补肾调肝方逆转泼尼松龙诱导的斑马鱼骨质疏松

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2695

中国组织工程研究 ›› 2020, Vol. 24 ›› Issue (20): 3146-3151.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2695

• 骨组织构建 bone tissue construction • 上一篇下一篇

补肾调肝方逆转泼尼松龙诱导的斑马鱼骨质疏松

林杰彬¹，石毓灵¹，高丰禾¹，梁祖建^1，2

¹广州中医药大学第三临床医学院，广东省广州市 510405；²广州中医药大学第三附属医院，广东省广州市 510240

收稿日期:2019-11-25 修回日期:2019-11-30 接受日期:2020-02-19 出版日期:2020-07-18 发布日期:2020-04-11
通讯作者: 梁祖建，男，博士，主任中医师，硕士生导师，广州中医药大学第三临床医学院，广东省广州市 510405；广州中医药大学第三附属医院，广东省广州市 510240
作者简介:林杰彬，男，1993年生，广东省汕头市人，汉族，广州中医药大学第三临床医学院在读硕士，主要从事中医药防治骨伤科疾病研究。
基金资助:
广东省自然科学基金项目(2018A0303130103)

Bushen Tiaogan prescription reverses prednisone-induced osteoporosis in zebrafish

Lin Jiebin¹, Shi Yuling¹, Gao Fenghe¹, Liang Zujian^{1, 2}

¹The Third Clinical College of Guangzhou University of Chinese Medicine, Guangzhou 510405, Guangdong Province, China;²The Third Affiliated Hospital of Guangzhou University of Chinese Medicine, Guangzhou 510240, Guangdong Province, China

Received:2019-11-25 Revised:2019-11-30 Accepted:2020-02-19 Online:2020-07-18 Published:2020-04-11
Contact: Liang Zujian, MD, Chief physician, Master supervisor, the Third Clinical College of Guangzhou University of Chinese Medicine, Guangzhou 510405, Guangdong Province, China; The Third Affiliated Hospital of Guangzhou University of Chinese Medicine, Guangzhou 510240, Guangdong Province, China
About author:Lin Jiebin, Master candidate, the Third Clinical College of Guangzhou University of Chinese Medicine, Guangzhou 510405, Guangdong Province, China
Supported by:
the Natural Science Foundation of Guangdong Province, No. 2018A0303130103

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：

斑马鱼骨质疏松模型：斑马鱼具有体型小、易养殖、成本低、发育迅速、产卵量大、对外界环境反应迅速、基因组与人类同源性高等特点而被广泛应用于科研领域。泼尼松龙诱导的斑马鱼骨质疏松模型具有简单、高效、高灵敏及低成本的优势，可克服哺乳动物实验强度大、耗时长、低灵敏、用样量大，以及细胞模型条件要求苛刻、作用环节单一等缺陷。该模型有望突破中药体内抗骨质疏松活性高效评价的制约，为早期、快速评价中药及其复方的抗骨质疏松活性提供思路与方法。

补肾调肝方：为自拟方，临床上应用多年，能明显改善高龄骨质疏松症患者疼痛症状和中医临床症状，方中包括骨碎补、狗脊、白芍、柴胡、郁金、当归、玫瑰花、川楝子、川芎、白术、合欢皮、菊花、石菖蒲、甘草，全方共奏补肾壮骨、疏肝解郁、理气止痛之功。

背景：前期研究发现，补肾调肝方能明显改善高龄骨质疏松症患者的疼痛和中医临床症状，疗效肯定，但缺乏相关的实验依据。

目的：探讨补肾调肝方的安全性及其对泼尼松龙诱导骨质疏松的治疗作用。

方法：选取受精后5 h的鱼卵分到24孔板中，每孔20枚，将不同浓度的补肾调肝方(生药质量浓度10，50，100，250，500 mg/L)分别加入到相应的孔，分别于受精后24，48，72，96 h观察胚胎的发育情况，并统计胚胎累计存活率及孵化率以评价补肾调肝方的安全性；将受精后3 d的斑马鱼卵分为对照组(0.5%二甲基亚砜)、泼尼松龙模型组(25 μmol/L)、阿仑膦酸钠组(阳性药物)、补肾调肝方(生药质量浓度10，50，100，250，500 mg/L)组，每组40条，每天换液至第8天后处死，用茜素红对各组斑马鱼幼鱼骨骼染色，进行显微检测、数码成像，并用图像软件定量分析骨骼染色区域来评价补肾调肝方抗骨质疏松的作用。

