干细胞培养与分化 stem cell culture and differentiation 栏目所有文章列表

(按年度、期号倒序)     一年内发表的文章 |  两年内 |  三年内 |  全部 Please wait a minute... 选择: 下载引用 EndNote Reference Manager ProCite BibTeX RefWorks 显示/隐藏图片 Select Hippo-YAP信号通路对人羊膜上皮细胞成骨分化的影响 张文景, 智晓东, 张玉强, 王 伟 中国组织工程研究    2023, 27 (24): 3788-3794.   DOI: 10.12307/2023.697 摘要 （276）      PDF （2129KB）（51）    可视化    文题释义： 人羊膜上皮细胞：作为近年来干细胞治疗领域最有前景的种子细胞之一，其具有全能干性，可向多胚层分化。无论是伦理问题，还是来源问题，人羊膜上皮细胞都具有先天优势。 间接共培养：将2种或2种以上的细胞接种于不同载体，然后将这些载体置于同一培养环境，使不同种类的细胞共用同一种培养体系而不直接接触。 背景：人羊膜上皮细胞作为新型种子细胞，在骨损伤修复中具有重要作用。 目的：探讨与成骨细胞共培养环境下人羊膜上皮细胞成骨分化的潜在调节机制。 方法：使用酶消化法提取人羊膜上皮细胞，实时细胞分析系统 xCELLigence RTCA S16检测原代细胞增殖情况，使用transwell将人羊膜上皮细胞与成骨细胞共培养，并加入siRNA-YAP1干预，通过检测人羊膜上皮细胞的成骨相关蛋白评估成骨分化情况。 结果与结论：①原代人羊膜上皮细胞在12 h内可完成贴壁，并在24-48 h进入指数增长期；②共培养过程中，人羊膜上皮细胞表现出成骨分化趋势，Hippo信号通路中YAP1蛋白表达增高；③在共培养过程中加入siRNA-YAP1后，Hippo信号通路中YAP1蛋白表达降低，同时人羊膜上皮细胞成骨分化能力减弱。 https://orcid.org/0000-0003-2572-5975 (王伟)  中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程 Select 毛囊表皮神经嵴干细胞调节面神经损伤后局部炎症因子的表达水平 唐 笠, 潘 瑶, 朱国臣 中国组织工程研究    2023, 27 (33): 5249-5255.   DOI: 10.12307/2023.750 摘要 （267）      PDF （3978KB）（62）    可视化    文题释义： 面神经：第七对颅神经，属于外周神经系统，经茎乳孔出颅后分为5支，主要支配面部表情肌群，损伤后引起面瘫。 毛囊表皮神经嵴干细胞：毛囊隆突区来源的表皮神经嵴干细胞，具备多向分化潜能。起源于神经外胚层神经嵴，与外周神经具有同源性，是外周神经损伤修复极具潜力的种子细胞。 背景：既往研究报道了毛囊表皮神经嵴干细胞在周围神经修复中的巨大潜力，但其炎症调节作用在面神经修复研究中鲜有报道。 目的：探究毛囊表皮神经嵴干细胞能否调节面神经损伤后早期局部肿瘤坏死因子α和白细胞介素4表达水平，以促进面神经功能和形态恢复。 方法：提取4 d龄SD大鼠毛囊表皮神经嵴干细胞进行培养、鉴定。取54只成年雄性SD大鼠制备面神经干缺损自体静脉导管桥接模型，随机等分为生理盐水组、DMEM组和毛囊表皮神经嵴干细胞组。通过免疫蛋白印迹、免疫组化、免疫荧光观察术后4-14 d肿瘤坏死因子α和白细胞介素4表达水平。对术后 12 周大鼠进行面神经功能评分，并行苏木精-伊红染色观察面神经形态。 