神经胶质成熟因子γ抑制人结直肠癌LoVo细胞增殖并影响人脐静脉内皮细胞的骨架运动

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.3507

中国组织工程研究 ›› 2021, Vol. 25 ›› Issue (13): 2055-2059.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.3507

• 干细胞基础实验 basic experiments of stem cells • 上一篇下一篇

神经胶质成熟因子γ抑制人结直肠癌LoVo细胞增殖并影响人脐静脉内皮细胞的骨架运动

王惠丽1，陈志江2，吴炳义3

1广东省妇幼保健院检验科，广东省广州市 511442；2南方医科大学珠江医院儿科中心，广东省广州市 510280；3南方医科大学南方医院临床医学研究中心，广东省广州市 510515

收稿日期:2020-06-28 修回日期:2020-07-03 接受日期:2020-07-21 出版日期:2021-05-08 发布日期:2020-12-28
通讯作者: 吴炳义，博士，教授，南方医科大学南方医院临床医学研究中心，广东省广州市 510515
作者简介:王惠丽，女，1987年生，山东省龙口市人，汉族，硕士，主管技师，主要从事结肠癌相关研究。
基金资助:
2020年广东省医学科学技术研究基金项目(A2020599)，项目负责人：王惠丽

Glia maturation factor-gamma inhibits the proliferation of human colorectal cancer LoVo cells and affects the cytoskeletal motion of human umbilical vein endothelial cells

Wang Huili1, Chen Zhijiang2, Wu Bingyi3

1Clinical Laboratory, Guangdong Women and Children Hospital, Guangzhou 511442, Guangdong Province, China; 2Pediatric Center, Zhujiang Hospital of Southern Medical University, Guangzhou 510280, Guangdong Province, China; 3Clinical Medicine Research Center, Nanfang Hospital, Southern Medical University, Guangzhou 510515, Guangdong Province, China

Received:2020-06-28 Revised:2020-07-03 Accepted:2020-07-21 Online:2021-05-08 Published:2020-12-28
Contact: Wu Bingyi, MD, Professor, Clinical Medicine Research Center, Nanfang Hospital, Southern Medical University, Guangzhou 510515, Guangdong Province, China
About author:Wang Huili, Master, Technician-in-charge, Clinical Laboratory, Guangdong Women and Children Hospital, Guangzhou 511442, Guangdong Province, China
Supported by:
the Guangdong Medical Science and Technology Research Fund Project in 2020, No. A2020599 (to WHL)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：
神经胶质成熟因子γ(glia maturation factor gamma，GMFG)：是一个分子质量为17 kD的小分子蛋白，与神经胶质成熟因子家族中的神经胶质成熟因子β高度同源，是细胞骨架运动重建过程中ADF/cofilin超家族蛋白成员之一。
细胞骨架：是指真核细胞中的蛋白纤维网络结构，主要由微管、微丝及中间纤维组成。细胞骨架的主要作用是完成细胞的运动、维持细胞的形态以及胞吞、胞吐、信息传递、能量转换等。

背景：神经胶质成熟因子γ(glia maturation factor-gamma，GMFG)是细胞骨架运动重建过程中ADF/cofilin超家族蛋白成员之一，可以通过调节肌动蛋白介导细胞骨架重组参与细胞运动的调控。作者前期发现GMFG的高表达与结直肠癌肿瘤患者临床病理相关，但具体的上游及下游机制有待探究。
目的：探索GMFG对人脐静脉内皮细胞骨架及LoVo细胞增殖的影响。
方法：①将人脐静脉内皮细胞接种在激光共聚焦皿中，待细胞贴壁稳定生长后，细胞免疫荧光染色观察GMFG的表达与人脐静脉内皮细胞骨架蛋白F-actin表达的关系；然后加入秋水仙素抑制细胞有丝分裂，分为对照组、0.5 mg/L秋水仙素组、1.0 mg/L秋水仙素组，流式细胞术观察3组细胞周期的变化，Western blot蛋白印迹观察3组细胞GMFG蛋白表达；②将人结直肠癌LoVo细胞接种在激光共聚焦皿中，待细胞贴壁稳定生长后，细胞免疫荧光染色观察GMFG的表达与细胞周期的相关性，然后采用siRNA技术干扰LoVo细胞中GMFG的表达，分为空白对照组、空转染组和siRNA-GMFG组，Edu实验检测细胞增殖率的变化。
结果与结论：①在人脐静脉内皮细胞中，GMFG的表达与人脐静脉内皮细胞骨架运动有关，细胞骨架回缩时GMFG表达增多；秋水仙素抑制人脐静脉内皮细胞有丝分裂后，随秋水仙素用量增加G2/M期细胞占比增加，GMFG蛋白表达下降；②在LoVo细胞中，GMFG的表达强度与细胞有丝分裂有关，在细胞有丝分裂中后期GMFG表达增强；③siRNA技术干扰LoVo细胞GMFG表达后，细胞增殖率下降；④结果表明，干扰GMFG表达能够抑制人结直肠癌LoVo细胞的增殖率，并且细胞骨架运动与GMFG的表达存在一定的相关性。