结果与结论：①低浓度补肾调肝方对胚胎存活率及孵化率无影响，而高浓度补肾调肝方可降低胚胎存活率及孵化率；②25 μmol/L泼尼松龙能成功诱导斑马鱼骨量显著丢失；③与模型组比较，50，100，250 mg/L的补肾调肝方可对抗泼尼松龙诱导的斑马鱼骨质疏松，并呈浓度依赖性；低质量浓度无明显的抗骨质疏松作用，高质量浓度抗骨质疏松作用呈下降趋势；④结果表明，25 μmol/L泼尼松龙能成功诱导斑马鱼骨质疏松模型的建立；成功评价了补肾调肝方的安全性，补肾调肝方在50 mg/L开始出现抗骨质疏松作用，在250 mg/L具有最为显著的抗骨质疏松作用。

ORCID: 0000-0003-3987-4904(林杰彬)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

关键词: 中医中药, 骨质疏松, 补肾调肝方, 斑马鱼, 泼尼松龙

Abstract:

BACKGROUND: Our previous studies have found that Bushen Tiaogan prescription can significantly reduce pain and improve the clinical symptoms of traditional Chinese medicine in elderly patients with osteoporosis. The clinical effect is positive, but there is no relevant experimental evidence.

OBJECTIVE: To explore the safety of Bushen Tiaogan prescription and its therapeutic effect on prednisolone-induced osteoporosis.

METHODS: The zebrafish juveniles 5 hours after fertilization were evenly distributed into 24-well plates at a density of 20 per well. Different concentrations of Bushen Tiaogan prescription (crude drug concentrations 10, 50, 100, 250, 500 mg/L) were added to the corresponding wells. The development of the embryos was observed at 24, 48, 72, 96 hours after fertilization, and the cumulative survival rate and hatching rate were used to evaluate the safety of Bushen Tiaogan prescription. The zebrafish juveniles 3 days after fertilization were randomly divided into blank control group (0.5% dimethyl sulfoxide), 25 μmol/L prednisolone model group, alendronate sodium positive drug group and Bushen Tiaogan prescription (10, 50, 100, 250, 500 mg/L) groups, with 40 in each group. The culture fluid was changed every day and executed at the 8^th day. Zebrafish juveniles were dyed using alizarin red for microscopic detection and digital imaging and the bone staining area was quantitatively analyzed by image software to evaluate the anti-osteoporosis activity of Bushen Tiaogan prescription.

RESULTS AND CONCLUSION: The low-concentration Bushen Tiaogan prescription had no effect on embryo survival rate and hatching rate, while the high-concentration Bushen Tiaogan prescription could reduce embryo survival rate and hatching rate. Prednisolone, 25 μmol/L, was able to successfully induce significant loss of bone mass in zebrafish. Compared with the model group, 50, 100 and 250 mg/L Bushen Tiaogan prescription could resist prednisolone-induced zebrafish osteoporosis in a concentration-dependent manner. At low concentrations, there was no significant anti-osteoporosis effect, and at high concentrations, anti-osteoporosis effect showed a downward trend. These findings indicate that 25 μmol/L prednisolone successfully induces the establishment of zebrafish osteoporosis model, and successfully evaluates the initial safety of Bushen Tiaogan prescription. Bushen Tiaogan prescription begins to show an anti-osteoporosis effect at 50 mg/L, and has the most significant anti-osteoporosis effect at 250 mg/L.

Key words: Chinese Traditional Medicine, osteoporosis, Bushen Tiaogan prescription, zebrafish, prednisolone

中图分类号:

林杰彬, 石毓灵, 高丰禾, 梁祖建. 补肾调肝方逆转泼尼松龙诱导的斑马鱼骨质疏松[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(20): 3146-3151.

Lin Jiebin, Shi Yuling, Gao Fenghe, Liang Zujian. Bushen Tiaogan prescription reverses prednisone-induced osteoporosis in zebrafish[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2020, 24(20): 3146-3151.

