放射性131Ⅰ 诱导的甲状腺功能减退大鼠模型的构建

doi:10.12307/2023.195

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：
甲状腺功能减退症：简称甲减，是由于多种原因引起的甲状腺激素合成、分泌或生物效应不足所致机体各系统功能减退的一组综合征。
碘131(131Ⅰ)：碘-131是元素碘的一种放射性同位素，为人工放射性核素(核裂变产物)，半衰期为8.02 d。

背景：目前，甲状腺功能减退动物模型造模过程中动物及药物剂量的选择各有差异，造模成功与否的标准也未得到统一。
目的：探讨放射性131Ⅰ诱导大鼠甲状腺功能减退模型的可行性和最佳剂量。
方法：健康雄性SD大鼠40只，随机分为5组，每组8只。其中4组大鼠分别腹腔注射4.625，9.25，12.95，18.5 MBq 131Ⅰ溶液，构建甲状腺功能减退模型；另一组大鼠为正常对照组注射等量生理盐水。分别于注射131Ⅰ前、注射131Ⅰ后4，8，12，16周测量大鼠体质量变化，采用ELISA试剂盒法分别测定血清中促甲状腺激素、FT3、FT4、丙氨酸氨基转移酶、门冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶、尿素氮、肌酐、尿酸水平，通过甲状腺131Ⅰ静态显像评价甲状腺功能，苏木精-伊红染色观察甲状腺组织形态学改变。
结果与结论：①与对照组相比，第8，12，16周9.25 MBq、12.95 MBq、18.5 MBq组大鼠体质量下降(P < 0.05)；9.25 MBq、12.95 MBq、 18.5 MBq组大鼠血清促甲状腺激素浓度在4，8，12，16周逐渐升高，FT3、FT4水平逐渐下降(P < 0.05)；12.95 MBq、18.5 MBq组大鼠丙氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶水平高于对照组，18.5 MBq组尿素氮、肌酐水平较对照组升高(P < 0.05)；②注射131Ⅰ前，各组甲状腺清晰显影，靶/非靶比值无显著差异(P > 0.05)；与对照组相比，第4周9.25 MBq、12.95 MBq、18.5 MBq组甲状腺未见显影，靶/非靶比值减小(P < 0.05)，且在8，12，16周随访均未显影，但各剂量组之间靶/非靶比值差异无显著性意义(P > 0.05)；注射131Ⅰ后大鼠甲状腺滤泡体积变小、萎缩，部分呈不规则形态；③结果表明，采用腹腔注射9.25 MBq剂量 131Ⅰ，且该剂量在4周内可使大鼠成功建立稳定的甲状腺功能减退模型，该研究为核医学131Ⅰ治疗领域动物模型的建立提供参考。

https://orcid.org/0000-0002-8610-5529(战莹)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