https://orcid.org/0000-0002-2977-6465(王惠丽)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

关键词: 人脐静脉内皮细胞, 细胞骨架, LoVo细胞, 细胞增殖, 神经胶质成熟因子γ, 秋水仙素, 肠癌

Abstract: BACKGROUND: Glial maturation factor-gamma (GMFG) is one of the members of the ADF/cofilin superfamily protein in the process of cytoskeleton remodeling. It can regulate the cell movement by regulating actin-mediated cytoskeleton reorganization. The authors previously found that the high expression of GMFG is associated with the clinicopathological features of colorectal cancer patients, but the specific upstream and downstream mechanisms need to be explored.
OBJECTIVE: To study the effects of GMFG on cytoskeleton and LoVo cell proliferation.
METHODS: (1) Human umbilical vein endothelial cells were inoculated in a laser confocal dish. After the cells grew stably, the correlation between the expression of GMFG and the expression of cytoskeletal protein F-actin was observed by immunofluorescence staining. Colchicine inhibited mitosis. The cells were divided into control group, 0.5 mg/L colchicine group and 1.0 mg/L colchicine group. The cell cycle was observed by flow cytometry and GMFG protein expression was observed by western blot assay. (2) Human colorectal cancer LoVo cells were inoculated in a laser confocal dish. After the cells grew stably, the correlation between GMFG expression and cell cycle was observed by immunofluorescence staining. Afterwards, siRNA was used to interfere the expression of GMFG in LoVo cells. The LoVo cells were divided into blank control group, empty transfer group and siRNA-GMFG group. The cell proliferation rate was detected by Edu assay.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) In human umbilical vein endothelial cells, the expression of GMFG was associated with the cytoskeletal motion of human umbilical vein endothelial cells, and the expression of GMFG increased when the cytoskeleton retracted. After colchicine inhibited the mitosis of human umbilical vein endothelial cells, the proportion of cells in G2/M phase increased and the expression of GMFG protein decreased with the increase of colchicine dosage. (2) In LoVo cells, the expression intensity of GMFG was associated with mitosis, and the expression of GMFG was enhanced in the middle and late stages of cell mitosis. (3) After siRNA interference with GMFG in LoVo cells, the cell proliferation rate was decreased. (4) Results verify that interference with GMFG can inhibit the proliferation rate of LoVo cells of human colorectal cancer, and there is a certain correlation between cytoskeletal motion and GMFG expression.

Key words: human umbilical vein endothelial cells, cytoskeleton, LoVo cells, cell proliferation, glia maturation factor-gamma, colchicine, colorectal cancer

中图分类号:

王惠丽, 陈志江, 吴炳义. 神经胶质成熟因子γ抑制人结直肠癌LoVo细胞增殖并影响人脐静脉内皮细胞的骨架运动[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(13): 2055-2059.

Wang Huili, Chen Zhijiang, Wu Bingyi. Glia maturation factor-gamma inhibits the proliferation of human colorectal cancer LoVo cells and affects the cytoskeletal motion of human umbilical vein endothelial cells[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2021, 25(13): 2055-2059.

