神经干细胞在加载神经生长因子角蛋白纤维支架上的生长与分化

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.0533

中国组织工程研究 ›› 2018, Vol. 22 ›› Issue (21): 3387-3392.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.0533

• 干细胞培养与分化 stem cell culture and differentiation • 上一篇下一篇

神经干细胞在加载神经生长因子角蛋白纤维支架上的生长与分化

孙泉¹，李莹²，高钰丹^1，2，郝鹏^1，2，赵文^1，2，段红梅^1，2，杨朝阳^1，2，李晓光^1，2

¹北京航空航天大学生物与医学工程学院，生物材料和神经再生北京市重点实验室，大数据精准医疗高精尖创新中心，北京市 100191；²首都医科大学神经生物学系，北京市 100069

修回日期:2018-03-08 出版日期:2018-07-28 发布日期:2018-07-28
通讯作者: 李晓光，博士，教授，北京航空航天大学生物与医学工程学院，生物材料和神经再生北京市重点实验室，大数据精准医疗高精尖创新中心，北京市 100191；首都医科大学神经生物学系，北京市 100069
作者简介:孙泉，男，1993年生，安徽省马鞍山市人，北京航空航天大学在读硕士，主要从事生物材料在中枢神经损伤修复中的研究。
基金资助:
国家重点研发计划(2017YFC1104001；2017YFC1104002)；国家自然科学基金面上项目(31670988；31771053)；国家自然科学基金应急管理项目(31650001)；国家自然科学基金国际(地区)合作与交流项目(31320103903)；高等学校全国优秀博士学位论文作者专项资金资助项目(201356)；国家自然科学基金重点项目(31730030)；北京市科技计划(Z171100002217066)

Growth and differentiation of neural stem cells on a keratin fiber scaffold carrying nerve growth factor

Sun Quan¹, Li Ying², Gao Yu-dan^{1, 2}, Hao Peng^{1, 2}, Zhao Wen^{1, 2}, Duan Hong-mei^{1, 2}, Yang Zhao-yang^{1, 2}, Li Xiao-guang^{1, 2}

¹Beijing Key Laboratory for Biomaterials and Neural Regeneration, Beijing Advanced Innovation Center for Big Data-Based Precision Medicine, School of Biological Science and Medical Engineering, Beihang University, Beijing 100191, China; ²Department of Neurobiology, Capital Medical University, Beijing 100069, China

Revised:2018-03-08 Online:2018-07-28 Published:2018-07-28
Contact: Li Xiao-guang, Ph.D., Professor, Beijing Key Laboratory for Biomaterials and Neural Regeneration, Beijing Advanced Innovation Center for Big Data-Based Precision Medicine, School of Biological Science and Medical Engineering, Beihang University, Beijing 100191, China; Department of Neurobiology, Capital Medical University, Beijing 100069, China
About author:Sun Quan, Master candidate, Beijing Key Laboratory for Biomaterials and Neural Regeneration, Beijing Advanced Innovation Center for Big Data-Based Precision Medicine, School of Biological Science and Medical Engineering, Beihang University, Beijing 100191, China
Supported by:
the National Key Research and Development Program of China, No. 2017YFC1104001, 2017YFC1104002; the National Natural Science Foundation of China for Key Program, No. 31730030, for General Program, No. 31670988, 31771053, for Emergency Management Program, No. 31650001, and for Projects of International Cooperation and Exchanges, No. 31320103903; Special Funds for the Authors of Excellent Doctoral Dissertations of Universities and Colleges, No. 201356; Beijing Science and Technology Program, No. Z171100002217066

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：
角蛋白纤维：人类头发纤维具有优异的生物相容性，其中角蛋白的含量为85%-90%，是一种天然角蛋白纤维。加载神经生长因子后的角蛋白纤维能为体外细胞培养提供良好的细胞外微环境。
神经生长因子：第一个被发现的神经营养因子，可以促进轴突生长，促进突起伸展，诱导神经干细胞分化成神经元。加载了神经生长因子的角蛋白纤维可以显著增强神经干细胞向神经元分化的比例。

