针刀调控线粒体途径软骨细胞凋亡防治大鼠膝骨关节炎

doi:10.12307/2024.513

中国组织工程研究 ›› 2024, Vol. 28 ›› Issue (32): 5190-5195.doi: 10.12307/2024.513

• 软骨组织构建 cartilage tissue construction • 上一篇下一篇

针刀调控线粒体途径软骨细胞凋亡防治大鼠膝骨关节炎

卢梦雅1，伍闲1，佘泽宇1，夏帅1，卢曼1，杨永晖2

1安徽中医药大学研究生院，安徽省合肥市 230038；2安徽省针灸医院骨伤科，安徽省合肥市 230061

收稿日期:2023-08-31 接受日期:2023-10-21 出版日期:2024-11-18 发布日期:2023-12-29
通讯作者: 杨永晖，教授，主任医师，博士生导师，安徽省针灸医院骨伤科，安徽省合肥市 230061
作者简介:卢梦雅，女，1994年生，安徽省广德市人，汉族，硕士在读，主要从事针刀医学基础与临床研究。
基金资助:
2022年度安徽省中医药传承创新科研项目(2022CCZC03)，项目负责人：杨永晖；2022年度安徽省高校科研项目(2022AH050499)，项目负责人：杨永晖；2022年国家重大疾病治疗专科针灸科项目(622WCS2022)，项目参与人：杨永晖

Acupotomy prevents knee osteoarthritis in rats by modulating chondrocyte apoptosis in the mitochondrial pathway

Lu Mengya1, Wu Xian1, She Zeyu1, Xia Shuai1, Lu Man1, Yang Yonghui2

1Graduate School of Anhui University of Chinese Medicine, Hefei 230038, Anhui Province, China; 2Department of Orthopedics and Traumatology, Anhui Acupuncture and Moxibustion Hospital, Hefei 230061, Anhui Province, China

Received:2023-08-31 Accepted:2023-10-21 Online:2024-11-18 Published:2023-12-29
Contact: Yang Yonghui, Professor, Chief physician, Doctoral supervisor, Department of Orthopedics and Traumatology, Anhui Acupuncture and Moxibustion Hospital, Hefei 230061, Anhui Province, China
About author:Lu Mengya, Master candidate, Graduate School of Anhui University of Chinese Medicine, Hefei 230038, Anhui Province, China
Supported by:
2022 Anhui Traditional Chinese Medicine Inheritance and Innovation Research Project No. 2022CCZC03 (to YYH); 2022 Anhui University Research Project, No. 2022AH050499 (to YYH); 2022 National Specialty Acupuncture for the Treatment of Major Diseases Project, No. 622WCS2022 (to YYH [project participant])

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：

软骨细胞：是关节软骨中主要的细胞成分，当软骨细胞处于病理状态无法发挥正常功能或凋亡时就不能适当地再生和重塑软骨，最终导致关节软骨衰竭，诱发关节疾病。减少软骨细胞凋亡、恢复软骨功能对于减缓膝骨关节炎的发生发展是至关重要的。
线粒体途径的细胞凋亡：细胞凋亡信号通路可以分为细胞内信号诱导的线粒体途径及细胞外信号触发的死亡受体途径，其中线粒体途径的凋亡信号主要由Bcl-2家族成员通过调节线粒体膜的通透性进行调控。

背景：针刀治疗膝骨关节炎的疗效确切，但其作用机制并不十分明确。

目的：基于破骨细胞相关受体-肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体-骨保护素(OSCAR-TRAIL-OPG)途径分析针刀对膝骨关节炎大鼠膝关节软骨细胞凋亡的影响。
方法：采用随机数字表法将27只SD大鼠分为正常组(9只)、模型组(9只)、针刀组(9只)，正常组大鼠常规饲养，不进行任何处理；模型组、针刀组采用膝关节内注射木瓜蛋白酶建立左后肢膝骨关节炎模型，造模成功后给予针刀组大鼠针刀干预，1次/周，共3次。干预结束后进行相关检测。