结果与结论：①毛囊表皮神经嵴干细胞中 Nestin 和 p75NTR 双阳性表达，细胞纯度 > 90%；②与其他两组相比，毛囊表皮神经嵴干细胞组的肿瘤坏死因子α表达在术后7 d减弱(P < 0.05)，而白细胞介素4表达在术后3，7，14 d均增强(P < 0.05)；③与其他两组相比，毛囊表皮神经嵴干细胞组的面神经功能改善(P < 0.05)；④面神经移植段均可见新生血管和再生轴突，与其他两组相比，毛囊表皮神经嵴干细胞组移植段和移植远段的神经纤维排列更有序、包绕的髓鞘更厚；⑤结果表明：毛囊表皮神经嵴干细胞对面神经损伤后修复早期局部肿瘤坏死因子α和白细胞介素4表达具有调节作用，可抑制局部炎症反应，并促进面神经功能和形态恢复。 https://orcid.org/0000-0003-4814-1550 (朱国臣)  中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程 Select 旋转生物反应器内球形体培养对人胎盘间充质干细胞炎症因子分泌的影响 张萍萍, 梁婷婷, 范明松, 陈 黎, 张世昌 中国组织工程研究    2024, 28 (19): 3012-3017.   DOI: 10.12307/2024.177 摘要 （222）      PDF （1181KB）（89）    可视化    文题释义： 球形体培养：是利用细胞自我聚集形成细胞球的特性而建立的一种三维细胞培养方法。通常采用悬滴法、低黏附材料、凝胶包埋、生物反应器等方法进行多种细胞的球形体培养，构建类似于体内微环境的细胞-细胞和细胞-细胞外基质相互作用网络，广泛应用于细胞高密度扩增培养和类器官培养研究。 旋转生物反应器：是一种绕其处于水平位置的中心轴旋转，带有多种膜式氧合器(气体交换器)的圆柱形细胞或组织培养容器，具有低剪切力、微重力、极高溶氧效率、营养物质浓度梯度低等特点，是一种非常理想的细胞与组织工程用三维培养系统。 背景：生物反应器内球形体培养是既能维持间充质干细胞干性又能大规模扩增的体外培养方法，明确其对干细胞免疫调节作用的影响有利于指导临床应用。 目的：探讨旋转生物反应器内球形体培养对人胎盘间充质干细胞炎症因子分泌的影响。 方法：从人胎盘组织中分离培养人胎盘间充质干细胞，分别进行二维培养和旋转生物反应器培养，利用倒置相差显微镜、免疫组化染色和CCK-8实验观察细胞形态与增殖能力，RT-qPCR和流式荧光法检测多种炎症因子基因表达与蛋白分泌量。 结果与结论：①旋转生物反应器内培养的人胎盘间充质干细胞聚集成多细胞球形体，数量与体积逐渐增加；②苏木精-伊红染色可见旋转生物反应器内培养4 d的人胎盘间充质干细胞在球形体内分布均匀，形态正常；③免疫组化染色显示球形体内有大量人胎盘间充质干细胞的细胞核Ki-67阳性；④CCK-8实验结果显示，生物反应器内球形体培养的人胎盘间充质干细胞活力显著高于二维培养的细胞；⑤RT-qPCR和流式免疫荧光法检测结果显示，旋转生物反应器内球形体培养的人胎盘间充质干细胞中白细胞介素1β、白细胞介素4、白细胞介素6、白细胞介素8、白细胞介素10、白细胞介素17、肿瘤坏死因子α和干扰素α的基因表达量和蛋白分泌量显著高于二维培养的细胞；⑥结果表明，旋转生物反应器内球形体培养能显著提高人胎盘间充质干细胞分泌多种炎症因子的能力，加强人胎盘间充质干细胞的免疫调节作用。 https://orcid.org/0000-0002-6587-2518 (张世昌)  中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程 Select 低氧和氧化应激对不同来源间充质干细胞旁分泌的差异性影响 潘筱颖, 许永德, 刘志强, 邢晓雯, 杨 勇 中国组织工程研究    2024, 28 (19): 3024-3030.   DOI: 10.12307/2024.140 摘要 （198）      PDF （1288KB）（21）    可视化    文题释义： 氧化应激：是指体内氧化与抗氧化失衡的一种状态，导致中性粒细胞炎性浸润，蛋白酶分泌增加，产生大量活性氧，直接损伤细胞。 