图/表（结果） 6

2.1 斑马鱼幼鱼的生长发育情况显微镜观察结果发现，24及48 hpf时胚胎未孵化成幼鱼，胚胎形态正常，未见明显畸形。72及96 hpf时胚胎孵化成幼鱼，各脏器发育基本完全，鱼体透明，在载玻片上易侧卧，显微镜下检视脏器形态清楚、直观，心脏区域心包未见肿大，各组斑马鱼幼鱼均无明显畸形。因此，与对照组相比，不同质量浓度补肾调肝方对斑马鱼幼鱼均未见明显毒性作用，结果见图1。

2.2 存活率结果不同质量浓度补肾调肝方对斑马鱼幼鱼存活率的影响见图2。药物处理96 hpf后，低浓度补肾调肝方(10，50，100，250 mg/L)对斑马鱼存活率无明显影响，而当药物浓度到达500 mg/L时，斑马鱼存活率出现下降，差异有显著性意义(P < 0.05)，提示高质量浓度补肾调肝方可以影响斑马鱼存活。

2.3 孵化率结果不同质量浓度补肾调肝方对斑马鱼胚胎孵化率的影响见图3。药物处理72 hpf后，低浓度补肾调肝方(10，50，100，250 mg/L)对斑马鱼孵化率无明显影响，而当药物浓度到达500 mg/L时，斑马鱼孵化率出现下降，差异有显著性意义(P < 0.05)，提示高质量浓度补肾调肝方可以影响斑马鱼胚胎孵化。

2.4 补肾调肝方对泼尼松诱导的斑马鱼骨质疏松的影响各组斑马鱼幼鱼(8 dpf)头骨茜素红染色的显微成像结果见图4，图像分析软件分析结果见图5，6。与对照组相比，模型组的骨染色矿化面积和累积吸光度值明显降低，差异有显著性意义(P < 0.00)，表明25 μmol/L泼尼松龙能够成功诱导斑马鱼骨量减少；与泼尼松龙模型组比较，100 mg/L阿仑膦酸钠溶液组中骨染色面积和累计吸光度值显著升高(P < 0.001)。补肾调肝方组中，在一定质量浓度内，随着补肾调肝方质量浓度增加，斑马鱼头骨染色面积和累计吸光度值均随之增加。10 mg/L补肾调肝方溶液中斑马鱼头骨染色面积和累计吸光度值与泼尼松龙组比较差异无显著性意义(P > 0.05)；补肾调肝方质量浓度为50 mg/L时，染色面积和累计吸光度值呈现极显著性增加(P < 0.01)；质量浓度为 100 mg/L时，染色面积和累计吸光度值呈现极显著性增加(P < 0.005)；质量浓度为250 mg/L时，染色面积和累计吸光度值呈现极显著性增加(P < 0.001)；当质量浓度增加到500 mg/L时，染色面积和累计吸光度值与模型组比较差异有显著性意义(P < 0.005)，但其染色面积和累计吸光度值均比250 mg/L时下降。结果说明50，100，250 mg/L的补肾调肝方可对抗泼尼松龙诱导的斑马鱼骨质疏松，并呈浓度依赖性；低质量浓度则无明显的抗骨质疏松作用，而高质量浓度组斑马鱼的头骨染色面积和累积吸光度值却呈下降趋势。

