miR-34a-5p/PLCD3轴调控骨关节炎进展的机制

doi:10.12307/2024.653

中国组织工程研究 ›› 2024, Vol. 28 ›› Issue (33): 5320-5325.doi: 10.12307/2024.653

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miR-34a-5p/PLCD3轴调控骨关节炎进展的机制

应璞，许岳，路通，薛燚，缪逸鸣

南京中医药大学常熟附属医院，江苏省常熟市 215500

收稿日期:2023-08-14 接受日期:2023-10-12 出版日期:2024-11-28 发布日期:2024-01-30
通讯作者: 缪逸鸣，主任医师，南京中医药大学常熟附属医院骨科，江苏省常熟市 215500
作者简介:应璞，男，1988年生，江苏省常熟市人，汉族，博士，副主任医师，主要从事关节外科临床与基础研究。
基金资助:
苏州市科技发展计划指导性项目(SKJYD2021007)，项目负责人：应璞；苏州市科技发展计划指导性项目(SKJYD2021202)，项目负责人：缪逸鸣；苏州市“科教兴卫”青年科技项目(KJXW2020068)，项目负责人：应璞；常熟市卫健委科技计划项目资助性重点项目(CSWS202118)，项目负责人：应璞；南京中医药大学常熟附属医院课题(cszyy201910)，项目负责人：应璞

Mechanism by which miR-34a-5p/PLCD3 axis regulates osteoarthritis progression

Ying Pu, Xu Yue, Lu Tong, Xue Yi, Miao Yiming

Changshu Hospital Affiliated to Nanjing University of Chinese Medicine, Changshu 215500, Jiangsu Province, China

Received:2023-08-14 Accepted:2023-10-12 Online:2024-11-28 Published:2024-01-30
Contact: Miao Yiming, Chief physician, Changshu Hospital Affiliated to Nanjing University of Chinese Medicine, Changshu 215500, Jiangsu Province, China
About author:Ying Pu, MD, Associate chief physician, Changshu Hospital Affiliated to Nanjing University of Chinese Medicine, Changshu 215500, Jiangsu Province, China
Supported by:
Suzhou Science and Technology Development Plan Guiding Project, No. SKJYD2021007 (to YP); Suzhou Science and Technology Development Plan Guiding Project, No. SKJYD2021202 (to MYM); Suzhou “Science, Education and Health” Youth Science and Technology Project, No. KJXW2020068 (to YP); Key Project of Changshu Municipal Health Commission Science and Technology Plan, No. CSWS202118 (to YP); a grant from Changshu Hospital Affiliated to Nanjing University of Chinese Medicine, No. cszyy201910 (to YP)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：

miR-34a-5p：作为一种非编码miRNA，是真核生物中广泛存在的一种RNA分子，可调节其他基因的表达，通过与靶信使核糖核酸(mRNA)特异结合，从而抑制转录后基因表达，在调控基因表达、调节细胞稳态等方面起重要作用。
miRNA/mRNA轴：是指两者之间的相互作用关系。miRNA通过与mRNA结合来调控基因表达，可以导致mRNA的降解或抑制其翻译。miRNA/mRNA轴在许多生物学过程中起着重要的调控作用，包括细胞增殖、分化、凋亡等。

背景：目前已有针对miRNA/mRNA轴调节骨关节炎疾病进程的分子机制研究。先前生物信息学研究发现具有临床预测价值的mRNA(磷脂酶Cδ3：phospholipase C delta 3，PLCD3)及其靶向miRNA(miR-34a-5p)，尚缺实验验证其调控骨关节炎的具体作用及机制。