旁分泌功能：是指干细胞表达、分泌、合成的多种生物活性分子对靶细胞产生的生物学作用，是调节微环境稳态和应答外界不良刺激的重要机制。 背景：间充质干细胞的生物学行为受所处生存微环境的影响，微环境条件预处理是调控间充质干细胞功能的重要手段。 目的：对比氧化应激和低氧条件下脐带间充质干细胞、脂肪间充质干细胞旁分泌功能的差异，为治疗不同疾病选择适当的间充质干细胞预处理方式提供理论依据。 方法：培养脐带间充质干细胞和脂肪间充质干细胞，分别加入不同浓度的H2O2或不同体积分数的O2干预，检测细胞形态、增殖、活力和旁分泌因子表达。 结果与结论：①普通培养环境下，脐带间充质干细胞中脑源性神经营养因子和转化生长因子β的表达水平显著高于脂肪间充质干细胞，而脂肪间充质干细胞中基质细胞衍生因子1α和肿瘤坏死因子刺激因子6的表达水平显著高于脐带间充质干细胞；②中低浓度水 平(≤100 μmol/L)H2O2对2种间充质干细胞活力的影响无显著差异，但H2O2浓度从50 μmol/L增至100 μmol/L使脐带间充质干细胞中血管内皮生长因子表达水平显著增高，脂肪间充质干细胞中碱性成纤维细胞生长因子、血管内皮生长因子、基质细胞衍生因子1α和白细胞介素10表达水平均显著升高；③体积分数1% O2促进2种间充质干细胞增殖；体积分数1% O2干预24 h后，2种间充质干细胞中基因表达水平均有升高，但脂肪间充质干细胞中血管内皮生长因子、白细胞介素10和肿瘤坏死因子刺激因子6的表达水平显著高于脐带间充质干细胞；④结果提示：低氧和氧化应激预处理可提高间充质干细胞旁分泌功能，但2种间充质干细胞对低氧和氧化应激的响应不同，治疗疾病可选择适合的间充质干细胞预处理方式进一步提升其治疗潜力。 https://orcid.org/0009-0003-9786-6715 (潘筱颖)  中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程 Select miR-135a-5p靶向抑制Kif3B调控小鼠腭胚突间充质细胞的自噬 冯文宣, 廉舒博, 王 哲, 陈 靖, 何 苇 中国组织工程研究    2024, 28 (19): 3003-3011.   DOI: 10.12307/2024.151 摘要 （169）      PDF （1998KB）（11）    可视化    文题释义： microRNAs：是一种非编码短链RNA(大约22个核苷酸)，通过与靶点mRNA的3’-UTR相结合，发挥转录后水平调控作用。 细胞自噬：是在自噬相关基因的作用下，真核细胞通过溶酶体对损伤细胞器及胞浆中蛋白质进行降解的一种细胞行为。在正常生理条件下，细胞自噬处于较低水平以调控细胞的稳态，如蛋白质或细胞器的更新。 背景：研究表明，在地塞米松诱导腭裂的小鼠胚胎腭突间充质细胞中miR-135a-5p呈高表达，初级纤毛及其介导的Shh信号通路参与小鼠胚胎腭突间充质细胞的自噬。由此猜测miR-135a-5p可能通过初级纤毛及其介导的Shh信号途径调控小鼠胚胎腭突间充质细胞的自噬。 目的：探讨miR-135a-5p对小鼠胚胎腭突间充质细胞自噬的调控作用。 方法：体外提取并培养C57BL/6J小鼠胚胎腭突间充质细胞。细胞转染分别设置为：①对照组、miR-135a-5p阴性对照组、miR-135a-5p模拟物组。②NC+miR-NC组、KIF3B过表达组、miR-135a-5p+KIF3B组。qRT-PCR验证miR-135a-5p、KIF3B的转染效率；透射电镜观察各组细胞中自噬小体/自噬溶酶体的数目；免疫荧光技术测定自噬标记物LC3B的荧光表达程度；Western blot检测KIF3B、LC3和P62的蛋白表达。③miR-135a-5p阴性对照组、SAG处理组、SAG+miR-135a-5p组。