关键词: 131Ⅰ, 大鼠, 甲状腺功能减退症, 单光子发射计算机断层成像术, FT3, FT4, 丙氨酸氨基转移酶, 碱性磷酸酶, 尿素氮, 肌酐

Abstract: BACKGROUND: Up to now, there is no unified conclusion on the selection of animals and drug doses and the criteria for successful modeling in the modeling process of hypothyroid animal models.
OBJECTIVE: To explore the feasibility and optimal dose of radioactive 131I in the establishment of hypothyroidism model in rats
METHODS: Forty healthy male Sprague-Dawley rats were randomly divided into five groups (n=8 per group). Four groups were injected intraperitoneally with 4.625, 9.25, 12.95, and 18.5 MBq 131I solution to construct hypothyroidism models and the control group was injected with the same amount of normal saline. The body mass of rats was measured before 131I injection, 4, 8, 12, and 16 weeks after injection of 131I. The serum levels of thyroid-stimulating hormone, free triiodothyronine, free thyroxine, alanine aminotransferase, aspartate aminotransferase, alkaline phosphatase, blood urea nitrogen, creatinine, and uric acid were determined by an ELISA kit. Thyroid function was evaluated by 131I static imaging and morphological changes of thyroid tissue were observed by hematoxylin-eosin staining.
RESULTS AND CONCLUSION: Compared with the control group, the body mass of the rats in the 9.25, 12.95, and 18.5 MBq groups were significantly decreased at 8, 12, and 16 weeks (P < 0.05). The serum thyroid-stimulating hormone concentration gradually increased in the 9.25, 12.95, and 18.5 MBq groups at 4, 8, 12, and 16 weeks, while the levels of free triiodothyronine and free thyroxine gradually decreased (P < 0.05). The levels of alanine aminotransferase and alkaline phosphatase in the 12.95 and 18.5 MBq groups were significantly higher than those in the control group, while the blood urea nitrogen and creatinine levels in the 18.5 MBq group were significantly higher than those in the control group (P < 0.05). The thyroid glands in each group were clearly visualized before 131I injection, and the target-to-nontarget ratio was not significantly different among groups (P > 0.05). Compared with the control group, the thyroid glands of the 9.25, 12.95, and 18.5 MBq groups were not visualized in the 4th week and the target-to-nontarget ratio was significantly decreased (P < 0.05). The thyroid glands were undeveloped at the 8-, 12-, and 16-week follow-up visits, but there was no statistical difference in the target-to-nontarget ratio among groups (P > 0.05). After injection of 131I, the thyroid follicles of rats became smaller and shrunken, and some of them were irregular. All these findings indicate that intraperitoneal injection of 131I at a dose of 9.25 MBq could successfully establish a stable hypothyroid model in rats within 4 weeks, which provide a reference for the establishment of animal models in the field of nuclear medicine 131I therapy.

Key words: 131I, rat, hypothyroidism, single photon emission computed tomography, free triiodothyronine, free thyroxine, alanine aminotransferase, alkaline phosphatase, blood urea nitrogen, creatinine

中图分类号:

战莹, 武晓丹, 郝珊瑚. 放射性131Ⅰ 诱导的甲状腺功能减退大鼠模型的构建[J]. 中国组织工程研究, 2023, 27(17): 2631-2636.

Zhan Ying, Wu Xiaodan, Hao Shanhu. Establishment of an animal model of radioactive 131I-induced hypothyroidism in rats[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2023, 27(17): 2631-2636.

图/表（结果） 7

2.1 实验动物数量分析实验选用大鼠40只，分为5组， 12.95 MBq组在14周死亡1只鼠、15周死亡1只鼠，18.5 MBq组在12周死亡1只鼠、14周死亡2只鼠，4.625 MBq、9.25 MBq 组大鼠未出现死亡。
2.2 各组大鼠体征及体质量变化趋势比较 131Ⅰ 干预4周后9.25 MBq、12.95 MBq、18.5 MBq组大鼠均出现少动、饮水进食减少、反应淡漠等症状，而4.625 MBq组反应不明显。各剂量组与对照组相比，第4周体质量无明显差异(P > 0.05)，第8，12，16周，9.25 MBq、12.95 MBq、18.5 MBq组大鼠体质量与对照组相比明显下降(P < 0.05)，而4.625 MBq组大鼠体质量与对照组相比各个时间点均无统计学变化，见表1。

2.3 各组大鼠血清促甲状腺激素、FT3、FT4水平比较 4.625 MBq 组与对照组甲状腺功能各项指标比较差异无显著性意义(P > 0.05)。9.25 MBq、12.95 MBq、18.5 MBq组与对照组相比，随着剂量的增加，血清促甲状腺激素浓度在4，8，12，16周逐渐升高，FT3、FT4水平逐渐下降，差异有显著性意义 (P < 0.05)，见表2。

2.4 各组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶、门冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶、尿素氮、肌酐、尿酸水平比较 131Ⅰ 照射4周后，与对照组相比，4.625 MBq组和9.25 MBq组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶、门冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶水平差异均无显著性意义(P > 0.05)，12.95 MBq组和18.5 MBq组丙氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶水平升高(P < 0.05)，门冬氨酸氨基转移酶水平无明显变化，见图1；与对照组相比， 4.625 MBq、9.25 MBq、12.95 MBq组大鼠血清尿素氮、肌酐、尿酸水平差异均无显著性意义(P > 0.05)，18.5 MBq组尿素氮、肌酐水平升高(P < 0.05)，尿酸水平无明显变化，见图2。