目的：探讨miR-34a-5p/PLCD3轴对骨关节炎进展的调控作用及机制。
方法：选择15例膝骨关节炎患者的滑膜为骨关节炎组，同时选择同期因创伤致髌骨骨折行内固定术的15例年轻患者的健康滑膜为对照组，Real-time PCR法检测滑膜中PLCD3及miR-34a-5p的表达。通过细胞转染的方法，将人滑膜关节炎成纤维细胞(human fibroblast like synovial cells-osteoarthritis，HFLS-OA)进行处理，并分为miR-34a-5p模拟物组、pCDH-PLCD3组、miR-34a-5p模拟物+pCDH-PLCD3组、miR-34a-5p抑制剂组、si-PLCD3组、miR-34a-5p抑制剂+si-PLCD3组，通过Real-time PCR法检测PLCD3和miR-34a-5p表达的关系；通过CCK-8法、细胞划痕实验检测各组HFLS-OA细胞活力及细胞迁移的影响；使用Western Blot法检测凋亡标记蛋白表达水平；使用ELISA法检测炎症因子的表达。

结果与结论：①PLCD3是miR-34a-5p的直接靶标，同时PLCD3和miR-34a-5p表达水平呈负相关。②PLCD3上调会促进HFLS-OA细胞的增殖并抑制细胞迁移，而miR-34a-5p上调会显著抑制HFLS-OA细胞的活性并增强细胞迁移；miR-34a-5p过表达使HFLS-OA细胞Casp3和Casp9蛋白水平显著升高，而PLCD3过表达则表现出相反趋势。③PLCD3过表达显著增加了HFLS-OA细胞白细胞介素6和肿瘤坏死因子α的表达，而miR-34a-5p模拟物则表现出保护活性。④结果说明，miR-34a-5p/PLCD3轴可能通过调节滑膜细胞的炎症过程或凋亡来影响骨关节炎的进展。

https://orcid.org/0000-0003-3975-6326 (应璞)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：人工关节；骨植入物；脊柱；骨折；内固定；数字化骨科；组织工程

关键词: 骨关节炎, 滑膜, miR-34a-5p, 磷脂酶Cδ3, PLCD3, 白细胞介素6, 肿瘤坏死因子α

Abstract: BACKGROUND: Molecular mechanisms targeting the miRNA/mRNA axis to regulate osteoarthritis disease process have been studied. We identified the mRNA: phospholipase C delta 3 (PLCD3) and its target miRNA(miR-34a-5p) with clinical predictive value through previous bioinformatics studies, while experiments to verify their specific roles and mechanisms in regulating osteoarthritis are still lacking.
OBJECTIVE: To investigate the regulatory role and mechanism of miR-34a-5p/PLCD3 axis on osteoarthritis progression.
METHODS: The synovium of 15 patients with knee osteoarthritis was selected as the osteoarthritis group, and the synovium of 15 young patients with internal fixation of patellar fracture caused by trauma during the same period was selected as the control group. The expression of PLCD3 and miR-34a-5p in the synovium was detected by real-time PCR. Human fibroblast like synovial cells-osteoarthritis (HFLS-OA) cells were treated by cell transfection and divided into miR-34a-5p mimic group, pCDH-PLCD3 group, miR-34a-5p mimic+pCDH-PLCD3 group, miR-34a-5p inhibitor group, si-PLCD3 group, and miR-34a-5p inhibitor+si-PLCD3 group. The relationship between PLCD3 and miR-34a-5p expression was detected by real-time PCR. The effects of HFLS-OA cell viability and cell migration in each group were detected by CCK-8 assay and cell scratch test. Western blot assay was used to detect the expression level of apoptosis marker protein. The expression of inflammatory factors was detected by ELISA.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) PLCD3 was a direct target of miR-34a-5p, and the expression levels of PLCD3 and miR-34a-5p were negatively correlated. (2) Upregulation of PLCD3 promoted proliferation of HFLS-OA cells and inhibited cell migration. The up-regulation of miR-34a-5p significantly inhibited the activity of HFLS-OA cells and enhanced cell migration. Overexpression of miR-34a-5p significantly increased the levels of Casp3 and Casp9 proteins in HFLS-OA cells, while overexpression of PLCD3 showed the opposite trend. (3) PLCD3 overexpression significantly increased the expression of interleukin 6 and tumor necrosis factor alpha in HFLS-OA cells, while miR-34a-5p mimics showed protective activity. (4) The miR-34a-5p/PLCD3 axis may affect the progression of osteoarthritis by regulating the inflammatory process or apoptosis of synovial cells.