摘要
背景：神经组织工程的基本方法是建立生物材料支架复合神经细胞的三维空间结构，这种方法对修复神经损伤具有极大潜力。
目的：分析不同处理条件下角蛋白纤维的理化性质以得到最佳的处理条件，并研究加载神经生长因子后角蛋白纤维材料对神经干细胞分化的影响。
方法：使用不同浓度的盐酸对角蛋白纤维进行处理，红外图谱分析其化学性质，以得到最佳的盐酸处理浓度。随后加载神经生长因子，并使用红外图谱证明神经生长因子成功加载到角蛋白纤维上。将角蛋白纤维、加载神经生长因子的角蛋白纤维分别与神经干细胞共培养10 d，免疫荧光细胞化学方法检测MAP2，MBP，GFAP的表达及神经干细胞向神经元分化的比例。
结果与结论：8 mol/L盐酸处理的角蛋白纤维表现出最高的羧基含量。与神经干细胞共培养10 d后，加载神经生长因子的角蛋白纤维组神经干细胞分化为神经元的比例显著高于单纯的角蛋白纤维组和无材料的对照组。该研究证明了加载神经生长因子的角蛋白纤维可以显著增加神经干细胞分化成神经元的比例。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程
ORCID: 0000-0001-7596-5702(孙泉)

关键词: 角蛋白纤维, 神经生长因子, 神经干细胞, 神经元, 神经组织工程, 干细胞, 国家自然科学基金

Abstract:

BACKGROUND: It is essential for nerve tissue engineering is to construct a three-dimensional biomaterial scaffold carrying nerve cells, which has huge potential for repair of injured nervous system.
OBJECTIVE: To seek the optimal concentration of hydrochloric acid used to treat keratin fibers based on the physical and chemical properties of keratin fibers, and to explore the effect of keratin fibers carrying nerve growth factor (NGF) on the differentiation of neural stem cells.
METHODS: Keratin fibers were treated by hydrochloric acid of various concentrations, and their chemical properties were anlayzed by Fourier transform infrared spectroscopy. Then, we determined the optimal concentration of hydrochloric acid to treat keratin fibers. Subsequently, NGF was loaded onto the keratin fibers as shown by the Fourier transform infrared spectroscopy. Neural stem cells were co-cultured with keratin fibers with or without NGF for 10 days, and the expression of MAP2, MBP, GFAP and the percentage of nerve cells were thereafter detected by immunofluorescence.
RESULTS AND CONCLUSION: The highest content of exposed carboxyl on the fiber surface appeared after treatment of keratin fibers with 8 mol/L hydrochloric acid. After 10 days of co-culture, the percentage of nerve cells was significantly higher in the keratin fiber-NGF group than the keratin fiber and control groups. Findings from the present study indicate that co-culture with keratin fibers carrying NGF can dramatically increase the percentage of nerve cells differentiating from neural stem cells.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

Key words: Keratins, Nerve Growth Factor, Neural Stem Cells, Neurons, Tissue Engineering

中图分类号:

R394.2

孙泉，李莹，高钰丹，郝鹏，赵文，段红梅，杨朝阳，李晓光. 神经干细胞在加载神经生长因子角蛋白纤维支架上的生长与分化[J]. 中国组织工程研究, 2018, 22(21): 3387-3392.

Sun Quan, Li Ying, Gao Yu-dan, Hao Peng, Zhao Wen, Duan Hong-mei, Yang Zhao-yang, Li Xiao-guang . Growth and differentiation of neural stem cells on a keratin fiber scaffold carrying nerve growth factor[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2018, 22(21): 3387-3392.

