环状RNA hsa-circ-0001360在同型半胱氨酸诱导人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用

doi:10.12307/2024.184

中国组织工程研究 ›› 2024, Vol. 28 ›› Issue (25): 4060-4064.doi: 10.12307/2024.184

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环状RNA hsa-circ-0001360在同型半胱氨酸诱导人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用

况园军1，2，于素美2，3，钟颖怡2，章旭红4，马胜超2，杨安宁2，郝银菊2，熊建团2，焦运5，姜怡邓2

宁夏医科大学，1检验学院，2国家卫生健康委代谢性心血管疾病研究重点实验室，3临床医学院，4基础医学院，宁夏回族自治区银川市 750004；5宁夏医科大学总医院，宁夏回族自治区银川市 750004

收稿日期:2023-05-31 接受日期:2023-07-17 出版日期:2024-09-08 发布日期:2023-11-24
通讯作者: 姜怡邓，博士，教授，宁夏医科大学国家卫生健康委代谢性心血管疾病研究重点实验室，宁夏回族自治区银川市 750004
作者简介:况园军，男，1996年生，江西省宜春市人，汉族，宁夏医科大学在读硕士，主要从事心血管疾病形成的机制研究。
基金资助:
中国医学科学院中央级公益性科研院所基本科研业务费项目(2019PT330002)，项目负责人：姜怡邓；国家自然科学基金(82270492)，项目负责人：马胜超；国家自然科学基金(82060090)，项目负责人：郝银菊；宁夏回族自治区重点研发计划(2022BFH02013)，项目负责人：郝银菊；宁夏回族自治区重点研发计划(2020BFH02003)，项目负责人：杨安宁；宁夏回族自治区重点研发计划(2021BEG02033)，项目负责人：熊建团；宁夏回族自治区重点研发计划(2020BEG03005)，项目负责人：焦运

Effect of cyclic RNA hsa-circ-0001360 on homocysteine-induced apoptosis of human umbilical vein endothelial cells

Kuang Yuanjun1, 2, Yu Sumei2, 3, Zhong Yingyi2, Zhang Xuhong4, Ma Shengchao2, Yang Anning2, Hao Yinju2, Xiong Jiantuan2, Jiao Yun5, Jiang Yideng2

1School of Inspection, 2Key Laboratory of Metabolic Cardiovascular Disease Research of National Health Commission, 3School of Clinical Medicine, 4Basical Medical College, Ningxia Medical University, Yinchuan 750004, Ningxia Hui Autonomous Region, China; 5General Hospital of Ningxia Medical University, Yinchuan 750004, Ningxia Hui Autonomous Region, China

Received:2023-05-31 Accepted:2023-07-17 Online:2024-09-08 Published:2023-11-24
Contact: Jiang Yideng, MD, Professor, Key Laboratory of Metabolic Cardiovascular Disease Research of National Health Commission, Ningxia Medical University, Yinchuan 750004, Ningxia Hui Autonomous Region, China
About author:Kuang Yuanjun, Master candidate, School of Inspection, and Key Laboratory of Metabolic Cardiovascular Disease Research of National Health Commission, Ningxia Medical University, Yinchuan 750004, Ningxia Hui Autonomous Region, China
Supported by:
Fundamental Research Funds for Central Level Public Welfare Research Institutes of the Chinese Academy of Medical Sciences, No. 2019PT330002 (to JYD); National Natural Science Foundation of China, No. 82270492 (to MSC); National Natural Science Foundation of China, No. 82060090 (to HYJ); Key Research and Development Plan of Ningxia Hui Autonomous Region, No. 2022BFH02013 (to HYJ); Key Research and Development Plan of Ningxia Hui Autonomous Region, No. 2020BFH02003 (to YAN); Key Research and Development Plan of Ningxia Hui Autonomous Region, No. 2021BEG02033 (to XJT); Key Research and Development Plan of Ningxia Hui Autonomous Region, No. 2020BEG03005 (to JY)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：