qRT-PCR检测Shh信号下游关键转录因子Gli3的mRNA表达水平；Western blot检测自噬相关蛋白LC3和P62的蛋白表达。 结果与结论：①过表达miR-135a-5p后，细胞内自噬小体/自噬溶酶体数量显著增多(P < 0.01)；LC3B的荧光密度显著升高(P < 0.01)，KIF3B、P62的蛋白表达降低(P < 0.01)，LC3的蛋白表达升高；②过表达KIF3B后，细胞内自噬小体/自噬溶酶体数目明显减少(P < 0.01)，LC3B的荧光密度降低(P < 0.01)，P62的蛋白表达升高(P < 0.01)，LC3的蛋白表达下降(P < 0.01)；miR-135a-5p靶向抑制KIF3B的表达(P < 0.01)，并使自噬小体/自噬溶酶体数目、LC3B的荧光强度以及LC3的蛋白表达得到回升(P < 0.01)，P62的蛋白表达下降(P < 0.01)；③SAG使Gli3的mRNA表达明显升高(P < 0.01)，P62的蛋白表达升高(P < 0.01)，LC3的蛋白表达下降(P < 0.01)；加入miR-135a-5p后，Gli3的mRNA表达显著下降(P < 0.01)，P62的蛋白表达下降(P < 0.01)，LC3的蛋白表达回升(P < 0.01)；④结果表明：miR-135a-5p靶向抑制KIF3B并且可能通过负向调控Shh信号通路促进小鼠胚胎间充质细胞自噬。 https://orcid.org/0000-0002-7483-8143 (冯文宣)  中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程 Select 兔垂体干细胞的培养鉴定及分化 岳婷婷, 朱 婷, 毛剑男, 李 伟, 杭春华 中国组织工程研究    2024, 28 (25): 3942-3946.   DOI: 10.12307/2024.178 摘要 （157）      PDF （1162KB）（12）    可视化    文题释义： 垂体干细胞：是具有自我更新和多向分化潜能的原始细胞，主要分布于垂体前叶，其在整个生命过程中保持多能能力，并可分化成多种分泌不同激素类型的垂体细胞，在垂体平衡中发挥重要作用。 细胞分化：指同一来源的细胞逐渐产生出形态结构、功能特征各不相同的细胞类群的过程，其结果是在时间和空间上同一细胞与其从前的状态有所不同。如垂体干细胞可分化为多种类型细胞：促肾上腺皮质激素细胞、促甲状腺激素细胞、促生长激素细胞、促黄体生成激素细胞、促卵泡素细胞、催乳素细胞。 背景：脑垂体是人体重要的内分泌器官。多种疾病可引起脑垂体损伤，如脑垂体瘤、垂体功能减退症等。垂体干细胞因具有自我更新和多向分化潜力的特性，有望成为一种新的治疗方式修复受损的垂体。 目的：采用悬浮细胞球培养法分离培养垂体干细胞，鉴定其增殖及分化能力。 方法：采用悬浮细胞球培养法从新生新西兰白兔垂体中分离培养垂体干细胞，观察其形态特征；免疫荧光细胞染色检测垂体干细胞标志蛋白SOX2及Nestin的表达；采用EdU标记法检测垂体干细胞增殖能力；经贴壁及诱导分化后，通过ELISA法检测培养基中的激素水平。 结果与结论：通过悬浮细胞球培养法可成功分离得到垂体干细胞球，且具有较强的增殖能力；干细胞特异性标记物SOX2和Nestin阳性表达；经诱导分化后培养基中促肾上腺皮质激素、促甲状腺激素、促生长激素、促黄体生成激素、促卵泡素、催乳素水平显著升高(P < 0.001)，具有较强的分化能力。 https://orcid.org/0000-0001-9672-0798 (岳婷婷)  中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程 Select Lewis大鼠骨髓来源成熟和未成熟树突状细胞的提取与鉴别 李立强, 李明皓, 李 良, 李文波, 张 军, 孔令梅 中国组织工程研究    2024, 28 (25): 4013-4017.   