miR-34a调节SIRT1表达抑制结肠癌干细胞增殖和侵袭

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.0521

中国组织工程研究 ›› 2018, Vol. 22 ›› Issue (17): 2680-2685.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.0521

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miR-34a调节SIRT1表达抑制结肠癌干细胞增殖和侵袭

李合，李军，陈兴超

海南医学院第一附属医院普通外科，海南省海口市 570102

修回日期:2018-03-26 出版日期:2018-06-18 发布日期:2018-06-18
通讯作者: 李军，副主任医师，海南医学院第一附属医院普通外科，海南省海口市 570102
作者简介:李合，男，1983年生，海南省陵水县人，汉族，2006年海南医学院毕业，主治医师，主要从事胃肠外科方面的研究。
基金资助:
海南省自然科学基金项目(20158351)

miR-34a inhibits the proliferation and invasion of colon cancer stem cells by regulating SIRT1 expression

Li He, Li Jun, Chen Xing-chao

Department of General Surgery, the First Affiliated Hospital of Hainan Medical University, Haikou 570102, Hainan Province, China

Revised:2018-03-26 Online:2018-06-18 Published:2018-06-18
Contact: Li Jun, Associate chief physician, Department of General Surgery, the First Affiliated Hospital of Hainan Medical University, Haikou 570102, Hainan Province, China
About author:Li He, Attending physician, Department of General Surgery, the First Affiliated Hospital of Hainan Medical University, Haikou 570102, Hainan Province, China
Supported by:
the Natural Science Foundation of Hainan Province, No. 20158351

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：
miR-34a：是一个非编码蛋白的单链小分子RNA，在转录水平上通过碱基配对3’-端非翻译区域抑制靶基因表达，多用于肿瘤学的研究中，可通过下调原癌基因的表达抑制肿瘤细胞生长。
SIRT1：是一种依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的去乙酰化酶，可与多种信号通路中的蛋白相互作用，其在多种恶性肿瘤中的表达增高可能与肿瘤转移侵袭、肿瘤分期及患者预后密切相关。

摘要
背景：miR-34a是一种起抑癌作用的miRNA，它能调节多个靶基因的表达，有可能成为治疗肿瘤的新靶点。
目的：探讨miR-34a及其靶基因SIRT1对结肠癌干细胞体外增殖、凋亡、侵袭能力的影响。
方法：采用无血清悬浮培养法从人结肠癌细胞株HCT116中富集肿瘤干细胞，流式细胞仪检测CD44⁺/CD133⁺细胞所占的比例进行鉴定。利用脂质体转染法将miR-34a模拟物转染结肠癌干细胞，并设miRNA无序阴性对照物和未转染组。CCK-8增殖实验、细胞凋亡实验、细胞侵袭实验检测结肠癌干细胞增殖、凋亡、侵袭情况。采用qRT-PCR和Western blot法检测miR-34a转染后细胞中SIRT1 mRNA和蛋白的表达水平。

结果与结论：①无血清悬浮培养法富集的肿瘤干细胞球中含有较高比例的CD44⁺/CD133⁺表型细胞，所占比例为(78.3±6.7)%；②miR-34a转染组的miR-34a表达量高于未转染组和miR-34a对照组(P < 0.05)；③与未转染组和miR-34a对照组比较，miR-34a转染组的细胞增殖能力明显降低(P < 0.05)；细胞凋亡率明显升高(P < 0.05)；侵袭细胞数明显降低(P < 0.05)；④miR-34a过表达后，miR-34a转染组的SIRT1 mRNA和蛋白的表达水平均明显低于未转染组和miR-34a对照组(P < 0.05)；⑤结果表明，过表达miR-34a可抑制结肠癌干细胞增殖、侵袭并诱导凋亡，可能与其下调SIRT1的表达有关。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程
ORCID: 0000-0002-0870-5617(李合)

关键词: 结肠癌, 肿瘤干细胞, miR-34a, SIRT1, 细胞增殖, 细胞凋亡, 细胞侵袭, 干细胞, 海南省自然科学基金

Abstract:

BACKGROUND: miR-34a has an antitumor effect and can regulate the expression of multiple target genes. Therefore, it may become a new target for the treatment of tumors.
OBJECTIVE: To investigate the effect of miR-34a and its target gene SIRT1 on the proliferation, apoptosis and invasion of colon cancer stem cells in vitro.
METHODS: Colon cancer stem cells were enriched from human colon cancer cell line HCT116 by serum-free suspension culture. Then, the percentage of CD44⁺/CD133⁺ cells was identified by flow cytometry method. Colon cancer stem cells in transfection and control groups were transfected with artificially synthesized miR-34a mimics and negative control sequences, respectively. Cells with no transfection were used as non-transfection group. Cell proliferation, apoptosis, and invasion were detected through cell counting kit-8 assay, cell apoptosis experiment, and cell invasion experiment, respectively. The expression of SIRT1 mRNA and protein was detected by qRT-PCR and western blot analysis, respectively.
RESULTS AND CONCLUSION: CD44⁺/CD133⁺ cells accounted for (78.3±6.7)% of the tumor stem cells enriched in the serum-free medium. The expression of miR-34a in miR-34a transfection group was higher than that of non-transfection group and miR-34a control group (P < 0.05). Compared with the non-transfection group and the miR-34a control group, the cell proliferation ability was significantly decreased (P < 0.05), the apoptotic rate increased significantly (P < 0.05), and the number of invasion cells decreased significantly (P < 0.05) in the miR-34a transfection group. The expression level of SIRT1 mRNA and protein in the miR-34a transfection group was significantly lower than that in the non-transfection group and the miR-34a control group (P < 0.05). These findings suggest that miR-34a may down-regulate the expression of SIRT1 to suppress cell growth and invasion and promote apoptosis in colon cancer stem cells.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

Key words: Colonic Neoplasms, Neoplastic Stem Cells, MicroRNAs, Cell Proliferation, Apoptosis, Tissue Engineering

中图分类号:

R394.2

李合，李军，陈兴超. miR-34a调节SIRT1表达抑制结肠癌干细胞增殖和侵袭[J]. 中国组织工程研究, 2018, 22(17): 2680-2685.

Li He, Li Jun, Chen Xing-chao. miR-34a inhibits the proliferation and invasion of colon cancer stem cells by regulating SIRT1 expression[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2018, 22(17): 2680-2685.

图/表（结果） 1

2.1 HCT116在无血清培养条件下形成的细胞球 HCT116结肠癌细胞接种于无血清培养基中，培养第2天后可观察到悬浮的细胞呈出芽式生长，第3天可见三维聚集体，第5天时已形成形态规则的球形，细胞之间连接紧密。所有的细胞球需要及时胰酶消化传代，第2代和第3代微球体形态更接近球形，生长旺盛，第5代之后，细胞球体数量减少，细胞之间连接较前疏松，且更加容易贴壁分化。流式细胞术分析发现，上述分离的肿瘤干细胞球中含有较高比例的CD44⁺/CD133⁺表型细胞，所占比例为(78.3±6.7)%。

2.2 miR-34a在结肠癌干细胞中表达下调 采用qRT- PCR技术检测CD44⁺/CD133⁺结肠癌干细胞中miR-34a表达，以结肠癌细胞HCT116为对照。结果显示，miR-34a在CD44⁺/CD133⁺结肠癌干细胞中的表达水平显著低于结肠癌细胞，差异有显著性意义(P < 0.01)，见图1。

2.3 miR-34a转染效率 采用脂质体转染法转染miR-34a模拟物后，qRT-PCR检测miR-34a转染效率，结果显示，miR-34a转染组的miR-34a表达量高于未转染组和miR-34a对照组，差异有显著性意义(P < 0.05)；而未转染组和miR-34a对照组的miR-34a表达量差异无显著性意义(P > 0.05)，见图2。

2.4 miR-34a过表达抑制CD44⁺/CD133⁺结肠癌干细胞的增殖 采用CCK-8法检测转染后CD44⁺/CD133⁺结肠癌干细胞的增殖情况。结果显示，miR-34a转染组的细胞增殖能力明显低于未转染组和miR-34a对照组，差异有显著性意义(P < 0.05)，见图3。