图/表（结果） 2

2.1 红外光谱 不同浓度盐酸处理后的角蛋白纤维均在红外光谱谱图中显现出了羧基的特征峰。在3 289 cm^-¹处的大而宽的峰是-COOH中-OH的伸缩振动峰。随着盐酸浓度的增加，-OH的峰值和峰面积都出现增加(图1A)。8 mol/L盐酸处理后的角蛋白纤维(K8)表现出最高的羧基含量，所以之后的实验选择K8进行。NGF的红外光谱谱图中表现出了氨基的特征峰，其中3 409 cm^-¹是游离的-NH的伸缩振动峰，1 464 cm^-¹是N-H的弯曲振动峰。K8的红外光谱谱图中表现出了羧基的特征峰。在K8-NGF的红外光谱谱图中，3 317 cm^-¹是酰胺键中-NH的伸缩振动峰，这代表成功进行了酰胺反应，NGF加载到了纤维上(图1B)。

2.2 神经球与材料共培养后的细胞形态 K8组和对照组在共培养后1 d，仅有少量的神经球黏附到培养皿底部，大部分神经球没有突起伸展出来。随着培养时间的延长，到第7天，少量的细胞从神经球中迁移出来，迁移出的细胞胞体扁平，突起较短。光镜下，K8组和对照组相比细胞形态无明显差异。K8-NGF组在共培养第1天，可以观察到大量的神经球贴壁，黏附在培养皿底部，同时有少量短的突起从贴壁神经球中伸展出来。共培养第7天，可以观察到大量的细胞从神经球中迁移分化出来，与共培养第1天相比，突起的长度明显增长，细胞之间形成复杂的细胞网络，见图2。

2.3 神经突起的定量分析结果 共培养第1天，对照组和K8组只有很短的突起伸出，分别为(26.96±11.31) μm和(22.31±8.39) μm。第5天，对照组和K8组突起变长，且两组没有显著性差异，分别为(74.46±18.84) μm和(72.49± 16.87) μm。K8-NGF组在第1天共培养后就有大量短的突起从神经球中伸展出来，达(106.60±18.25) μm，且随着培养时间的延长突起的长度继续增加。在第7天，K8-NGF组中从神经球伸展出的突起长度为(279.09±36.45) μm，明显长于其他两组，见图3。

2.4 细胞活性 共培养第1，3，7天，K8组和对照组的吸光度值在各时间点均无显著性差异，K8-NGF组吸光度值明显高于其他两组。共培养第1天到第3天，对照组和K8组的吸光度值都有所增加，但是从第3天到第7天对照组和K8组的吸光度值都基本没有变化。K8-NGF组一直保持很稳定的高细胞活性状态，见图4。

2.5 角蛋白纤维和角蛋白纤维-NGF对NSCs分化的影响 分别用神经元标记物MAP-2，星形胶质细胞标记物GFAP，少突胶质细胞标记物MBP进行免疫荧光染色，以观察共培养后NSCs的分化及比例。使用ImageJ进行细胞计数。结果显示，共培养10 d后，K8-NGF组的大部分NSCs分化成了神经元(80.78±1.95)%，少部分分化成了星形胶质细胞和少突胶质细胞，分化的细胞表型比例为神经元>星形胶质细胞>少突胶质细胞，其中分化为神经元的比例显著高于对照组和K8组。对照组和K8组中的NSCs也分化成了神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞，但是细胞表型的比例为星形胶质细胞>神经元>少突胶质细胞，仅有少量分化为了神经元[(31.65±2.18)%和(33.93±2.92)%]，K8组和对照组分化出的各种细胞表型的比例均无显著性差异，见图5和图6。

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引言

中枢神经系统中神经干细胞(neural stem cells，NSCs)的发现以及它们可以分化成神经元的潜力给神经组织损伤患者带来了希望。研究表明，NSCs可以代替损伤的细胞和功能失调的细胞^[1]，促进不完全脊髓损伤动物的功能恢复^[2]。之前的大量研究已经证明NSCs的分化受内在和外在信号共同影响，如支架、培养基成分、细胞间复杂的相互作用等^[3-4]。神经营养因子可以维持NSCs在体外的生存和迁移，使它们具有分化成神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的潜能。神经营养因子可以促进脊髓损伤的修复^[5]，改善阿尔茨海默病大鼠的学习记忆功能^[6]。神经生长因子(nerve growth factor，NGF)是第一个被发现的神经营养因子。NGF可以促进轴突生长^[7]，促进突起伸展^[8]，诱导来源于脑的神经干细胞分化成神经元^[9]。

