积雪草酸对骨质疏松模型大鼠生物力学特性与骨小梁面积及Runx2蛋白的影响

doi:10.12307/2022.895

中国组织工程研究 ›› 2023, Vol. 27 ›› Issue (2): 246-251.doi: 10.12307/2022.895

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积雪草酸对骨质疏松模型大鼠生物力学特性与骨小梁面积及Runx2蛋白的影响

陈晓驷1，谭小艳2，刘田丰2，韩登鹏2，魏波2，胡资兵2，吴少科2

广东医科大学附属医院，1国际医疗与特需医疗病区，2骨外科，广东省湛江市 524023

收稿日期:2021-01-13 接受日期:2021-12-17 出版日期:2023-01-18 发布日期:2022-06-18
通讯作者: 吴少科，硕士，主任医师，广东医科大学附属医院骨外科，广东省湛江市 524023
作者简介:陈晓驷，女，1984年生，湖北省武汉市人，汉族，2010年广东医科大学毕业，硕士，主要从事老年人骨质疏松预防与治疗研究。
基金资助:
广东省自然科学基金-粤东西北创新人才联合培养项目(2018A030307019)，项目负责人：吴少科

Effects of asiatic acid on biomechanical properties, trabecular area and Runx2 protein in osteoporotic rats

Chen Xiaosi1, Tan Xiaoyan2, Liu Tianfeng2, Han Dengpeng2, Wei Bo2, Hu Zibing2, Wu Shaoke2

1International and Special Medical Service Ward, 2Department of Orthopedics, Affiliated Hospital of Guangdong Medical University, Zhanjiang 524023, Guangdong Province, China

Received:2021-01-13 Accepted:2021-12-17 Online:2023-01-18 Published:2022-06-18
Contact: Wu Shaoke, Master, Chief physician, Department of Orthopedics, Affiliated Hospital of Guangdong Medical University, Zhanjiang 524023, Guangdong Province, China
About author:Chen Xiaosi, Master, International and Special Medical Service Ward, Affiliated Hospital of Guangdong Medical University, Zhanjiang 524023, Guangdong Province, China
Supported by:
Guangdong Provincial Natural Science Foundation-Yuedong Northwest Innovative Talents, No. 2018A030307019 (to WSK)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：
积雪草酸：是一种五环三萜酸，具有广泛的生物学作用。积雪草酸对多发性骨髓瘤细胞的增殖活性具有调节作用，可以防治肿瘤恶化，同时抑制骨基质细胞的脂肪分化。积雪草酸作为一种中药活性成分，药效温和持久、不良反应少，应用前景广阔。
RUNX2：这个基因是转录因子runx家族的一员，编码一个具有runt-dna结合域的核蛋白。该蛋白对成骨细胞分化和骨骼形态发育至关重要，并作为核酸和参与骨骼基因表达的调控因子的支架。

背景：研究证实，积雪草酸以浓度依赖的方式促进成骨细胞分化，抑制成骨细胞凋亡，但目前关于积雪草酸对骨生物力学、Runx2蛋白的具体作用机制尚不明确。
目的：探究积雪草酸对骨质疏松大鼠生物力学特征、骨小梁面积及Runx2蛋白的影响。
方法：选用SD大鼠48只，随机分为假手术组、模型组、积雪草酸低剂量组和高剂量组各12只。除假手术组外其余大鼠双侧去卵巢建立骨质疏松模型，假手术组和模型组大鼠术后3 mL/(kg·d)生理盐水灌胃；积雪草酸低剂量组60 mg/(kg·d)积雪草酸灌胃；积雪草酸高剂量组120 mg/(kg·d)积雪草酸灌胃，各组大鼠均干预60 d。RT-PCR、Western blot检测检测骨保护素、Runx2的mRNA和蛋白水平，比较各组大鼠股骨生物力学特征、骨小梁面积及血清炎性因子水平的差异性。
结果与结论：①大鼠最大载荷、刚度、总能量、弹性模量值假手术组高于模型组(P < 0.05)；与模型组相比，积雪草酸低、高剂量组上述指标均有所提高(P < 0.05)，且积雪草酸高剂量组高于积雪草酸低剂量组(P < 0.05)；②骨小梁面积假手术组高于模型组(P < 0.05)；模型组低于积雪草酸低、高剂量组(P < 0.05)；积雪草酸高剂量组高于低剂量组(P < 0.05)；③大鼠血清转化生长因子β1的水平模型组显著低于其他3组(P < 0.05)，积雪草酸高剂量组高于低剂量组(P < 0.05)；骨钙素、碱性磷酸酶、肿瘤坏死因子α水平模型组显著高于其他3组(P < 0.05)，积雪草酸高剂量组低于低剂量组(P < 0.05)；④骨保护素和Rnux2 的mRNA表达水平假手术组高于模型组和积雪草酸低剂量组(P < 0.05)；积雪草酸高剂量组高于假手术组(P < 0.05)；⑤骨保护素、Rnux2蛋白表达水平模型组低于其他3组，积雪草酸高剂量组高于低剂量组；⑥结果说明，积雪草酸可改善骨质疏松模型大鼠骨生物学特征，提高骨小梁面积、降低炎性水平，其作用机制可能与促进Runx2表达有关。