结果与结论：①与正常组相比，模型组大鼠Lequesne MG行为学评分升高(P < 0.01)；与模型组相比，针刀组大鼠Lequesne MG行为学评分降低(P < 0.01)。②苏木精-伊红染色显示与正常组相比，模型组大鼠膝关节软骨表面磨损且不平整，软骨细胞肿胀、破裂且数量减少，细胞排列杂乱；针刀组大鼠膝关节软骨表面较为平整，软骨细胞数量较多且排列较规整，结构基本清晰。③免疫组化染色显示与正常组相比，模型组大鼠膝关节软骨组织中OSCAR、TRAIL阳性表达增加(P < 0.01)，OPG阳性表达减少(P < 0.01)；与模型组相比，针刀组大鼠膝关节软骨组织中OSCAR、TRAIL阳性表达减少(P < 0.01)，OPG阳性表达增加(P < 0.01)。④TUNEL染色显示与正常组相比，模型组软骨细胞凋亡数量增加(P < 0.01)；与模型组相比，针刀组软骨细胞凋亡数量减少(P < 0.01)。⑤RT-qPCR与Western blot检测显示与正常组相比，模型组大鼠关节软骨组织中OSCAR、TRAIL、Bax表达升高(P < 0.01)，OPG、Bcl-2表达降低(P < 0.01)；与模型组相比，针刀组大鼠关节软骨组织中OSCAR、TRAIL、Bax表达降低(P < 0.01)，OPG、Bcl-2表达升高(P < 0.01)。⑥针刀干预可减轻膝骨关节炎大鼠关节软骨组织损伤，该作用可能与OSCAR-TRAIL-OPG通路阻断线粒体途径凋亡信号释放有关。

https://orcid.org/0009-0002-5260-5303(卢梦雅)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

关键词: 针刀, 膝骨关节炎, 软骨细胞凋亡, 破骨细胞相关受体, 肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体, 骨保护素, 大鼠

Abstract: BACKGROUND: Acupotomy is effective in the treatment of knee osteoarthritis, but its mechanism is not very clear.
OBJECTIVE: To observe the effect of acupotomy on the apoptosis of knee chondrocytes in knee osteoarthritis rats based on osteoclast associated receptor (OSCAR)-tumor necrosis factor-associated apoptosis-inducing ligand (TRAIL)-osteoprotetin (OPG) pathway.
METHODS: Twenty-seven Sprague-Dawley rats were randomly divided into normal group (n=9), model group (n=9) and acupotomy group (n=9). Rats in the normal group were routinely housed without any treatment. Animal models of knee osteoarthritis were established by knee injection of papain. Acupotomy intervention was performed 1 week after modeling, once a week for a total of three times. Relevant tests were performed at the end of the intervention.
RESULTS AND CONCLUSION: The Lequesne MG behavioral scores of rats in the model group were elevated compared with the normal group (P < 0.01), while the Lequesne MG behavioral scores of rats in the acupotomy group were decreased comparedwith the model group (P < 0.01). Hematoxylin-eosin staining results showed that compared with the normal group, the cartilage surface of the rat’s knee joints in the model group was worn and uneven and the chondrocytes were swollen, ruptured, reduced in number, and arranged disorderly; while the cartilage surface of the rat’s knee joints in the acupotomy group was relatively smooth, and the chondrocytes were high in number and arranged in an orderly manner, with the structure basically clear. Immunohistochemical staining results showed that compared with the normal group, the positive expressions of OSCAR and TRAIL were increased in the model group (P < 0.01), while the positive expression of OPG was decreased (P < 0.01). Compared with the model group, the positive expressions of OSCAR and TRAIL in the acupotomy group were decreased (P < 0.01), while the positive expression of OPG was increased (P < 0.01). TUNEL staining results showed that compared with the normal group, the number of apoptotic cells in the model group were increased (P < 0.01); compared with the model group, the number of apoptotic cells in the acupotomy group decreased (P < 0.01). RT-qRCR and western blot results showed that compared with the normal group, the protein expressions of OSCAR, TRAIL and Bax in the model group were increased (P < 0.01), and the protein expressions of OPG and Bcl-2 were decreased (P < 0.01); compared with the model group, the protein expressions of OSCAR, TRAIL, and Bax in the acupotomy group were decreased (P < 0.01), and the protein expressions of OPG and Bcl-2 were increased (P < 0.01). To conclude, acupotomy can reduce cartilage injury of the knee joint in rats with knee osteoarthritis, which may be related to the blockage of mitochondrial pathway apoptotic signaling release by the OSCAR-TRAIL-OPG pathway.