人脐静脉内皮细胞：是来源于新生儿脐带静脉内壁的一种干细胞。因其容易获取、没有伦理学争议，且能够无限增殖，常作为内皮细胞功能和病理学的研究模型，应用于血管生成、愈合、血管建模、组织工程、炎症等研究中。
环状RNA：一种共价闭合的单链非编码RNA，其结构稳定性相较于其他RNA更强；环状RNA具有调控基因转录、调控靶蛋白和充当小分子RNA海绵等诸多功能。
同型半胱氨酸：是一种含硫氨基酸，是蛋氨酸代谢的中间产物，其本身不参与蛋白质的合成。高同型半胱氨酸血症是心脑血管病的新的、独立的危险因子。

背景：同型半胱氨酸水平上升会诱导人脐静脉内皮细胞发生凋亡，但机制尚不清楚。

目的：探讨hsa-circ-0001360在同型半胱氨酸诱导人脐静脉内皮细胞发生凋亡中的作用。
方法：体外培养人脐静脉内皮细胞，将其分为对照组、同型半胱氨酸组、干扰对照组、干扰对照+同型半胱氨酸组、干扰hsa-circ-0001360组、干扰hsa-circ-0001360+同型半胱氨酸组、过表达对照组、过表达对照+同型半胱氨酸组、过表达hsa-circ-0001360组和过表达hsa-circ-0001360+同型半胱氨酸组，同型半胱氨酸的干预浓度均为100 μmol/L。干预细胞72 h后，应用Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase-3的表达；流式细胞仪检测细胞的凋亡率；实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测hsa-circ-0001360的表达水平。

结果与结论：①与对照组相比，同型半胱氨酸组人脐静脉内皮细胞中Caspase-3和Bax的表达明显升高(P < 0.01)，Bcl-2的表达明显降低( P < 0.01)，细胞凋亡率明显增高(P < 0.01)；②与对照组相比，同型半胱氨酸组人脐静脉内皮细胞中hsa-circ-0001360的表达明显升高(P < 0.01)；③hsa-circ-0001360在人脐静脉内皮细胞的细胞质中表达显著高于细胞核(P < 0.01)；④与干扰对照组或干扰对照+同型半胱氨酸组相比，干扰hsa-circ-0001360组和干扰hsa-circ-0001360+同型半胱氨酸组人脐静脉内皮细胞中Caspase-3、Bax的表达明显降低(P < 0.01)，Bcl-2的表达明显升高(P < 0.01)，细胞凋亡率明显降低(P < 0.01)；⑤与过表达对照组或过表达对照+同型半胱氨酸组相比，过表达hsa-circ-0001360组和过表达hsa-circ-0001360+同型半胱氨酸组人脐静脉内皮细胞中Caspase-3、Bax的表达明显升高(P < 0.01)，Bcl-2的表达明显降低(P < 0.01)，细胞凋亡率明显升高(P < 0.01)；⑥以上结果表明，hsa-circ-0001360可以促进同型半胱氨酸诱导人脐静脉内皮细胞发生凋亡。

https://orcid.org/0009-0000-9937-6056 (况园军)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

