二妙散治疗类风湿关节炎的作用机制

doi:10.12307/2022.121

中国组织工程研究 ›› 2022, Vol. 26 ›› Issue (5): 742-748.doi: 10.12307/2022.121

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二妙散治疗类风湿关节炎的作用机制

赵雨薇1，高玉亭2，李振1，2，郝慧琴1，2

山西中医药大学，1基础医学院，2中西医结合基础实验室，山西省晋中市 030600

收稿日期:2020-11-10 修回日期:2020-11-13 接受日期:2020-12-14 出版日期:2022-02-18 发布日期:2021-12-01
通讯作者: 郝慧琴，博士，教授，山西中医药大学基础医学院，山西中医药大学中西医结合基础实验室，山西省晋中市 030600
作者简介:赵雨薇，女，1990年生，汉族，山西省人， 2020年山东中医药大学毕业，博士，讲师，主要从事中医临床文献研究。
基金资助:
国家自然科学基金项目(81904034)，项目负责人：李振；山西省重点研发计划(201803D31084)，项目负责人：郝慧琴；山西省面上青年基金项目(201901D211534)，项目负责人：高玉亭

Mechanism of Ermiao San in the treatment of rheumatoid arthritis

Zhao Yuwei1, Gao Yuting2, Li Zhen1, 2, Hao Huiqin1, 2

1Basic Medical College, 2Basic Laboratory of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine, Shanxi University of Chinese Medicine, Jinzhong 030600, Shanxi Province, China

Received:2020-11-10 Revised:2020-11-13 Accepted:2020-12-14 Online:2022-02-18 Published:2021-12-01
Contact: Hao Huiqin, MD, Professor, Basic Medical College, Basic Laboratory of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine, Shanxi University of Chinese Medicine, Jinzhong 030600, Shanxi Province, China
About author:Zhao Yuwei, MD, Lecturer, Basic Medical College, Shanxi University of Chinese Medicine, Jinzhong 030600, Shanxi Province, China
Supported by:
the National Natural Science Foundation of China, No. 81904034 (to LZ); Shanxi Provincial Key Research and Development Program, No. 201803D31084 (to HHQ); General Youth Fund Project of Shanxi Province, No. 201901D211534 (to GYT)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：
分子对接：是通过受体的特征以及受体和药物分子之间的相互作用方式来进行药物设计的方法，主要研究分子间(如配体和受体)相互作用，并预测其结合模式和亲合力的一种理论模拟方法。
ADME：“药代动力学”，指人体对外源化学物的吸收(Absorption)、分布(Distribution)、代谢(Metabolism)及排泄(Excretion)过程。

背景：传统复方中药二妙散治疗类风湿关节炎具有良好的效果，已有研究证明其具有抑制血管新生的作用，延缓病情发展，但其作用机制尚不明确。
目的：基于网络药理学方法和分子对接分析二妙散治疗类风湿关节炎的药理机制，为经典方剂的治疗机制研究及临证运用提供参考依据。
方法：通过中医药系统药理学平台(TCMSP)获取苍术、黄柏的主要化学成分及其靶点，根据ADME筛选中药活性组分；通过GeneCards，OMIM，TTD，DRUGBANK数据库获取类风湿关节炎主要靶点，利用String平台进行蛋白质相互作用分析，构建PPI网络并挖掘网络中潜在的蛋白质功能模块。运用Metascape平台分析“药物-成分-靶点”及其参与的生物学过程及信号通路，然后使用Cytoscape 3.8.0软件构建“二妙散成分-类风湿关节炎靶点-通路”网络，最后通过Autodock软件对网络中度值较高的药物成分与核心作用靶点进行分子对接验证。
结果与结论：①二妙散调治类风湿关节炎的核心活性成分为槲皮素、汉黄芩素及β-谷甾醇等，核心靶点有前列腺素G/H合成酶2(PTGS2)、原癌基因蛋白(JUN)及核转录因子κB/p65(RELA)等；②二妙散调治类风湿关节炎的生物学通路主要作用于晚期糖基化终产物(AGE-RAGE)、有丝分裂原活性蛋白激酶(MAPK)、白细胞介素17以及肿瘤坏死因子等信号通路，主要与免疫调节、细胞凋亡、炎性反应及氧化应激有关；③分子对接结果证实，二妙散中槲皮素、汉黄芩素及β-谷甾醇等关键化合物与前列腺素G/H合成酶2、原癌基因蛋白和核转录因子κB/p65等关键靶点有较为稳定的结合活性；④文章结果初步揭示了二妙散通过多成分、多靶点、多通路调控的特点发挥治疗类风湿关节炎的分子药理学作用机制，为二妙散的作用机制研究及临床应用提供了理论基础。

https://orcid.org/0000-0002-2184-999X (赵雨薇) ；https://orcid.org/0000-0003-1144-2579 (郝慧琴)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