Key words: osteoarthritis, synovial membrane, miR-34a-5p, phospholipase Cδ3, PLCD3, interleukin 6, tumor necrosis factor alpha

中图分类号:

应璞, 许岳, 路通, 薛燚, 缪逸鸣. miR-34a-5p/PLCD3轴调控骨关节炎进展的机制[J]. 中国组织工程研究, 2024, 28(33): 5320-5325.

Ying Pu, Xu Yue, Lu Tong, Xue Yi, Miao Yiming. Mechanism by which miR-34a-5p/PLCD3 axis regulates osteoarthritis progression[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2024, 28(33): 5320-5325.

图/表（结果） 7

2.1 PLCD3是miR-34a-5p的直接靶标 PLCD3的3’ UTR区具有miR-34a-5p的结合位点，见图1。qRT-PCR结果显示，骨关节炎组滑膜中miR-34a-5p表达水平明显低于对照组(P < 0.05)；相关性分析结果显示miR-34a-5p与PLCD3的表达水平呈现负相关(r=-0.611，P < 0.05)，见图2。随后的双荧光素酶报告基因实验进一步验证了PLCD3和miR-34a-5p之间的关系，miR-34a-5p模拟物转染后，WT组中PLCD3的相对荧光素酶活性显著下降(P < 0.05)；而在PLCD3 mut组没有下降，见图3A。进一步通过qRT-PCR分析miR-34a-5p模拟物、pCDH-PLCD3和miR-34a-5p模拟物+pCDH-PLCD3对HFLS-OA细胞中PLCD3表达的影响，结果显示，miR-34a-5p的过表达可抑制PLCD3表达，miR-34a-5p沉默则促进PLCD3表达，见图3B，C。此外，转染miR-34a-5p模拟物或抑制剂分别削弱了pCDH-PLCD3对PLCD3表达的促进作用和si-PLCD3诱导的抑制作用。上述结果表明PLCD3是miR-34a-5p的直接靶点。

2.2 miR-34a-5p/PLCD3轴对HFLS-OA细胞增殖、迁移、凋亡的影响
2.2.1 CCK8测定结果显示si-PLCD3显著抑制HFLS-OA细胞增殖；相反，转染pCDH-PLCD3后，HFLS-OA细胞的增殖显著增加；miR-34a-5p模拟物和pCDH-PLCD3的共转染可以改变miR-34a-5b模拟物和pCDH-PLCD3的个体转染的相应效果，见图4。

2.2.2 划痕实验结果显示相反的趋势。PLCD3过表达减少了细胞迁移，而PLCD3的敲除显著增加了细胞迁移率；类似的，miR-34a-5p模拟物和pCDH-PLCD3的共转染逆转了pCDH-PLCD3对HFLS-OA 细胞迁移能力的影响。总之，miR-34a-5p/PLCD3轴会对HFLS-OA细胞的增殖和迁移产生影响，见图5A和图5B。

2.2.3 Western Blot检测采用蛋白质印迹法进一步阐明miR-34a-5p/PLCD3轴在HFLS-OA细胞中的作用。结果显示，miR-34a-5p过表达HFLS-OA细胞Casp3和Casp9蛋白水平显著升高，而PLCD3过表达则表现出相反趋势，见图6A，B。这些结果表明miR-34a-5p/PLCD3 轴可以刺激HFLS-OA细胞凋亡。

2.3 miR-34a-5p/PLCD3轴对HFLS-OA细胞炎症因子分泌的影响用白细胞介素1β(10 ng/mL)、miR-34a-5p模拟物和PLCD3过表达质粒预处理细胞24 h后，用 ELISA检测白细胞介素6和肿瘤坏死因子α水平。与空白对照组相比，在单一治疗组中，白细胞介素1β和PLCD3过表达显著增加了白细胞介素6和肿瘤坏死因子α的表达，而miR-34a-5p mimic组表现出保护活性；在联合治疗组中，PLCD3过表达促进了白细胞介素1β的促炎细胞因子分泌作用；相反，miR-34a-5p mimic削弱了白细胞介素1β对炎症因子的促进作用，见图7A，B。