关键词: 同型半胱氨酸, hsa-circ-0001360, 人脐静脉内皮细胞, 细胞凋亡, 环状RNA

Abstract: BACKGROUND: Increased homocysteine level induces apoptosis of human umbilical vein endothelial cells, but the mechanism remains unclear.
OBJECTIVE: To investigate the role of hsa-circ-0001360 in human umbilical vein endothelial cell apoptosis induced by homocysteine.
METHODS: In vitro cultured human umbilical vein endothelial cells were divided into control group, homocysteine group, interference control group, interference control + homocysteine group, hsa-circ-0001360 interference group, hsa-circ-0001360 + homocysteine interference group, overexpression control group, overexpression control + homocysteine group, hsa-circ-0001360 overexpression group and hsa-circ-0001360 + homocysteine overexpression group. All groups were treated with 100 μmol/L homocysteine. After 72 hours of intervention, the expressions of apoptosis-related proteins Bax, Bcl-2, and Caspase-3 were detected by western blot assay. The apoptotic rate was detected by flow cytometry. Quantitative real-time PCR was used to detect the expression of hsa-circ-0001360.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) Compared with the control group, the expression of Caspase-3 and Bax was significantly increased (P < 0.01), and the expression of Bcl-2 was significantly decreased (P < 0.01), and the apoptotic rate was significantly increased (P < 0.01) in the homocysteine group. (2) Compared with control group, the expression of hsa-circ-0001360 was significantly increased in the homocysteine group (P < 0.01). (3) The expression of hsa-circ-0001360 was significantly higher in the cytoplasm than that in the nucleus (P < 0.01). (4) Compared with the interference control C group and interference control + homocysteine group, the expressions of Caspase-3 and Bax were significantly decreased (P < 0.01), while the expression of Bcl-2 was significantly increased (P < 0.01); the apoptotic rate was significantly decreased (P < 0.01) in sh-hsa-circ-0001360 interference group and sh-hsa-circ-0001360 + homocysteine interference group. (5) Compared with overexpression control group and overexpression control + homocysteine group, the expressions of Caspase-3 and Bax were significantly increased (P < 0.01), while the expression of Bcl-2 was significantly decreased (P < 0.01); the apoptotic rate was significantly increased (P < 0.01) in the hsa-circ-0001360 overexpression group and the hsa-circ-0001360 + homocysteine overexpression group. (6) In conclusion, hsa-circ-0001360 can promote the apoptosis of human umbilical vein endothelial cells induced by homocysteine.

Key words: homocysteine, hsa-circ-0001360, human umbilical vein endothelial cell, apoptosis, cyclic RNA

中图分类号:

况园军, 于素美, 钟颖怡, 章旭红, 马胜超, 杨安宁, 郝银菊, 熊建团, 焦运, 姜怡邓. 环状RNA hsa-circ-0001360在同型半胱氨酸诱导人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用[J]. 中国组织工程研究, 2024, 28(25): 4060-4064.

Kuang Yuanjun, Yu Sumei, Zhong Yingyi, Zhang Xuhong, Ma Shengchao, Yang Anning, Hao Yinju, Xiong Jiantuan, Jiao Yun, Jiang Yideng. Effect of cyclic RNA hsa-circ-0001360 on homocysteine-induced apoptosis of human umbilical vein endothelial cells[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2024, 28(25): 4060-4064.

图/表（结果） 6

2.1 Hcy对HUVECs凋亡的影响 Western blot检测结果表明，与对照组相比，Hcy组Bax和Caspase-3蛋白的表达水平明显增高(P < 0.01)，Bcl-2蛋白的表达水平明显降低(P < 0.01)；流式细胞仪结果显示，Hcy组HUVECs凋亡率明显高于对照组(P < 0.01)。以上结果共同表明，Hcy处理后HUVECs发生明显凋亡，见图1。

2.2 Hcy对HUVECs中hsa-circ-0001360表达的影响 qRT-PCR结果表明，Hcy组HUVECs中hsa-circ-0001360的表达显著高于对照组(P < 0.01)，见图2。

2.3 hsa-circ-0001360在HUVECs细胞核和细胞质中的表达 qRT-PCR结果表明，hsa-circ-0001360在细胞质中的表达明显高于细胞核(P < 0.01)，见图3。

2.4 慢病毒转染干扰和过表达hsa-circ-0001360效果验证使用慢病毒转染HUVECs以实现对hsa-circ-0001360的干扰和过表达，qRT-PCR结果表明，与干扰对照组相比，干扰hsa-circ-0001360组hsa-circ-0001360表达明显下降(P < 0.01)；与过表达对照组相比，过表达hsa-circ-0001360组hsa-circ-0001360表达明显升高(P < 0.01)，见图4。

2.5 干扰hsa-circ-0001360对Hcy诱导HUVECs凋亡的影响 Western blot检测结果与流式细胞仪结果分别表明：干扰hsa-circ-0001360组相较于干扰对照组，干扰hsa-circ-0001360+Hcy组相较于干扰对照+Hcy组，Bax和Caspase-3蛋白的表达水平显著降低(P < 0.01)，Bcl-2蛋白的表达水平明显升高(P < 0.01)，细胞凋亡率明显下降(P < 0.01)，见图5。