https://orcid.org/0000-0002-6672-2693 (陈晓驷)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

关键词: 积雪草酸, 骨质疏松大鼠, 生物力学特征, 骨小梁面积, Runx2

Abstract: BACKGROUND: Studies have confirmed that asiatic acid promotes osteoblast differentiation and inhibits osteoblast apoptosis in a concentration-dependent manner. However, the specific mechanism of asiatic acid on bone biomechanics and Runx2 protein is still unclear.
OBJECTIVE: To investigate the effects of asiatic acid on biomechanical characteristics, trabecular area and Runx2 protein expression in osteoporotic rats.
METHODS: Forty-eight Sprague-Dawley rats were selected and randomly divided into four groups (n=12 per group): sham operation group, model group, low-dose asiatic acid group, and high-dose asiatic acid group. Except for the sham operation group, rats in the other groups were bilaterally ovariectomized to establish osteoporosis models. The rats in the sham operation and model groups were given 3 mL/(kg·d) normal saline after surgery, while those in the low- and high-dose asiatic acid groups were given 60 and 120 mg/(kg·d) asiatic acid by gavage, respectively. Intervention in each group lasted for 60 days. RT-PCR and western blot were used to detect osteoprotegerin and Runx2 at mRNA and protein levels, respectively. Biomechanical characteristics, trabecular bone area and inflammatory factor levels of rats were compared among groups.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) The maximum load, stiffness, total energy and elastic modulus of rats in the sham operation group were higher than those in the model group (P < 0.05). Compared with the model group, both high- and low-dose asiatic acid could increase the above-mentioned indexes (P < 0.05). Moreover, the maximum load, stiffness, total energy and elastic modulus were higher in the high-dose asiatic acid group than the low-dose asiatic acid group (P < 0.05). (2) The trabecular bone area was higher in the sham operation group than the model group (P < 0.05). The trabecular bone area was lower in the model group than the low- and high-dose asiatic acid group (P < 0.05). The trabecular bone area was higher in the high-dose asiatic acid group than the low-dose asiatic acid group (P < 0.05). (3) The serum level of transforming growth factor-β1 was significantly lower in the model group than the other three groups (P < 0.05) and significantly higher in the high-dose asiatic acid group than the low-dose asiatic acid group (P < 0.05). The levels of osteocalcin, alkaline phosphatase and tumor necrosis factor-αwere significantly higher in the model group than the other three groups (P < 0.05) and significantly lower in the high-dose asiatic acid group than the low-dose group (P < 0.05). (4) The mRNA expression levels of osteoprotegerin and Rnux2 were higher in the sham operation group than the model and low-dose asiatic acid groups (P < 0.05), and the mRNA expression levels of osteoprotegerin and Rnux2 in the high-dose asiatic acid group were higher than those in the sham operation group (P < 0.05). (5) The protein expression levels of osteoprotegerin and Rnux2 were lower in the model group than the other three groups and higher in the high-dose asiatic acid group than the low-dose asiatic acid group. To conclude, asiatic acid can improve the biological characteristics of bone tissue, increase the area of trabecular bone, and reduce the level of inflammation in osteoporotic rats. Its mechanism of action may be related to the promotion of Runx2 expression.

