骨髓间充质干细胞复合异体骨修复松质骨缺损

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2013.27.004

中国组织工程研究

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骨髓间充质干细胞复合异体骨修复松质骨缺损

王峰，付志厚

辽宁医学院济南军区总医院研究生培养基地，山东省济南市 250031

收稿日期:2013-03-15 修回日期:2013-04-18 出版日期:2013-07-02 发布日期:2013-07-02
通讯作者: 付志厚，博士、教授、主任医师、硕士生导师，济南军区总医院骨病科，山东省济南市 250031 jzgbfzh@yahoo.com.cn
作者简介:王峰★，男，1984年生，山东省烟台市人，汉族，辽宁医学院在读硕士，主要从事骨缺损修复方面的研究。 medouni@163.com
基金资助:
辽宁医学院研究生基金

Bone marrow mesenchymal stem cells combined with allogeneic bone for cancellous bone defects

Wang Feng, Fu Zhi-hou

Postgraduate Training Unit of Liaoning Medical University, General Hospital of Jinan Military Region, Jinan 250031, Shandong Province, China

Received:2013-03-15 Revised:2013-04-18 Online:2013-07-02 Published:2013-07-02
Contact: Fu Zhi-hou, M.D., Chief physician, Professor, Master’s supervisor, Postgraduate Training Unit of Liaoning Medical University, General Hospital of Jinan Military Region, Jinan 250031, Shandong Province, China jzgbfzh@yahoo.com.cn
About author:Wang Feng★ Studying for master’s degree, Postgraduate Training Unit of Liaoning Medical University, General Hospital of Jinan Military Region, Jinan 250031, Shandong Province, China medouni@163.com
Supported by:
the Postgraduate Foundation of Liaoning Medical University

摘要/Abstract

摘要：

背景：有研究表明骨髓间充质干细胞及异体骨可促进骨缺损的修复，但骨髓间充质干细胞复合异体骨对于松质骨缺损的修复效果至今少有报道。
目的：观察骨髓间充质干细胞复合异体骨修复兔松质骨缺损效果。
方法：在新西兰大白兔双侧股骨外侧髁造成0.6 cm×1.2 cm 的松质骨缺损，一侧设为模型组，骨缺损处植入复合骨髓间充质干细胞的异体骨，另一侧设为对照组，单纯植入异体骨。
结果与结论：植入后4，8，12周，大体观察、X射线检查和苏木精-伊红染色观察结果显示，模型组在新骨成长方面，缺损区修复方面均优于对照组。植入后12周，模型组骨缺损区可见大量骨小梁形成及成熟的板层骨组织，骨缺损基本修复。对照组骨缺损区仅可见大量编织骨形成，骨缺损尚未得到有效修复。模型组Lane-Sandhu法X射线结合组织学观察评分高于对照组(P < 0.05)。生物力学检测结果显示，植入后12周，模型组股骨髁最大压力载荷、载荷/应变比值均高于对照组(P < 0.05)，最大应变位移较对照组低(P < 0.05)。结果证实，骨髓间充质干细胞复合异体骨可有效修复兔股骨髁松质骨缺损，且修复效果明显优于单纯异体骨移植。

关键词: 干细胞, 骨髓干细胞, 骨髓间充质干细胞, 异体骨, 松质骨缺损, 股骨髁, 其他基金, 干细胞图片文章

Abstract:

BACKGROUND: Some studies have shown that bone marrow mesenchymal stem cells and allograft bone have a certain role for repairing bone defects, but the effectiveness on cancellous bone defects is seldom reported so far.
OBJECTIVE: To observe the effectiveness of bone marrow mesenchymal stem cells combined with allogeneic bone on cancellous bone defects.
METHODS: The models of cancellous bone defects (0.6 cm×1.2 cm) were made artificially in both condylus lateralis femoris of New Zealand white rabbits: one side served as model group implanted with combination of bone marrow mesenchymal stem cells and allogeneic bone, and the other side was considered as control group implanted with allogeneic bone.
RESULTS AND CONCLUSION: The model group was better than the control group in new bone growth and defect repair at 4, 8, 12 weeks after implantation, which was confirmed by general observation, X-ray examination and hematoxylin-eosin staining. There was a large amount of trabecular bone formation and mature lamellar bone tissue in bone defects of model group by histological observation at 12 weeks after implantation, and bone defects of the model group were repaired basically; while there were only abundant woven bones in the control group, and bone defects in the control group were not repaired effectively. Scores on Lane-Sandhu’s X-ray combined with histological observation were higher in the model group than the control group (P < 0.05). Biomechanical test showed that the maximum pressure load of the femoral condyle and load/strain ratio in the model group were significantly higher than those in the control group at 12 weeks after implantation (P < 0.05), while the maximum strain and displacement of the model group was lower than that of the control group (P < 0.05). These findings suggest that the combination of bone marrow mesenchymal stem cells and allogeneic bone is superior to simple allogeneic bone implantation in the repair of cancellous bone defects of the femoral condyle.