2.6 过表达hsa-circ-0001360对Hcy诱导HUVECs凋亡的影响 Western blot结果与流式细胞仪结果分别表明：过表达hsa-circ-0001360组相较于过表达对照组，过表达hsa-circ-0001360+Hcy组相较于过表达对照+ Hcy组，Bax和Caspase-3蛋白的表达水平明显增高(P < 0.01)，Bcl-2蛋白的表达水平明显降低(P < 0.01)，细胞凋亡率明显增高(P < 0.01)，见图6。

参考文献

[1] BENJAMIN EJ, BLAHA MJ, CHIUVE SE, et al. Heart Disease and Stroke Statistics-2017 Update: A Report From the American Heart Association. Circulation. 2017;135(10):e146-e603.
[2] LI X, QI H, CUI W, et al. Recent advances in targeted delivery of non-coding RNA-based therapeutics for atherosclerosis. Mol Ther. 2022; 30(10):3118-3132.
[3] LIBBY P, BURING JE, BADIMON L, et al. Atherosclerosis. Nat Rev Dis Primers. 2019;5(1):56.
[4] EIKELBOOM JW, LONN E, GENEST J JR, et al. Homocyst(e)ine and cardiovascular disease: a critical review of the epidemiologic evidence. Ann Intern Med. 1999;131(5):363-375.
[5] DUAN H, ZHANG Q, LIU J, et al. Suppression of apoptosis in vascular endothelial cell, the promising way for natural medicines to treat atherosclerosis. Pharmacol Res. 2021;168:105599.
[6] 张晴,高春兰,于飞飞,等.同型半胱氨酸致胰岛β细胞凋亡中肝配蛋白A型受体2 DNA甲基化升高[J].中国组织工程研究, 2023,27(5):714-719.
[7] 刘昆,谢琳,曹军,等.同型半胱氨酸致足细胞凋亡中FoxO1 DNA甲基化水平增高[J].中国组织工程研究,2021,25(2):269-273.
[8] QIN M, WANG W, ZHOU H, et al. Circular RNA circ_0003645 silencing alleviates inflammation and apoptosis via the NF-κB pathway in endothelial cells induced by oxLDL. Gene. 2020;755:144900.
[9] ZHUANG JB, LI T, HU XM, et al. Circ_CHFR expedites cell growth, migration and inflammation in ox-LDL-treated human vascular smooth muscle cells via the miR-214-3p/Wnt3/β-catenin pathway. Eur Rev Med Pharmacol Sci. 2020;24(6):3282-3292.
[10] RONG ZH, CHANG NB, YAO QP, et al. Suppression of circDcbld1 Alleviates Intimal Hyperplasia in Rat Carotid Artery by Targeting miR-145-3p/Neuropilin-1. Mol Ther Nucleic Acids. 2019;18:999-1008.
[11] CHEN P, LI C, HUANG H, et al. Circular RNA profiles and the potential involvement of down-expression of hsa_circ_0001360 in cutaneous squamous cell carcinogenesis. FEBS Open Bio. 2021;11(4):1209-1222.
[12] 马鹏俊,张鸣号,郭伟,等.叶酸和维生素B_(12)在同型半胱氨酸诱导人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用[J].中国病理生理杂志, 2019,35(11):1951-1956.
[13] DUAN MX, ZHOU H, WU QQ, et al. Andrographolide Protects against HG-Induced Inflammation, Apoptosis, Migration, and Impairment of Angiogenesis via PI3K/AKT-eNOS Signalling in HUVECs. Mediators Inflamm. 2019;2019:6168340.
[14] ZHAO F, YANG X, XU G, et al. Propranolol suppresses HUVEC viability, migration, VEGF expression, and promotes apoptosis by downregulation of miR-4295. J Cell Biochem. 2019;120(4):6614-6623.
[15] MOUJALLED D, STRASSER A, LIDDELL JR. Molecular mechanisms of cell death in neurological diseases. Cell Death Differ. 2021;28(7):2029-2044.
[16] SIPKENS JA, KRIJNEN PA, HAHN NE, et al. Homocysteine-induced cardiomyocyte apoptosis and plasma membrane flip-flop are independent of S-adenosylhomocysteine: a crucial role for nuclear p47(phox). Mol Cell Biochem. 2011;358(1-2):229-239.
[17] 曹军,刘昆,谢琳,等.脂肪酸结合蛋白4对高同型半胱氨酸血症小鼠足细胞凋亡的影响[J].医学研究生学报,2020,33(1):25-31.
[18] 杨绍兵,梁思敏,曾祥飞,等.激活TRPV1在高同型半胱氨酸促内皮细胞凋亡中的作用[J].临床心血管病杂志,2017,33(6):587-591.
[19] CHEN LL. The expanding regulatory mechanisms and cellular functions of circular RNAs. Nat Rev Mol Cell Biol. 2020;21(8):475-490.
[20] MISIR S, WU N, YANG BB. Specific expression and functions of circular RNAs. Cell Death Differ. 2022;29(3):481-491.
[21] HUANG Z, MA W, XIAO J, et al. CircRNA_0092516 regulates chondrocyte proliferation and apoptosis in osteoarthritis through the miR-337-3p/PTEN axis. J Biochem. 2021;169(4):467-475.
[22] ZHANG S, XU Y, ZHENG Q. circRNA_0000285 knockdown suppresses viability and promotes apoptosis of cervical cancer cells by sponging microRNA-654-3p. Bioengineered. 2022;13(3):5251-5261.
[23] XU Q, DENG B, LI M, et al. circRNA-UBAP2 promotes the proliferation and inhibits apoptosis of ovarian cancer though miR-382-5p/PRPF8 axis. J Ovarian Res. 2020;13(1):81.
[24] KRISTENSEN LS, ANDERSEN MS, STAGSTED LVW, et al. The biogenesis, biology and characterization of circular RNAs. Nat Rev Genet. 2019; 20(11):675-691.

