青蒿琥酯对大鼠小肠移植急性排斥反应的作用

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2014.05.018

中国组织工程研究 ›› 2014, Vol. 18 ›› Issue (5): 761-766.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2014.05.018

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青蒿琥酯对大鼠小肠移植急性排斥反应的作用

于小迪¹，王为忠²，焦婕英³，郑建勇²，赵正维²

¹解放军第323医院，陕西省西安市 710054；²解放军第四军医大学西京医院，陕西省西安市 710033；³兵器工业521医院，陕西省西安市 710065

修回日期:2013-11-14 出版日期:2014-01-29 发布日期:2014-01-29
通讯作者: 王为忠，博士生导师，教授，主任医师，解放军第四军医大学西京医院，陕西省西安市 710033
作者简介:于小迪，男，1978年生，陕西省蓝田县人，汉族，2007年解放军第四军医大学毕业，硕士，主治医师，主要从事小肠移植基础研究。

Effect of artesunate on acute rejection after small intestine transplantation in rats

Yu Xiao-di¹, Wang Wei-zhong², Jiao Jie-ying³, Zheng Jian-yong², Zhao Zheng-wei²

¹The 323rd Hospital of PLA, Xi’an 710054, Shaanxi Province, China; ²Xijing Hospital, the Fourth Military Medical University of PLA, Xi’an 710033, Shaanxi Province, China; ³Weapon Industry 521 Hospital, Xi’an 710065, Shaanxi Province, China

Revised:2013-11-14 Online:2014-01-29 Published:2014-01-29
Contact: Wang Wei-zhong, Doctoral supervisor, Professor, Chief physician, Xijing Hospital, the Fourth Military Medical University of PLA, Xi’an 710033, Shaanxi Province, China
About author:Yu Xiao-di, Master, Attending physician, the 323rd Hospital of PLA, Xi’an 710054, Shaanxi Province, China

摘要/Abstract

摘要：

背景：随着强效、特异免疫抑制剂的问世，小肠移植的成活率有了一定程度的提高。但这些免疫抑制剂的不良反应及昂贵的治疗费用，让很多患者难以承受。所以，选择有免疫抑制作用的中药在临床上应用是很有意义的。青蒿琥酯有免疫抑制作用，可以减轻小肠移植急性排斥反应，提高小肠移植的成功率。

目的：观察青蒿琥酯在大鼠小肠移植急性排斥反应中的作用及其机制。

方法：选用封闭群SD大鼠和Wistar大鼠建立同种异基因小肠移植模型，随机分为3组：①同基因移植组(SD→SD)。②异基因移植组(Wistar→SD)。③异基因移植+青蒿琥酯治疗组(Wistar→SD+青蒿琥酯60 mg/(kg•d)，腹腔注射)。

结果与结论：同基因移植组大鼠存活均超过10 d，并于第10天全部处死。异基因移植组大鼠平均存活(6.73±0.58) d，治疗组大鼠平均存活(8.50±0.74) d，两组间比较差异有显著性意义(P < 0.01)。病理组织学检查显示同基因移植组标本无明显排斥征象，异基因移植组标本在术后第3，5，7天分别符合轻、中、重度排斥反应，治疗组部分标本有轻度排斥表现，但出现较晚、程度较轻。ELISA法检测显示异基因移植组血清白细胞介素2、γ-干扰素表达水平在术后均显著高于其他2组(P < 0.01)，治疗组血清白细胞介素2表达水平与同基因移植组比较亦有升高，但差异无显著性意义(P > 0.05)，治疗组血清γ-干扰素表达水平高于同基因移植组(P < 0.05)。结果可见青蒿琥酯对大鼠小肠移植急性排斥反应有抑制作用，其作用机制可能与抑制白细胞介素2、γ-干扰素等细胞因子的分泌表达有关。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程

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关键词: 实验动物, 组织构建, 小肠移植, 移植排斥反应, 青蒿琥酯, 免疫抑制, 白细胞介素2, γ-干扰素, SD大鼠, Wistar大鼠, 同种异基因

Abstract:

BACKGROUND: As the potent, specific immunosuppressants emerge, the survival rate after intestinal transplantation is improved to some extent. However, the adverse effects of immunosuppressants and expensive treatment costs are not tolerable for many patients. Therefore, it is clinically meaningful to choose traditional Chinese medicine which presents immunosuppressive effects. Artesunate has immune suppression effect, reduces acute rejection following small intestine transplantation, and improves the success rate of small intestine transplantation.