DOI: 10.12307/2024.190 摘要 （131）      PDF （872KB）（81）    可视化    文题释义： 树突状细胞：它在体内具有极强的免疫抗原提呈功能，特别是树突状细胞处于未成熟状态下，主要通过组织相容性复合体捕获、处理抗原并将抗原递呈给初始T细胞，以激活抗原特异性的细胞免疫反应。 混合淋巴细胞反应：在具有抗原提呈功能的树突状细胞刺激下，T细胞发生增殖和活化，根据淋巴细胞反应的强度来评价组织相容性抗原差异和对异体细胞的反应能力。 背景：树突状细胞在未成熟阶段表现出极强的抗原吞噬功能，它可以在免疫耐受、癌症的免疫治疗等方面都表现出极大的优越性。但由于未成熟树突状细胞在生物体内含量极微，这就严重限制了它在临床、科研方面的应用。 目的：提取鉴别Lewis大鼠骨髓来源成熟和未成熟树突状细胞。 方法：从Lewis大鼠骨髓中分离骨髓前体细胞，应用20 ng/mL粒细胞集落刺激因子、10 ng/mL白细胞介素4培养7 d诱导为未成熟树突状细胞，然后在未成熟树突状细胞中加入1 μg/mL脂多糖继续培养2 d诱导为成熟树突状细胞。采用荧光倒置显微镜观察树突状细胞形态，流式细胞仪鉴定成熟和未成熟树突状细胞表面特异性分子，ELISA检测成熟和未成熟树突状细胞培养上清白细胞介素10、白细胞介素12和白细胞介素17A因子的分泌水平，混合淋巴细胞反应检测成熟和未成熟树突状细胞对T淋巴细胞的刺激反应。 结果与结论：①普通荧光倒置显微镜下观察树突状细胞具有明显的突起结构；②流式细胞仪可见未成熟树突状细胞低表达CD40、CD86等共刺激分子；相反，成熟树突状细胞高表达上述共刺激分子；③未成熟树突状细胞的白细胞介素10、白细胞介素17A分泌水平要远高于成熟树突状细胞(P < 0.01)；未成熟树突状细胞的白细胞介素12分泌水平低于成熟树突状细胞(P < 0.05)；④成熟树突状细胞对T细胞的刺激明显比成熟树突状细胞强，当成熟树突状细胞与T淋巴细胞比例达到1∶10时刺激能力更强；⑤结果表明：Lewis大鼠骨髓前体细胞可以分化为树突状细胞，通过流式细胞鉴定、相关因子检测、混合淋巴细胞反应能够鉴别树突状细胞的成熟和未成熟状态。 https://orcid.org/0000-0001-8856-1387 (李立强)  中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程 Select 人胎盘间充质干细胞调控 TGF-β1 /Smad3 信号通路抑制肺纤维化的发生 曹佳伟, 丁劭瑞, 铁 华, 薛 菁, 贾元元, 梁雪云, 李 锋 中国组织工程研究    2024, 28 (31): 4970-4974.   DOI: 10.12307/2024.712 摘要 （76）      PDF （1656KB）（10）    可视化    文题释义： 胎盘间充质干细胞：是存在于胎盘组织中的一种多功能细胞，具有自我更新和多向分化能力。因具有免疫调节功能、组织修复作用以及低免疫原性，胎盘间充质干细胞在多种疾病治疗中展现出广阔的应用前景。 肺纤维化：是一种发生在肺间质的慢性进展性疾病，会引起肺组织的免疫炎症反应和肺泡结构损伤，主要病理特征是胶原合成和降解失衡引起细胞外基质在肺间质内过度积累，导致气体交换不良，最终引发呼吸衰竭。 背景：研究表明人胎盘间充质干细胞能有效抑制肺纤维化的发展，但其发挥作用的具体机制目前并不清楚。 目的：探究人胎盘间充质干细胞对二氧化硅诱导人胚肺成纤维细胞发生肺纤维化的治疗作用及相关机制。 方法：CCK-8法检测不同质量浓度二氧化硅干预不同时间对MRC-5细胞增殖活力的影响，结合免疫荧光染色法筛选出最佳的二氧化硅刺激质量浓度与时间用于后续实验。