人类的头发是人体皮肤重要的一种附属器官，无细胞毒性，无免疫原性，具有优异的生物相容性。作为一种复合生物纤维，头发的主要成分是占头发总质量85%-90%的角蛋白^[10]，所以它是一种具有精细结构的天然角蛋白纤维。角蛋白具有良好的生物相容性、生物可降解性、机械耐久性和产量丰富等特点，作为一种生物材料在生物医学领域已经得到了广泛的研究^[11-15]。但是这些研究都关注于将头发中的角蛋白提取出来，然后进行材料的制备与化学修饰，如制备成薄膜^[16]、静电纺丝纳米纤维^[17-19]、水凝胶^[20]，而忽视了对头发这种具有精细结构的天然角蛋白纤维的研究。

课题组使用盐酸对天然角蛋白纤维进行处理，破坏其最表面的表皮层，暴露出内部的皮质层，然后利用角蛋白上的羧基和NGF上的氨基进行交联反应，从而使NGF加载到角蛋白纤维上，作为一种组织工程支架支持神经干细胞的黏附、生存、迁移和分化。实验旨在探索对角蛋白纤维处理的最佳条件，以及加载NGF的角蛋白纤维对神经干细胞分化的影响，为其应用于神经组织工程提供基础。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

材料方法

1.1 设计 生物材料支架与神经干细胞体外共培养实验。

1.2 时间及地点 实验于2017年4至11月在北京航空航天大学逸夫科学馆和首都医科大学基础科研楼完成。

1.3 材料

1.3.1 实验动物 新生24 h SPF级Wistar大鼠6只，雌雄不限，由首都医科大学实验动物部提供，许可证号：SCXK(京)2016-0006。所有实验均由首都医科大学实验动物中心批准，并按照首都医科大学实验动物中心和北京实验动物协会的标准执行。

1.3.2 实验仪器和试剂 光学显微镜及显微成像系统(日本OLYMPUS公司)；酶标仪(德国BMG LABTECH公司)；培养瓶、6孔板(美国Corning公司)；激光共聚焦扫描显微镜(德国Leica公司)；傅里叶红外光谱仪(美国Bruker公司)；CCK-8试剂盒(日本Dojindo公司)；ELISA试剂盒(美国Sigma公司)；小鼠来源anti-MAP2抗体(1︰200，美国Millipore公司)；兔来源anti-MBP抗体(1︰100，美国Millipore公司)；小鼠来源anti-nestin抗体(1︰100，美国Millipore公司)；兔来源anti-GFAP抗体(1︰100，美国Millipore公司)；山羊抗小鼠Alexa Fluor 594(1︰300，美国Millipore公司)；山羊抗兔 Alexa Fluor 488(1︰300，美国Millipore公司)；浓盐酸(北京化工厂)；1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC，美国Sigma公司)；N-羟基丁二酰亚胺(NHS，美国Sigma公司)；NGF(美国Sigma公司)；PBS粉末(美国Gibco公司)。

1.4 实验方法

1.4.1 制备加载NGF的角蛋白纤维 所有用于实验的角蛋白纤维均为处理后的人类头发纤维，人类头发纤维均来自于25-30岁的健康女性，且实验前没有经过任何烫染或者化学试剂处理。所有样品使用前都经过洗发水和护发素洗涤，然后用蒸馏水冲洗3次，去除残留的试剂，37 ℃烘箱中烘干，室温下干燥储存。将角蛋白纤维分别置于2，4，8 mol/L盐酸中，37 ℃水浴处理30 min，37 ℃烘箱中烘干。盐酸处理后的纤维分别记为K2，K4，K8，未使用盐酸处理的纤维记为K0。在无菌条件下，取最适浓度盐酸处理过后的角蛋白纤维1 mg加入到0.1 mol/L MES缓冲溶液(pH 5.6)中，然后加入8 mg EDC和12 mg NHS，避光振荡反应15 min。随后，在4 ℃下加入到10 mL预冷的0.1 mol/L PBS中，再加入200 ng NGF，避光振荡反应过夜，-80℃冷冻干燥。