引言

材料方法

1.1 设计体外细胞实验，两样本间均数比较采用t检验，多样本间均数比较采用单因素方差分析。
1.2 时间及地点实验于2022年10月至2023年4月在宁夏医科大学国家卫生健康委代谢性心血管疾病研究重点实验室完成。
1.3 材料 HUVECs由宁夏医科大学国家卫生健康委代谢性心血管疾病研究重点实验室惠赠。DMEM高糖培养基、胎牛血清(Gibco，美国)；胰蛋白酶、青链霉素(Solarbio，中国)；Hcy(Sigma，美国)；蛋白提取试剂盒(凯基，南京)；凋亡检测试剂盒(BD，北京)；总RNA提取试剂盒(天根，北京)；反转录试剂盒、荧光定量PCR试剂盒(Takara，中国)；Bcl-2抗体、Bax抗体、Caspase-3抗体(Abcam，美国)；核质分离试剂盒(Thermo Fisher，美国)；RNA引物(生工，上海)；慢病毒转染试剂(舍为斯，天津)；超净工作台(安泰，苏州)；荧光定量PCR仪(耶拿，德国)；流式细胞仪(安捷伦，美国)。
1.4 实验方法
1.4.1 细胞培养、转染及分组使用含有体积分数1%青链霉素和体积分数10%胎牛血清的DMEM高糖培养基于37 ℃、体积分数5%CO2培养箱中培养HUVECs(T25培养瓶)，每24 h换液1次，待细胞密度达90%左右时，用胰蛋白酶对其进行消化、传代，继续培养。
细胞分组：对照组、Hcy组、干扰对照组、干扰对照+Hcy组、干扰hsa-circ-0001360组、干扰hsa-circ-0001360+Hcy组、过表达对照组、过表达对照+Hcy组、过表达hsa-circ-0001360组和过表达hsa-circ-0001360+Hcy组。第4代HUVECs接种于6孔板中，每孔细胞数约2×105，细胞密度约50%时，选取其中4孔分别加入20 μL sh-NC、sh-hsa-circ-0001360、pLV-NC和pLV-sh-hsa-circ-0001360慢病毒转染试剂，继续培养72 h(中途可使用完全培养基对细胞进行换液以保持细胞活性)，荧光显微镜下观察细胞感染效率，将细胞转移至T25培养瓶中继续培养、传代，待细胞稳定且传至3代以后，用2 μg/mL嘌呤霉素对细胞进行消杀以保证感染效率(消杀后即可获取可稳定传代的转染株)。根据实验分组将细胞密度达90%左右稳定干扰和过表达hsa-circ-0001360的HUVECs(经嘌呤霉素消杀后获得的稳转株)或正常HUVECs进行1瓶传4瓶传代，待细胞贴壁后使用浓度为100 μmol/L的Hcy干预细胞72 h，最后收取细胞用于后续实验[12]。