OBJECTIVE: To observe the effect and action mechanism of artesunate in acute rejection after small intestine transplantation in rats.

METHODS: Allogeneic small intestine transplantation models were established in the closed group of Sprague-Dawley rats and Wistar rats, and then were randomly divided into three groups, syngenic transplantation group (SD→SD), allogeneic transplantation group (Wistar→SD), and artesunate treatment group (Wistar→SD + artesunate 60 mg/kg per day, intraperitoneal injection).

RESULTS AND CONCLUSION: Rats in syngenic transplantation group survived for more than 10 days and they were all killed on day 10. The average survival of rats in allogeneic transplantation group and artesunate treatment group was respectively (6.73±0.58) days and (8.50±0.74) days, with significant differences between the two groups (P < 0.01). Histopathological examination showed that, there was no apparent rejection in syngenic transplantation group specimens, but mild, moderate and severe rejections in allogeneic transplantation group ondays 3, 5, 7. In treatment group, some specimens had mild rejection, but appeared relatively late to a low degree. Enzyme linked immunosorbent assay results revealed that, serum interleukin-2 and interferon-gamma expression levels in allogeneic transplantation group were significantly higher than other two groups after surgery (P < 0.01), serum interleukin-2 gene expression level in treatment group was also higher than syngenic transplantation group, but there was no significant difference (P > 0.05), serum interferon-gamma expression level in treatment group was higher than syngenic transplantation group (P < 0.05). Artesunate can inhibit acute rejection after rat small intestine transplantation, and its mechanism may be related to inhibition effect on the secretion and expression of interleukin-2, interferon-gamma and other cytokines.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程

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Key words: organ transplantation, intestine, small, graft rejection, artemisia annua, interleukin-2, interferon-gamma

中图分类号:

R318

于小迪，王为忠，焦婕英，郑建勇，赵正维. 青蒿琥酯对大鼠小肠移植急性排斥反应的作用[J]. 中国组织工程研究, 2014, 18(5): 761-766.

Yu Xiao-di, Wang Wei-zhong, Jiao Jie-ying, Zheng Jian-yong, Zhao Zheng-wei. Effect of artesunate on acute rejection after small intestine transplantation in rats[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2014, 18(5): 761-766.

图/表（结果） 2

2.1 移植大鼠一般情况 各组受体动物于术后一两个小时苏醒，1 d后给予正常饮食。同基因组恢复较好，精神佳，活动自如，腹壁造口小肠黏膜红润，分泌物黏稠无异味。异基因组大鼠术后精神差，进食、活动减少，毛色干枯，体质量减轻，腹腔造口颜色灰白无光泽，分泌物稀薄。治疗组术后表现与同基因组相似，恢复较好，活动自如，腹壁造口黏膜红润，分泌物黏稠，个别大鼠五六天后出现进。食、活动减少反应差的表现。72 h内受体死亡者，不在统计范围中。

各组大鼠术后存活情况如下：异基因组平均存活(6.73±0.58) d，治疗组(8.50±0.74) d，两组间差异有显著性意义；同基因组存活均超过10 d，于第10天处死。

2.2 移植小肠病理组织学检查

同基因组：小肠黏膜上皮完整，无明显炎症反应(图1A)。

异基因组：术后第3天见肠黏膜绒毛数目减少，组织间可见炎性细胞浸润。第5，7天可见肠黏膜上皮有变性、脱落，固有层水肿明显，固有腺体明显减少、排列紊乱，隐窝变浅，间质大量炎性细胞浸润，重者可见溃疡形成(图1B)。

治疗组：术后第3天黏膜上皮完整，绒毛结构正常，无明显排斥反应表现；术后第5天可见肠黏膜绒毛结构基本正常，组织间隙可见少量淋巴细胞和粒细胞浸润；术后第7天可见肠黏膜绒毛有断裂，增粗，变短，但结构仍清晰，间质纤维组织增生，少量炎性细胞浸润(图1C)。

根据病理组织学检查显示：同基因组大鼠无明显移植排斥征象。异基因组大鼠术后第3，5，7天分别符合轻、中、重度排斥反应标准。青蒿琥酯治疗组第7天移植肠标本检查有排斥反应出现，属轻度排斥反应。