1.4.2 加载NGF的角蛋白纤维的表征 取盐酸处理后的角蛋白纤维(K0，K2，K4，K8)和加载NGF的角蛋白纤维(角蛋白纤维-NGF)，使用ATR-FTIR spectroscopy进行化学分析，分辨率为4 cm^-¹，扫描次数为30次，扫描范围为4 000-400 cm^-¹，并进行波数扫描。

1.4.3 脊髓神经干细胞的分离和培养 完整取出Wistar大鼠的脊髓，用预冷的DMEM/F12培养基清洗3次。移除脊髓的硬脊膜，用吸管将其吹打为单细胞悬液，以1×10⁵/cm²的细胞密度接种于含有新鲜培养基的培养瓶中。培养基成分为：96.8% DMEM/F12，2% B27，0.1%碱性成纤维细胞生长因子(20 μg/L)，0.1%表皮生长因子(20 μg/L)，1%青霉素-链霉素。将细胞置于37 ℃，体积分数为5%CO₂的培养箱中培养1 d，丢弃贴壁的细胞，离心后收集神经球。将神经球用0.25%胰蛋白酶和EDTA消化，吹打分离，得到单细胞，然后以1×10⁵/cm²的细胞密度悬浮于含有新鲜培养基的培养瓶中。重复上述培养过程，第3代获得比较纯的神经球。

1.4.4 CCK-8法检测细胞活性 在96孔板中接种第3代神经球悬液(100 μL/孔)，将培养板放在37 ℃、体积分数为5%CO₂的培养箱中预培养1 d，然后按实验分组，单纯角蛋白纤维组(K8组)加入8 mol/L盐酸处理后的角蛋白纤维1 mg，角蛋白纤维-NGF组(K8-NGF组)加入加载NGF的角蛋白纤维1 mg，对照组不加入任何物质，每组设置3个复孔。将培养板放在37 ℃，体积分数为5%CO₂培养箱中培养1，3，7 d，加入10 μL CCK-8溶液孵育2 h，使用酶标仪在450 nm处测量吸光度值。

1.4.5 神经干细胞与材料共培养 取第3代神经球，以50个神经球/cm²的密度接种在使用多聚赖氨酸铺板的盖玻片上。将盖玻片置于培养皿中，并加入基础培养基，然后按实验分组，单纯角蛋白纤维组(K8组)加入8 mol/L盐酸处理后的角蛋白纤维1 mg，角蛋白纤维-NGF组(K8-NGF组)加入加载NGF的角蛋白纤维1 mg，对照组不加入任何物质。在接种神经球前使用熔融的琼脂糖滴在纤维两端从而将纤维固定在盖玻片上。上述3组细胞置于37 ℃，体积分数为5%CO₂的培养箱中培养，每3 d换1次培养基。在培养1，5，7 d时，倒置显微镜下观察神经球的形态。随机测量每1个神经干细胞球伸出的10个突起的长度，即从神经干细胞球的边缘到突起顶端的直线距离。每组细胞随机检测8个神经球的突起长度。

1.4.6 免疫荧光染色 神经干细胞与材料共培养10 d后，将接种细胞的盖玻片用40 g/L多聚甲醛在4 ℃下固定40 min，0.3% PBST浸泡5 min，体积分数为1%山羊血清封闭30 min，加入一抗，4 ℃过夜，加入合适的二抗，37 ℃孵育60 min，加入Hoechst 33258核染料(1︰1 500)，孵育5 min，去离子水漂洗3次，每次5 min。最后用50%缓冲甘油封固，激光共聚焦显微镜观察并拍照。所用一抗和稀释浓度分别为：小鼠来源anti-MAP2抗体(1︰200)；兔来源anti-MBP抗体(1︰100)；小鼠来源anti-nestin抗体(1︰100)；兔来源anti-GFAP抗体(1︰100)。所用二抗和稀释浓度分别为：山羊抗小鼠Alexa Fluor 594(1︰300)；山羊抗兔 Alexa Fluor 488(1︰300)。