2.5 不同131Ⅰ 剂量组大鼠甲状腺131Ⅰ 静态显像结果各剂量组注射131Ⅰ 前，甲状腺清晰显影，靶/非靶(target-to-nontarget ratio，T/NT)比值差异无显著性意义(P > 0.05)，第4周开始，9.25 MBq、12.95 MBq、18.5 MBq组甲状腺未见显影，T/NT比值与对照组相比差异有显著性意义(P < 0.05) ，且在12周，16周随访均未显影，但各剂量组之间差异无显著性意义(P > 0.05)，见表3；典型图像见图3。

2.6 大鼠甲状腺组织形态学观察对照组大鼠甲状腺组织中滤泡数量丰富，结构完整，上皮细胞形态结构正常，基质含量丰富，未见明显炎症。而注射131Ⅰ 后4周大鼠甲状腺组织发生明显改变，甲状腺滤泡体积变小、萎缩，部分呈不规则形态，见图4。

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引言

甲状腺是人体的内分泌腺，可产生参与新陈代谢和大脑发育的含碘类激素。碘有几种同位素，包括放射性131Ⅰ 、 125Ⅰ 和123Ⅰ 等[1]。由于碘在甲状腺中的自然积累，131Ⅰ (半衰期 8.02 d)经常被用于治疗甲状腺恶性肿瘤及甲状腺功能亢进症，还可用于甲状腺静态显像[2]。甲状腺功能减退(简称甲减)是由于甲状腺激素合成及分泌减少导致的机体代谢减低的一种疾病[3]，具体表现为促甲状腺激素浓度高于参考范围和游离甲状腺素浓度低于参考范围。全世界有高达5%的人群患有甲减，另约有5%的甲减患者未被诊断[4]。甲减的原因主要包括碘缺乏影响甲状腺激素的合成和分泌、慢性自身免疫性甲状腺炎(也称为桥本氏病)和1型糖尿病等自身免疫性疾病[5]、接受药物(如胺碘酮)阻断甲状腺激素的产生[6]、以及甲状腺切除手术、放射性碘治疗及头颈部放射治疗等[7]。甲减的临床症状是非特异性的，主要有疲倦、便秘、脱发、注意力不集中、抑郁[8]、皮肤干燥、不明原因体质量改变等[9]，严重影响患者的生存质量，如果不加以治疗或治疗效果不理想，可能会产生严重的不良健康影响甚至最终导致死亡[10]。甲减的治疗通常首先采用左旋甲状腺素进行终生治疗，一部分患者可以通过左旋甲状腺素(LT4)治疗充分替代甲状腺激素，一部分患者仅仅是控制疾病或减轻症状，并且仍有超过1/3的患者治疗不充分，促甲状腺激素水平居高不下，部分患者虽促甲状腺激素水平得到控制，但症状持续存在或出现一些并发症[11-13]，加之一些患者缺乏药物依从性[14]，因此，如何有效地治疗甲减及方案改进是当下研究的难点。一些研究提出了改善治疗方案的必要性，如采用LT4+碘塞罗宁(LT3)联合治疗[15-16]；或使用干甲状腺片，干甲状腺片是一种联合疗法，其中 LT4/LT3 比率为4∶1[17]；也有研究者合成一种金属配位形式的 LT3，并将其装入包衣明胶胶囊中，通过口服缓释的方式提供较长时间的相对稳定的血清 T3 水平[18]。建立甲减动物模型，对其发病机制的进一步研究及指导临床治疗甲减具有重要的意义。目前，甲减动物模型造模过程中动物及药物剂量的选择各有差异、造模成功与否的标准也未得到统一[19-21]。
此次研究采用不同剂量的131Ⅰ 诱导建立大鼠甲减模型，以期建立一种精确、安全、有效的甲减模型及评价体系，为临床上治疗甲减尤其是甲状腺功能亢进继发甲减的研究奠定基础。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