2.3 小肠移植后第3，5，7天各组血清白细胞介素2和γ-干扰素表达变化 见表1。异基因组血清白细胞介素2、γ-干扰素的表达在术后第3，5，7天均显著高于其他2组(P < 0.01)，白细胞介素2升高以第3天明显，第5天达到高峰，第7天即有所下降，γ-干扰素升高较为缓慢，第7天达到高峰。同基因组、治疗组与异基因组比较，血清白细胞介素2水平较低，均无高峰出现；治疗组与同基因组相比白细胞介素2水平偏高，但差异无显著意义(P > 0.05)；治疗组血清γ-干扰素水平高于同基因组(P < 0.05)，低于异基因组(P < 0.05)。

参考文献

[1] 伍晓汀,黎介寿.改进技术的大鼠全小肠移植术[J].中华显微外科杂志,1999,22(1):48-50.

[2] 董光龙,李开宗,王为忠,等.双Cuff双造口大鼠异位小肠移植模型的建立[J].第四军医大学学报,2003,24(2):189.

[3] Rosemurgy AS, Schraut WH. Small bowel allografts. Sequence of histologic changes in acute and chronic rejection. Am J Surg. 1986;151(4):470-475.

[4] Schmid T, Oberhuber G, Körözsi G,et al. Histologic pattern of small bowel allograft rejection in the rat. Mucosal biopsies do not provide sufficient information. Gastroenterology. 1989; 96(6):1529-1532.

[5] 吴波,周晓军.小肠移植后急性排斥反应的病理诊断标准[J].肠外与肠内营养,2005,12(6):378-381.

[6] 夏穗生.临床移植医学[M].杭州:浙江科学技术出版社,1999: 438-442.

[7] 张汝芝,高玉祥.青蒿琥酯对Ⅰ~Ⅳ型变态反应的影响[J].中华皮肤科杂志,1998,31(6):368-372.

[8] 杨启超.青蒿素及其衍生物青蒿酯钠与青蒿醚的药理研究[J].广西医学,1984,6(6):292-294.

[9] 徐继红,章元沛.二氢青蒿素与青蒿琥酯的抗孕作用[J].药学学报,1996,31(9):657-659.

[10] Greenfeld K, Avraham R, Benish M,et al. Immune suppression while awaiting surgery and following it: dissociations between plasma cytokine levels, their induced production, and NK cell cytotoxicity. Brain Behav Immun. 2007;21(4):503-513.

[11] 封光华,张喜平,朱炜,等.小肠移植患者可溶性白介素2受体的早期变化(附一例报道)[J].胃肠病学和肝病学杂志,2006,15(1): 98-99.

[12] Williams JG, Jurkovich GJ, Maier RV. Interferon-gamma: a key immunoregulatory lymphokine. J Surg Res. 1993;54(1): 79-93.

[13] 育柳英,林培英,张丹,等.青蒿琥酯对小鼠肝癌及S180实体瘤的抑制作用[J].实用癌症杂志,2001,16(3):245-247.

[14] 林培英,冯昭明,潘竟锵.青蒿琥酯对小鼠免疫功能的影响[J].中国药理学报,1995,16(5):441-443.

[15] Khan NU, Fildes JE, Al-Aloul M, et al. Increased serum concentrations of Th1 chemokines are associated with acute rejection following heart transplantation. The Journal of Heart and Lung Transplantation.2007;26(2):194.

[16] Middleton SJ, Jamieson NV. The current status of small bowel transplantation in the UK and internationally. Gut. 2005;54(11): 1650-1657.

[17] Matsuura T, Taguchi T, Hayashida M,et al. Relationship between real-time monitoring of the graft motility and mucosal histology in swine intestinal transplantation.Transplant Proc. 2006;38(6):1851-1852.

[18] Tocci MJ, Matkovich DA, Collier KA, et al. The immunosuppressant FK506 selectively inhibits expression of early T cell activation genes. J Immunol. 1989; 143: 718-726.

[19] Greenfeld K, Avraham R, Benish M, et al. Immune suppression while awaiting surgery and following it: Dissociations between plasma cytokine levels, their induced production, and NK cell cytotoxicity . Brain Behav Immun. 2007;21(4):503-513.

[20] 金伯泉.细胞和分子免疫学[M].2版.北京:科学出版社,2001: 396-411.

[21] Ziarkiewicz-Wróblewska B, Górnicka B, O?dakowska U,et al. Plasmacytic hyperplasia--the early form of posttransplant lymphoproliferative disorder--with atypical morphology and clinical course in patient after liver transplantation: a case report. Transplant Proc. 2003; 35(6):2320-2322.