关键词: 二妙散, 中医药, 网络药理学, 分子对接, 类风湿关节炎, 靶点预测, 免疫调节, 炎性反应

Abstract: BACKGROUND: Ermiao San has a good effect in the treatment of rheumatoid arthritis. Studies have proved that Ermiao San can inhibit angiogenesis and delay the progression of the disease, but its mechanism is not clear.
OBJECTIVE: To analyze the pharmacological mechanism of Ermiao San in the treatment of rheumatoid arthritis based on network pharmacology and molecular docking, so as to provide reference for studying the therapeutic mechanism and clinical application of classical prescriptions.
METHODS: The main chemical components and targets of Atractylodes macrocephala and Phellodendri were collected on the Systematic Pharmacological Platform of Traditional Chinese Medicine (TCMSP), and the active components of traditional Chinese medicine were screened according to ADME. The main targets of rheumatoid arthritis were obtained by GeneCards, OMIM, TTD and DRUGBANK databases, and the protein interaction was analyzed by String platform to construct the protein-protein interaction network and mine the potential protein functional modules in the network. The “drug-ingredient-target” and the relevant biological processes and signaling pathways were analyzed by Metascape platform, and then the “Ermiao San component-rheumatoid arthritis target-pathway” network was constructed by Cytoscape3.8.0 software. Finally, the molecular docking verification was carried out between the drug components with high value in the network and the core action target by Autodock software.
RESULTS AND CONCLUSION: The core active components of Ermiao San in the treatment of rheumatoid arthritis are quercetin, wogonin, β-sitosterol and so on, and the core targets are prostaglandin G/H synthetase 2, JUN proto-oncogene protein, and nuclear factor-κb/p65. The biological pathways of Ermiao San in the treatment of rheumatoid arthritis mainly include advanced glycation end product and receptor, mitogen-activated protein kinase, interleukin-17, and tumor necrosis factor signaling pathway, which are mainly related to immune regulation, apoptosis, inflammatory reaction and oxidative stress. The results of molecular docking showed that the key compounds such as quercetin, wogonin and β-sitosterol in Ermiao San have stable binding activity with key targets such as prostaglandin G/H synthetase 2, JUN proto-oncogene protein, and nuclear factor-κb/p65. This study preliminarily indicates that Ermiao San plays a role in the treatment of rheumatoid arthritis through multi-component, multi-target and multi-pathway regulations, which provides a basis for the study on the mechanism and clinical application of Ermiao San.

Key words: Ermiao San, traditional Chinese medicine, network pharmacology, molecular docking, rheumatoid arthritis, target prediction, immune regulation, inflammatory response

中图分类号:

赵雨薇, 高玉亭, 李振, 郝慧琴. 二妙散治疗类风湿关节炎的作用机制[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(5): 742-748.

Zhao Yuwei, Gao Yuting, Li Zhen, Hao Huiqin . Mechanism of Ermiao San in the treatment of rheumatoid arthritis[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2022, 26(5): 742-748.

图/表（结果） 13

2.1 二妙散活性成分靶点的获取通过TCMSP数据库，初步提取了苍术的49种化学成分、黄柏的 140 种化学成分，经ADME筛选后共获得二妙散有效成分29个，其中苍术 4个、黄柏25个，包括汉黄芩素、槲皮素、豆甾醇、小檗碱和黄柏酮等，见表2。经Uniprot 数据库规范后，共预测苍术成分作用靶点68个、黄柏成分作用靶点510个，合并后删除重复值共预测靶点213个。