Key words: acupotomy, knee osteoarthritis, apoptosis of chondrocytes, osteoclast related receptor, tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand, osteoprotegerin, rat

中图分类号:

卢梦雅, 伍闲, 佘泽宇, 夏帅, 卢曼, 杨永晖. 针刀调控线粒体途径软骨细胞凋亡防治大鼠膝骨关节炎[J]. 中国组织工程研究, 2024, 28(32): 5190-5195.

Lu Mengya, Wu Xian, She Zeyu, Xia Shuai, Lu Man, Yang Yonghui. Acupotomy prevents knee osteoarthritis in rats by modulating chondrocyte apoptosis in the mitochondrial pathway[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2024, 28(32): 5190-5195.

图/表（结果） 7

2.1 实验动物数量分析 27只SD大鼠全部进入结果分析。
2.2 各组大鼠行为学测评结果造模后与正常组比较，模型组、针刀组大鼠Lequesne MG行为学评分升高(P < 0.01)；干预结束后与模型组比较，针刀组大鼠Lequesne MG行为学评分降低(P < 0.01)，见表2。

2.3 各组大鼠膝关节软骨组织病理形态苏木精-伊红染色显示，正常组大鼠膝关节软骨表面平整，软骨细胞数量丰富，表层可见呈扁圆形软骨细胞，中间层为椭圆形，深层为柱状排列，结构分明；模型组大鼠膝关节软骨表面磨损且不平整，软骨细胞肿胀、破裂，数量减少，原有结构丧失，排列杂乱；针刀组软骨表面较为平整，软骨细胞数量较多，表层有幼稚软骨细胞，整体细胞排列较规整，结构基本明朗清晰，见图1。

2.4 各组大鼠膝关节软骨组织OSCAR、TRAIL、OPG阳性表达比较在正常生理情况下，OSCAR可在软骨细胞质膜、核质、细胞质中表达，TRAIL主要在软骨细胞膜及细胞内表达，OPG主要在细胞核及高尔基体中表达。免疫组化染色显示，正常组大鼠膝关节软骨组织中可见少量OSCAR、TRAIL阳性细胞，染色较浅，OPG阳性细胞数量较多；模型组大鼠膝关节软骨组织中OSCAR、TRAIL阳性细胞增多，染色较深，OPG阳性细胞明显减少且染色变浅；针刀组大鼠膝关节软骨组织中OSCAR、TRAIL阳性细胞数量减少，OPG深褐色阳性细胞数量增加，见图2。与正常组比，模型组OSCAR、TRAIL(Tnfsf10)阳性细胞数量增加(P < 0.01)，OPG(Tnfrs11b)阳性细胞数量减少(P < 0.01)；与模型组比，针刀组OSCAR、TRAIL(Tnfsf10)阳性细胞数量减少(P < 0.01)，OPG(Tnfrs11b)阳性细胞数量增加(P < 0.01)。

2.5 各组大鼠膝关节软骨细胞凋亡水平比较 TUNEL染色显示，正常组仅有极少棕褐色阳性凋亡细胞，模型组可见大量阳性凋亡细胞，针刀组阳性凋亡细胞数量较少；与正常组比，模型组软骨细胞凋亡数量增加(P < 0.01)；与模型组比，针刀组软骨细胞凋亡数量减少(P < 0.01)，见图3。