[22] Robert CD, Lacaille F, Canioni D,et al. EBV-negative lymphoproliferative disease with hyper-IgA, in a child with combined liver and small bowel transplantation. Pediatr Transplant. 2004;8(3):305-307.

[23] 李泽林,杨立新,刘菊福,等.青蒿酯钠致畸作用的研究[J].中药通报,1988,13(4) :234-236.

[24] Singh NP, Lai H. Selective toxicity of dihydroartemisinin and holotransferrin toward human breast cancer cells. Life Sci. 2001;70(1):49-56.

[25] Woerdenbag HJ, Moskal TA, Pras N,et al. Cytotoxicity of artemisinin-related endoperoxides to Ehrlich ascites tumor cells. J Nat Prod. 1993;56(6):849-856.

[26] 宁殿玺,徐在海,滕翕和.青蒿酯钠静脉注射对犬的亚急性毒性[J].中国药理学与毒理学杂志,1987,1(1):135-136.

[27] Dayan AD. Neurotoxicity and artemisinin compounds do the observations in animals justify limitation of clinical use. Med Trop (Mars). 1998;58(3 Suppl):32-37.

[28] Gorczynski RM, Alexander C, Bessler W,et al. An alteration in the levels of populations of CD4+ Treg is in part responsible for altered cytokine production by cells of aged mice which follows injection with a fetal liver extract. Immunol Lett. 2007; 109(2):101-112.

[29] Gorczynski RM, Alexander C, Bessler W,et al.An alteration in the levels of populations of CD4+ Treg is in part responsible for altered cytokine production by cells of aged mice which follows injection with a fetal liver extract.Immunol Lett. 2007; 109(2):101-112.

[30] 周平,高玉祥.青蒿琥酯对小鼠免疫功能的影响[J].蚌埠医学院学报,1996,21(1):5-8.

[31] Khan NU, Fildes JE, Al-Aloul M, et al. Increased serum concentrations of Th1 chemokines are associated with acute rejection following heart transplantation.J Heart Lung Transplantation. 2007;26(2):194.

[32] Nakashima H. Membranous nephropathy is developed under Th2 environment in chronic graft-versus-host disease. Med Hypotheses. 2007;69(4):787-791.

[33] 金慧玲,高玉祥.青蒿琥酯对豚鼠表皮郎格罕细胞的影响[J].蚌埠医学院学报,1993,18(4) :225-227.

[34] 张利群,窦肇华.大鼠小肠移植急性排斥反应中IL-2表达的研究[J].临沂医学专科学校学报,2004,26(3):161-162.

[35] Dekel B, Böcher WO, Marcus H,et al. Acute cellular rejection of human renal tissue by adoptive transfer of allogeneic human peripheral blood mononuclear cells into chimeric rats: sequential gene expression of cytokines, chemokines and cytolytic effector molecules, and their regulation by CTLA-4-Ig. Int Immunol. 1999;11(10):1673-1683.

[36] Steiger JU, Nickerson PW, Hermle M,et al. Interferon-gamma receptor signaling is not required in the effector phase of the alloimmune response. Transplantation. 1998;65(12): 1649-1652.

[37] 周平,高玉祥.青蒿琥酯对NK细胞活性及ADCC 活性的影响[J].蚌埠医学院学报,1995,20(6):363-365.

[38] Newell KA, He G, Guo Z,et al. Cutting edge: blockade of the CD28/B7 costimulatory pathway inhibits intestinal allograft rejection mediated by CD4+ but not CD8+ T cells.J Immunol. 1999;163(5):2358-2362.

[39] Valujskikh A, Heeger PS. CD4+ T cells responsive through the indirect pathway can mediate skin graft rejection in the absence of interferon-gamma.Transplantation. 2000;69(5): 1016-1019.

[40] Su GL, Walgenbach KJ, Heeckt PH,et al. Increased expression of interferon-gamma in a rat model of chronic intestinal allograft rejection.Transplantation. 1996; 62(2): 242-248.

[41] 莫正魁,李立,王建忠.青蒿素对小鼠迟发型超敏反应的免疫抑制作用[J].昆明医学院学报, 2005,26(4): 55-59.

[42] 林培英,张丹,肖柳英,等.青蒿素、青蒿酯和蒿甲醚对抑制性T细胞的作用[J].广州医药,1998,29(1):37-39.