2.5 miR-34a过表达促进CD44⁺/CD133⁺结肠癌干细胞的凋亡 采用流式细胞技术检测转染后CD44⁺/CD133⁺结肠癌干细胞的凋亡情况，结果显示，miR-34a转染组的细胞凋亡率明显高于未转染组和miR-34a对照组，差异有显著性意义(P < 0.05)，见图4。

2.6 miR-34a过表达抑制CD44⁺/CD133⁺结肠癌干细胞的侵袭 Transwell小室实验结果显示，miR-34a转染组的侵袭细胞数明显低于未转染组和miR-34a对照组，差异有显著性意义(P < 0.05)，见图5。

2.7 miR-34a下调CD44⁺/CD133⁺结肠癌干细胞中SIRT1的表达水平 采用qRT-PCR和Western blot法检测miR- 34a过表达后细胞中SIRT1 mRNA和蛋白的表达水平，结果显示，miR-34a转染组SIRT1 mRNA和蛋白的表达水平均明显低于未转染组和miR-34a对照组，差异有显著性意义(P < 0.05)，见图6。

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引言

结肠癌是常见的发生于结肠部位的消化道恶性肿瘤，由于人们生活方式、饮食结构的改变，其发病率明显上升，严重威胁着人们的生命和健康^[1-2]。尽管以手术切除为主的综合治疗手段有很大改进，但是晚期结肠癌的5年生存率并无大的改观。随着分子生物学的不断发展，使得临床对结肠癌的病理诊断进一步提高，而且为其预后判断、治疗方案的选择提供了更全面的依据^[3-4]。

miRNAs是一类长度介于20-25个核苷酸的非编码单链小分子RNA，成熟的miRNA通过与特定mRNA的3’端非编码区结合，下调特定靶基因的表达，在转录后水平调节蛋白质合成，研究表明其能够调控细胞生长、增殖、分化和凋亡等一系列生物学特性^[5-7]。迄今为止，已发现多种与癌症相关的miRNA，这说明miRNAs在癌症发生过程中起至关重要的作用，其中miR-34a被认为是一种抑癌的miRNAs，可直接抑制靶基因表达，在结肠癌的发展过程发挥重要作用^[8]，但其调控结肠癌的机制有待进一步研究。

SIRT1是一种依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的去乙酰化酶，可与多种信号通路中的蛋白相互作用，其在多种恶性肿瘤中的表达增高可能与肿瘤转移侵袭、肿瘤分期及患者预后密切相关^[9-10]。黄立勇等^[11]研究者认为SIRT1表达增加与结直肠癌的淋巴结转移、肿瘤分期、组织分化程度成正相关。明浩等^[12]研究发现，肺腺癌组织SIRT1表达与病理分级显著相关，且SIRT1高表达提示肺腺癌预后较差。同时前期细胞学研究也发现特异性干扰SIRT1的表达能够抑制肿瘤细胞的增殖^[13]，而SIRT1表达增高能够促进肿瘤细胞的增殖、侵袭等^[14]。

肿瘤干细胞学说的提出为癌症相关研究开辟了新的方向，进一步加深了人们对肿瘤发生与发展的认识。Weissman提出了肿瘤干细胞学说，他认为存在于肿瘤组织中的一小部分细胞具有干细胞的特性，这些细胞能够自我更新并具有无限增殖能力和分化为各种肿瘤细胞的潜能，而其自身则处于休眠或低增殖状态，因而对放化疗的敏感度低，并且这些细胞是肿瘤形成的启动细胞，这一学说目前已经得到越来越多的学者的认同^[15-16]。结肠癌干细胞是结肠癌细胞中少数细胞亚群，具有明显未分化、自我更新和多向分化潜能，结肠癌干细胞很有可能是引发结肠癌并且在维持其生长及复发过程中起到关键作用，针对结肠癌干细胞的治疗有可能是关键因素。miR-34a在结肠癌干细胞中的表达水平及作用机制目前报道较少。

实验采用肿瘤球实验和表面标志体外富集人结肠癌干细胞，利用脂质体转染法将miR-34a模拟物转染人结肠癌干细胞，探讨改变其表达水平对结肠癌干细胞生物学特性的影响及相关机制，为结肠癌的防治提供理论依据。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