Key words: asiatic acid, osteoporotic rat, biomechanical characteristics, trabecular area, Runx2

中图分类号:

陈晓驷, 谭小艳, 刘田丰, 韩登鹏, 魏波, 胡资兵, 吴少科. 积雪草酸对骨质疏松模型大鼠生物力学特性与骨小梁面积及Runx2蛋白的影响[J]. 中国组织工程研究, 2023, 27(2): 246-251.

Chen Xiaosi, Tan Xiaoyan, Liu Tianfeng, Han Dengpeng, Wei Bo, Hu Zibing, Wu Shaoke. Effects of asiatic acid on biomechanical properties, trabecular area and Runx2 protein in osteoporotic rats[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2023, 27(2): 246-251.

图/表（结果） 10

2.1 实验动物数量分析实验选用SD大鼠48只，分为4组，实验过程无脱失，全部进入结果分析。
2.2 各组大鼠生物力学特征指标的比较假手术组大鼠股骨组织中最大载荷、刚度、总能量、弹性模量值高于模型组(P < 0.05)；与模型组相比，积雪草酸低剂量组、高剂量组大鼠股骨组织中最大载荷、刚度、总能量、弹性模量值均有所提高(P < 0.05)，且积雪草酸高剂量组大鼠股骨组织中生物力学指标高于积雪草酸低剂量组(P < 0.05)，见表2，图1。

2.3 各组大鼠股骨骨小梁面积比较假手术组大鼠股骨组织中骨小梁面积(2.41±0.22) mm2较模型组(0.43±0.03) mm2高(t=30.890，P < 0.001)；模型组大鼠股骨组织中骨小梁面积较积雪草酸低剂量组(1.07±0.08) mm2、积雪草酸高剂量组(1.92±0.18) mm2低(t=25.950，28.280，均P < 0.001)；积雪草酸高剂量组大鼠股骨组织中骨小梁面积较积雪草酸低剂量组高(t=14.950，P < 0.001)，见图2，3。

2.4 各组大鼠转化生长因子β1、碱性磷酸酶、骨钙素及肿瘤坏死因子α水平假手术组大鼠血清中转化生长因子β1的水平较模型组高，骨钙素、碱性磷酸酶、肿瘤坏死因子α水平较模型组低(P < 0.05)；模型组大鼠血清中转化生长因子β1的水平较积雪草酸各组低，骨钙素、碱性磷酸酶、肿瘤坏死因子α水平较积雪草酸低剂量各组高(P < 0.05)；积雪草酸高剂量组大鼠血清中转化生长因子β1的水平较积雪草酸低剂量组高，骨钙素、碱性磷酸酶、肿瘤坏死因子α水平较积雪草酸低剂量组低(P < 0.05)，见表3，图4。

2.5 各组大鼠股骨骨保护素和Runx2蛋白水平假手术组大鼠股骨组织中骨保护素、Runx2蛋白水平高于模型组(P < 0.05)；与模型组相比，积雪草酸各组大鼠股骨组织中骨保护素、Runx2蛋白水平均有所提高(P < 0.05)，积雪草酸高剂量组大鼠股骨组织中骨保护素、Runx2蛋白水平高于积雪草酸低剂量组(P < 0.05)，见表4，图5。

2.6 各组大鼠股骨骨保护素和Runx2 mRNA水平假手术组大鼠股骨组织中骨保护素和Runx2 mRNA水平较模型组、积雪草酸低剂量组高(P < 0.05)；模型组大鼠股骨组织中骨保护素mRNA、Runx2 mRNA水平低于其余各组(P < 0.05)；积雪草酸高剂量组大鼠股骨组织中骨保护素mRNA、Runx2 mRNA水平高于假手术组(P < 0.05)，由此可看出骨保护素mRNA和Runx2 mRNA水平在骨质疏松大鼠模型中为低表达，经过治疗后水平升高，见表5，图6。