将MRC-5细胞分为空白组、二氧化硅组、二氧化硅+人胎盘间充质干细胞组，空白组细胞不予任何处理，二氧化硅组MRC-5细胞给予100 μg/mL二氧化硅刺激48 h，二氧化硅+人胎盘间充质干细胞组MRC-5细胞先给予100 μg/mL二氧化硅刺激48 h后再与人胎盘间充质干细胞共培养24 h。免疫荧光染色检测各组细胞α-平滑肌肌动蛋白、胶原蛋白Ⅰ型蛋白的表达；Western blot检测各组细胞肺纤维化相关蛋白和TGF-β1/Smad 3信号通路相关蛋白表达。 结果与结论：①CCK-8结果显示，100 μg/mL 二氧化硅刺激MRC-5细胞48 h为最佳质量浓度与时间；②免疫荧光染色结果显示，与二氧化硅组相比，二氧化硅+人胎盘间充质干细胞组α-平滑肌肌动蛋白、胶原蛋白Ⅰ型蛋白表达明显降低；③Western blot结果显示，与二氧化硅组相比，二氧化硅+人胎盘间充质干细胞组α-平滑肌肌动蛋白、胶原蛋白Ⅰ型、N-钙黏蛋白、粘连蛋白、转化生长因子β1、p-Smad3、Smad3的蛋白表达均降低，E-钙黏蛋白表达升高，差异均有显著性意义(P < 0.05)；④结果说明，人胎盘间充质干细胞能够对二氧化硅诱导的肺纤维化有显著的治疗作用；人胎盘间充质干细胞可以通过调控 TGF-β1/Smad3信号通路抑制肺纤维化的发生。 https://orcid.org/0009-0000-1631-3456 (曹佳伟)；https://orcid.org/0000-0002-7991-8011 (李锋) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程 Select Atf7ip是骨形态发生蛋白2促小鼠胚胎成体细胞成骨分化的负调节因子 石 现, 韩淳青, 胡安然, 况舒韵, 冉依梦, 吴 郁 中国组织工程研究    2024, 28 (31): 4931-4936.   DOI: 10.12307/2024.716 摘要 （72）      PDF （1334KB）（12）    可视化    文题释义： 激活转录因子7相互作用蛋白(activating transcription factor 7 interacting protein，Atf7ip)：作为组蛋白甲基转移酶SETDB1的辅因子共同调节组蛋白甲基化，通过调控特定转录因子的表达从而调控成骨分化。 成骨分化：骨生成的关键步骤，即骨髓间充质干细胞经历成骨祖细胞、成骨前体细胞、成骨细胞并最终分化为成熟骨细胞的过程，其中涉及到多种信号通路、转录因子、生长因子等的改变。 背景：Atf7ip是否参与成骨分化的调控尚未明确，研究其对成骨分化的影响及具体机制具有重要意义。 目的：探讨Atf7ip对骨形态发生蛋白2促小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)成骨分化的影响。 方法：将体外培养的MC3T3-E1细胞分为正常组、干扰组(NC-siRNA组、Atf7ip-siRNA组)、高表达组(CMV-VC组、CMV-Atf7ip组)，转染处理24 h，然后使用200 ng/mL骨形态发生蛋白2分别处理0，12，24，48 h，qRT-PCR检测各组细胞中Atf7ip、碱性磷酸酶、骨钙素、Ⅰ型胶原α1的mRNA表达水平，Western blot检测成骨分化标记分子Sp7、Runx2的蛋白表达以及Atf7ip结合分子SETDB1、组蛋白H3、H3K9me3甲基化的表达，并进行碱性磷酸酶活性分析。 