2.2 类风湿关节炎相关靶点的获取从 Genecards数据库获得类风湿关节炎靶点4 329个。根据经验设定Score值大于中位数的目标靶点为类风湿关节炎的潜在靶点。GeneCards 数据库中，类风湿关节炎靶点Score值最大值为114.78，最小值为0.23，中位数为1.82，因此Score > 1.82的靶点为类风湿关节炎的潜在靶点。然后，结合其他数据库进行补充，最终预测了2 247个类风湿关节炎相关靶点。
2.3 二妙散成分-类风湿关节炎靶点-通路网络的构建将预测的二妙散药物靶点与类风湿关节炎疾病靶点取交集，并通过Venny绘制韦恩图，得到二妙散成分-类风湿关节炎共同靶点132 个，见图1。将这132个靶点录入STRING，获得了PPI网络，并导入Cytoscape软件绘制蛋白关系PPI网络图，见图2。该网络包括132个节点，共524条边。节点的大小、颜色与此节点的Degree值成正比，即节点越大、颜色越深对应蛋白的Degree值越大。使用插件CytoHubba计算出得分较高的关键作用靶点，见图3，包括肿瘤坏死因子、JUN、白细胞介素1B、RELA、白细胞介素4、白细胞介素6、CXCL8、CCL2、白细胞介素2和IFNG，这些靶点在蛋白网络中具有枢纽的重要地位，在二妙散治疗类风湿关节炎中具有重要意义，可作为其有效成分作用的靶点。

由于 PPI 网络中蛋白的作用是相互的，所以通常归为无向图。PPI复杂网络中存在部分密度较高的区域称为模块(module)，是 PPI 网络中潜在的子网，其连线密度较高，具有生物学意义[13]，所以为了能更加精确地分析二妙散治疗类风湿关节炎的作用机制，在得到二妙散 PPI 网络后，有必要进一步识别其内在的模块。因此，运用Cytoscape 3.8.0软件中的MCOED插件，得到Module，见图4。根据P值，分别保留PPI网络与Module中3个最佳评分的生物学进程，并对其进行功能描述，见表3。

2.4 靶点功能与通路的富集分析文章采用 Metascape平台对二妙散治疗类风湿关节炎相关靶点进行信号通路分析，并使用 Origin Lab 9.1软件绘图。二妙散主要参与的生物学过程包括生物对有毒物质的应答过程(response to toxic substance)、对无机物的应答过程(response to inorganic substance)、对脂多糖的应答过程(response to lipopolysaccharide)、对细菌源分子的应答过程(response to molecule of bacterial origin)，细胞因子介导的信号通路(cytokine-mediated signaling pathway)，细胞凋亡信号通路(apoptotic signaling pathway)，见图5A，参与的通路主要有AGE-RAGE信号通路、MAPK信号通路、白细胞介素17信号通路以及肿瘤坏死因子信号通路等，见图5D。
相关靶点调节类风湿关节炎的功能主要富集于转录因子结合(transcription factor binding)，蛋白域特异结合(protein domain specific binding)，近端启动子序列特异性DNA结合(proximal promoter sequence-specific DNA binding)，RNA聚合酶Ⅱ特异性(DNA-binding transcription activator activity，RNA polymerase Ⅱ-specific)，RNA聚合酶Ⅱ近端启动子序列特异性DNA结合(RNA polymerase Ⅱ proximal promoter sequence-specific DNA binding)，DNA结合转录激活物活性，染色质结合(chromatin binding)等，见图5C。

2.5 二妙散成分-类风湿关节炎异常靶点-通路网络图的构建文章构建了二妙散成分-类风湿关节炎靶点-通路网络，见图6，并使用CytoScape 3.8.0软件中网络分析插件剖析二妙散治疗类风湿关节炎的网络，其中槲皮素连接度为107，紧密度为0.613 8，介度为0.533 5，因此预测槲皮素为二妙散治疗类风湿关节炎的主要活性成分，其次为汉黄芩素、β-谷甾醇和异紫堇杷明，详见表4。

PTGS2在网络中的连接度为25，介度为0.112 6，紧密度为0.504 2，因此预测PTGS2 为二妙散治疗类风湿关节炎的最主要靶点。JUN，RELA，MAPK1，肿瘤坏死因子，AKT1，RXRA，FOS，PTGS1，CASP3亦为相对重要的靶点，见表5。

2.6 成分-靶点分子对接验证分析结果文章选取二妙散活性成分中Degree值排名前3的关键药效物质与核心靶点进行分子对接验证发现，关键药效物质与核心靶点结合活性均较好，见表6。将上述对接结果利用Pymol软件绘图，由图可知，槲皮素与 PTGS2在ASN-382，ALA-202，ALA-199处形成氢键，与JUN在LEU-932，MET-929，GLY-856处形成氢键，与RELA在ARG-327，ARG-241，LYS-243处形成氢键；汉黄芩素与PTGS2在ASN-382，ALA-199和HIS-388处形成氢键，与JUN在LEU-932，MET-929，ASP-994处形成氢键，与RELA在GLN-325，ALA-335和HIS-176处形成氢键；β-谷甾醇与PTGS2在THR-212和TRP-387处形成氢键，与JUN在ASP-939，LYS-857和GLU-1015处形成氢键，与RELA在ASN-306，ALA-335和ARG-295处形成氢键，见图7。