参考文献

[1] ENSRUD KE, CRANDALL CJ. Osteoporosis. Ann Int Med. 2017;167(3):17-32.
[2] PASKINS Z, JINKS C, MAHMOOD W, et al. Public priorities for osteoporosis and fracture research: results from a general population survey. Arch Osteoporos. 2017;12(1):45.
[3] 薛鹏,李玉坤. 2017年版《原发性骨质疏松症诊疗指南》解读[J]. 河北医科大学学报,2018,39(1):1-6.
[4] 姚立彬,李百占,张立强,等.补肾益气化瘀汤治疗原发性骨质疏松症的临床疗效观察[J].中国药物与临床,2017,17(2):282-283.
[5] 柯呈辉,何立江,吴文华.双膦酸盐防治骨质疏松性骨折的研究进展[J].中国骨质疏松杂志,2019,25(6):870-874.
[6] KARI G, RODECK U, DICKER AP. Zebrafish: an emerging model system for human disease and drug discovery. Clin Pharmacol Ther. 2007;82(1):70-80.
[7] FLEMING A, SATO M, GOLDSMITH P. High -throughput in vivo screening for bone anabolic compounds with zebrafish. J Biomol Screen. 2005; 10(8):823-831.
[8] WAGNER TU, RENN J, RIEMENSPERGER T, et al. The teleost fish medaka (Oryzias Latipes) as genetic model to study gravity dependent bone homeostasis in vivo. Adv Space Res. 2003;32(8):1459-1465.
[9] BRETAUD S, LI Q, LOCKWOOD BL, et al. A choice behavior for morphine reveals experience-dependent drug preference and underlying neural substrates in developing larval zebrafish. Neuroscience. 2007;146(3):1109-1116.
[10] 梁祖建,吴春飞,张百挡,等.补肾调肝方治疗高龄原发性骨质疏松症32例临床观察[J].中医杂志,2013,54(8):681-683.
[11] 陈仲骅.补肾调肝方联合阿仑膦酸钠治疗原发性骨质疏松症疗效观察[J].实用中医药杂志,2017,33(4):387-388.
[12] 林勇凯,黄宇新,梁桂洪,等.补肾调肝方治疗高龄骨质疏松症伴抑郁障碍32例疗效观察[J].中医杂志,2014,55(2):137-140.
[13] 葛静,凌洁,宁青,等.基于斑马鱼 M-Act/Tox 联合评价箭叶淫羊藿的代谢-效/毒作用[J].中草药,2019, 50(7):1614-1620.
[14] HUANG H, LIN H, LAN F, et al. Application of bone transgenic zebrafish in anti‐osteoporosis chemical screening. Animal Models Exp Med. 2018;1(1):53-61.
[15] TU KN, LIE JD, WAN CKV, et al. Osteoporosis: a review of treatment options. Pharm Ther. 2018;43(2):92-104.
[16] 区作明,李兰,田浩,等. 加味骨宝汤联合钙剂治疗绝经后骨质疏松症肝肾不足证38例临床观察[J].甘肃中医药大学学报,2019, 36(3):63-66.
[17] 万倩慧,胡浩.老年骨质疏松症的中医病因病机及辨证分型的探讨[J]. 新疆中医药, 2018, 36(6):126-128.
[18] 彭勋潜,李艳利,莫枢,等.原发性骨质疏松症的中医研究近况[J]. 临床医学研究与实践,2019, 4(9):203-204.
[19] 刘岩岩,姜兆荣,王丽敏,等.骨痹源流研究[J].辽宁中医药大学学报,2019,21(7):1673-842.
[20] 张霞,徐力生,许晓雪,等.锁阳80%乙醇提取物对去卵巢大鼠骨质疏松防治作用研究[J].中药药理与临床,2017,33(3):101-104.
[21] 严正杰,戴有金,侯道荣.白介素-10对去卵巢小鼠骨质疏松的作用[J]. 中国医药导报,2017,14(10):39-42.
[22] 何升华,任之强,王建,等.从血瘀对骨代谢的影响探讨血瘀在女性原发性骨质疏松症发病中的作用机制[J].中国骨质疏松杂志, 2017,23(1):69-73.
[23] 梁祖建,吴春飞,张百挡,等.补肾调肝方治疗高龄原发性骨质疏松症32例临床观察[J].中医杂志,2013,54(8):681-683.
[24] XIE XW, PAN LY, SUN YH. Growing with the world: rapid development of the zebrafish research in china and the china zebrafish resource center. Sci China Life Sci. 2015;58(4): 396-399.
[25] NUSSLEIN-VOLHARD C. Of flies and fishes. Science. 1994; 266(5185):572-574.
[26] 杨国柱,段涛,卢丽,等.桃红四物汤对泼尼松诱导斑马鱼骨质疏松的治疗作用[J].中国骨质疏松杂志,2017,23(8):1007-1010.
[27] 罗群,吴铁,易子琳,等.阿仑膦酸钠联合金天格对泼尼松龙致斑马鱼骨丢失作用机制的研究[J].今日药学,2018,28(7):5-9.
[28] 陈吴越,陈颖,栾会玲,等.二至丸抗氧化活性与抑制斑马鱼骨质疏松作用研究[J].海峡药学,2017,29(11):12-15.
[29] 景莉君,王长梅,韦英杰,等.接骨汤抗泼尼松龙诱导斑马鱼骨丢失的作用研究[J].世界科学技术-中医药现代化,2014,16(5): 1071-1075.
[30] 陈磊,刘怡,梁生旺.模式生物斑马鱼在中药研究中的应用[J].药学学报, 2012,47(4):434-439.