材料方法

1.1   设计   随机对照动物实验，组间比较采用单因素方差分析。
1.2   时间及地点   实验于2018年12 月至2019年12月在北部战区总医院动物实验科完成。
1.3   材料
1.3.1   实验动物   40只清洁级SD大鼠由辽宁长生生物技术股份有限公司统一提供，雄性，6周龄，体质量为145-175 (166.8±5.9) g，许可证号：SCXK(辽)2020-0001。饲养于北部战区总医院动物实验科，饲养温度为18-23 ℃，相对湿度40%-70%，12 h光照/12 h黑暗，自由饮水摄食。
实验方案经北部战区总医院动物实验伦理委员会批准，批准号为2018024号。实验过程遵循了国际兽医学编辑协会《关于动物伦理与福利的作者指南共识》和本地及国家法规。实验动物在麻醉下进行所有的手术，并尽一切努力最大限度地减少其疼痛、痛苦和死亡。
1.3.2   仪器和试剂   Symbia T16 型双探头 SPECT/CT仪(德国，西门子)，Synersy HT酶标仪(BioRod公司)，低温高速离心机(美国，贝克曼)，Ⅰ-碘化钠注射液(中国工程物理研究院物理与化学研究所)。促甲状腺激素、游离三碘甲状腺原氨酸(free triiodothyronine，FT3)、游离甲状腺素(free thyroxine，
FT4)、丙氨酸氨基转移酶、门冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶、血尿素氮、血清肌酐、血尿酸、ELISA试剂盒由南京建成生物工程研究所公司提供。
1.4   实验方法   将40只大鼠随机分为5组，对照组(n=8)，4.625 MBq组(n=8)，9.25 MBq组(n=8)，12.95 MBq组(n=8)，18.5 MBq组(n=8)，分别将4.625，9.25 ，12.95，18.5 MBq 131Ⅰ ，
加生理盐水至0.5 mL一次性腹腔注射至大鼠体内，建立大鼠甲减模型，正常对照组注射0.5 mL生理盐水，并分别于注射131Ⅰ 前、注射131Ⅰ 后4，8，12，16周测量鼠体质量变化，并观察大鼠状态，包括毛发情况、精神状态、饮食饮水情况等。

1.5   主要观察指标
1.5.1   血清各指标测定   分别于注射131Ⅰ 前、注射131Ⅰ 后4，8，12，16周采血，动物采血前均禁食6 h以上，经眼眦采血并储存于抗凝管中，4 ℃，3 000 r/min离心10 min后取血清，放置于-80 ℃保存。采用ELISA试剂盒法测定血清中促甲状腺激素、FT3、FT4、丙氨酸氨基转移酶、门冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶、血尿素氮、血清肌酐、血尿酸水平，实验步骤严格按照试剂盒说明书进行。
1.5.2   甲状腺131Ⅰ 静态显像   各组大鼠腹腔注射10%水合氯醛麻醉，仰卧位固定于鼠板上，充分暴露其颈部，并分别于注射131Ⅰ 前、注射131Ⅰ 后4，8，12，16周腹腔注射131Ⅰ-碘化钠显像剂0.74 MBq，注射后24 h采集，采用高能平行孔准直器，采集矩阵128×128，能峰364 keV，采集计数300 K。
1.5.3   甲状腺组织形态学观察   将大鼠腹腔注射1%戊巴比妥钠40 mg/kg麻醉后处死，取出甲状腺，经40 g/L多聚甲醛固定，固定状态良好后，进行石蜡包埋，苏木精-伊红染色，光镜下观察甲状腺组织形态。
1.6   统计学分析   应用SPSS 18.0统计软件进行数据分析，计量数据以x±s表示，组间比较采用 ANOVA 单因素方差分析，组内两两比较采用最小显著差异LSD-t 检验，P < 0.05为差异有显著性意义，该文统计学方法经北部战区总医院生物统计学专家审核。