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引言

类风湿关节炎是一种全身性、系统性的自身免疫性疾病，影响了0.5%-1.0%的普通人群[1]。西医目前对类风湿关节炎的治疗大多以对症治疗为主，但部分患者存在不耐受、依从性低或耐药的情况，从而导致预后不良。软骨损伤是其重要的病理变化，现有的药物治疗无法改善类风湿关节炎晚期的软骨损伤状态，通过组织工程手段治疗类风湿关节炎导致的软骨缺损或许具有良好的前景[2]。类风湿关节炎属中医“痹症”范畴，其病因包括内因、外因和痰瘀等几方面[3]，而其症状和病因相互错杂，才是最终导致风湿性关节炎缠绵难愈的原因。中医药治疗类风湿关节炎的优势不容小觑，其调治机制具有层次丰富、靶点多位、疗效稳定和安全性高等特点，特别是在症状改善层面有着极大的优势[4]，因此探索中医药治疗类风湿关节炎有着重大的意义。
二妙散首载于元代医家危亦林1345年所撰的《世医得效方》，原名为苍术散，主治一切风寒湿热、手足膝痛[5]；至朱丹溪在1481年所撰的《丹溪心法》首次更名为二妙散[6]，具有清热化湿、祛风宣痹的功效[7]。目前，在临证运用方面已经证明了二妙散加味治疗类风湿关节炎拥有良好的疗效[8]，与此同时，现代动物实验也阐释了二妙散可以活化核转录因子κB，促进有丝分裂原活性蛋白激酶(MAPK)磷酸化，从而达到缓解类风湿关节炎大鼠关节充血和水肿，以及减少滑膜组织增生和关节软骨破坏的程度[9]。尽管临证和动物实验均已证明了二妙散治疗类风湿关节炎的良好疗效，但其作用机制仍不明晰。
网络药理学是从药物和疾病间相互作用的整体性和系统性出发，在中药药效物质基础和机制的研究、复方配伍规律的认识方面应用广泛[10]，而其整体性和系统性的特点也与中医药强调的整体观念与辨证论治理论有着异曲同工之妙[11]。因此，文章采用网络药理学和分子对接的方法，从二妙散各单味药物方面考虑，聚焦于整体角度剖析二妙散治疗类风湿关节炎的作用机制，同时为后续体内或体外实验研究提供一定的理论基础。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

材料方法

1.1 设计生物信息学实验。
1.2 时间及地点于2020年7-10月在山西中医药大学完成。
1.3 资料
1.3.1 数据库文章所需数据库详见表1。

1.4 方法
1.4.1 二妙散化学成分与靶点筛选运用中医药系统药理学平台(TCMSP)搜索苍术、黄柏2味中药的化学活性成分，根据口服利用度(oral bioavailability，OB)≥30%，类药性(drug-likeness，DL)≥0.18的2个药代动力学(ADEM)的参数值开展活性成分的初步筛选以获得活性化合物及其作用的蛋白质靶点。筛选结束后，应用Uniprot蛋白质数据库对靶点进行标准化处理。
1.4.2 类风湿关节炎相关靶点检索在GeneCards 数据库、TTD数据库及OMIM数据库中以 “rheumatoid arthritis”和“RA”为疾病关键词查找，挖掘类风湿关节炎的潜在靶点，登入 DRUGBANK数据库进行靶点补充。文章设定 Genecards 数据库Score值大于中位数的靶点为类风湿关节炎的潜在靶点，删除并合并以上4个疾病数据库中的靶点后便得到了类风湿关节炎疾病靶点。