图/表（结果） 5

2.1 秋水仙素对人脐静脉内皮细胞周期及GMFG蛋白表达的影响秋水仙素干预后，人脐静脉内皮细胞G0/G1期百分比下降，G2/M期细胞百分比明显增多，见图1A和表1。细胞免疫荧光染色发现，对照组细胞贴壁伸展良好，伪足向四周伸展；而实验组随着秋水仙素质量浓度的增加，细胞骨架回缩，不再向四周伸展，见图1B。Western blot检测发现随着秋水仙素使用量的增加，GMFG蛋白的表达量下降，见图2。这一结果说明，GMFG很可能在细胞骨架回缩运动中发挥着作用。

2.2 细胞免疫荧光法观察GMFG在LoVo细胞中的表达以及GMFG和F-actin在人脐静脉内皮细胞中的表达激光共聚焦显微镜观察细胞免疫荧光染色结果，正在发生有丝分裂的细胞(核深染，能够看到分离的染色体)，其GMFG染色的红色荧光强度较其他非有丝分裂细胞强，由于激光共聚焦显微镜下观察到的明显细胞核分裂数目有限，虽不能确认GMFG一定能够影响有丝分裂过程，但这一现象结合既往文献报道[12-13]，提示GMFG可能与细胞有丝分裂过程有关，见图3A。为此，在人脐静脉内皮细胞中进行细胞骨架(F-actin)和GMFG共染色观察二者是否具有相关性，激光共聚焦显微镜下发现GMFG在人脐静脉内皮细胞中表达增高，多处于细胞骨架回缩状态，罗丹明标记的鬼笔环肽染色显示弱或无明显细胞骨架形态，见图3B。

2.3 siRNA干扰LoVo细胞GMFG表达对其细胞增殖率的影响用siRNA干扰技术干扰LoVo细胞GMFG表达后，采用Edu方法检测细胞增殖情况，空白对照组增殖率为(44.18±2.68)%，空转染对照组增殖率为(39.12±2.36)%，siRNA-GMFG组增殖率为(30.10±1.79)%，siRNA GMFG组的细胞明显低于对照组和阴性对照组，差异有显著性意义(P < 0.05)，见图4。

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引言

结直肠癌是常见的恶性肿瘤之一，根据中国癌症登记中心统计分析表明自1998年以来结直肠癌的发病率逐步上升，据推算结直肠癌每年新发病例约为31万例，年死亡病例高达14万例，死亡率占所有肿瘤病例的7.09%[1-4]。结直肠癌的侵袭迁移与癌细胞、细胞外基质、上皮-间质转化、血管及淋巴转移相关，主要涉及wnt/β-Catenin、Notch、PI3K/Akt、
AKT-mTOR、HGF/C-Met、Integrin经典分子机制[5-8]，调控过程极为复杂，细胞内外调控网络都会对其造成影响，深入研究相关分子机制对结直肠癌的防治具有现实意义。
神经胶质成熟因子γ(glia maturation factor-gamma，GMFG)是一个分子质量为17 kD的小分子蛋白，与神经胶质成熟因子家族中的神经胶质成熟因子β高度同源，是细胞骨架运动重建过程中ADF/cofilin超家族蛋白成员之一[9-10]。细胞骨架由微管、微丝以及中间丝这3种主要的蛋白组成，它的主要作用是完成细胞的运动、维持细胞的形态以及胞吞、胞吐、信息传递、能量转换等[11-12]。GMFG可以通过细胞骨架重组来加强微血管内皮细胞、炎症细胞等细胞的功能，如细胞迁移、微管形成等[13-15]。在斑马鱼模型中GMFG的缺失严重影响节间血管的形成[16]。在免疫细胞中，GMFG可以通过调节肌动蛋白介导细胞骨架重组来促进中性粒细胞和T淋巴细胞的迁移[17-18]。此外，最新发现GMFG的表达与宫颈癌、卵巢癌、血液系统肿瘤的恶性生物学行为密切相关[19-22]，但是GMFG对结直肠癌细胞骨架运动和增殖的研究未见报道。该实验探讨GMFG对人脐静脉内皮细胞骨架运动以及结直肠癌LoVo细胞增殖的影响，探索GMFG与结直肠癌侵袭、迁移的可能机制。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