引言

材料方法

1.1 设计观察性实验。

1.2 时间及地点于2019年6至8月广州中医药大学科技创新中心实验室完成。

1.3 材料

1.3.1 实验动物实验所用6月龄野生型AB斑马鱼购买于南京一树梨花公司(由广州中医药大学临床药理研究所陈桐楷课题组提供)。

1.3.2 药物与试剂 MS-222(大连美伦，MB2517，中国)；泼尼松龙(上海笛柏生物科技有限公司，K900489，中国)；阿仑膦酸钠(国药准字H20083481，中国)；茜素红S染色液(Leagene，DS0059，中国)；多聚甲醛(广州晶欣生物科技有限公司，JX0100，中国)；二甲基亚砜(Sigma，D2650，美国)。

1.3.3 主要仪器 DMi8倒置荧光显微镜(Leica，D-35578)；三气培养箱(上海力申科学仪器有限公司，HF100)；分析天平(赛多利斯科学仪器有限公司公司，BSA224S-CW)。

1.3.4 药物溶液的配制

泼尼松龙溶液的配制：参考葛静等^[13]建立的方法，准确称取泼尼松龙90 mg，加入10 mL二甲基亚砜溶解，混匀即得25 mmol/L泼尼松龙储备液，使用时用配置好的E3按照1∶1 000稀释，终浓度为25 μmol/L。

中药提取物的配制：将浓缩的中药补肾调肝方分别用配置好的泼尼松龙溶液稀释到不同终质量浓度：10，50，100，250，500 mg/L，备用。

阿仑膦酸钠的配制：将阿仑膦酸钠加入超纯水使溶解，配制成50 g/L的母液，用配置好的泼尼松龙溶液稀释到终质量浓度为100 mg/L，备用。

1.3.5 药材提取补肾调肝方药材均由广州中医药大学第三附属医院提供，骨碎补15 g、狗脊15 g、白芍30 g、柴胡12 g、郁金15 g、当归15 g、玫瑰花12 g、川楝子12 g、川芎10 g、白术15 g、合欢皮15 g、菊花15 g、石菖蒲15 g、甘草10 g。以上中药投入5 L的带冷凝管的圆底烧瓶，加入1 600 mL蒸馏水，浸泡8 h，武火煮开，然后调至文火，微沸30 min，趁热过滤，滤液备用，滤渣加入800 mL蒸馏水再次煎熬，沸腾后20 min过滤，将收集的2次滤液合并浓缩至1 mL等于1 g原药材的浸膏，待其冷却后放入冰箱备用。

1.4 实验方法

1.4.1 斑马鱼的饲养及胚胎的收集 6月龄野生型AB斑马鱼养殖于(28.0±1)℃的环境中，保证14 h光照10 h黑暗，pH=6.8-7.5，给予充足的氧气，每天喂食2次。挑选适龄的繁殖斑马鱼，使其自由追逐交配产卵，收集30 min内产出的健康的卵。清洗挑选过的鱼卵均匀放置于直径为 10 cm的无菌的培养皿中加入20 mL的E3培养基(5 mmol/L NaCl、0.17 mmol/L KCl、0.33 mmol/L CaCl₂、0.33 mmol/L MgSO₄、0.5 mg/L亚甲基蓝)^[14]，放于(28.5±0.2) ℃的恒温培养箱中培养。

1.4.2 补肾调肝方的安全性评价选取健康的5 hpf(受精后小时数，hours post fertilization)的鱼卵均匀地分到24孔板中，每孔20枚鱼卵。将用E3溶液配置好的不同质量浓度的补肾调肝方水溶液(10，50，100，250，500 mg/L)分别加入到相应的孔中，每孔2 mL溶液，每个浓度设置2个复孔。分别于24，48，72，96 hpf观察胚胎的发育情况，并统计的胚胎累计存活率及孵化率。存活率、孵化率的计算方式为该时间点每孔的存活、孵化鱼卵的累计个数除以鱼卵总数(20)乘以100%。

1.4.3 斑马鱼骨质疏松模型的建立及分组实验分为对照组、模型组、阿仑膦酸钠(100 mg/L)组以及补肾调肝方 10 mg/L组、50 mg/L组、100 mg/L组、250 mg/L组、500 mg/L组。将发育至72 hpf的斑马鱼幼虫均匀的分布到12孔板中，每孔20条，2孔为一组共40条幼虫。每孔加入相应的溶液 4 mL，对照组阿仑膦酸钠组及各浓度的补肾调肝方溶液均含0.5%二甲基亚砜，所有组每24 h更换一次溶液，直到斑马鱼发育到8 dpf(受精后天数，days post fertilization)。