Key words: stem cells, bone marrow-derived stem cells, bone marrow mesenchymal stem cells, allogeneic bone, cancellous bone defects, femoral condyle, other grants-supported paper, stem cell photographs-containing paper

中图分类号:

R394.2

王峰，付志厚. 骨髓间充质干细胞复合异体骨修复松质骨缺损[J]. 中国组织工程研究, doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2013.27.004.

Wang Feng, Fu Zhi-hou. Bone marrow mesenchymal stem cells combined with allogeneic bone for cancellous bone defects[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2013.27.004.

图/表（结果） 3

2.1 实验动物数量分析纳入兔36只，其中2只兔因造模失败，后期1只兔子因感染死亡，1只取材失败，均直接剔除，未补充数量，最终32只兔计入结果分析。
2.2 骨髓间充质干细胞复合异体骨移植后松质骨缺损兔一般形态植入后第1天，兔活动量与进食均较少。植入后第2天，兔均可恢复正常习性，饮食活动正常。兔切口初期略有红肿，稍有渗出，但后期切口均愈合良好。
股骨外髁表面观察：模型组与对照组股骨髁骨缺损处随时间变化，骨质形成均比较明显，逐步恢复平坦外观，植入后12周骨皮质均已修复。
股骨髁剖面观察：模型组：植入后4周，植入骨块之间明显粘连，但骨块之间较易分离，与周围骨质分界清晰；植入后8周，植入骨块间连接紧密，不易分离，与周围骨质界限变模糊；植入后12周，难以区分植入骨块与周围骨质，骨缺损基本修复。
对照组：植入后4周，植入骨块之间有少量粘连，植入骨块、骨床之间基本呈游离状态；植入后8 周，植入骨块明显粘连，但较容易剥离，与周围骨质分界清晰；植入后12周，植入骨块间级与周围骨质彼此粘连，分离困难，不易区分周围骨质与植入骨块。
2.3 骨髓间充质干细胞复合异体骨移植后松质骨缺损兔X射线检查结果植入后4周，模型组骨缺损处密度高低不均，缺损区边缘模糊；对照组骨缺损处可见大量植入骨块高密度影，缺损区边缘清晰。植入后8周，模型组骨缺损处可见大量密度与周围骨质一致区域，缺损区域缩小，对照组骨缺损处植入骨块高密度影之外可见部分区域与周围骨质密度一致，缺损区域明显。植入后12周，模型组骨缺损处仍可见植入骨块高密度影，但大多区域基本与周围骨质一致，难以区分原缺损区域；对照组骨缺损处亦可见植入骨块高密度影，大量与周围骨质密度一致区域，但原缺损区域仍模糊可见。
2.4 骨髓间充质干细胞复合异体骨移植后松质骨缺损兔股骨髁生物力学指标变化植入后12周，与对照组相比，模型组股骨髁最大压力载荷、载荷/应变比值较高确 (P < 0.05)，最大应变位移较低(P < 0.05)。见表1。

2.5 骨髓间充质干细胞复合异体骨移植后松质骨缺损兔骨缺损区形态植入后4周，模型组可见成骨细胞大量生长，排列紊乱，含少量骨基质，见图1A；对照组仅可见少量成骨细胞，见图1B；植入后8周，模型组可见大量编织骨形成，成骨细胞整齐排列，见图1C，对照组成熟骨组织较少，含大量骨基质，见图1D；植入后12周，模型组可见大量骨小梁形成及成熟的板层骨组织，见图1E，对照组可见大量编织骨形成，仍可见部分骨基质及少量成骨细胞，见图1F。