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引言

骨质疏松症主要表现为成骨细胞减少、破骨细胞增多、局部丢失大量骨量、骨脆性增加，是一种代谢疾病，且骨质疏松患者极易产生骨折[1]。骨质疏松症的发病率随着人口老龄化逐年递增，使得该病的致残人数持续增长，引起了医学界学者的关注。骨质疏松症女性发病率高于男性，女性绝经后骨质疏松是由于雌激素下降及卵巢功能衰减使骨的载荷量等减少所致[2]。健康机体中，骨形成与骨吸收处于平衡状态，当平衡被打破，会导致骨量与骨密度减少，而Runx2可促进成骨细胞分化，在骨发育与代谢中占有重要地位[3]。老年人绝经后因其雌激素分泌减少，导致骨量的大量丢失，同时脊柱、髋骨、手腕等部位较易发生骨折，且难以愈合，给家庭及社会带来沉重的经济负担，因此寻找一种可以有效防治绝经后骨质疏松症的药物已成为当务之急。有研究报道，积雪草酸对多发性骨髓瘤细胞的增殖活性具有调节作用，可以防治肿瘤恶化，同时抑制骨基质细胞的脂肪分化，积雪草酸是一种五环三萜酸，具有广泛的生物学作用。近年来随着对积雪草酸药理活性的研究，发现积雪草酸还具有治疗痴呆症、肿瘤等老年性疾病的作用[4]。另有研究提出，积雪草苷可通过核因子κB、钙/钙调素依赖性激酶和MAPK三条信号转导通路抑制破骨细胞发挥作用所需的关键蛋白——NFATc1的表达，并最终抑制破骨细胞生成[5]。且目前已有研究证实，积雪草酸以浓度依赖的方式促进成骨细胞分化，抑制成骨细胞凋亡[6]。但目前关于积雪草酸对骨生物力学、Runx2蛋白的具体作用机制尚不明确。因此，该课题通过建立去卵巢大鼠骨质疏松动物模型，探讨积雪草酸对骨质疏松大鼠生物力学特征、骨小梁面积及Runx2蛋白的影响。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

材料方法

1.1 设计随机对照动物实验，组间比较进行配对t检验和方差分析，SNK法进行事后检验。
1.2 时间及地点实验于2019年5月至2020年4月在广东医科大学附属医院实验室完成。
1.3 材料
1.3.1 实验用主要试剂积雪草酸中药材来自南京标科生物公司；二甲基亚砜来自山东佳烨生物公司；戊巴比妥钠来自湖北鸿运隆生物公司；胰蛋白酶来自江苏采薇生物公司；光学显微镜来自济南欧莱博科学仪器公司；骨保护素、Runx2一抗来自上海恒远生物科技公司；辣根过氧化物酶二抗来自上海李记生物科技有限公司；转化生长因子β1ELISA试剂盒上海润裕生物科技有限公司；碱性磷酸酶ELISA试剂盒来自来自上海恪敏生物科技有限公司；骨钙素ELISA试剂盒来自上海心语生物科技公司；肿瘤坏死因子α检测试剂盒来自上海拜力生物科技有限公司。
1.3.2 药物制备根据吴少科等[7]的研究制备积雪草酸工作液：积雪草酸中药材 500 mg，二甲基亚砜(浓度低于0.1%)溶解，生理盐水稀释、混匀，定容至100 mL，配成质量浓度为5 g/L的积雪草酸工作液，常温避光保存。
1.3.3 实验动物健康雌性SPF级SD大鼠48只购自广州吉尼欧生物科技有限公司，许可证号：SYXK(粤)2019-0514，鼠龄6-8周，体质量200-300 g。大鼠常规饲养，自由饮食饮水，饲养温度在23-24 ℃，相对湿度在40%-50%，适应饲养1周后进行实验。实验已通过广东医科大学附属医院伦理审查会批准(批号：Y2019-004-18)。
1.4 实验方法
1.4.1 动物分组雌性SD大鼠48只随机分为4组，每组12只。其中假手术组切除两侧卵巢附近脂肪组织，术后给予3 mL/(kg·d)生理盐水灌胃；其余大鼠双侧去卵巢建立骨质疏松模型：术后模型组给予3 mL/(kg·d)生理盐水灌胃，积雪草酸低剂量组给予60 mg/(kg·d)积雪草酸灌胃，积雪草酸高剂量组给予120 mg/(kg·d)积雪草酸灌胃，各组大鼠均干预60 d。
1.4.2 模型建立将所有大鼠麻醉后，与两侧肋下剃毛，消除后，在肋下2 cm脊柱旁1.5 cm作纵向开口，腹腔内找到大鼠卵巢，假手术组摘取卵巢周围脂肪，保留卵巢，然后缝合皮肤，其他3组切除双侧卵巢，将周围组织塞入腹腔并缝合皮肤，进行局部消毒，7 d后拆线，后进行常规饲料喂养，分笼自由活动。饲养30 d后使用骨密度检测仪检测各组大鼠胫骨骨密度，以骨密度低于2.5 g/cm3视为建模成功。

