控缺血缺氧微环境对骨髓间充质干细胞增殖、分化及衰老的影响[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1129-1134.
[12]	曾燕华, 郝延磊. 许旺细胞体外培养及纯化的系统性综述[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1135-1141.
[13]	孔德胜, 何晶晶, 冯宝峰, 郭瑞云, Asiamah Ernest Amponsah, 吕飞, 张舒涵, 张晓琳, 马隽, 崔慧先. 间充质干细胞修复大动物模型脊髓损伤疗效评价的Meta分析[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1142-1148.
[14]	侯婧瑛, 于萌蕾, 郭天柱, 龙会宝, 吴浩. 缺氧预处理激活HIF-1α/MALAT1/VEGFA通路促进骨髓间充质干细胞生存和血管再生[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 985-990.
[15]	史洋洋, 秦英飞, 吴福玲, 何潇, 张雪静. 胎盘间充质干细胞预处理预防小鼠毛细支气管炎[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 991-995.