1.5 主要观察指标 ①傅里叶红外光谱观察各组支架的化学性质；②光镜下观察神经干细胞突起伸展情况；③CCK-8法检测神经干细胞活性；④免疫荧光染色检测神经干细胞向神经元分化情况。

1.6 统计学分析 采用SPSS 19.0统计软件进行数据分析，所有量化数据均用x(_)±s表示，使用单因素方差分析(one-way ANOVA)，采用Bonferronl法进行组间比较，P < 0.05 为差异有显著性意义。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

讨论

神经损伤，如脊髓损伤患者的永久性功能缺陷部分是由于损失区域的神经细胞死亡^[21]。神经组织工程，包括生物材料-神经干细胞三维支架移植被认为是神经损伤后促进组织修复的有效方法^[22]。纤维结构的导向作用是一个完美的组织工程支架的重要特点，因为纤维的导向可以很好地影响细胞的生长和迁移等相关功能^[23-24]。接触引导理论表明，细胞在合适的方向上有最大的迁移可能性，这与支架的化学性质、结构以及机械性能有关^[25]。因此，定向纤维为突起的伸展提供了更好的接触引导作用^[26-27]。

最近几年，大量的研究关注于影响NSCs增殖和分化的因素^[28-29]。这些因素可能会增强或者抑制NSCs的增殖和分化，包括神经营养因子^[30]，以及细胞间复杂的相互作用^[31]。例如，NGF可以刺激NSCs分化成神经元和星形胶质细胞^[32]。

头发纤维从外到内分别是表皮层、皮质层和髓质层^[33-34]。皮质层是纤维的主要部分，在三层结构中拥有最多的角蛋白含量。随着酸浓度的升高，越来越多的皮质层暴露出来，而皮质层中含有比表皮层中更多的角蛋白，也就含有更多的羧基。随着酸浓度的增加，-OH的含量也逐渐增高，这表明羧基含量的增加。8 mol/L盐酸处理后的角蛋白纤维暴露出的羧基量明显多于其他浓度，这意味着它具有加载上更多NGF的可能，因此认为8 mol/L是盐酸处理的最佳浓度。加载NGF的角蛋白纤维(K8-NGF)的红外光谱中出现代表酰胺键的-NH的特征峰和氢键，证明了NGF的成功加载。

K8-NGF组由于NGF从纤维上的释放，明显增强了神经球的贴壁，以及细胞的迁移和分化。光镜下可以看到相比于其他两组，K8-NGF组有更多的神经球贴壁。定量结果证明K8-NGF组中神经球伸展出的突起长度明显大于对照组和K8组。

CCK-8的结果显示K8组对NSCs的细胞活性无显著影响。在7 d的共培养周期内，K8-NGF组中NSCs的细胞活性显著高于其他两组，这是由于K8-NGF组NGF的持续释放会始终维持NSCs的存活。K8组和对照组表现出的细胞活性没有显著性的差异，这也表明了角蛋白纤维对细胞活性无负面影响，具有良好的细胞相容性。

NSCs在3组共培养体系中表现出不同的分化百分比。共培养10 d后，K8-NGF组中NSCs分化成神经元的比例明显大于其他两组，表明K8-NGF可以显著增加NSCs向神经元分化的比例。对照组和K8组更多的将NSCs诱导分化成了星形胶质细胞，分化成神经元的比例非常低。所有3组共培养体系中，都只出现了少量的少突胶质细胞。这些结果表明K8-NGF组更有利于定向诱导NSCs分化成神经元。

综上所述，实验确定了角蛋白纤维处理的最优盐酸浓度，然后加载上NGF，通过红外光谱证明了NGF成功加载到角蛋白纤维上。K8-NGF组可以显著增加NSCs的存活和神经向分化的比例。该研究证明了角蛋白纤维-NGF具有良好的细胞相容性，可以显著增加NSCs分化成神经元的比例。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

神经干细胞在加载神经生长因子角蛋白纤维支架上的生长与分化

Growth and differentiation of neural stem cells on a keratin fiber scaffold carrying nerve growth factor

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