讨论

甲减是一种较为常见的内分泌疾病。甲减患者血清促甲状腺激素水平升高，血清甲状腺激素水平降低(明显甲状腺功能减退)或正常(亚临床甲状腺功能减退)[22]，如果不加以治疗，可能会对身体健康产生严重影响并最终导致死亡[23]。以往研究者大多采用抗甲状腺药物抑制甲状腺过氧化物酶所介导的酪氨酸的碘化从而抑制甲状腺激素的合成制备甲减模型[24-25]。GŁOMBIK等[26]将抗甲状腺药物丙基硫氧嘧啶 (PTU) 给予雄性Wistar Kyoto 大鼠3周，大鼠体质量降低，FT3 和 FT4 水平显著下降，而促甲状腺激素浓度增加，成功构建了共存抑郁症和甲减动物模型。BEHESHTI等[27]对怀孕的雌性Wistar大鼠持续补充含有0.03% 甲巯咪唑(MTZ)的水60 d，使子代鼠甲状腺不能正常发育，甲巯咪唑组子代血清甲状腺素水平显著降低，成功诱导先天性甲状腺功能减退模型[28]。通过化学诱导甲减模型，方法简单，但造模过程中需要持续给药，停用后7 d大鼠甲状腺功能即自动恢复正常[29]，模型不稳定，且不利于长期研究。一些研究者在对动物模型施以抗甲状腺药物的同时还需配合低碘饮食[30-31]。也有研究者采用甲状腺全切术[32]、甲状腺次全切术或甲状腺全切术+131Ⅰ 制备快速甲减模型[33-34]，这种方法的优点是造模成功率高，但术后动物存活率较低，外科手术也可能损伤附近的器官，包括胸腺和大血管，且不能保证手术完全切除甲状腺组织，术后残留的甲状腺组织直接影响甲功水平[35-36]。此外，还有研究者通过氟化物暴露易对机体产生细胞DNA损伤，从而诱导产生甲状腺毒性[37]。YANG等[38]通过每天给予成年雄性Kumning小鼠口服50 mg/kg的 NaF 30 d构建甲减模型，但此模型并非适用所有研究，多用于研究由环境氟化物污染引起的甲状腺功能障碍的机制及其预防或改善措施。
此次研究通过对雄性SD大鼠腹腔注射9.25 MBq 131Ⅰ ，
4周后大鼠促甲状腺激素水平逐渐升高，FT3、FT4水平逐渐下降，成功建立大鼠甲减动物模型。甲状腺是对辐射敏感的器官之一，131Ⅰ 发射具有一定能量的β射线可对甲状腺组织产生电离辐射，使甲状腺组织本身呈现出一系列的病理改变，导致甲状腺滤泡细胞受损，甲状腺功能降低，甲状腺激素分泌受阻，进而导致甲减[39]。此模型操作简单、模型稳定、对动物损伤较小，可用于进行甲减相关研究，尤其是131Ⅰ 治疗甲状腺功能亢进(甲亢)后导致的甲减。131Ⅰ 治疗是治疗甲亢的常用手段之一，甲减是131Ⅰ 治疗甲亢最常见的并发症，临床发生率占80%以上[4]。此方法建立的甲减模型与临床上采用放射性131Ⅰ 治疗甲亢后造成的甲减在生理病理上相似，属于慢性甲减。研究采用此方法构建甲减模型，从不同时间点、不同剂量的131Ⅰ 所致大鼠甲减模型角度探索合适的造模剂量。
经查阅文献，此次研究选择4.625，9.25，12.95，18.5 MBq作为研究剂量[40]。首先评估了不同剂量131Ⅰ 作用下大鼠体质量与体征变化，结果发现131Ⅰ 干预的各组大鼠均出现少动、饮水进食减少、反应淡漠等症状，随着干预时间延长上述症状更为显著，这是由于131Ⅰ 致甲状腺功能低下从而引起代谢紊乱。通过体质量变化分析可知，4.625 MBq组大鼠体质量与对照组无明显差异，且促甲状腺激素、FT3、FT4水平与对照组相比无明显变化，可见4.625 MBq剂量不足以完全消除内源性甲状腺激素的产生，这很可能是由于放射性碘在甲状腺中的积累不足[41]。