MPC₃₀-DEA₇₀/TGF-β1AS-ODN复合物的制备及总电性的表征：用去离子水溶解转化生长因子β1 AS-ODN，使其终浓度为1 g/L，-20 ℃保存。称取10 mg MPC₃₀-DEA₇₀加到10 mL 0.01 mol/L的NaH₂PO₄/Na₂HPO₄缓冲液(pH=6.8)中(终浓度为1 g/L)，于磁力搅拌器上搅拌过夜至完全溶解后，调pH值至6.8，并用孔径0.22 μm的滤器过滤，置4 ℃保存。分别取1.0 μL AS-ODN加入到0，0.5，1，3，5，10, 15和20 μL的MPC₃₀-DEA₇₀溶液中形成N/P比值为0∶1，0.5∶1，1∶1，3∶1，5∶1，10∶1，15∶1和     20∶1的MPC₃₀-DEA₇₀/AS-ODN复合物。室温下平衡    30 min，在不含溴化乙锭(EB)的2%DNA琼脂糖凝胶，0.5×TBE，100 V电泳15 min，电泳结束后在电泳仪紫外灯下观察并拍照记录。

大鼠乳鼠心肌细胞的分离和培养及免疫荧光鉴定：新生SD大鼠，碘伏消毒后固定开胸取心脏，剪开心脏放入冰浴PBS中洗涤，将心肌组织剪成糊状，使用0.08%的Ⅰ型胶原酶和0.08%的胰酶37 ℃条件下进行消化。第1次消化   5 min其上清液弃去，以后每次消化3-5 min后将细胞悬液收集到盛有2倍体积含体积分数20%胎牛血清的DMEM培养基的无菌离心管中，细胞悬液离心1 000 r/min×5 min，弃上清，用含体积分数20%胎牛血清的DMEM培养液重悬细胞，按照每孔1×10⁴个接种于放置有直径为10 mm圆形载玻片的24孔板，体积分数5%CO₂，37 ℃条件下培养1 h后差速贴壁至细胞培养板中培养，加Brdu浓度至       0.1 mol/L，放入培养箱中常规培养，48 h后第1次更换培养液，以后每两至三天更换培养基，5 d后弃培养基，利用肌钙蛋白I抗体行免疫荧光鉴定。

MTT法检测MPC₃₀-DEA₇₀与心肌细胞的相容性：原代培养心肌细胞按照每孔1×10³个接种于96孔板(Costar，USA)，待心肌细胞贴壁后生长至约85%融合时弃培养基，PBS冲洗2次，每孔加体积分数20%胎牛血清的DMEM培养基，再分别加入0，1，3，5，10，15，20，40，60，80，100 μL MPC₃₀-DEA₇₀，终体积200 μL，每组各设5个复孔，同时设调零组(DMEM培养液、MTT、DMSO)，对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、DMSO)，继续培养24 h后弃培养基，加20 μL(5 g/L)MTT，37 ℃，体积分数5%CO₂孵育4 h，弃上清，每孔加100 μL DMSO，于摇床上避光低速震荡10 min使结晶物充分溶解，在酶联免疫检测仪A_{570 nm}(630 nm校准)测量各孔的吸光值(A)，按下式计算抑制率：细胞活力抑制率(%)=[(对照组A_{570 nm}-实验组A_{570 nm})/对照组A_{570 nm}]×100%，绘制浓度效应曲线。

共聚焦激光扫描显微镜观察MPC₃₀-DEA₇₀/TGF-β1 AS-ODN在细胞内的分布、定位及转染效率：原代心肌细胞按照每孔1×10⁴个接种于放置有直径为10 mm圆形载玻片24孔板中，待心肌细胞贴壁后生长至约85%融合时弃培养基，PBS冲洗2次，每孔加体积分数20%胎牛血清的DMEM培养基再分别加入N/P比值为0∶1，1∶1，3∶1，5∶1，10∶1，15∶1的MPC₃₀-DEA₇₀/TGF-β1 AS-ODN复合物，终体积1 mL，每组设2个重复，于37 ℃，体积分数5%CO₂培养24 h弃培养基，PBS洗2次，每孔加40 g/L多聚甲醛 200 μL 固定10 min后弃多聚甲醛，PBS洗3次，用镊子将细胞爬片按顺序放到吸水纸上，用Prolong Antifade试剂封固，待封固液干燥后于共聚焦显微镜下观察并拍照。

流式细胞仪检测MPC₃₀-DEA₇₀/TGF-β1AS-ODN (FAM标记)的细胞转染效率和荧光强度：原代心肌细胞按照每孔2×10⁴个接种于12孔板，转染24 h后弃培养基，PBS洗3遍，每孔加200 μL 0.25%的胰酶消化1 min，加入含胎牛血清的DMEM培养基中，1 000 r/min×5 min，弃上清，用PBS重悬细胞再离心洗涤，弃上清，用200 μL PBS重悬细胞放入流式管，流式细胞仪检测，分析转染效率和荧光强度。

RT-PCR检测心肌细胞转化生长因子β1 mRNA的表达：原代心肌细胞按照每孔2×10⁶个细胞接种于6孔板培养，转染48 h后按照Trizol试剂盒说明书提取心肌细胞总RNA，采用核酸蛋白测定仪检测其浓度和纯度后，取合乎试验要求的1 μg总RNA，参照RT-PCR试剂盒说明书进行反转录反应，以GAPDH作为内参照。转化生长因子β1引物序列(上海英骏生物公司合成)：上游引物5’-GAA GCC ATC CGT GGC CAG AT-3’，下游引物’-CCA GTG ACG TCA AAA GAC AG-3’，产物461 bp。GAPDH引物序列：上游引物5’-TCC GCC CCT TCC GCT GAT G-3’；下游引物5’-CAC GGA AGG CCA TGC CAG TGA-3’，产物340 bp。PCR反应条件：转化生长因子β1为：94 ℃变性30 s， 62.5 ℃退火、72 ℃延伸各1 min，进行30个循环，首次循环前先95 ℃预变性3 min，结束前72 ℃延伸5 min。GAPDH为：95 ℃变性45 s，54 ℃退火45 s，72 ℃延伸1 min，进行35个循环，首次循环前94 ℃预变性2 min，结束前72 ℃延伸2 min。取RT-PCR反应产物5 μL于2%琼脂糖凝胶中电泳，用凝胶成像扫描及分析系统，测定目的基因与内参基因的积分吸光度比值。

Weston-blot检测转化生长因子β1蛋白的表达：原代心肌细胞按照每孔2×10⁶个细胞接种于6孔板，转染48 h后提取蛋白，严格按照BCA试剂盒定量测定蛋白浓度后，取   50 μg总蛋白上样，进行SDS-PAGE凝胶电泳，转至NC膜上，一抗封闭4 ℃过夜，二抗37 ℃孵育1 h显色。Image J图像分析仪进行半定量分析。