[43] 余其斌,金慧玲.青蒿琥酯治疗系统性红斑狼疮30例临床观察[J]. 蚌埠医学院学报,1996,21(3):173-174.

[44] 金慧玲,肖玉周,高玉祥,等.青蒿琥酯对大鼠皮肤移植排斥反应的影响[J].蚌埠医学院学报,1997,22(3):152-153.

[45] Takeuchi T, Lowry RP, Konieczny B. Heart allografts in murine systems. The differential activation of Th2-like effector cells in peripheral tolerance. Transplantation. 1992; 53(6):1281-1294.

[46] Dallman MJ, Larsen CP, Morris PJ. Cytokine gene transcription in vascularised organ grafts: analysis using semiquantitative polymerase chain reaction. J Exp Med. 1991;174(2):493-496.

[47] Hitoshi Nakashima. Membranous nephropathy is developed under Th2 environment in chronic graft-versus-host disease. Medical Hypotheses, 2007, 30: 231-235.

[48] 郭尧,吴玲娟,徐潘生,等.大白鼠长期服用青蒿琥酯的安全性评估[J].中国血吸虫病防治杂志,2000,12(1):27-29.

[49] 张俊才.健康人对青蒿琥酯片的耐受性和不良反应[J].新药与临床,1992,11(2):70-72.

[50] 刘旭.抗疟药青蒿琥酯的研究[J].药学进展,1999,23:47-50.

[51] 陈重阳,袁模军,唐国权.青蒿琥酯对小鼠实验性肝损伤的保护作用[J].中国药理学通报,1990,6(6):382.

引言

材料方法

设计：随机对照动物实验。

时间及地点：实验于2006年3月至2007年4月在解放军第四军医大学胃肠外科实验室完成。

材料：

实验动物：模型动物选用封闭群SD和Wistar大鼠，成年雄性，体质量(250±30) g，均购自解放军第四军医大学实验动物中心。实验过程中对动物处置符合动物伦理学要求。

药物、试剂：青蒿琥酯粉针(桂林南药股份公司生产)。白细胞介素2、γ-干扰素酶联免疫试剂盒购自武汉博士德公司。

实验方法：

动物模型及分组：供体与受体按体质量相近配对。随机分为3组，每组18只。①同基因移植组：供受体均为SD大鼠。②异基因移植组：供体为Wistar大鼠，受体为SD大鼠。③异基因移植+青蒿琥酯治疗组(简称治疗组)：供体为Wistar大鼠，受体为SD大鼠，移植前7 d开始给予受体鼠腹腔注射青蒿琥酯，剂量60 mg/(kg•d)，溶于1.5 mL溶剂中，行腹腔注射，至移植后7 d。

动物模型建立采用伍晓汀、黎介寿的方法^[1-2]，行节段性小肠移植。供体取腹部大十字切口入腹，供肠取自屈氏韧带下1 cm处空肠，长7-10 cm。受体动脉吻合采用将供体带肠系膜上动脉的腹主动脉段和受体的腹主动脉端侧吻合，静脉吻合采用供体门静脉与受体左肾静脉cuff套管法吻合，移植肠两端从左侧腹壁分别切口拖出造口。分别于术后3，5，7 d处死大鼠取移植肠段行病理组织学检查，每个时间点6只。同时取血清行ELISA法检测血清白细胞介素2、γ-干扰素水平。

组织病理学检查：移植肠标本用40 g/L多聚甲醛固定，苏木精-伊红染色，显微镜下观察，确定排斥反应的发生及强度。

根据相关文献确定排斥程度诊断标准^[3-5]，分为轻、中、重度。轻度：肠黏膜绒毛数目减少，轻度增粗，变短，少量淋巴细胞和粒细胞浸润，少量凋亡上皮细胞；中度：肠黏膜绒毛明显变矮增宽，黏膜上皮开始脱落，细胞浸润加重，上皮细胞凋亡数目明显增多；重度：肠绒毛结构消失，上皮脱落，间质大量炎细胞浸润，肌层结构破坏，血管炎。

血清白细胞介素2、γ-干扰素水平检测：按白细胞介素2、γ-干扰素ELISA试剂盒说明操作，检测各组大鼠术后第3，5，7天的血清白细胞介素2、γ-干扰素水平。试剂盒检测水平范围二者均为：31.2-2 000 ng/L。