1.4.3 检测各组大鼠生物力学特征指标的表达实验结束前 12 h 禁食，戊巴比妥钠麻醉，取右侧股骨置于生理盐水润湿的纱布中，并用锡纸包裹防止水分蒸发，用于指标的检测。使用骨科生物力学测试仪(上海衡翼精密仪器有限公司，型号：MTS-858)进行三点弯曲试验，取股骨样品，置于水平支架上，载荷施加速度为2 mm/min直至骨折发生，测试结束后于断裂处用游标卡尺测量股骨外侧长、短轴以及横截面皮质骨的均值，求弹性模量(MOE)，Origin9软件求最大载荷、刚度及吸收的总能量。
1.4.4 RT-PCR检测骨保护素、Runx2水平取各组大鼠股骨组织，胰酶消化后提取细胞悬液，冲洗，采用TRIzol试剂提取RNA，反转录cDNA后进行PCR扩增，以GAPDH为内参，扩增条件为95 ℃2 min、95 ℃30 s、60 ℃30 s，共40个循环，计算方法用2-ΔΔCt法进行分析，引物序列见表1。

1.4.5 检测各组大鼠骨小梁面积实验结束后，无菌条件下取出左侧股骨，多聚甲醛固定、脱钙、脱水、透明、浸渍、包埋、贴片后行常规苏木精-伊红染色。用SONY摄像头采集苏木精-伊红染色，切片图像并输入图像分析系统。在光学显微镜下，每张切片随机选取5个视野，每个视野选定5个部位用鼠标分割法测量骨小梁面积。
1.4.6 检测各组大鼠转化生长因子β1、碱性磷酸酶、骨钙素、肿瘤坏死因子α水平实验结束后，麻醉处死各组大鼠后，经股动脉取血，离心10 min，1 325 r/min，分离血清，取上清液，ELISA法检测转化生长因子β1、碱性磷酸酶、骨钙素水平，放射免疫法检测肿瘤坏死因子α水平，均按照说明书进行操作。
1.4.7 Western blot检测骨保护素、Runx2水平取各组大鼠股骨组织，裂解液裂解并提取蛋白，并对蛋白的浓度进行测量，分装后保存在-20℃的环境中。将提取出的蛋白溶液和缓冲溶液进行混均，然后将其煮沸、变性。把电泳后的50 μm蛋白样品转移到PVDF膜上，加脱脂奶粉封闭1 h。加入骨保护素、Runx2一抗后(1∶500)PBS漂洗3次，每次间隔10 min，最后加入辣根过氧化物酶二抗(1∶2 000)对溶液稀释，常温封闭1 h。取出PVDF膜，上述方法漂洗，DAB显色后照相。
1.5 主要观察指标 ①大鼠生物力学特征指标；②股骨骨小梁面积；③血清转化生长因子β1、碱性磷酸酶、骨钙素、肿瘤坏死因子α水平；④股骨骨保护素、Runx2 mRNA和蛋白水平。
1.6 统计学分析采用SPSS 23.0软件进行统计分析，组间比较进行配对t检验和方差分析，描述采用x±s；事后检验采用SNK法进行组间两两比较；P < 0.05表示差异有显著性意义。文章统计学方法已通过广东医科大学附属医院生物统计学专家审核。

讨论

在中国骨质疏松症多发于老年人群，且女性发病人数较多，主要是由于绝经后雌激素减少使骨量减少所致[8]；在国外骨质疏松已达到了流行的比例[9]。此次研究运用积雪草酸针对骨质疏松症进行治疗，对骨质疏松症模型大鼠骨生物力学特征、Runx2蛋白以及骨小梁面积进行了分析。