2.6 各组大鼠膝关节软骨组织OSCAR、TRAIL、OPG、Bax、Bcl-2 mRNA表达比较 RT-qPCR检测显示与正常组比较，模型组大鼠膝关节软骨组织OSCAR、TRAIL、Bax mRNA表达量升高(P < 0.01)，OPG、Bcl-2 mRNA表达量降低(P < 0.01)；与模型组比，针刀组大鼠膝关节软骨组织OSCAR、TRAIL、Bax mRNA表达量降低(P < 0.05，P < 0.01)，OPG、Bcl-2 mRNA表达量升高(P < 0.01)，见图4。

2.7 各组大鼠膝关节软骨组织OSCAR、TRAIL、OPG、Bax、Bcl-2蛋白表达比较 Western blot检测显示与正常组比较，模型组大鼠膝关节软骨组织OSCAR、TRAIL、Bax蛋白表达量升高(P < 0.01)，OPG、Bcl-2蛋白表达量降低(P < 0.01)；与模型组比，针刀组大鼠膝关节软骨组织OSCAR、TRAIL、Bax蛋白表达量降低(P < 0.05，P < 0.01)，OPG、Bcl-2蛋白表达量升高(P < 0.05)，见图5。

2.8 OSCAR与TRAIL的相关性分析 Pearson相关分析显示，OSCAR相对表达量与TRAIL相对表达量呈线性正相关(r=0.777，P < 0.01)，见图6。

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引言

材料方法

1.1 设计随机对照动物实验，多组比较使用单因素方差分析(one-way ANOVA)，组间两两比较使用LSD检验。
1.2 时间及地点实验于2021年9月至2022年9月在安徽中医药大学新安楼实验中心完成。
1.3 材料
1.3.1 实验动物及分组健康雄性SD大鼠27只，SPF级，7周龄，体质量200-220 g，购于江苏省邳州市东方养殖有限公司，实验动物生产许可证号：SCXK(苏)2019-0005，于安徽中医药大学新安楼实验中心SPF级动物房分笼饲养，室温(20±2) ℃，湿度(55±15)%，明暗周期12 h/12 h，自由饮食饮水。适应性饲养1周后，采用随机数字表法将大鼠分成正常组(9只)、模型组(9只)、针刀组(9只)。
实验方案已通过安徽中医药大学动物实验伦理委员会批准(审批号：AHUCM-rats-2021108)。实验全程遵守2006年由中华人民共和国科技部颁布的《关于善待实验动物的指导性意见》来对待动物。
1.3.2 主要试剂 Triozl 试剂(15596018，美国Life technogies)；苏木精、伊红染色(B006、B005，珠海贝索生物技术有限公司)；七氟烷(H20080681，鲁南贝特制药有限公司)；TUNEL反应试剂盒(11684817910，德国Roche)；木瓜蛋白酶、L-半胱氨酸、十二烷基硫酸钠试剂盒(G8430、C0012、S8010，北京索莱宝科技有限公司)；RIPA细胞裂解液、Western一抗二抗去除液(P0013B、P0025，上海碧云天生物技术有限公司)；DAB显色试剂盒、山羊抗小鼠IgG、山羊抗兔IgG(ZLI-9018、ZB-2305、ZB-2301，北京中杉金桥生物技术有限公司)；OSCAR抗体试剂盒、TRAIL抗体试剂盒、OPG抗体试剂盒(bs-17523R、bs-1214R、bs-20625R，北京博奥森生物技术有限公司)；Bax、Bcl-2抗体试剂盒(ab32503、ab32124，英国abcam)；ECL超敏发光试剂盒(340958；美国Thermo)；PrimeScript™ RT reagent Kit with gDNA Eraser反转录试剂盒(RR047A，日本TaKaRa)；SYBR qPCR SuperMix Plus(E096-01B，上海近岸科技有限公司)。
1.3.3 主要仪器光学显微镜(CX41型，日本Olympus)；生物组织包埋机(YB-7LF型，湖北亚光医疗器械有限公司)；超薄切片机(UC-7型，德国Leica)；石蜡切片机(RM2016型，德国Leica)；高速冷冻离心机(JW-3021HR型，安徽嘉文仪器装备有限公司)；超微量分光光度计(OD1000+型，南京五义科技有限公司)；荧光定量PCR仪(PIKOREAL 96型，美国Thermo)；电泳仪、电泳槽、转膜仪(EPS300型、VE-180型、VE-186型，上海天能科技有限公司)；数字切片扫描仪(Pannoramic MIDI型，匈牙利3DHISTECH)；针刀0.30 mm×25 mm(马鞍山邦德医疗器械有限公司)。
1.4 方法