主要观察指标：①各组移植小肠病理组织学形态。②各组血清白细胞介素2、γ-干扰素水平。

统计学分析：结果以x(_)±s表示，采用SPSS11.5软件进行单因素方差分析，组间比较采用T 检验，P < 0.05为差异有显著性意义。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程

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讨论

临床小肠移植起步较早，但发展缓慢。早在1964年Detterling就开展了第一例临床小肠移植，但发展缓慢，至1974年的10年间，全球共进行的小肠移植例数不过8例，而且几乎没有成功的，最长存活也不超过半年。这其中主要原因是由小肠移植后复杂的排斥反应所引起的^[6-9]。进入20世纪80年代，伴随着强效免疫抑制剂环孢素A和他克莫司的发现，小肠移植才开始取得临床成功^[10-12]。

1985年4月至2003年3月期间，全球61个医学中心共计对923例患者进行了989例次小肠移植手术，移植小肠1年生存率达46%。但是，与其他实质性脏器移植比较，小肠移植的效果仍不尽如人意，严重、复杂的排斥反应是移植成功的最大障碍^[13-15]，这其中移植后急性排斥的发生率更是高达57%，所以小肠移植后早期急性排斥反应的发生是小肠移植失败的主要原因^[16-17]。

小肠移植现有的成功率及移植受体长期存活率较低，要解决的关键点是急、慢性排斥问题，将来的发展趋势可能集中在以下4个方面的研究：①活体小肠移植：活体小肠移植可选择亲体供肠，配型成功率高，术前准备充分，发生移植排斥反应率低且反应轻，而且切取部分小肠(150 cm)对供者的健康不致于有较大的影响，较肝、肾等亲体供给更为合适。②新型高效免疫抑制剂的研发：仅针对移植排斥反应而不影响受者其他免疫功能的免疫抑制剂是目前小肠移植成功的保证。③诱导受者的免疫耐受功能：诱导受者对移植肠的免疫耐受，减少或停止免疫抑制剂的应用是小肠移植的最佳选择。

新型免疫抑制剂环孢素A及他克莫司的问世，极大的推动了临床小肠移植的发展。但是大量、长期应用这些免疫抑制剂带来的不良反应，如机会性感染、恶性肿瘤的发生及肾毒性等等，使移植的成功率及患者长期存活率显著下降^[18-20]。而且各种免疫抑制剂的安全剂量范围很窄，不良反应较多且严重。尤其是继发于强烈的免疫抑制的移植后淋巴增生性疾病是部分小肠移植后主要的致死原因，而不是严重的排斥反应^[21-24]。所以应用有免疫抑制作用且不良反应较小的中药如雷公藤、青蒿等，在临床上有重要意义^[25-28]。

小肠移植急性排斥反应的发生和以下因素有重要关系：①小肠是有菌器官，因此小肠黏膜有多道屏障保护小肠不被外界的病原微生物感染。其中最重要的是免疫屏障即黏膜分泌性IgA和小肠众多的淋巴组织即肠道相关淋巴组织，其由4部分组成：Peyer斑、肠系膜淋巴结(MLNs)、肠上皮内淋巴细胞及黏膜固有层淋巴细胞。这些淋巴组织可以有效防止病原体经黏膜入侵。然而，也正是这些生理特点使得小肠移植后更容易发生急性排斥反应。②小肠黏膜对缺血再灌注损伤非常敏感。缺血再灌注损伤可破坏小肠黏膜屏障的完整性，易使肠腔内微生物和移植物抗原通过黏膜屏障进入黏膜、通过特化的小静脉聚集到Peyer斑和MLNs。Peyer斑和MLNs内含有大量的成熟树突状细胞，树突状细胞可以将移植物抗原直接提呈给受者淋巴细胞，或迁移至受者免疫器官，从而通过直接途径激活受体免疫细胞产生急性排斥反应。③CD4⁺T辅助细胞在小肠移植急性排斥反应中发挥重要作用，其中CD4⁺的间接效应T细胞可辅助B细胞产生抗体，同时CD4⁺T细胞分泌的多种细胞因子可活化CD8⁺T细胞、NK细胞和巨噬细胞，使多种免疫因素协同发挥抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用、调理吞噬或细胞毒作用。而且有动物实验发现，应用抗CD4⁺T细胞单克隆抗体处理后移植排斥反应延迟^[29]。