1.4.2 Western blot检测HUVECs中Caspase-3、Bax和Bcl-2蛋白的表达水平提取各组细胞总蛋白，加入蛋白上样缓冲液后99 ℃金属浴5 min；取30 μg总蛋白进行SDS-PAGE凝胶电泳，然后电转至PVDF膜，再用50 g/L脱脂牛奶封闭2 h，PBST清洗3次，每次10 min，PVDF膜用抗Bax抗体(1∶1 000稀释)，抗Bcl-2抗体(1∶1 000稀释)和抗Caspase-3抗体(1∶500稀释) 4 ℃孵育过夜，PBST清洗3次(同上)，PVDF膜用辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG孵育2 h，PBST清洗3次(同上)，最后应用凝胶图像分析成像系统(Image Lab)对PVDF膜进行成像并统计分析。
1.4.3 流式细胞术检测HUVECs的凋亡水平实验全程将细胞置于冰上操作。从培养箱中取出各组HUVECs，用胰蛋白酶(不含酚红和EDTA)对细胞进行消化处理并转移至1.5 mL离心管中，避光配制结合液(buffer∶水=1∶9)，单染组每个离心管只加100 μL结合液和5 μL其对应染料，实验组每管加100 μL结合液、5 μL PE染料和5 μL 7-aad染料，静置15 min再向每管加入400 μL结合液，轻轻混匀并过滤细胞至新离心管中，最后上机检测并统计分析数据。
1.4.4 qRT-PCR检测HUVECs中 hsa-circ-0001360的表达按照总RNA提取试剂盒使用说明书提取各组HUVECs总RNA，再将其反转录为cDNA。使用荧光定量PCR仪对cDNA进行扩增(扩增条件为：两步法，20 μL体系，95 ℃预变性30 s，95 ℃变性5 s，53.9 ℃退火10 s，共40个循环)，以GAPDH为内参基因，运用2-ΔΔCt法对获得的数据进行统计分析。
hsa-circ-0001360引物序列：上游为5’-GCT GAT TTT CAC ACC CGC TA-3’，下游为5’-GTT GGG TAA TAC TGC CGC TG-3’；GAPDH引物序列：上游为5’-GAA CGG GAA GCT CAC TGG-3’，下游为5’-GCC TGC TTC ACC ACC TTC T-3’。
1.4.5 qRT-PCR检测HUVECs细胞质和细胞核中hsa-circ-0001360的表达按照核质分离试剂盒分别提取HUVECs细胞质和细胞核，以GAPDH作为细胞质的内参基因，以U6作为细胞核的内参基因，进行qRT-PCR检测(方法同1.4.4)。U6引物序列：上游为5’-GGT GAA GGT CGG TGT GAA CG-3’，下游为5’-CTC GCT GGA AGA TGG TG-3’。
1.5 主要观察指标 ①HUVECs中Bax，Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达；②HUVECs的凋亡率；③HUVECs中hsa-circ-0001360的表达。
1.6 统计学分析实验数据均使用Graphpad Prism 8.0进行处理分析，统计结果以x±s表示，两样本间比较采用t检验，多样本间比较采用单因素方差分析，P < 0.05为差异有显著性意义。统计学方法已通过宁夏医科大学统计学专家审核。