结果与结论：①随骨形态发生蛋白2处理时间增加，Atf7ip的蛋白及mRNA表达减少，而Sp7、Runx2的蛋白表达和骨钙素、碱性磷酸酶的mRNA表达显著增加(P < 0.05)；Atf7ip结合分子SETDB1的蛋白表达并无明显改变；②与NC-siRNA组比较，Atf7ip-siRNA组Sp7、Runx2的蛋白表达和骨钙素、Ⅰ型胶原α1的mRNA表达显著上调(P < 0.05)，碱性磷酸酶活性明显增强，且H3K9甲基化明显降低(P < 0.05)；③与CMV-VC组比较，CMV-Atf7ip组Sp7、Runx的蛋白表达和骨钙素、碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原α1的mRNA表达显著下调(P < 0.05)，碱性磷酸酶活性显著减弱，而CMV-Atf7ip组的H3K9甲基化蛋白较对照组明显上调(P < 0.05)；④结果表明，Atf7ip在骨形态发生蛋白2诱导MC3T3-E1成骨分化过程中表达降低，敲降Atf7ip后成骨分化显著增强，过表达Atf7ip后成骨分化显著减弱，即Atf7ip是骨形态发生蛋白2促MC3T3-E1细胞成骨分化的负调节因子。 https://orcid.org/0009-0002-4992-3140 (石现)  中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程 Select 贴壁法联合纤维连接蛋白差别黏附法分离纯化鉴定大鼠纤维环源干细胞 马 东, 陈祁青, 赵继荣, 黄军凯, 杨云云, 朱 宝, 赵 宁, 马 同 中国组织工程研究    2024, 28 (31): 4980-4986.   DOI: 10.12307/2023.771 摘要 （58）      PDF （1963KB）（6）    可视化    文题释义： 纤维连接蛋白：是一种细胞外基质蛋白，对细胞黏附、扩散、迁移、增殖和凋亡有着决定作用，可以促进细胞的增殖、附着、生长和分化及其与不同整合素受体结合。 纤维环：由含胶原纤维束的纤维软骨构成，位于髓核的四周，纤维环的外观结构为前侧及两侧较厚，而后侧较薄，与人体脊柱的生理弯曲形状相适应，同时纤维环的前部有强大的前纵韧带，宽而坚韧，后侧的后纵韧带较窄、较薄，这是腰椎间盘髓核多向后、向外侧突出的解剖学原因。纤维环的各层纤维彼此交错成菱形，牢固地附着在上下软骨终板和椎体骨缘上，这种特殊的纤维排列方式非常坚固且富有弹性，不仅使相邻椎体间存在一定限度内的活动范围，还可限制椎体之间的过度扭转和滑移活动，加强了椎体间连接的稳定性，同时还可耐受各个方向的压力，并能缓冲外力，吸收震荡。 背景：目前，细胞疗法治疗椎间盘退变多以骨髓间充质干细胞为主。但是，使用骨髓间充质干细胞作为纤维环再生的种子细胞存在修复部位形成异位骨化和畸胎瘤的危险。因此，寻找一种新的纤维环组织工程种子细胞对椎间盘退变的治疗将具有巨大的经济和社会意义。 目的：通过贴壁法联合纤维连接蛋白差别黏附筛选法分离纯化大鼠纤维环源干细胞，观察纯化效果及细胞的生物学特性。 方法：从SD大鼠椎间盘中获取纤维环组织，机械-酶消化法获取原代纤维环源干细胞，通过贴壁法联合纤维连接蛋白差别黏附法纯化纤维环源干细胞，在显微镜下观察细胞形态变化及增殖情况，应用细胞免疫荧光技术和qPCR技术检测干细胞表面标志物的表达，对筛选后的细胞进行多系诱导分化和特征性基因检测。 结果与结论：①纯化后细胞生长良好，形态多以角形和星形多突起细胞为主，具有较好的增殖能力；②细胞膜表面抗原CD73、CD90、CD105呈阳性表达，CD45、CD34呈阴性表达；③经特定诱导后，细胞可以成功分化为成骨细胞、成软骨细胞及成脂细胞；④成骨诱导后Collagen-Ⅰ、Runx2、成软骨诱导后Collagen-Ⅱ、Sox-9 和成脂诱导后PPAR-γ、LPL各特征性基因均在细胞中呈高表达，与诱导前比较，差异有显著性意义(P < 0.05)；⑤结果表明，贴壁法联合纤维连接蛋白差别黏附法能够有效筛选、纯化大鼠纤维环源干细胞，所得的细胞生物学性能良好，具有较好的增殖及多向分化潜能。 https://orcid.org/0000-0001-8607-9597(马东)  中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程