1.4.1 膝骨关节炎模型制备与分组干预正常组大鼠常规饲养，不进行任何处理。取模型组、针刀组大鼠，采用注射木瓜蛋白酶法制备大鼠左后肢膝骨关节炎模型[12]。模型组、针刀组大鼠造模前禁食12 h，3%七氟烷吸入麻醉起效后将大鼠侧卧于操作台上，剃除膝关节毛发并消毒，使左后肢膝关节弯曲45°，从髌骨下极髌腱外缘处进针到达髁间，当感觉针下有落空感且回抽无血时注射木瓜蛋白酶混合液0.15 mL(4%木瓜蛋白酶与0.03 mol/L L-半胱氨酸的体积比为2∶1)，在每周的1，4，7 d注射，连续注射3周。造模3周后Lequesne MG行为学评分≥6分判断造模成功[13]。

造模成功后，模型组大鼠常规饲养，针刀组大鼠给予针刀干预，1次/周，共3次。针刀干预操作：手动抓取固定，触摸寻找大鼠左后肢膝关节股四头肌肌腱、内外侧副韧带处结节、粘连，选取4个点，外科记号笔定位，常规备皮、消毒后，刀口线和下肢纵轴方向平行，直刺，针刀经皮肤、皮下组织后感觉刀下有韧性感时行提插切开刀法三四刀，操作完成后拔出针刀，局部压迫止血。
1.4.2 组织取材针刀干预结束后次日，首先进行Lequesne MG行为学评分，然后每组随机选取4只大鼠使用3%七氟烷吸入麻醉，于操作台上仰卧固定，使用剪刀在距膝关节2 cm处将胫骨、股骨头钳断，取下整膝关节，固定于40 g/L多聚甲醛中，4 ℃保存，脱钙14 d后进行石蜡切片(厚度5 μm)，用于苏木精-伊红染色、免疫组化及TUNEL染色。每组剩余5只大鼠取胫骨平台、股骨髁部位的软骨，投入冻存管并保存于液氮罐中，用于Western blot和RT-qPCR检测。
1.4.3 Lequesne MG行为学评分造模后及干预结束后次日对大鼠患肢进行Lequesne MG行为学评分，评分内容：①膝关节局部按压疼痛表现：无反应(0分)、患肢收缩(1分)、轻度全身反应(2分)、挣扎抽搐(3分)；②关节活动度： > 90°(0分)、45°(含45°)-90°(1分)、15°-< 45°(2分)、< 15°(3分)；③关节肿胀：骨性标志清晰(0分)、骨性标志模糊(1分)、骨性标志消失(2分)；④步态变化：正常行走(0分)、轻度跛行可奔跑(1分)、可行走伴跛行明显(2分)、不参与行走(3分)。总分越高表示关节损伤越严重、关节功能越差。
1.4.4 苏木精-伊红染色观察膝关节软骨组织形态将石蜡切片按照常规流程脱蜡、水化后进行苏木精浸染(5 min)，常规分化、蓝化、脱水后伊红溶液浸染(3 s)，脱水、透明、封固，400倍光学显微镜下观察切片。每组选3-5张切片，每张切片随机选择3个视野。
1.4.5 免疫组化染色观察软骨组织中OSCAR、TRAIL、OPG阳性表达石蜡切片常规脱蜡、水化，经抗原高压修复后进行内源性过氧化物酶阻断(体积分数3%双氧水)，依次滴加一抗(TRAIL/OPG/OSCAR均稀释1∶500)、二抗，分别加盖置于37 ℃培养箱孵育60，30 min。取出切片，冲洗后滴加DAB显色剂，显微镜下观察并控制时间，有阳性时终止显色。苏木精染色、脱水、透明、封固，400倍光学显微镜观察切片。每组选3-5张切片，每张切片随机选择3个视野截图，使用Image-J软件计算平均吸光度值，平均吸光度值=累积吸光度÷图片面积。
1.4.6 TUNEL染色观察软骨细胞凋亡石蜡切片常规脱蜡、水化，过二甲苯3道，每道15 min，乙醇梯度脱水，自来水冲洗；37 ℃下Proteinase K工作液处理15 min，用PBS漂洗3次，过氧化物酶封闭30 min，加入Tunel反应液(50 μL TdT+450 μL dUTP)，37 ℃暗湿盒中反应1 h；用PBS漂洗3次，DAB显色，冲洗，终止显色后苏木精复染，常规分化、蓝化、水洗、脱水、透明、封固。每组选3-5张切片在400倍光学显微镜下观察，每张切片随机选择3个视野截图，使用Image-J软件分析平均吸光度值，计算公式同上。