材料方法

1.1 设计 细胞学体外观察实验。

1.2 时间及地点 实验于2017年3至7月在海南医学院第一附属医院完成。

1.3 材料 人结肠癌细胞株HCT116(中科院上海细胞生物研究所)；胎牛血清、胰蛋白酶、PBS、RPMI1640培养液、DMEM/F12培养液(Gibco公司)；FITC-CD44单克隆抗体、PE-CD133单克隆抗体(Becton Dickinson公司)；重组表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子(PeproTech公司)；B27因子(Sigma公司)；Lipofectamine 2000转染试剂(美国Invitrogen Life Technologies公司)；CCK-8试剂盒(上海碧云天生物技术研究所)；总RNA提取Trizol试剂(美国Invitrogen公司)；RT-PCR试剂盒(日本TaKaRa公司)；目的基因及内参引物(上海生物工程公司设计和合成)；miRNA-34a模拟物及对照序列购自广州锐博生物科技有限公司；兔抗SIRT1、兔抗GAPDH及HRP标记的羊抗兔二抗(CST公司)；细胞凋亡试剂盒(南京凯基生物科技发展有限公司)；Transwell小室(美国Corning公司)；miR-34a模拟物和无意义小分子阴性对照片段(miR-34a无序阴性对照物)(广州锐博生物科技有限公司合成)。

1.4 方法

1.4.1 细胞培养 人结肠癌细胞株HCT116用含体积分数为10%胎牛血清的RPMI1640培养液传代培养，置于37 ℃，体积分数为5%CO₂饱和湿度培养箱中，待细胞生长至80%-90%汇合后，用0.25%胰酶消化，制成单细胞悬液，以1×10⁶ L^-¹的细胞浓度接种于无血清培养基中(DMEM/ F12、1︰50 B27、4%BSA、20 μg/L表皮生长因子、20 μg/L碱性成纤维细胞生长因子)进行悬浮培养，每3 d换液1次，每7-9 d传代1次，通过胰酶消化法和机械吹打法分离成单细胞悬液后传代，倒置显微镜下观察细胞球形成情况。

1.4.2 流式细胞仪检测 收集第3代肿瘤细胞球，胰酶消化后制成单细胞悬液，每管1×10⁵个细胞，加入FITC-CD44和PE-CD133单克隆抗体，混匀后室温下避光孵育30 min，PBS冲洗、离心，重复2次，多聚甲醛溶液固定细胞，流式细胞仪检测CD44⁺/CD133⁺细胞所占的比例。

1.4.3 细胞转染 将对数生长期的CD44⁺/CD133⁺肿瘤干细胞以1×10⁵/孔的密度接种于24孔板。待细胞生长至50%-80%融合时，分为3组：未转染组、miR-34a转染组、miR-34a对照组。未转染组不做任何处理，miR-34a转染组、miR-34a对照组将miR-34a模拟物或miRNA无序阴性对照物以Lipofectamine 2000包裹后转染至细胞中，严格按照Lipofectamine 2000转染试剂盒说明书执行转染，转染72 h后收集细胞，进行以下研究。采用qRT-PCR检测各组的miR-34a水平以评价转染效果。

1.4.4 qRT-PCR检测miR-34a的表达 按照Trizol说明书提取细胞的总RNA，反转录合成cDNA，以U6为内参照，使用qRT-PCR试剂盒进行扩增，采用2^-^??Ct方法分析miR-34a的相对表达水平。miR-34a-F：5’-ATG GTT CGT GGG TGG CAG TGT CTT AGC TGG-3’；miR-34a-R：5’-GCA GGG TCC GAG GTA TTC-3’；U6-F：5’-CTC GCT TCG GCA GCA CA-3’；U6-R：5’-AAC GCT TCA CGA ATT TGC GT-3’。

1.4.5 CCK-8增殖实验 按照CCK-8试剂盒说明操作，收集转染72 h后细胞，以每孔2×10⁴的密度接种于96孔板，在37 ℃，体积分数为5%CO₂饱和湿度培养箱培养，第1-5天每天同一时间点，每孔加入10 μL CCK-8溶液混匀，于37 ℃孵育2 h，采用酶联免疫仪检测各孔在波长450 nm处的吸光度值。重复3次，取平均值。