材料方法

1.1 设计体外细胞系观察实验。
1.2 时间及地点实验于2014年1月至2016年1月在南方医科大学南方医院临床医学实验研究中心完成。
1.3 材料人结直肠癌LoVo细胞、人脐静脉内皮细胞为南方医科大学临床实验研究中心保存(购买于中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心)。胎牛血清、DMEM培养基、Opti-MEM培养基、胰蛋白酶(Gibco公司)；Click-iT Edu
imaging kit(Invitrogen公司)；罗丹明B标记的鬼笔环肽
(Cytoskeleton公司)；GMFG兔源多克隆抗体(Proteintech公司)；荧光二抗(羊抗兔488，羊抗兔594，Abbkine公司)；HilyMax(同仁化学研究所)；辣根过氧化物酶标记的羊抗兔二抗(中山金桥)；秋水仙素(Sigma公司)；ECL发光液(Millipore公司)；细胞裂解液、BCA蛋白定量试剂盒、
Hochest-33342(碧云天公司)；siRNA干扰序列(广州锐博公司)。
1.4 方法
1.4.1 流式细胞术检测细胞周期取对数生长期的人脐静脉内皮细胞，调整细胞浓度为1×109 L-1接种于培养皿中分为3组，分别为对照组、0.5 mg/L秋水仙素组、1.0 mg/L秋水仙素组，其中秋水仙素组加入不同质量浓度的秋水仙素处理6 h，
用不含EDTA的胰蛋白酶消化成单细胞，时间不宜过长，用含胎牛血清的DMEM培养基及时终止消化，再用PBS洗涤细胞1次(2 000 r/min离心5 min)，收集细胞并调整细胞浓度为1×109 L-1，取1 mL单细胞悬液，离心去除上清，加入体积分数为70%冷乙醇500 μL固定过夜，4 ℃保存，染色前用PBS洗去固定液；加入100 μL RNase A 37 ℃水浴30 min，再加入400 μL PI染色混匀，4 ℃避光孵育30 min，用流式细胞仪记录激发光波长为488 nm处的红色荧光。
1.4.2 细胞免疫荧光检测GMFG的表达将LoVo细胞培养在激光共聚焦培养皿中，细胞浓度为1×108 L-1，待细胞贴壁后用PBS轻轻洗涤3次，加1 mL 40 g/L多聚甲醛室温固定
20 min，PBS洗涤3次，用山羊血清封闭液封闭1 h，PBS洗涤3次，滴加兔源GMFG一抗(1∶100)4℃孵育过夜；第2天用PBS洗涤3次后，滴加羊抗兔荧光二抗(1∶100，橙红色DyLight 594荧光标记)室温避光孵育1 h，PBS洗涤3次；加入Hochest 33342室温避光反应30 min，PBS洗涤3次，在智能激光共聚焦显微镜下拍照。
因罗丹明B标记的鬼笔环肽荧光显色为红光，因此在人脐静脉内皮细胞中观察GMFG与细胞骨架关系时，将GMFG的荧光二抗改为羊抗兔荧光二抗(1∶100，绿色DyLight 488荧光标记)，PBS洗涤3次，在室温避光条件下滴加适量罗丹明B标记的鬼笔环肽，室温孵育30 min，PBS洗涤3次，滴加Hochest33342染细胞核，室温避光孵育30 min，PBS洗涤3次后在激光共聚焦显微镜下拍照。
1.4.3 蛋白提取及Western blot检测GMFG蛋白的表达取对数生长期的人脐静脉内皮细胞，调整细胞浓度为1×109 L-1接种于培养皿中分为3组，分别为对照组、0.5 mg/L秋水仙素组、1.0 mg/L秋水仙素组，其中秋水仙素组加入不同质量浓度的秋水仙素处理6 h。用细胞裂解液裂解3组细胞，BCA试剂盒提取总蛋白并检测各组蛋白浓度，加入5×Loading Buffer并煮沸保存。选择12%分离胶和5%浓缩胶进行蛋白电泳，待电泳完毕后，选取目的蛋白分子质量区域凝胶进行转膜，转至PVDF膜后用5%脱脂牛奶封闭1 h，兔源GMFG一抗(1∶100)4 ℃摇床孵育过夜，TBST洗涤3次，每次10 min，室温下孵育辣根过氧化物酶标记的二抗1 h，TBST洗涤3次，每次10 min，用ECL化学发光法在暗室中进行发光。
1.4.4 siRNA技术干扰LoVo细胞GMFG表达构建siRNA-
GMFG干扰序列，设置空白对照组，空转染对照组和siRNA-
GMFG组，调整LoVo细胞浓度为1×108 L-1接种于激光共聚焦培养皿中，待LoVo细胞覆盖激光共聚焦培养皿40%-90%时，将siRNA-GMFG干扰序列添加到含有Opti-MEM无血清培养基的细胞培养皿中，加入转染试剂HilyMax轻轻混匀室温静置15 min，作用24 h后用EDU方法检测其对细胞增殖率的影响。
1.4.5 EDU检测细胞增殖率调整LoVo细胞浓度为1×108 L-1接种于激光共聚焦培养皿中，siRNA技术干扰LoVo细胞24 h
后，更换培养基，在培养皿中分别加入EDU染料A液，继续孵育6 h；0.3% BSA清洗细胞2次，加入1 mL 3.7%甲醛室温固定15 min；0.3% BSA清洗细胞2次，加入1 mL 0.5% TritonX-100室温孵育20 min；0.3% BSA清洗2次，加入适量1×Click-iT鸡尾酒反应液，室温避光孵育30 min；0.3% BSA清洗2次，Hoechst 33342避光室温孵育30 min；1 mL PBS清洗2次，避光激光共聚焦显微镜下拍摄20个视野，分别计数总的细胞数目和增殖细胞数，细胞增殖率=增殖细胞数目/
总细胞数目×100%，实验重复3次。
1.5 主要观察指标 ①秋水仙素对人脐静脉内皮细胞周期的影响；②秋水仙素对人脐静脉内皮细胞GMFG蛋白表达的影响；③细胞免疫荧光法观察GMFG在LoVo细胞中的表达；④细胞免疫荧光法观察F-actin在人脐静脉内皮细胞中的表达；⑤siRNA干扰LoVo细胞GMFG表达对其细胞增殖率的影响。
1.6 统计学分析采用SPSS 20.0软件进行数据处理。结果采用x±s表示，多组间比较使用单因素方差分析，方差齐两两比较用LSD法；如果方差不齐，结果用Welch法进行校正，多组均数间的两两比较用Dunnett’s T3法。P < 0.05为差异有显著性意义。