1.4.7 RT-qPCR检测软骨组织中OSCAR、TRAIL、OPG、Bax、Bcl-2 mRNA表达称取软骨组织100 mg剪碎，使用Trizol法提取总RNA。运用反转录试剂盒将总RNA反转录为cDNA并用为模板，按照PCR反应条件进行扩增：预变性95 ℃ 1 min；95 ℃ 20 s，60 ℃ 1 min，共40个循环。以β-actin为各组各样本基因的内参，相对表达量采用2-ΔΔCt法计算。由安徽中抗生物技术有限公司合成引物序列，见表1。

1.4.8 Western blot检测软骨组织中OSCAR、TRAIL、OPG、Bax、Bcl-2蛋白表达称取软骨组织样本约100 mg，将600 µL的RIPA细胞裂解液加入后进行裂解，提取组织总蛋白。凝胶配制参考TRAKRA产品目录进行，依次上样、电泳、转膜，加入Western封闭液(5%脱脂奶粉)室温封闭2 h，摇床缓慢摇动，加入一抗4 ℃孵育过夜(OSCAR抗体稀释比1∶1 000；TRAIL抗体稀释比1∶1 000；OPG抗体稀释比1∶2 000；Bax抗体稀释比 1∶2 000；Bcl-2抗体稀释比 1∶2 000；GAPDH抗体稀释比1∶2 000)，根据一抗的属性和二抗说明书进行辣根过氧化物酶(HRP)标记的二抗(稀释比1∶20 000)孵育。使用ECL发光试剂盒测定蛋白，Image-J软件分析胶片条带。
1.5 主要观察指标各组大鼠关节功能、关节软骨组织病理形态、软骨细胞凋亡以及关节软骨组织OSCAR、TRAIL、OPG、Bax、Bcl-2的表达。
1.6 统计学分析统计学分析使用SPSS 25.0软件进行，计量资料使用x±s表示。各项资料均满足正态性、方差齐，多组比较使用单因素方差分析(one-way ANOVA)，组间两两比较使用LSD检验；双变量满足正态性使用线性相关分析，不满足正态性使用等级相关分析；以P < 0.05为差异有显著性意义。使用GraphPad Prism 9.0 软件绘制各项数据统计图。该文统计学方法已经安徽中医药大学生物统计学专家审核。