1.4.3 二妙散成分-类风湿关节炎靶点PPI网络构建为了阐明二妙散单味药靶点与类风湿关节炎靶点间的相互作用，因此利用Venny 2.1.0在线绘制韦恩图，然后将交集靶点提交至STRING 11.0数据库构建蛋白互质(PPI)网络模型，并使用 CytoScape 3.8.0中的MCODE插件功能深入分析PPI网络，确定潜在蛋白质功能模块。
1.4.4 二妙散成分-类风湿关节炎靶点功能与通路的富集分析运用 Metascape平台进行 GO 富集功能分析[12]，录入靶点后，设置P值，得到分析结果。对排名前20位的生物学过程(biological process，BP)、细胞成分(cellular component，CC)、分子功能(molecular function，MF)绘制GO分析条形图，并对排名前15的KEGG信号通路进行富集分析，筛选出可以用于解释二妙散治疗类风湿关节炎的通路。
1.4.5 二妙散成分-类风湿关节炎靶点-通路网络的构建运用CytoScape 3.8.0软件构建二妙散成分-类风湿关节炎靶点-通路网络图，利用CytoScape 3.8.0网络分析插件分析其有效成分及靶点的网络拓扑参数，包括连接度、紧密度及介度等。
1.4.6 成分-靶点分子对接验证在PubChem数据库中下载二妙散关键活性成分的2D结构，保存为SDF 格式。随后在PDB数据库中下载核心靶点的3D结构，保存为PDB格式。在PyMol软件中去除水分子及小分子配体，并使用AutoDockTools软件添加氢键，对受体和配体进行分子对接，从而得到分子对接的分数值并评估其结合活性。