讨论

肿瘤进展的生物学过程表现为原位癌细胞脱离原发病灶，侵袭穿越基底膜向间质浸润性生长并穿越局部毛细血管或淋巴管迁移至靶器官血管或淋巴管内皮细胞发生黏附，在继发部位不断增殖形成肿瘤细胞转移灶 [23-25]。GMFG可能与肿瘤的恶性生物学行为密切相关，作者前期研究发现恶性程度更高的低分化结直肠癌细胞株中GMFG表达更高，干扰GMFG表达可以抑制结直肠癌细胞株LoVo的恶性生物学行为，外源性给予GMFG可以促进LoVo细胞的侵袭与迁移，抑制GMFG表达能影响细胞上皮-间质转化进程[26]。那么GMFG是否能通过调控细胞骨架运动参与肿瘤进展？作者进行了相关的探索研究。
实验采用秋水仙素抑制人脐静脉内皮细胞有丝分裂后，随着秋水仙素质量浓度的增加，G2/M期人脐静脉内皮细胞占比进一步增多，说明秋水仙素通过抑制有丝分裂过程中纺锤丝向两极牵引，使细胞停滞在G2期；与此同时，秋水仙素干预后人脐静脉内皮细胞中GMFG的表达降低，其细胞骨架形态伸展度也出现下降，提示GMFG与细胞增殖可能有关。INAGAKI等[27]研究也发现类似结果，GMFG在4周龄左右大鼠血清中表达达到高峰，随后迅速降低，同时发现GMFG在大鼠未分化组织中表达较高，如胸腺，这都说明GMFG可能与细胞的生长和分化有关。
细胞骨架运动参与了细胞增殖、分裂等生物过程，与肿瘤转移、侵袭密切相关。文献报道，GMFG与丝切蛋白结构相似，而丝切蛋白在细胞骨架运动中发挥着重要的作用，Rac或者Cdc42能通过Ser2的磷酸化和WASP/WAVE来活化GMFG，使GMFG与Arp2/3结合从而刺激极化，达到细胞骨架运动的目的[28]。该研究通过细胞免疫荧光方法观察发现在结直肠癌LoVo细胞有丝分裂中后期出现GMFG高表达；将细胞骨架(F-actin)与GMFG共同染色发现，细胞骨架伸展的细胞中GMFG染色较弱，细胞骨架回缩的细胞中GMFG染色较强。GMFG与肿瘤发生进展存在密切关系，GMFG已被证实与宫颈癌、结肠癌骨肉瘤等实体肿瘤淋巴结转移和肿瘤转移有关，但是具体机制仍不清楚[20-22，26，29]。另外SAADIYA等[19]
发现GMFG高表达与急性白血病的发病有关。实验通过siRNA干扰结直肠癌LoVo细胞的GMFG表达，用EDU方法检测干扰GMFG表达后LoVo细胞增殖率的变化，结果发现干扰GMFG表达后细胞的增殖率较空白对照组和阴性对照组均有下降，差异有显著性意义。GMFG-细胞骨架运动-肿瘤细胞增殖进展之间内在的调控机制究竟如何？这是一个有趣的方向，需要去进一步验证和探索。
结论：实验发现干扰GMFG表达能够抑制肿瘤细胞LoVo的增殖率，并且细胞骨架运动与GMFG的表达存在一定的相关性。从细胞骨架运动方向后续深入探讨GMFG调控结直肠癌细胞侵袭、迁移机制提供新的靶点。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