近年的研究发现，青蒿素类衍生物青蒿琥酯对免疫系统有明显作用。有研究报道：青蒿琥酯通过抑制白细胞介素1、白细胞介素2的产生，阻止淋巴细胞从G1期进入S期，使淋巴细胞增殖反应降低，DNA合成受抑，从而产生免疫抑制作用^[30-32]。而且对大部分免疫细胞有抑制作用，抑制表皮郎格罕细胞的增生^[33-36]，对自然杀伤细胞活性呈现单向抑制，即较大剂量在体外能抑制自然杀伤细胞活性，且呈剂量相关性，而小剂量则对自然杀伤细胞活性无显著影响^[37-40]。并且青蒿琥酯对抗体依赖细胞介导的细胞毒作用活性也有明显的抑制作用。还有研究报道青蒿琥酯可降低血清γ-干扰素的水平，但其降低γ-干扰素的程度不如他克莫司，但与他克莫司具有协同作用，可以进一步抑制免疫反应，减轻炎症损伤^[41]。

综合研究显示，青蒿素、青蒿琥酯对体液免疫的抑制作用机制是和它们能增强脾脏效应阶段TS细胞的活化作用有关。提示TS细胞可能是青蒿素和青蒿琥酯的效应靶细胞^[42]。而且青蒿琥酯在治疗系统性红斑狼疮等免疫性疾病，也取得了一定效果，其治疗系统性红斑狼疮的机制可能是直接或间接通过影响体内白细胞介素6和转化生长因子β表达，抑制了系统性红斑狼疮的异常免疫反应而起到治疗作用^[43]。在器官移植方面，金慧玲等^[44]研究青蒿琥酯对大鼠皮肤移植排斥反应的影响时发现，青蒿琥酯可显著延长大鼠移植皮肤的存活时间，其机制可能与青蒿琥酯诱导Ts细胞活性，从而限制T效应细胞产生，使致敏T细胞的直接杀伤作用降低，抑制自然杀伤细胞及抗体依赖细胞介导的细胞毒作用活性，使其对靶细胞的破坏减少等有关。

本研究以青蒿素衍生物青蒿琥酯为研究对象，观察其在大鼠急性小肠移植排斥反应中的作用。结果证实青蒿琥酯可以明显延长移植大鼠的存活时间，减轻移植排斥反应。而且与异基因移植组比较，应用青蒿琥酯的治疗组和同基因移植组排斥反应无或较轻，且血清细胞因子白细胞介素2和γ-干扰素的水平较低，说明了青蒿琥酯可以抑制细胞因子白细胞介素2和γ-干扰素的合成和分泌，从而对小肠移植后的急性排斥反应有抑制作用。

免疫学的研究发现，在动物器官移植急性排斥反应过程中，白细胞介素2和γ-干扰素等细胞因子发挥重要作用^[45-46]。通过抑制白细胞介素2的表达可以起到抑制排斥反应的作用，例如他克莫司的免疫抑制作用机制就是通过控制白细胞介素2 mRNA的转录翻译实现的^[47]。本实验研究发现，青蒿琥酯可以明显延长移植大鼠的存活时间，减轻移植排斥反应。血清学检测发现在急性排斥反应发生时细胞因子白细胞介素2和γ-干扰素血清水平升高，证实了白细胞介素2和γ-干扰素在急性移植排斥反应中发挥重要作用。而且通过本实验说明了青蒿琥酯的免疫抑制作用机制可能与抑制白细胞介素2和γ-干扰素的合成和分泌有关。

青蒿琥酯是中药，研究显示其毒副作用小，安全性很大^[48-49]，小鼠静注半数致死量为(520.0±70.2) mg/kg，大鼠静注半数致死量为533 mg/kg^[50]，几乎是治疗剂量的9倍。而且青蒿琥酯还有护肝作用^[51]，其免疫抑制作用在其他疾病方面也发挥了一定作用。所以其作为免疫抑制剂应用于临床小肠移植是可行的。但其免疫抑制作用有限，实验中发现其抑制作用出现较晚，较弱，仍有排斥反应发生，但是总体较对照组为轻。所以将青蒿琥酯与其他免疫抑制剂联合应用，减少毒副作用较大的药物如环孢素A、他克莫司的用量，减轻药物对患者的毒副反应，提高移植成活率方面有重大意义。