讨论

类风湿关节炎是一种慢性炎症性关节疾病，可导致软骨、关节损伤甚至残疾[14]。类风湿关节炎的特征是持续性滑膜炎、全身性炎症和自身抗体的产生，其发生风险与遗传因素、环境因素皆有关系[15]。类风湿关节炎的发病率接近1%，是全球范围内最广泛的免疫介导的炎症性关节病，常见于中年女性和老年人[16]。长期以来，被认为与多种具有潜在危害的临床疾病相关，其损害不仅限于肌肉骨骼系统，也可出现心血管疾病及其他并发症[17]。中医学对类风湿关节炎的认识最早见于《黄帝内经》，称为“痹症”，《素问》为之设专文《痹论》。关于痹症的病因，古代医家多遵循“三因致痹”学说，现代医家在传统认知上加以发挥，认为类风湿关节炎的病因病机为“正虚为本，外感为标”，多脏器亏虚致邪毒内伏而发为此病[18]。从临床医学角度分析，二妙散的主要活性成分均具有抗炎、解热以及抗细胞凋亡的作用，但同临床医学的治疗观念不同的是，中医学强调疾病的整体观与辨证论治，其在治疗类风湿关节炎的过程中有着得天独厚的优势。在疾病初期，中医治疗以祛风除湿、消肿止痛、活血通络为主[19]，从而达到缓解关节肿胀和疼痛的目的，阻止疾病的发展。方中黄柏味苦能燥，寒以清热，有清热燥湿之效，为君药；苍术味辛行散，有燥湿健脾、祛风散寒的功效，善治风湿痹证，用为臣药，二药相伍，清热燥湿，标本兼顾。全方药少力专，集祛湿、清热、消肿、止痛为一体，其功效与类风湿关节炎的病机相契合，临床上也使用广泛，但目前其治疗类风湿关节炎的相关作用机制尚未揭示。
文章对二妙散进行初步筛选后共预测了药物活性成分靶点215个，类风湿关节炎疾病靶点2 247个，通过Venny在线平台取交集后一共得到了二妙散治疗类风湿关节炎的潜在作用靶点132个。通过“成分-靶点-通路”网络的构建，分析网络关系中的度值排名前3的活性成分，分别为槲皮素、汉黄芩素及β-谷甾醇，这些成分可能是二妙散治疗类风湿关节炎的关键有效成分。其中，槲皮素是方中君药黄柏的主要活性成分，研究证实槲皮素可通过多种方式调节类风湿关节炎中破骨细胞的生成[20]，可能具有调节类风湿关节炎中骨破坏和炎症的作用，其可以通过激活p53、减少细胞色素c的释放、抑制bcl-2、bax 和白细胞介素1β的表达而诱导成纤维样滑膜细胞的凋亡，并可抑制成纤维细胞的增殖[21]，还可以通过降低白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α水平以激活破骨细胞，抑制软骨的退化[22]，因此槲皮素是一种潜在的能缓解病情的抗风湿药物。汉黄芩素是方中臣药苍术的主要活性成分，研究发现汉黄芩素可以显著改善氧化应激，抑制CFA和p65核转位引起的p38磷酸化，引发氧化蛋白产物和炎性细胞因子水平的改变[23]。β-谷甾醇是黄柏的另一个主要成分，研究表明β-谷甾醇对巨噬细胞的极化有影响，能够诱导巨噬细胞分泌更多的白细胞介素10，从而触发抗炎表型，显著抑制炎症细胞的浸润[24]。课题组认为二妙散主要通过其有效活性成分，诸如槲皮素、汉黄芩素及β-谷甾醇等抑制炎症的发生，促进细胞凋亡，从而发挥其治疗作用。
最近的研究表明，类风湿关节炎的发病与氧化应激和慢性炎症密切相关，氧化应激是其病情加重的关键因素[25]，抗炎、抗氧化以及免疫调节是治疗类风湿关节炎的重要机制。文章通过对蛋白互质网络(PPI)的分析，发现PTGS2，JUN，RelA为PPI网络中的核心蛋白。已有研究证实，PTGS2的治疗可通过降低血清中白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α的水平及其mRNA表达来减轻类风湿关节炎大鼠的炎症[26]；JUN可以调控促炎细胞因子和趋化因子表达，诱导滑膜巨噬细胞中外周血中Fre-1表达和Fra-1蛋白升高，从而调节类风湿关节炎的临床进程[27]；RelA能够调控免疫和炎症过程相关基因的表达，抑制核转录因子κB信号通路，阻断生长激素或胰岛素样生长因子1信号转导，抑制细胞增殖，抑制BMP2的表达，促进细胞凋亡，进而在类风湿关节炎的发生和发展中起关键作用[28]。
通过对基因的GO功能富集分析，结果表明二妙散治疗类风湿关节炎的132个潜在靶点的主要生物学过程涉及细胞因子介导的信号通路，生物对有毒物质、对无机物、对脂多糖的应答过程，细胞凋亡信号通路。文章KEGG通路富集结果表明核心靶点对应的显著信号通路有 15 条，包括AGE-RAGE通路、PI3K-Akt信号通路、白细胞介素17信号通路、细胞凋亡通路以及肿瘤坏死因子信号通路，这些通路主要与免疫调节、炎症反应及氧化应激等有关，且相互之间有着协同效应。其中AGE-RAGE通路富集基因数最多，相关研究表明AGE与受体RAGE结合可激活多种细胞内信号级联，如活化JAK/STAT信号通路，通过MAPK，ERK1/2和JNK等激活转录因子核转录因子κB，使白细胞介素1、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α等细胞因子表达增加，进一步激活核转录因子κB信号通路，促进炎性反应[29]。同时AGE-RAGE通路还可通过烟酰胺腺嘌呤磷酸二核苷酸氧化酶途径刺激活性氧的生成，进一步产生炎性反应，促进脂质和葡萄糖氧化，使AGE表达进一步升高[30]。现有研究已经证实核转录因子κB信号通路表达的变化是类风湿关节炎发展过程中的重要环节[31]。课题组认为二妙散主要通过调控炎症通路、氧化应激通路和细胞凋亡通路等，在类风湿关节炎的疾病进程中发挥作用。
分子对接结果显示，二妙散中关键药效物质与核心靶点蛋白PTGS2，JUN及RELA能够稳定地结合，表明二妙散可能作用于PTGS2，JUN及RELA等靶点，以此调节免疫、抑制炎症、改善氧化应激，从而治疗类风湿关节炎。
综上所述，二妙散具有调节免疫、抑制炎症及改善氧化应激等多重功效，具有典型的多靶点、多通路共同发挥作用治疗类风湿关节炎的特征。文章基于网络药理学和分子对接的方法，对二妙散各个中药进行研究，通过构建“成分-靶点-通路”网络图，剖析其治疗类风湿关节炎的作用机制，并完成了核心靶点与关键化合物的分子对接，结果发现该方活性成分槲皮素及关键基因PTGS2对类风湿关节炎的治疗存在较大的相关性。文章结果发现，二妙散方中黄柏的活性成分广玉兰内酯和唐松草定碱在PPI网络构建时未发现相关蛋白，这可能与部分数据库收录不完整或是更新滞后有关。此外，文章现阶段收集的药物与疾病靶点可能不够全面，预测得到的关键化合物槲皮素、汉黄芩素、β-谷甾醇以及核心靶点PTGS2，JUN和RELA也没有开展相关的体内和体外实验验证，因此存在一定的局限性。但值得肯定的是文章从网络药理学角度佐证了二妙散调节免疫、抗炎和抗氧化的作用机制，为后续在此基础上进行体内或体外实验验证提供了一定的理论支持，使其对临床应用更具有指导意义。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

二妙散治疗类风湿关节炎的作用机制

Mechanism of Ermiao San in the treatment of rheumatoid arthritis

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