讨论

据《黄帝内经》记载，膝骨关节炎为“筋痹”，属经筋病，因膝为筋府足三阳三阴经筋环绕于此，若因感受外邪、过度劳累或年老体弱导致经络闭阻，气血不通则使膝关节软骨及其周围组织损害，无法行使正常的关节功能。针刀在治疗膝骨关节炎时以经筋理论为基础、以痛为腧，并结合解剖结构进行定点取穴，采用与“恢刺”“输刺”相类似的纵行、横行分离法、提插、铲剥等手法[14-15]，既可刺激腧穴、疏通经络，又可将肌肉、筋膜、滑囊等出现的“筋结瘛疭”进行剥离、松解，从而促进机体的动态平衡。
凋亡是程序性细胞死亡的一种，是受到高度调控的途径，涉及特定的细胞内信号和基因结合[16]，而软骨细胞凋亡会导致软骨活力的丧失，使膝关节处于病理状态[17-18]。线粒体途径是细胞凋亡的方式之一，主要由 Bcl-2家族成员来调节线粒体凋亡信号，其中抗凋亡蛋白Bcl-2和促凋亡蛋白Bax是主要调节因子。OSCAR一直被认为是破骨细胞分化和维持骨内平衡的关键分子[19-20]，但一些研究表明其在软骨或滑膜中高表达可能参与骨关节炎进程，与软骨细胞凋亡有关[11，21-22]。TRAIL属于肿瘤坏死因子家族蛋白，是一种凋亡诱导配体[23]，同时也是骨关节炎进程中的关键调节因子，在病理状态下增多的TRAIL会导致细胞凋亡信号的释放[24]，诱导软骨细胞凋亡并导致关节炎症和软骨破坏[25-27]。OPG是一种有效的受体，能在关节软骨中表达，对软骨具有保护作用，参与维持关节软骨的完整性，并且具有抑制TRAIL诱导的软骨细胞凋亡的作用，在病理状态下OPG的表达会被TRAIL抑制[28-31]。
此次实验发现膝骨关节炎大鼠膝关节功能变差，软骨中OSCAR和TRAIL表达增多、OPG表达减少，同时Bax表达上调、Bcl-2表达下调，病理检测显示软骨组织损伤加重，软骨细胞凋亡增多；针刀干预后，膝骨关节炎大鼠膝关节功能恢复，软骨中OSCAR和TRAIL表达减少、OPG表达增多，同时Bax表达下调、Bcl-2表达上调，病理检测显示软骨组织损伤减轻，软骨细胞凋亡减少，并且OSCAR与TRAIL表达量之间呈线性正相关。以上提示针刀干预可以抑制OSCAR的表达，使OSCAR促进TRAIL表达的作用减弱，因此增加的OPG与TRAIL结合来减弱其促细胞凋亡的活性，发挥骨保护作用，进一步阻断了线粒体途径凋亡信号的释放，进而减少了软骨细胞凋亡、减轻软骨损伤，这与既往研究相一致[11]。
以往关于OSCAR、OPG在膝骨关节炎中的作用多围绕破骨细胞生成进行阐述，此次实验则将OSCAR-TRAIL-OPG通路与软骨细胞凋亡相联系，观察针刀治疗膝骨关节炎的作用机制。对于针刀是否既可通过OSCAR-TRAIL-OPG通路从多种细胞凋亡途径来减少软骨细胞凋亡，又能影响破骨细胞生成或骨生成而相互联系共同缓解膝骨关节炎还需进一步探讨。综上，针刀疗法可以改善膝关节软骨组织损伤，其机制的产生可能与激活OSCAR-TRAIL-OPG通路阻断了线粒体途径的凋亡信号释放有关。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

针刀调控线粒体途径软骨细胞凋亡防治大鼠膝骨关节炎

Acupotomy prevents knee osteoarthritis in rats by modulating chondrocyte apoptosis in the mitochondrial pathway

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