1.4.6 细胞凋亡实验 按照Annexin-V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒说明书进行操作，将2×10⁵转染72 h后的细胞加入到100 μL 1×Binding缓冲液中重悬，然后添加10 μL Annexin V-FITC和10 μL PI孵育20 min，PBS洗涤，加缓冲液重悬，上流式细胞仪检测。重复3次，取平均值。

1.4.7 细胞侵袭实验 取Transwell小室放入24孔板，接种细胞前，小室中加入无血清DMEM/F12培养基，于37 ℃放置2 h，吸出小室内培养基，然后在上层小室中加入无血清培养基重悬的细胞悬液500 μL(细胞浓度为5×10⁷ L^-¹)，下层小室中加入含体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12培养基750 μL，置于37 ℃、体积分数为5% CO₂细胞培养箱中培养24 h，吸出小室内培养液，PBS清洗，用棉签将微孔膜上层的细胞擦拭去，在室温下用甲醇固定15 min，用0.1%结晶紫染色20 min，PBS清洗2次，对微孔膜下层的细胞，在倒置显微镜下计数。

1.4.8 qRT-PCR检测SIRT1 mRNA的表达 按1.4.4实验方法检测SIRT1 mRNA的表达，结果以2^-??Ct表示。SIRT1引物序列为F：5’-GGA GGA GCT GGA TTT GGG ACT GAT-3’；R：5’-GGT GGA ACA ATT CCT GTA CCT GCA CA-3’。

1.4.9 Western blot检测SIRT1蛋白的表达 收集转染72 h后细胞，加入RIPA细胞裂解液置冰上裂解10 min，提取总蛋白，采用BCA试剂盒进行蛋白定量，每孔取等量蛋白，与上样缓冲液混匀后进行SDS-PAGE凝胶电泳，将目的蛋白半干转至PVDF膜，加入一抗(兔抗SIRT1、兔抗GAPDH，1︰1 000) 4 ℃孵育过夜，TBST漂洗5 min×3次，加入HRP标记的羊抗兔二抗，37 ℃孵育1 h，TBST漂洗5 min×3次，运用ECL化学发光法显影后，采用Gel-Pro analyzer软件进行量化分析。

1.5 主要观察指标 ①结肠癌干细胞培养形态及鉴定结果；②转染miR-34a模拟物后结肠癌干细胞的增殖、凋亡、侵袭情况；③转染miR-34a模拟物后结肠癌干细胞中SIRT1 mRNA和蛋白的表达水平。

1.6 统计学分析 采用SPSS 19.0统计学软件进行分析，数据以x(_)±s表示，多组间比较采用单因素方差分析，P < 0.05为差异有显著性意义。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

讨论

结肠癌是临床常见的恶性肿瘤之一，其发病机制仍不明确，手术是其最有效的治疗手段，但其发病隐匿，易发生转移，诊断时多属于中晚期，大多数患者已失去根治性手术机会，尽管外科手术技术在不断改善，但是手术辅助放化疗等对中晚期结肠癌的疗效还是很不乐观，仍避免不了癌组织的转移和复发。寻找新的有效的结肠癌生物治疗靶点，已成为提高结肠癌诊治的重要途径。近年来国内外研究表明肿瘤组织中含一小部分具有自我更新、多向分化潜能的肿瘤干细胞。肿瘤干细胞被认为是肿瘤生长、复发和转移的根源。分离出这一小部分细胞是结肠癌干细胞实验室研究及结肠癌临床治疗的关键^[17-18]。利用细胞表面标记，采用流式细胞仪或免疫磁珠分选可能的肿瘤细胞亚群，再进行生物学鉴定，以证明其干细胞特性。但该方法的明显不足之处在于借鉴其他肿瘤干细胞或正常干细胞的分选标记来分选肿瘤干细胞，一旦选取错误的分选标记，后续再验证这些筛选出的错误细胞亚群将毫无意义。无血清悬浮培养法依据肿瘤干细胞特性，采用添加生长因子的无血清培养基对肿瘤细胞进行悬浮培养，获得肿瘤干细胞样细胞球体，然后对分离的细胞球体进行生物学功能鉴定。此方法的优点是能够避免血清对细胞培养的影响，无需大量费用和复杂的细胞分离纯化过程，相对含血清培养基而言，无血清培养基具有更高的成分限定性和产品质量一致性。