神经胶质成熟因子γ抑制人结直肠癌LoVo细胞增殖并影响人脐静脉内皮细胞的骨架运动

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本文评价

[1]	刘聪, 刘肃. miR-17-5p调控低氧诱导因子1α介导脂肪细胞分化及血管生成的分子机制[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1069-1074.
[2]	李偲, 赵婷, 谭戈, 郑雨林, 张若男, 吴艳, 唐俊明. 血小板源生长因子BB可促进骨骼肌成肌细胞增殖、分化与迁移[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1050-1055.
[3]	马泽涛, 曾晖, 王德利, 翁鉴, 冯松. 微小RNA-138-5p与软骨细胞增殖和自噬的关系[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(5): 674-678.
[4]	王玉姣, 刘丹, 孙嵩, 孙勇. 改良型富血小板纤维蛋白复合双相磷酸钙可促进兔骨髓间充质干细胞的活性[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(4): 504-509.
[5]	周继辉, 姚猛, 王岩松, 李新志, 周游, 黄卫, 陈文瑶. 新型纳米支架对神经干细胞生物行为及相关基因表达的影响[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(4): 532-536.
[6]	陈扬, 黄邓高, 高元慧, 王顺兰, 曹卉, 郑琳麟, 何浩伟, 罗思琴, 肖敬川, 张应爱, 张淑芳. 低强度脉冲场超声促进人脂肪间充质干细胞的增殖和黏附[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(25): 3949-3955.
[7]	周武, 王彬娉, 王雅雯, 程亚楠, 黄谢山. 转化生长因子β和骨形成蛋白2联合诱导小鼠成骨细胞系MC3T3-E1细胞的增殖与分化[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(23): 3630-3635.
[8]	陈思奇, 先德彬, 徐荣胜, 覃中杰, 张磊, 夏德林. 羟基磷灰石-磷酸三钙支架复合骨髓间充质干细胞和人脐静脉内皮细胞对大鼠颅骨缺损修复早期成血管的影响[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(22): 3458-3465.
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[10]	戴雅玲, 陈乐文, 何肖君, 林华伟, 贾微微, 陈立典, 陶静, 柳维林. miR-146b过表达慢病毒载体构建及对海马神经干细胞增殖的影响[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(19): 3024-3030.
[11]	艾力麦尔旦•艾尼瓦尔, 王玲, 古丽, 迪丽达尔•塔西甫拉提, 王珊, 尹宏斌. 转化生长因子β3对成骨细胞增殖和成骨能力的影响[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(17): 2664-2669.
[12]	王任先, 曹晶晶, 王宏刚, 万奔, 刘巍峰. 几种分散剂对纳米羟基磷灰石团聚、细胞内分布和细胞增殖的影响[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(16): 2500-2505.
[13]	姜涛, 吴硕, 李志强, 寿玺, 马依热·努尔买卖提, 马创, 魏琴. 血小板衍生生长因子BB促进SD大鼠骨髓间充质干细胞的增殖[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(13): 1976-1981.
[14]	颜南, 司晓凤, 曾亮, 田伟, 单广东, 熊礼硕, 杨炜杰, 王正东. 神经生长因子干预大鼠骨骼肌卫星细胞增殖及α-肌动蛋白的表达[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(13): 2030-2035.
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