讨论

该研究结果显示，Hcy干预组HUVECs中hsa-circ-0001360的表达显著高于对照组，干扰hsa-circ-0001360能够降低Hcy诱导HUVECs的凋亡，而过表达hsa-circ-0001360则进一步增强Hcy诱导HUVECs的凋亡。
内皮细胞功能障碍是动脉粥样硬化发展的第一步，血管的形成离不开内皮细胞，血管内皮细胞是覆盖在血管内膜表面纵向排列的单层扁平细胞，其直接接触血液系统，是血液系统和组织间的屏障，具有多种生理功能。建立血管内皮细胞培养模型，是体外研究血管内皮细胞功能的实验手段，而HUVECs以其来源方便、增殖能力强且没有伦理争议等诸多优点，成为了众多研究者首选的模型构建细胞[13-14]。由于高同型半胱氨酸血症是动脉粥样硬化性心血管疾病的独立危险因素[4-5]，因此，该研究以Hcy干预HUVECs来构建体外动脉粥样硬化模型。
不同于细胞坏死，细胞凋亡是由基因控制的，是细胞为更好适应周围生存环境而发生的一种主动的程序性死亡过程。细胞凋亡的途径有2种：内源性的线粒体途径(Bcl-2途径)和外源性的死亡受体途径[15]。Bcl-2家族有抗凋亡蛋白和促凋亡蛋白两大类，抗凋亡蛋白主要包括Bcl-2、Bcl-XL、Mcl-1和Bcl-W等，促凋亡蛋白主要包括Bax、Bak、Bcl-XS和Bad等。该研究从内源性的线粒体途径以Bcl-2、Bax和Caspase-3为主要蛋白指标对HUVECs的凋亡进行了探究。Hcy作为人体代谢的一种中间产物，其能够诱导心肌细胞、足细胞、内皮细胞等多种细胞发生凋亡的研究早有报道[16-18]。该研究中，Hcy处理后HUVECs凋亡率同样显著高于对照组。
circRNAs作为一种非编码RNA，在生命体中发挥着诸多功能，包括：①调控基因转录；②调控剪接；③充当微小RNA(miRNA)海绵；④充当蛋白质海绵；⑤形成circRNA-蛋白质复合物；⑥翻译蛋白等[19-20]。某些circRNAs曾被报道在细胞凋亡中发挥作用，HUANG等[21-23]研究指出circRNA-0092516可调控软骨细胞的凋亡，circRNA-0000285和circRNA-UBAP2等多种circRNA调控细胞凋亡也已被证实，这为研究hsa-circ-0001360调控HUVECs凋亡提供了思路。Hcy处理后HUVECs中hsa-circ-0001360的表达显著高于对照组，当干扰hsa-circ-0001360后，HUVECs的凋亡率明显下降，而过表达hsa-circ-0001360后，HUVECs的凋亡率却显著上升。
核质分离结果显示，hsa-circ-0001360主要在HUVECs的细胞质中表达，而在细胞中表达的circRNA的主要生物学功能是充当miRNA海绵和调控下游靶蛋白[24]，但该研究未能展开探讨hsa-circ-0001360调控HUVECs凋亡的具体机制，这将是后续实验的研究重点。
综上所述，该研究表明hsa-circ-0001360可以促进Hcy诱导HUVECs发生凋亡，这为进一步探究高同型半胱氨酸血症诱发动脉粥样硬化的分子机制提供了新的实验依据和理论基础。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

环状RNA hsa-circ-0001360在同型半胱氨酸诱导人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用

Effect of cyclic RNA hsa-circ-0001360 on homocysteine-induced apoptosis of human umbilical vein endothelial cells