Lane-Sandhu法X射线结合组织学观察评分评分结果见表2，结果可见植入后各时间点模型组评分均高于对照组(P < 0.05)。

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引言

如何有效修复因创伤、感染、肿瘤切除等造成的骨缺损一直是骨科界的难点和研究热点。因自体骨移植无免疫排斥反应且具有愈合快速、牢固等优点，自体骨移植一直被奉为骨缺损修复的金标准^[1]。
但自体骨移植存在供体来源有限、并发症多、移植时间长等诸多问题^[2]，又不可避免的造成供区的医源性二次损伤，且自体骨在形态、大小和数量上又往往难以满足缺损处的要求，特别是巨大的或特殊部位的骨缺损的修复，从而在临床应用上受到了极大的限制。因此，寻找良好的自体骨的替代材料也成为成功修复骨缺损的关键。
随着科技的飞速发展，各种人工生物替代材料被用于骨缺损的修复，但目前研究的常用的生物替代材料虽然生物相容性较好、无组织刺激、容易塑性等，但这些生物材料不具有成骨细胞等任何活性物质，不能与种植体形成能负重的结合，且单一材料又往往存在或者机械强度低或者难以降解速率等诸多问题，应用受到一定的限制。
近年来，组织工程学技术发展迅速，为骨缺损的修复提供了更多的选择。组织工程骨是用最少的组织细胞通过在体外培养扩增后，通过构建了由种子细胞和生物材料复合构成的三维空间体，形成具有生命活力的组织，对缺损组织进行修复，其可按组织器官缺损情况任意塑形，并在结构、形态和功能上的重建并达到永久性替代，以达到完美的形态修复。但目前的组织工程技术治疗骨缺损尚存在诸多缺点，如低成骨诱导活性、降解时间长、机械强度低等，且大多仍停留于动物实验阶段，何时应用于临床还需要更深层次的研究实验，以全面评价复合材料的安全性、有效性及持久性^[3]。
同种异体骨与自体骨相比具有来源广泛，且可以满足缺损区形态和数量的要求，同时避免了供骨区疼痛等并发症的发生，同时又具有人工生物材料所不具有的成骨活性物质，但新鲜的同种异体骨存在免疫排斥反应等诸多缺陷而很少应用。但随着免疫学、医学细胞生物学等学科的发展，异体骨移植再次逐渐成为骨科界备受重视的课题^[4]。
同种异体骨已经在临床上有了较为广泛的应用，但目前单纯的同种异体骨的移植仍存在诸多难以解决的问题，因目前应用于临床的同种异体骨多经诸多免疫处理从而使同种异体骨的成骨活性降低，从来导致移植后植骨愈合时间长甚至不愈合等诸多问题，且存在一定的失败率。如何使同种异体骨移植更好的发挥作用，达到与自体骨相当的作用，成为有效修复骨缺损的关键。骨髓间充质干细胞是组织工程和再生治疗的一种重要细胞^[5]，其结合支架材料如羟基磷灰石和磷酸三钙等的应用产生了可喜的临床效果。有研究证明，骨髓间充质干细胞可以在异体骨移植中生存下来^[6]。
近年来，外科技术飞速发展，已经可以彻底清除近关节的肿瘤及感染病灶、完全解剖复位严重粉碎性骨折及成功翻修有假体周围严重骨吸收的人工关节，但这些修复方法往往遗留大块的松质骨缺损，而这些松质骨缺损又常导致并发症的发生，从而影响修复效果及患者功能的恢复。
传统的观点认为松质骨缺损的修复较皮质骨缺损的修复容易，发生于松质骨的骨折愈合明显易于皮质骨。这也导致了目前骨缺损的研究大多都集中于皮质骨缺损的修复，而对于修复松质骨缺损的研究报道则较少。但松质骨缺损的修复不同于皮质骨缺损的修复，且目前松质骨缺损的修复研究又以生物材料为主，而忽视了同种异体骨的应用。
因此，实验以骨髓间充质干细胞复合异体骨修复兔股骨髁松质骨缺损，探讨其修复松质骨缺损的可行性，从来为临床松质骨缺损的修复提供可行的方法。

材料方法

设计：随机对照动物实验。
时间及地点：实验于2012年4至11月在济南军区动物实验中心完成。
材料：
实验动物：健康清洁级4-6月龄新西兰大白兔40只，体质量2.5-3.4 kg，雌雄不限，购自济南西岭角养殖繁育中心，动物许可证号：SCXK(鲁)2010-0005。分笼饲养，自由摄食饮水。其中4只兔用于同种异体骨取材，36只兔作为实验动物。实验对动物的处理方法符合中华人民共和国科学技术部颁发的《关于善待实验动物的指导性意见》^[7]。
骨髓间充质干细胞复合异体骨修复松质骨缺损的试剂及仪器:

实验方法：
分组：实验将新西兰大白兔36只双侧股骨髁造成松质骨缺损，一侧设为模型组，植入骨髓间充质干细胞复合异体骨，另一侧设为对照组，单纯植入异体骨。
冷冻干燥异体骨的制备：取4只兔髂骨、四肢长骨，彻底去除骨膜和软组织，制成约2 mm×2 mm的骨块，洗除骨髓。在氯仿和甲醇(1∶1)混合液中脱脂12 h后洗净，放置-80 ℃超低温冰箱冷冻1周，再置于冷冻干燥机脱水干燥48 h，制成冻干异体骨，密封包装，60Co辐照灭菌后备用。
兔骨髓间充质干细胞的分离、培养及传代：严格无菌条件下于兔股骨大转子下穿刺，抽取骨髓约5 mL后缓慢注入含10 mL淋巴细胞分离液的离心管中；2 500 r/min离心15 min，吸取界面层细胞，将细胞悬液按4×10⁹L-1细胞浓度接种于75 mL培养瓶内，37 ℃、体积分数5%CO2的培养箱中培养，48 h后首次换液，以后每3 d更换培养液，去除未贴壁的造血细胞，待细胞浓度达85%以上融合时给予传代，吸出培养瓶中的培养液，加入体积分数0.25%胰蛋白酶液2 mL进行消化，置于 37 ℃，镜下观察见大部分细胞胞质回缩，细胞变圆，细胞间隙增大时，加入2 mL基础培养液终止消化。从一边到另一边轻轻吹打贴壁的细胞，并将脱离的细胞制成单细胞悬液。以1 000 r/min离心5 min。弃上清液，用PBS液清洗，加入适量基础培养液，充分吹打制作成单细胞悬液。按6×108 L-1的细胞浓度接种于培养瓶内，并加入传代细胞培养液，置于37 ℃、体积分数5%CO2、饱和湿度孵箱中培养。每隔3 d更换培养液，每日光学显微镜下观察细胞的生长变化情况，待细胞再次达到85%以上融合给予再次传代^[8-9]。
异种骨与骨髓间充质干细胞体外复合培养：将第4代骨髓间充质干细胞浓度调整到109 L-1，加入成骨诱导培养液(地塞米松10-8 mol/L+甘油磷酸钠10 mol/L+维生素C 50 mg/L，pH 7.3)盖过异体骨，置于37 ℃、体积分数5%CO2、饱和湿度孵箱中培养，次日更换成骨诱导培养液，每隔3 d换全量更换1次培养液，孵育1周。
兔松质骨缺损模型的建立：实验模型参考结合以往研究的造模方法进行造模^[10-12]：速眠新耳缘静脉麻醉后，无菌条件下取兔一侧膝关节外侧切口，显露股骨外髁，切去骨膜。用直径0.6 cm电钻由外髁最宽大处中点为进点向内髁方向制作约0.6 cm×1.2 cm的松质骨骨缺损，以探针探测穿通深度及是否穿透对侧皮质骨(注意不要穿透对侧皮质骨)，骨缺损处植入复合骨髓间充质干细胞的异体骨填塞、压实，关闭切口。同法制作对侧股骨髁松质骨缺损，用等量单纯异体骨填塞、压实，关闭切口。植入后不固定肢体，允许自由活动，连续3 d肌注青霉素G钠预防感染。
主要观察指标:
一般情况：植入后14 d内观察动物进食、切口愈合、肢体活动情况等。
大体观察：植入后4，8，12周，缺损区表面观察及与股骨髁间线垂直剖面切开观察骨缺损修复情况。
影像指标观察：于植入后4，8，12周，拍摄双膝关节正侧侧位X射线片，了解骨缺损修复情况。
组织学观察：植入后4，8，12周，切取股骨髁骨标本，用中性甲醛溶液固定，脱钙，树脂包埋，分层切片后苏木精-伊红染色，普通光镜下观察新生骨形成及骨缺损修复情况。
生物力学观察：植入后12周，取模型组和对照组各8只股骨髁，修整成上下面平整的柱状样本，取材时生理盐水持续冲洗，保持样本湿润与冷却，-20 ℃冰箱保存。样本室温解冻后，置于生物力学试验机载物台，缓慢加载(3 mm/min)，直至组织出现破裂，记录此时载荷大小、修复组织的应变位移，计算载荷/应变比值，将结果进行比较。
采用Lane-Sandhu法X射线结合组织学观察评分标准[^13]，对骨缺损区新骨形成进行评分。
评分标准如下：