HCT116是处于未分化状态的高侵袭性结肠癌细胞系，大量研究显示，只有未分化的肿瘤干细胞才能耐受无血清环境存活且能形成肿瘤干细胞球^[19]。成球的肿瘤细胞中干细胞比例增加，可以分选出较多的干细胞用于研究。根据肿瘤干细胞的这种生长特点，实验以结肠癌细胞株HCT116为研究对象，采用无血清悬浮培养法富集结肠癌干细胞。采用流式细胞术对分离得到的肿瘤细胞球进行鉴定，判断其是否具有肿瘤干细胞特性。CD44属于黏附分子家族，作为一种细胞膜表面糖蛋白介导细胞间、细胞与外基质间的黏附作用，参与细胞增殖、分化、黏附和迁移等^[20-21]。冯燕君等^[22]采用无血清培养法培养出CD44⁺CD24^-的结肠癌细胞亚群，在动物体内具有很强的致瘤能力。CD133是近年来的肿瘤干细胞研究领域的热点之一，它的过表达可以促进肿瘤细胞的增殖。从结肠癌细胞系中筛选得到的CD44⁺/CD133⁺细胞，具有更强的成球生长能力，接种于动物体内可形成肿瘤^[23]。实验采用流式细胞术分析发现，上述分离的肿瘤干细胞中含有较高比例的CD44⁺/CD133⁺表型细胞。无血清悬浮培养是简单而有效的初步富集结肠癌干细胞的方法，为结肠癌干细胞的生物学性能研究奠定理论与实践基础。

miRNAs是一组非编码小分子RNA，其功能主要在转录后水平调控靶基因表达。文献已证实miRNAs在肿瘤发生发展过程中扮演重要的角色^[24]。miR-34a是备受关注的miRNA之一。作为p53的下游基因，miR-34a是一种起抑癌作用的miRNA，其编码基因位于1号染色体短臂(1p36.23)，它能调节多个靶基因的表达，有可能成为治疗肿瘤的新靶点^[25]。多项研究表明，miR-34a在多种肿瘤细胞中具有抑制增殖、促进凋亡的作用，但其中涉及的调控机制尚不明确^[26-31]。实验采用脂质体转染法，以miR-34a模拟物转染实现miR-34过表达，qRT-PCR检测miR-34a转染效率，结果显示，miR-34a转染组的miR-34a表达量高于未转染组和miR-34a对照组，说明miR-34a已成功转染至结肠癌干细胞中。进一步通过细胞模型实验探讨miR-34a在结肠癌干细胞中的功能，实验检测结果显示，过表达miR-34a可显著抑制结肠癌干细胞的增殖、侵袭且促进细胞凋亡。

研究表明，miRNA可直接抑制多种信息调控因子、细胞周期蛋白的表达来调控各种生物学过程。通过查阅相关文献，分析SIRT1是miR-34a的靶基因^[32]，调控细胞的增殖、分化、凋亡等过程，在肿瘤的发生、发展中起重要作用^[33]，其包括结肠癌、前列腺癌、乳腺癌和非小细胞肺癌在内的多种恶性肿瘤中异常高表达，并与不良预后密切相关^[34-35]。研究发现，SIRT1可以通过AMPK、Akt、P53等多种信号通路，调节肿瘤细胞的增殖、凋亡以及化疗药物的敏感性^[36-40]。实验采用qRT-PCR和Western blot实验检测结果显示：miR-34a转染后结肠癌干细胞中的SIRT1 mRNA和蛋白表达水平显著下降，与未转染组和miR-34a对照组比较，差异有显著性意义(P < 0.05)。因此，作者推测过表达miR-34a可抑制结肠癌干细胞增殖、侵袭并诱导凋亡，可能与其下调SIRT1的表达有关。但是，miR-34a是否还通过靶向其他基因来调控结肠癌干细胞的增殖、凋亡、侵袭，仍需要进一步研究。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

miR-34a调节SIRT1表达抑制结肠癌干细胞增殖和侵袭

miR-34a inhibits the proliferation and invasion of colon cancer stem cells by regulating SIRT1 expression

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