此次研究发现，模型组大鼠骨生物力学特征各指标下降，在经过积雪草酸治疗后积雪草酸低剂量组与积雪草酸高剂量组骨生物力学特征各指标水平上升，以积雪草酸高剂量组上升更为显著，由此可看出，积雪草酸提高了大鼠最大载荷和刚度。最大载荷和刚度的水平是决定骨质疏松发生与否的重要条件，骨质疏松是骨吸收与骨形成失衡、骨量下降所致[10]。骨微观结构的改变可影响骨生物力学的特性[11-12]。积雪草酸是积雪草的提取物，属于五环三萜酸类，具有较强的抗肿瘤作用，且其还具有抗炎、抗菌、清热利湿、解毒消肿等作用，可通过减少炎症等发挥骨保护作用[13-14]。研究提示积雪草通过提高抗氧化的能力以及抑制骨吸收、促进骨形成、影响骨微观结构，达到骨保护的作用[15-16]。提示，积雪草酸可能是通过降低炎性反应，从而增加大鼠骨的最大载荷以及刚度，影响骨微结构，进而起到治疗骨质疏松作用。

此次研究发现，大鼠Runx2、骨保护素表达及骨小梁面积在模型组的表达下降，在经过积雪草酸治疗后Runx2、骨保护素表达及骨小梁面积表达上升，且积雪草酸高剂量组上升效果更为明显，说明积雪草酸可提高骨保护素水平及Runx2转录能力。骨保护素可通过与骨保护素诱导受体结合，抑制破骨细胞的形成[17]。Runx2可促进成骨细胞分化，Runx2表达的减少会致骨发育异常，其过表达可促进成骨细胞的产生[18-19]。骨质疏松症在发病时破骨细胞与成骨细胞增长失衡，有研究表明积雪草酸在抗人成骨细胞凋亡方面具有重要作用，可减缓骨质疏松症[20]。王剑等[21]研究提示，Runx2 水平下降可能是骨质疏松发病的原因之一，在经过治疗后Runx2水平上升，促进成骨细胞增殖，提高骨小梁面积，改善骨质疏松症状。上述结果提示，积雪草酸具有提高Runx2水平的作用，从而提高骨小梁面积，对骨质疏松症起到治疗作用。

此次研究显示，大鼠骨钙素、碱性磷酸酶、肿瘤坏死因子α的水平在模型组中升高，转化生长因子β1的水平在模型组中下降，经过积雪草酸治疗后骨钙素、碱性磷酸酶、肿瘤坏死因子α的水平下降，转化生长因子β1的水平上升，说明积雪草酸可降低骨质疏松大鼠中的骨钙素从而减少钙化，降低肿瘤坏死因子及碱性磷酸酶的表达，提高转化生长因子β1的转录功能，对骨质疏松起到治疗的效果。骨钙素来自于成骨细胞，主要是维持骨代谢，女性绝经后骨钙素水平上调可引起骨质疏松症[22-23]。碱性磷酸酶的水平与骨钙化联系密切，是骨形成的重要酶，成骨细胞分泌碱性磷酸酶并释放入血，当肝和胎盘等功能正常时，血清碱性磷酸酶可作为骨形成的有效特异性指标[24-25]。一般认为碱性磷酸酶的升高是伴随着骨吸收亢进而出现的代偿性骨形成增加引起的[26-27]。肿瘤坏死因子α可促进破骨细胞繁殖，抑制碱性磷酸酶产生，减少骨钙化的形成[28]。转化生长因子β1主要存在于骨内，可促细胞繁殖，参与骨与软骨的形成[29]。叶文静等[30]研究结果提示，积雪草治疗肺纤维化效果较好，其作用机制是通过下调肿瘤坏死因子α、转化生长因子β1水平，减少炎症产生而完成的。相关研究显示，积雪草酸可以通过调节碱性磷酸酶、骨钙素，降低成骨细胞的凋亡来防治去卵巢大鼠骨质疏松症的发生[7]。上述结论提示，积雪草酸可调控炎症水平以及碱性磷酸酶、骨钙素的表达来改善骨质疏松症。

综上所述，积雪草酸可改善大鼠骨生物学特征，提高骨小梁面积、降低炎性水平，其作用机制可能与促进Runx2表达有关。该研究存在单中心研究、样本量少等不足之处，研究内容需进一步完善，在今后的研究中应通过多元化实验方案为临床骨质疏松治疗提供有力的依据。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

积雪草酸对骨质疏松模型大鼠生物力学特性与骨小梁面积及Runx2蛋白的影响

Effects of asiatic acid on biomechanical properties, trabecular area and Runx2 protein in osteoporotic rats

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