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[1]	盛思琪, 谢琳, 赵翔宇, 姜怡邓, 吴凯, 熊建团, 杨安宁, 郝银菊, 焦运. miR-144-3p参与高蛋氨酸饮食诱导Cbs+/-小鼠的肝细胞自噬[J]. 中国组织工程研究, 2024, 28(8): 1289-1294.
[2]	陈泽鹏, 侯永辉, 陈树东, 侯宇, 林定坤. 牛磺熊去氧胆酸干预缺糖缺氧条件下脊髓神经元的凋亡[J]. 中国组织工程研究, 2024, 28(4): 528-534.
[3]	段彦哲, 滑键林, 丁智斌, 江楠, 宋丽娟, 闫玉清, 马存根. 细胞凋亡在缺血性脑卒中过程中作用的可视化分析[J]. 中国组织工程研究, 2024, 28(26): 4145-4150.
[4]	马凌桔, 汪乐新, 迟宏扬, 张竞文, 彭红建, 高春兰, 姜怡邓, 黄晖, 杨力, 马胜超. METTL3在同型半胱氨酸诱导小鼠胰岛β细胞自噬中的作用[J]. 中国组织工程研究, 2024, 28(26): 4221-4225.
[5]	裴建升, 杨文娟, 何静, 燕茹, 黄晖, 贾绍斌. 骨形态发生蛋白2介导同型半胱氨酸促进血管钙化[J]. 中国组织工程研究, 2024, 28(25): 4027-4033.
[6]	李雁冰, 王记委, 刘晓琴, 郭敏芳, 牛晓洁, 孟涛, 苏琴, 王瀚斌, 杨立志, 马存根, 尉杰忠. 灵孢多糖对过氧化氢致SH-SY5Y细胞凋亡及线粒体功能障碍的调控[J]. 中国组织工程研究, 2024, 28(25): 4041-4047.
[7]	谢婷, 刘婷婷, 曾雪慧, 李亚敏, 周庞虎, 易念华. 岩藻黄质活化核因子E2相关因子2改善糖皮质激素诱导的成骨细胞凋亡[J]. 中国组织工程研究, 2024, 28(23): 3609-3614.
[8]	马万里, 杨红胜, 屈波, 张正东, 龚凯, 林炎水. 黄芩素预防大鼠激素性股骨头坏死的作用机制[J]. 中国组织工程研究, 2024, 28(23): 3661-3668.
[9]	宁桃丽, 谢艳, 王娜, 王庆丰, 吉建, 张冬纳. 葡萄籽提取物抑制大鼠生长板软骨细胞凋亡及促进胫骨的生长[J]. 中国组织工程研究, 2024, 28(20): 3216-3222.
[10]	左俊, 马少林. β-谷甾醇对增生性瘢痕成纤维细胞作用机制的网络药理学分析[J]. 中国组织工程研究, 2024, 28(2): 216-223.
[11]	王倩, 卢子昂, 李利和, 吕超亮, 王盟, 张存鑫. 青藤碱可有效抑制白细胞介素1β介导的髓核细胞凋亡[J]. 中国组织工程研究, 2024, 28(2): 224-230.
[12]	陈思敏, 胡颖俊, 闫文睿, 冀乐, 邵梦丽, 孙泽, 郑红星, 祁珊珊. 链脲佐菌素诱导糖尿病脑病大鼠模型的构建及评价[J]. 中国组织工程研究, 2024, 28(2): 237-241.
[13]	龙智生, 龚飞鹏, 温家宾, 闵欢, 舒阳, 赖卓玺, 陈钢. 骨髓间充质干细胞外泌体联合茶多酚治疗大鼠脊髓缺血再灌注损伤[J]. 中国组织工程研究, 2024, 28(19): 2953-2959.
[14]	侯艺文, 刘莹, 李竹蓉, 陈晨, 李振城, 刘杨. 环状RNA参与自身免疫性肝炎小鼠肝损伤的相关性分析[J]. 中国组织工程研究, 2024, 28(14): 2152-2158.
[15]	范志鸿, 张贤, 李超. 椎间盘退变中的Wnt信号通路[J]. 中国组织工程研究, 2024, 28(12): 1950-1955.