1.4.4 斑马鱼头骨茜素红染色将8 dpf大的斑马鱼幼虫安乐死(10X MS-222麻醉)。以40 g/L多聚甲醛固定24 h，随机每组抽取8条幼虫进行茜素红染色，对染色的斑马鱼幼虫进行显微镜镜检。运用Image J计算斑马鱼头部骨骼染色面积及吸光度。

1.5 主要观察指标 ①斑马鱼幼鱼的生长发育情况；②斑马鱼胚胎的累计存活率；③斑马鱼胚胎的孵化率；④斑马鱼头骨茜素红染色面积；⑤斑马鱼头骨茜素红染色累计吸光度值。

1.6 统计学分析所有的数据使用GraphPad Prism 7软件进行分析，统计方法采用One-way ANOVA，数据呈现形式为x(_)±s，P < 0.05认为差异有显著性意义。

讨论

现代医学认为，骨质疏松症是一种全身性骨骼疾病，由于骨矿物质密度低，骨微结构、矿化受损或骨强度降低而增加了骨折的风险^[15]。骨质疏松症属于中医学“骨痹”“骨痿”范畴，历代医家对其病机的认识主要包括肾精亏虚，脾胃失调，瘀阻脉络，肝失疏泄^[16-19]。其中肾中精气的盛衰是根本，脾胃功能失调导致气血不足^[20]，肝失疏泄导致气血瘀滞是诱发骨质疏松的重要原因，若肝失疏泄，气血运行不畅，其发病机制可能是淤血导致骨内微循环障碍，使新骨形成及旧骨的吸收减少^[21-22]。因此，骨质疏松治疗的主要原则是补肾调肝。

补肾调肝方中骨碎补为君药，起补肾益精之效；狗脊补肝肾、强腰膝；白芍养血柔肝、缓急止痛；柴胡疏肝解郁，郁金行气解郁、活血止痛；当归补血；川芎活血祛瘀、行气开郁、祛风止痛；玫瑰花行气解郁、和血、止痛；川楝子舒肝、行气止痛，共为臣药。白术健脾益气，既能实土以御木侮，且使营血生化有源；石菖蒲开窍、豁痰、理气、活血、散风、祛湿；菊花散风清热、平肝阳；合欢皮解郁、和血、宁心、安神为佐药。甘草调和诸药为使药。全方共奏补肾壮骨、疏肝解郁、理气止痛之功^[23]。

作为研究工具，斑马鱼因具有体型小、易养殖、成本低、发育迅速、产卵量大、体外受精、体外发育、胚胎透明、对外界环境反应迅速、基因组与人类同源性高等特点而被广泛应用于科研领域^[24-25]，近年来糖皮质激素诱导的斑马鱼骨质疏松模型已被逐步应用于药物筛选当中^[26-28]。泼尼松龙诱导的斑马鱼骨质疏松模型具有简单、高效、高灵敏及低成本的优势，克服哺乳动物实验强度大、耗时长、低灵敏、用样量大，以及细胞模型条件要求苛刻、作用环节单一等缺陷^[29]。该模型有望突破中药在体抗骨质疏松活性高效评价的制约，为早期、快速评价中药及其复方的抗骨质疏松活性提供思路与方法。但目前斑马鱼的中药给药换算方法仍处于探索阶段，在斑马鱼实验之后，应当再搭配使用其他动物模型，特别是哺乳动物(如小鼠等)模型进行进一步的验证^[30]。