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引言

骨关节炎是一种以滑膜炎症、关节软骨退化和破坏、骨质增生为特征的慢性关节疾病，其临床表现为关节疼痛、僵硬和肿胀，并伴有活动受限或关节稳定性降低[1-2]。迄今为止，由于骨关节炎的发病机制尚不清晰，同时缺乏能够逆转骨关节炎进展的有效药物，因此有必要对骨关节炎新的生物标志物进行探索和鉴定。最近研究表明，骨关节炎进展过程中滑膜组织炎症增生，并导致软骨受侵蚀和退化[3-5]。滑膜增生组织中存在许多成纤维细胞样滑膜细胞，参与关节软骨的破坏，这些细胞的增殖和凋亡等生物学行为也变得异常活跃，可释放出大量炎症因子加速关节软骨破坏[6-9]。
磷脂酶C(phospholipase C，PLC)是磷脂酰肌醇代谢的关键酶，参与真核生物的信号转导。PLCD3(phospholipase C delta 3)是磷脂酶C家族的一个成员，它在许多肿瘤生物学过程中起着至关重要的作用，如参与鼻咽癌和甲状腺癌的转移和进展等[10-12]。但目前关于PLCD3与骨关节炎相关性的研究较少。miRNA是一类多功能的短非编码RNA，能够通过直接与目标基因的3’UTR结合参与各种生物和病理学过程。许多研究表明，miRNAs可以通过调节软骨细胞的增殖和凋亡影响骨关节炎的进展[13-15]。通过先前的生物信息学分析发现，miR34a-5p可能直接靶向PLCD3[16]。SONG等[17]发现miR-34a-5p在滑膜成纤维细胞中表达水平较低，并且可以通过靶基因XBP1抑制细胞增殖。TIAN等[18]报道miR-34a-5p在骨关节炎软骨细胞中表达上调，而下调miR-34a-5p可促进骨关节炎软骨细胞增殖，抑制细胞凋亡和自噬。ENDISHA等[19]发现miR-34a-5p在晚期骨关节炎患者的血浆、软骨和滑膜中表达显著增加，从而促进骨关节炎的关节破坏。然而，PLCD3和miR-34a-5p在骨关节炎中的潜在分子机制尚不清楚。因此，此次实验通过研究miR34a-5p/PLCD3轴在人滑膜关节炎成纤维细胞(human synovial arthritis fibroblasts，HFLS-OA)中的作用，探讨miR34a-5p/PLCD3轴可能通过何种方式参与调节骨关节炎进展的生物学过程，为骨关节炎的治疗提供新的生物标志物。中国组织工程研究杂志出版内容重点：人工关节；骨植入物；脊柱；骨折；内固定；数字化骨科；组织工程