统计学分析：计量资料以

表示，采用SPSS 16.0统计学软件进行数据处理，两组间差异用两样本均数比较采用配对样本t 检验。P < 0.05为差异有显著性意义。

讨论

骨缺损的修复是一个长期、复杂的过程，受多种因素的影响，如自身条件、缺损部位与大小、多种生长因子的调控及移植材料的选择等。骨缺损的“爬行替代”理论认为新骨的生长是沿着移植物的表面逐渐爬行并逐步降解吸收并替代移植物，骨移植材料应具3种生物学性能：①骨传导作用：植入后提供支架和桥梁，起引导及支撑作用，使周围有活性的血管肉芽组织长入及新骨沉淀。②成骨作用：提供具有成骨细胞或其前体细胞，是植入后能具有成骨作用。③骨诱导作用：能诱导移位而来的未分化间充质细胞分化为软骨和骨。其中的诱导作用是植骨的主要目的，其中骨诱导作用是植骨的主要目的^[14-15]。自体骨的移植一直以来是修复骨缺损的常用方法，自体骨成骨能力强，生物组织相容性好，但自体骨移植存在诸多缺陷限制了其广泛的应用。
目前常用的人工生物材料仅起到骨传导作用，不具有骨诱导作用。同种异体骨作为一种生物活性材料，具有来源丰富、形态大小不受限，生物学特征、骨质强度和形态结构与自体骨相似，能够长期贮存等优点，是目前替代自体骨移植治疗骨缺损的良好材料^[16]。经过处理的同种异体骨不仅免疫反应显著降低，而且保留了一定的骨诱导作用，它能诱导血管周围游走间充质细胞和骨髓间充质干细胞转化为软骨细胞和骨细胞，同时同种异体骨具有自体骨的三维孔隙结构，具有一定的骨传导作用，且与受体有较好的组织相容性，可为骨髓间充质干细胞提供黏附支架、生长空间及成骨因子，从而促进成骨作用。但作为移植材料，仍无法与自体骨相比，且虽然经过一定的免疫处理，但同种异体骨移植仍存在一定的免疫反应、感染、骨折、不愈合、延迟愈合等并发症。
松质骨缺损的修复不同于皮质骨缺损的修复。松质骨缺损的研究具有一定的临床意义，如儿童干骺端肿瘤治疗的刮除植骨、人工髋臼假体周围骨缺损的填充等，因儿童自体骨相对稀缺，假体周围骨缺损往往是导致假体松动而行翻修的主要原因^[17]。传统的观点认为松质骨缺损的修复较皮质骨容易的多，甚至认为空腔隙性松质骨缺损可以自然愈合。但事实并非如此，Olivier等^[18]在兔双侧股骨髁上构建深度为10 mm，直径7 mm骨缺损，一侧注入可注射性钙磷酸盐作为模型组，另一侧为空白对照组，发现模型组骨缺损愈合良好，对照组骨缺损未见自行愈合。刘阳等^[14]制作兔股骨髁空腔隙性松质骨缺损，发现空白组旷置处理后12周不能愈合，仅有纤维结缔组织形成，而植入复合材料的模型组及植入自体髂骨的对照组均有明显的新骨形成。早有学者指出，松质骨修复的生物学行为不同于皮质骨的膜内化骨或软骨化骨，而是通过骨小梁长入来完成的。因为松质骨骨折端仅有部分血块，不能通过包绕骨折端血肿机化，软骨内成骨作用微弱，另外松质骨无骨外膜，不显现外骨痂，有的松质骨有骨外膜，但成骨能力差，膜内化骨弱，仅有少量的外骨痂形成，有的外骨膜仅为一层结缔组织没有成骨作用，不会产生外骨痂，因此，松质骨的骨愈合只有依赖骨髓的成骨作用^[19]。
骨髓间充质干细胞具有提高骨移植材料修复骨缺损质量的潜力。骨髓间充质干细胞资源丰富，取材方便，便于体外培养，操作简单，且自我更新能力强，分化潜能多等特点。骨髓间充质干细胞在体外长期培养不会丧失其干细胞特征而失去分化能力，在特定的诱导条件下能定向分化成成骨细胞^[20]。应用自体骨髓间充质干细胞复合不同材料修复各类骨缺损已经有了较多的实验研究与初步临床应用报告，但自体骨髓间充质干细胞的成骨能力随着年龄的增加而逐渐减弱，一定程度上影响了骨缺损的修复，且应用自体骨髓间充质干细胞需经历比异体骨髓间充质干细胞更长的准备工作，这有可能延误最佳治疗时间。大量实验表明，同种异体间骨髓干细胞的移植不会引起机体的免疫排斥反应。由于缺乏免疫相关的表面标记和已经确定的包括抑制体外培养的同种异体T细胞增殖的免疫调节功能，更有学者认为骨髓间充质干细胞是非免疫原性的，是一种免疫特许细胞^[21]。
骨髓间充质干细胞的成骨作用需要支架材料作为载体才能更好的、长久的维持。直接在骨缺损处注射容易被自身体液、血液冲洗而流失，从来使骨髓间充质干细胞有效浓度降低而不能很好的发挥其成骨作用。例如骨髓间充质干细胞结合支架如羟基磷灰石^[22]，β-磷酸三钙^[23]，磷酸钙^[24]，完全或部分脱钙骨^[25]，都已证明这些支架材料能促进细胞的黏附，增殖和/或分化。骨移植材料的形态可影响骨形成^[26]；例如，增加的微孔可以提高骨诱导性^[27]，将硅晶体加入到羟基磷灰石中能增加骨诱导和骨传导性能^[28-29]。自体骨髓间充质干细胞与羟基磷灰石结合已成功地用于修复体内的临界尺寸的颅面骨缺损^[30-31]。以往临床研究也报道了自体骨髓间充质干细胞与羟基磷灰石结合成功修复了干骺端空洞型骨缺损和非节段性骨缺损^[32-33]，与单纯异体骨移植相比，骨髓间充质干细胞在早期可以增强新生骨对异体骨的渗入率^[34]。骨髓间充质干细胞可以提高新生骨在植入的异体骨表面的形成^[35]。
近年来，有关骨髓间充质干细胞或组织工程骨修复骨缺损的研究如下(按主题排序)：