9.25，12.95，18.5 MBq组大鼠体质量与对照组相比呈下降趋势，且随着时间增加，血清促甲状腺激素持续增高，T3、T4逐渐降低；但12.95 MBq组与18.5 MBq组在12周后大鼠部分出现死亡现象，这可能是由于131Ⅰ 剂量过大，间接导致大鼠产生危象[42]，大鼠处在持续严重的甲状腺功能损坏状态下未得以治疗，可能并发呼吸系统损害、心血管系统损害[43]、颈部肿胀、疼痛、昏迷、甚至黏液性水肿等[44]，严重可危及生命[45-46]。研究表明甲减长期未得以诊断或未得以治疗的死亡率高达40%-60%，近来由于早期检测和积极的护理，死亡率仍然高达20%-25%[47]。此外，还可能由于131Ⅰ 同时产生β射线和γ射线，当注射体内时会因内照射产生明显的生物效应，还会引起电离效应，穿透深层的组织引起严重损伤[48]。由于动物个体放射敏感性不同，131Ⅰ 除对机体产生确定性效应之外，还会产生随机性效应，可能因此导致动物死亡[49-50]。此次研究12.95 MBq组和18.5 MBq组丙氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶水平高于对照组，18.5 MBq
组尿素氮、肌酐水平较对照组升高(P < 0.05)；造模后甲状腺131Ⅰ 静态显像显示给予131Ⅰ 第4周，9.25，12.95，18.5 MBq组甲状腺消失，且随后8，12，16周的随访显示甲状腺未见显影，且T/NT值无明显变化(P > 0.05)，说明甲减模型稳定，且3组T/NT值无显著差异，但大剂量131Ⅰ 会对大鼠造成过度损伤。结合体质量变化、血清指标以及131Ⅰ 显像结果，作者认为9.25 MBq是最佳的剂量，SD大鼠腹腔注射9.25 MBq 131Ⅰ 可获得较稳定的甲减实验模型。
查阅文献可知关于放射性碘构建甲减模型的研究较少，蒋宁一等[40]将新西兰兔随机分为对照组(0.5 mL/kg 服用生理盐水)、低剂量组(18.5 MBq 131Ⅰ)、高剂量组(37 MBq/kg 131Ⅰ)，结果发现高剂量组在接受131Ⅰ 后1个月血清FT3、FT4水平明显减低，促甲状腺激素水平明显升高，甲状腺扫描未见显影，提示甲减模型构建成功。目前部分研究采用兔为模型[22，40]，作者认为大鼠对射线敏感，又几乎完全没有全身初期反应，体积大小适中，有利于后续的显像观察，而兔因其生理特征常常会出现对照射所特有的休克样反应，在实验过程中容易在照射后立即或不久死亡，再加上其体型较大，费用较高，因此此次研究选择大鼠作为研究对象[51]。文献中使用的是放射免疫分析法(RIA)测定血清促甲状腺激素及FT3、FT4水平，虽其灵敏度特异度较好，但自动化机台的取得却较受限，且成本较高，且因其具有放射性还需要特殊的预防措施，不利于推广和普通实验室开展[52]。此次研究采用ELISA，通过特异性免疫反应和酶的催化作用，灵敏度和特异度均较高，性质稳定，无放射性，易于观察和测定，应用更加广泛。目前针对甲状腺显像通常使用的是锝显像，因其具有价格便宜、易获得、操作简便等优点[53]。锝与碘为同族，都能被甲状腺组织摄取，但锝不能被有机化，故99 TcmO4-甲状腺显像只能反映甲状腺的摄取功能，不能反映碘代谢状态和有机化状态，因此，此次研究采用碘显像，结果更加准确全面[54]。
此造模方法较简便，成功率高，周期较短，经济易行。但该方法也存在局限性，131Ⅰ 进入体内形成内照射，除衰变产生β射线破坏甲状腺组织外，还释放γ射线，需要特殊防护措施。该模型可用于进行甲减相关研究，尤其是131Ⅰ 治疗甲亢后导致的甲减，可模拟疾病发展的状态。由此可见，此次研究数据为建立甲减模型提供了一个有效的放射性131Ⅰ 剂量，建议采用腹腔注射9.25 MBq剂量 131Ⅰ ，该剂量可使大鼠成功建立稳定的甲状腺功能减退模型，为核医学131Ⅰ 治疗领域动物模型的建立提供参考。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程