材料方法

1.1 设计人膝关节滑膜样本数据分析，体外细胞学实验，两组数据之间比较采用t检验，多组数据之间比较采用单因素方差分析。
1.2 时间及地点实验于2021年1月至2023年2月在南京中医药大学常熟附属医院完成。
1.3 对象选择2022年1月至2023年2月在南京中医药大学常熟附属医院行全膝关节置换术的15例膝骨关节炎患者的滑膜为骨关节炎组，同时选择同期因创伤致髌骨骨折行内固定术的15例年轻患者的健康滑膜为对照组。该研究已通过南京中医药大学常熟附属医院伦理委员会审查通过(审查批件编号：202202007)，受试者对治疗方法及组织标本的采集完全知情同意，并签署了知情同意书。
1.3.1 骨关节炎患者入组标准
(1)诊断标准：①近１个月内反复的膝关节疼痛；②X射线片(站立位或负重位)示关节间隙变窄、软骨下骨硬化和(或)囊性变、关节边缘骨赘形成；③年龄≥50岁；④晨僵时间≤30 min；⑤活动时有骨摩擦音(感)。满足诊断标准①+②③④⑤条中的任意2条可诊断为膝骨关节炎。
(2)纳入标准：①符合膝骨关节炎的诊断标准：根据中华医学会骨科学分会指定的《骨关节炎诊疗指南(2018版)》和《中国骨关节炎诊疗指南(2021年版)》[20-21]；②采用全膝关节置换术治疗；③对试验内容知情同意并签署知情同意书。
(3)排除标准：①同侧下肢既往有感染病史、骨与软组织肿瘤病史或其他重大手术及外伤史；②身体基础状况无法耐受手术；③病历资料不全。
1.3.2 对照组患者入组标准
(1)纳入标准：①年龄18-35岁；②新鲜闭合性骨折者；③采用切开复位内固定术治疗；④对试验内容知情同意并签署知情同意书。
(2)排除标准：①同侧膝关节合并其他骨折；②身体基础状况无法耐受手术；③病历资料不全。
1.4 材料 HFLS-OA、人成纤维样滑膜细胞(human fibroblast-like synoviocyte，HFLS)(上海通蔚)；DMEM培养基和体积分数10%胎牛血清(美国Invitrogen)；白细胞介素1β(美国Sigma)；RNA提取试剂盒RNeasy Mini Kit(德国Qiagen)；Golden StarTM RT6 cDNA合成试剂盒、Master qPCR Mix(SYBR GREEN I)(北京擎科生物)；miR-34a-5p、U6引物(MQPS00010961-100，MQPS0000002-1-100)、Si-PLCD3、siRNA对照、PLCD3过表达质粒(pCDH-GFP-PLCD3)、对照质粒(NC)、miR-34a-5p mimic、miR-34a-5p inhibitors和双荧光素酶报告基因pmiR-RB-ReportTM 3’UTR均购自广州锐博生物；Lipofectamine 3000试剂(美国Invitrogen)；双荧光素酶报告试剂盒(美国Promega)；CCK-8试剂盒、蛋白质裂解液、BCA蛋白质测定试剂、Casp3抗体(AF6370)、Casp9抗体(AF1264)、辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG(H+L)均为碧云天产品。
1.5 实验方法
1.5.1 细胞培养及处理 HFLS-OA和HFLS以DMEM培养基作为基础培养基，加入体积分数10%胎牛血清、100 U/mL青霉素和100 mg/mL链霉素，恒温箱以体积分数5% CO2、37 ℃培养细胞。使用白细胞介素1β(10 ng/mL)持续刺激HFLS 24 h以构建关节炎体外模型。
1.5.2 qPCR检测滑膜中相关基因及miRNA的表达取2组各15例人膝关节滑膜组织，首先使用小样本RNA提取试剂盒提取总RNA，并使用Nanodrop 2000测量提取RNA的浓度。通过Golden StarTM RT6 cDNA合成试剂盒将等量RNA反转录成cDNA。随后使用Master qPCR Mix(SYBR GREEN I)和Biosystems 7500 Fast实时荧光定量PCR系统进行RT-PCR检测。GAPDH作为RNA内参，U6作为miRNA内参。反应条件：95 ℃ 1 min，95 ℃ 10 s，60 ℃ 30 s，40个循环。使用2-ΔΔCt法计算mRNA和miRNA的表达水平。Primer 5.0软件用于设计mRNA引物。引物序列见表1。