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实验选用冻干的同种异体骨为支架材料，经过冻干处理及60Co辐照灭菌，很大程度上降低了同种异体骨的抗原性，又保留了一定的骨传导及骨诱导作用，其作为支架材料，与受体有较好的组织相容性，生物稳定性好，又具有与自体骨相同三维孔隙结构，为骨髓间充质干细胞的生长和黏附提供了必要的空间。而骨髓间充质干细胞种植于支架材料上必须保持有效的浓度才能确保新骨的形成[36]，且骨髓间充质干细胞的初始接种密度对复合体的成骨能力有着明显的影响[37]。田志逢等[38]通过实验证明在制备复合体时把细胞浓度维持在1×109 L-1最为合适，既能保证细胞在支架材料上既得到充分的生长空间，也得到充足的营养，通过自分泌和旁分泌的方式良好的增殖分化。实验以细胞初始接种浓度为1×109 L-1在接种于冻干同种异体骨上，并对骨髓间充质干细胞进行了成骨诱导，在体外联合培养，既保证了体内细胞成骨的足够浓度，又保证了复合异体骨在植入体内后骨髓间充质干细胞不会被血液等冲洗而流失，有利于骨髓间充质干细胞的缓慢、长期、稳定的发挥成骨作用。实验结果显示，模型组和对照组都有新骨形成的表现，且随着时间的延长，新骨形成逐渐增多。但相同时间点内，模型组所形成的新骨要比对照组多，而模型组在植入后12周可以发现成熟的板层骨组织，也说明骨缺损已经得到基本的修复。而且模型组所形成的的骨组织的强度也要高于对照组。
综上所述，实验认为单纯同种异体骨移植对于松质骨缺损的修复具有一定的作用，而骨髓间充质干细胞可以增强同种异体骨对松质骨缺损的修复作用。相比较单纯异体骨，复合了骨髓间充质干细胞的异体骨对松质骨缺损的修复效果显然更加显著，二者的复合使用在一定程度上可以有效的修复松质骨缺损。可以说，骨髓间充质干细胞与异体骨复合，二者互为补充，对于松质骨缺损的修复明显优于单纯异体骨移植，但不可避免的，也人为的造成了准备时间相对延长等一系列的缺陷问题。实验设想未来如果能最大程度的降低异体骨的免疫排斥反应，同时又尽最大可能保留异体骨的骨传导及骨诱导作用，加上骨髓间充质干细胞的分化成骨作用，会使此复合物逐步具有与自体骨相似的作用。

骨髓间充质干细胞复合异体骨修复松质骨缺损

Bone marrow mesenchymal stem cells combined with allogeneic bone for cancellous bone defects

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