器官移植的最终目标是实现免疫耐受，但急性排斥反应仍是阻碍小肠移植疗效进一步提高的主要因素。本实验也发现，异基因移植大鼠没有采取任何免疫抑制措施的情况下，无一例外的都死于早期的急性移植排斥反应。所以早期发现小肠移植急性排斥仍是术后的难点，而采取简易、无创性的监测方法将是今后研究的重点。研制更有效的免疫抑制药物、积累新的免疫抑制方案使用的经验，对于提高小肠移植整体效果均具有非常重要的作用。

文章初步揭示了青蒿琥酯对小肠移植后急性移植排斥反应的抑制作用，并结合血清学白细胞介素2及γ-干扰素水平的检测分析其可能的作用机制，并提示白细胞介素2及γ-干扰素可以作为判断小肠移植急性排斥反应发生的监测指标。但移植排斥反应的发生是一个多方面因素综合作用的结果，仅血清学细胞因子的变化远不能解释其免疫抑制作用的原理，因此需要进一步深入的实验研究。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程
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青蒿琥酯对大鼠小肠移植急性排斥反应的作用

Effect of artesunate on acute rejection after small intestine transplantation in rats

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[1]	杨洋, 姚羽, 沈孝天, 刘佳佳, 薛建华. 退变腰椎间盘中白细胞介素21的表达及意义[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(5): 690-694.
[2]	陈宇彤, 李晨晨, 刘阳, 郑亚琴, 杨喜花, 安美文. 急性放射性皮肤损伤Wistar大鼠模型的建立[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(2): 237-241.
[3]	王晓勃, 王长安, 韩健乐, 杨青彦, 杨帅平, 杨俊伟. 环孢素转换为他克莫司对稳定期肾移植受者糖代谢和心血管风险的影响[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(14): 2236-2240.
[4]	许国峰, 李学斌, 唐一钒, 赵寅, 周盛源, 陈雄生, 贾连顺. 人黄韧带细胞骨化发生过程中的自噬[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(8): 1174-1181.
[5]	周玉, 龙小安, 李宁, 王纯. 有限元法分析髌腱炎状态时的生物力学变化[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(8): 1280-1286.
[6]	刘梦婷, 饶巍, 韩兵, 肖翠红, 武栋成. 人脐带间充质干细胞的体外免疫调节特性 [J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(7): 1063-1068.
[7]	杨敏杰, 刘伟, 涂宏飞, 李莉, 费素娟. 藏红花素保护溃疡性结肠炎模型大鼠的作用及相关机制[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(29): 4673-4679.
[8]	陈盛, 刘建航, 刘本涛, 张兆剑, 李本澈, 张帆, 李东飞. 脊髓型颈椎病动物模型制作的关注热点[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(24): 3890-3896.
[9]	刘玥彤, 王琴, 杨烨, 朱筠, 阿布力克木•吐尔地. 1,25(OH)₂D3干预糖尿病肾病模型大鼠肾脏组织MicroRNA-130b及转化生长因子β1的变化 [J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(2): 248-253.
[10]	沙力塔娜提•乌尔曼别克, 李亦丞, 任姜栋, 马海蓉, 穆文博, 曹力. 青蒿琥酯改善软骨下骨破骨细胞介导的骨关节炎疼痛[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(17): 2636-2641.
[11]	冯翮飞, 郭涛, 黄敏, 苏旺, 夏得月, 彭澜, 于云波, 孙杰. 改良构建大鼠单侧输尿管梗阻肾间质纤维化模型[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(17): 2706-2711.
[12]	刘婷, 杨婷婷, 马晓娜, 马海滨, 金毅然, 梁雪云. 人胎盘间充质干细胞CD200⁺亚群细胞对同种异基因移植排斥的调节效应[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(13): 2068-2073.
[13]	宋旭东, 何云武, 李勇霖, 陈静, 胡君兰. 超声引导下椎旁神经阻滞治疗带状疱疹相关疼痛的Meta分析[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(11): 1797-1804.
[14]	曹曦，崔伟，陈跃平，冯洋，路通. 尼尔样1型生长因子促进修复骨再生和治疗骨质疏松的应用潜力[J]. 中国组织工程研究, 2019, 23(8): 1235-1240.
[15]	庞巨涛，张新虎，孙建华，周连军，刘斌，李凤国，李文哲. 经皮球囊扩张椎体后凸成形后椎体再骨折的危险：回顾性多因素分析[J]. 中国组织工程研究, 2019, 23(8): 1182-1187.