1.5.3 细胞转染用Opti-MEM培养基分别稀释Lipofectamine 3000试剂、Si-PLCD3、siRNA对照、PLCD3过表达质粒(pCDH-GFP-PLCD3)、对照质粒(NC)、miR-34a-5p mimic和miR-34a-5p inhibitors，按照lipofectamine 3000的操作说明将HFLS-OA细胞分别进行转染，并分为miR-34a-5p模拟物组、pCDH-PLCD3组、miR-34a-5p模拟物+pCDH-PLCD3组、miR-34a-5p抑制剂组、si-PLCD3组、miR-34a-5p抑制剂+si-PLCD3组。
1.5.4 CCK-8实验收集受试细胞，按照96孔板1×104个/孔均匀铺板，每个实验组有3个重复孔，随后在37 ℃、体积分数5% CO2条件下进行24 h和48 h孵育处理。每孔加入10 μL CCK-8(5 mg/mL)继续孵育3 h，使用多模式读取器以450 nm测量每个孔的吸光度值。重复进行实验3次。
1.5.5 划痕实验收集受试细胞，1×105个/孔均匀铺板48孔板，随后以37 ℃、体积分数5%CO2为条件置于恒温培养箱中。当细胞长到融合成单层状态时，用200 μL无菌枪头画一条直线，随后用PBS清洗2次，通过显微镜拍摄划痕照片，记录0，12，24和48 h时划痕状态并使用Image J软件评估。
1.5.6 双荧光素酶报告实验将细胞按1×104个/孔均匀铺至96孔板，Opti-MEM培养基稀释重组质粒pmiR-RB-PLCD3 WT、pmiR-RB-PLCD3 mut、pmiR-RB-NC和miR-34a-5p mimic、miR-34a-5p mimic NC进行共转染。培养48 h的后使用双荧光素酶报告试剂盒测量荧光强度值。
1.5.7 蛋白质印迹实验细胞转染48 h后收集细胞，使用蛋白质裂解液裂解细胞，收集总蛋白质。用BCA方法定量蛋白质。加入5×上样缓冲液，蛋白质95 ℃变性5 min。使用12% SDS-PAGE电泳转移蛋白带至PVDF膜。随后用5%脱脂奶粉封闭，孵育2 h，加入一抗[Casp3(AF6370)、Casp9(AF1264)]，稀释比例均为1∶1 000，4 ℃过夜孵育。用TBST清洗后，室温下加入HRP标记的二抗(1∶1 000)孵育条带60 min。然后，使用Western TMB Substrate显色。
1.5.8 ELISA实验将HFLS-OA细胞以1×106个/孔均匀铺板6孔板并孵育24 h。加入miR-34a-5p mimic和PLCD3过表达质粒，继续孵育24 h。随后，白细胞介素1β(10 ng/mL)额外处理细胞24 h。收集细胞上清液并1 500 r/min、4 ℃离心10 min，随后使用肿瘤坏死因子α及白细胞介素6 ELISA试剂盒进行检测，实验过程按说明书进行。
1.6 主要观察指标 ①HFLS-OA细胞的活力；②HFLS-OA细胞的迁移情况；③HFLS-OA细胞中凋亡标记蛋白Casp3和Casp9的表达；④白细胞介素1β诱导的HFLS-OA细胞中炎症因子的表达。
1.7 统计学分析连续性变量以x±s表示，GraphPad Prism 7.0和SPSS 22.0用于统计分析，组间比较采用单因素方差分析，多个均数之间两两比较行LSD-t检验，相关性分析采用Pearson相关性分析法，P < 0.05时认为差异有显著性意义。该文统计学方法已经南京中医药大学常熟附属医院生物统计学专家审核。

讨论

骨关节炎的发病机制与慢性滑膜炎症和软骨退化均有关，然而导致关节退化和功能丧失的真正因素目前仍是未知的[3，22]。骨关节炎造成的关节功能丧失对患者的日常生活和社会活动带来了极大的负面影响，因此探讨骨关节炎的病理生理机制及新的有效治疗手段显得极其重要。
目前日渐增多的证据表明，miRNA在骨关节炎的发病机制中具有不同的调节作用，包括参与调节细胞增殖、侵袭、炎症、细胞凋亡和自噬等细胞生物学行为[15，23-25]。为了开发新的治疗策略并探究miRNA调节HFLS-OA细胞的分子机制，通过生物信息学分析方法发现高表达于骨关节炎滑膜样本中的PLCD3可能是一个潜在的治疗靶点[16]，这与COUTINHO等[26]的研究结果是一致的；同时发现直接靶向PLCD3的miR-34a-5p表达水平在骨关节炎组中较正常对照组下调。虽然目前已经有一些关于miR-34a-5p在骨关节炎中的研究报道，但是尚无针对miR-34a-5p靶基因PLCD3对骨关节炎调节作用的研究。以往研究显示，miR-34a-5p可以抑制成纤维细胞样滑膜细胞的增殖并抑制成纤维细胞样滑膜细胞分泌肿瘤坏死因子α和白细胞介素6[17]。还有报道称，miR-34a-5p在骨关节炎软骨组织和白细胞介素1β处理的软骨细胞中分别表达上调和下调，即促进了骨关节炎软骨细胞增殖，抑制了细胞的凋亡和自噬[18]。基于已有的报道，同时结合实验结果，推测miR-34a-5p/PLCD3轴在骨关节炎的进展中发挥着重要的作用。
此次研究发现，PLCD3在骨关节炎滑膜样本中的表达显著上调。体外实验结果显示，PLCD3上调会促进HFLS-OA细胞的增殖并抑制细胞迁移，而miR-34a-5p上调会显著抑制HFLS-OA细胞的活性并增强细胞迁移，这表示miR-34a-5p可能通过靶基因PLCD3调控HFLS-OA细胞的迁移和增殖能力。
骨关节炎的发生或恶化一般伴随着炎症反应。目前已有证据显示，位于滑膜内膜层的成纤维细胞(成纤维细胞样滑膜细胞)具有不完全转化细胞的特征[27]，它们在炎症刺激下可以被持续激活，表现出肿瘤样增殖活性和高侵袭能力，这与骨关节炎关节软骨破坏和关节损伤密切相关[28-29]。
CHWASTEK等[30]研究表明，骨关节炎患者的成纤维细胞样滑膜细胞(FLS-OA)对环境中促炎因子存在的反应增强，从而使成纤维细胞样滑膜细胞在功能上发生改变，进一步促进骨关节炎的进展。因此，此次研究进一步检测了miR-34a-5p/PLCD3轴对炎症因子的影响，结果表明，白细胞介素1β会增加HFLS-OA细胞中肿瘤坏死因子α和白细胞介素6的产生，提示白细胞介素1β建立的细胞模型可以模拟骨关节炎的病理过程。PLCD3的过表达增强了白细胞介素1β对肿瘤坏死因子α和白细胞介素6产生的刺激作用，而miR-34a-5p过表达逆转了白细胞介素1β的刺激作用。研究结果表明，miR-34a-5p/PLCD3轴可以通过调控HFLS-OA细胞中炎症因子的释放来调控细胞炎症反应；进一步进行了凋亡相关蛋白检测，结果表明PLCD3过表达可抑制细胞凋亡，miR-34a-5p模拟物可升高细胞凋亡率。这种促凋亡行为可能是抑制HFLS-OA过度活动的一种机制或反应。
综上所述，miR-34a-5p/PLCD3轴可能通过调节滑膜细胞的炎症过程或凋亡影响骨关节炎的进展。但目前的研究存在一些局限性，例如所有实验都是以细胞实验为基础进行，今后还需要通过设计体内实验进行验证；此外骨关节炎的发生和发展是一个复杂的过程，会受到多条信号通路组成的信号网络调控，但具体介导的信号通路此次未做深入探讨。因而今后还需要进一步研究以评估miR-34a-5p/PLCD3轴在骨关节炎的临床诊治中的重要性。中国组织工程研究杂志出版内容重点：人工关节；骨植入物；脊柱；骨折；内固定；数字化骨科；组织工程

miR-34a-5p/PLCD3轴调控骨关节炎进展的机制

Mechanism by which miR-34a-5p/PLCD3 axis regulates osteoarthritis progression

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