此次研究发现，阿仑膦酸钠作为临床当中常用的抗骨质疏松药物，对泼尼松导的斑马鱼骨质疏松有较好的治疗作用。此次实验用斑马鱼骨质疏松模型成功评价了补肾调肝方防治骨质疏松的作用以及补肾调肝方的初步安全性。数据显示，补肾调肝方在50 mg/L开始出现抗骨质疏松作用，在250 mg/L具有最为显著的抗骨质疏松作用；在质量浓度增加至500 mg/L时，头骨染色面积和累计吸光度值有所降低，表明药物的抗骨质疏松作用不是随着质量浓度增大而效应增强的，这可能与药物在斑马鱼体内的吸收和代谢有关，具体原因有待进一步研究。质量浓度在500 mg/L以上对斑马鱼幼鱼的心血管发育虽未见明显影响，但会降低斑马鱼胚胎的累计存活率及孵化率。结果显示，抗骨质疏松有效剂量浓度与出现中毒症状浓度相差近10倍，提示补肾调肝方治疗骨质疏松的临床剂量范围内是安全的。此次研究为斑马鱼模型高效评价中药抗骨质疏松抗效果的合理性、可靠性提供了依据，后期将以补肾调肝方对骨质疏松症基因及其蛋白表达的干预作用为主，探讨补肾调肝方产生抗骨质疏松症作用的机制。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

补肾调肝方逆转泼尼松龙诱导的斑马鱼骨质疏松

Bushen Tiaogan prescription reverses prednisone-induced osteoporosis in zebrafish

PDF

可视化

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

图/表（结果） 6

参考文献

相关文章 15

引言

材料方法

讨论

文章快阅

延伸阅读

编辑推荐

Metrics

本文评价

[1]	唐辉, 姚志浩, 罗道文, 彭双麟, 杨双林, 王浪, 肖金刚. 高脂高糖饮食结合链脲佐菌素建立2型糖尿病性骨质疏松症大鼠模型[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(8): 1207-1211.
[2]	李中峰, 陈明海, 凡一诺, 魏秋实, 何伟, 陈镇秋. 右归饮治疗激素性股骨头坏死作用机制的网络药理学分析[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(8): 1256-1263.
[3]	侯广原, 张继学, 张志军, 孟祥晖, 段文, 高维陆. 骨水泥强化椎弓根螺钉内固定治疗伴骨质疏松腰椎退行性疾病的1年随访[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(6): 878-883.
[4]	李时斌, 赖渝, 周毅, 廖建钊, 章晓云, 张璇. 激素性股骨头坏死发病机制及相关信号通路的靶点效应[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(6): 935-941.
[5]	肖方骏, 陈树东, 栾继耀, 侯宇, 何坤, 林定坤. 丹参干预骨质疏松症：网络药理学解释的作用机制[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(5): 772-778.
[6]	刘波, 陈祥和, 杨康, 余慧琳, 陆鹏程. DNA甲基化在运动干预骨质疏松中的作用机制[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(5): 791-797.
[7]	聂少波, 李建涛, 孙基恩, 赵喆, 赵燕鹏, 张里程, 唐佩福. 内侧支撑髓内钉置入支撑治疗严重骨质疏松性股骨转子间骨折的力学稳定性[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(3): 329-333.
[8]	钟远鸣, 万通, 钟锡锋, 吴卓檀, 何炳坤, 吴思贤. 弯角与单侧椎弓根入路椎体成形治疗骨质疏松性椎体压缩骨折有效性与安全性的Meta分析 [J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(3): 456-462.
[9]	朱云, 陈渝, 邱皓, 刘盾, 靳国荣, 陈诗谋, 翁政. 对侧皮质锁定螺钉治疗骨质疏松股骨骨折的有限元分析[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(24): 3832-3837.
[10]	冯冠成, 方剑明, 吕浩然, 张东升, 韦家冬, 俞兵兵. 骨水泥弥散分布方式如何影响经皮椎体成形后的早期疗效[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(22): 3450-3457.
[11]	刘畅, 李大同, 刘元, 孔令擘, 郭瑞, 杨利学, 郝定均, 贺宝荣. 急性症状性骨质疏松性胸腰椎压缩骨折椎体强化手术后疗效欠佳：与骨水泥、骨密度、邻近骨折的关系[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(22): 3510-3516.
[12]	蔡群斌, 杨丽娟, 李秋民, 陈心敏, 郑利钦, 黄培镇, 林梓凌, 姜自伟. 基于断裂力学认识老年股骨转子间骨折后内固定取除的可行性[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(21): 3313-3318.
[13]	刘玉琳, 李国泰. 高压氧、振动训练与虾青素联合干预糖尿病骨质疏松模型大鼠骨密度、糖代谢及氧化应激的变化[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(20): 3117-3124.
[14]	蔺海山, 米尔阿里木•木尔提扎, 李鹏, 马超, 王利. 绝经后女性髋部骨折患者骨骼肌肌纤维特点与骨密度的相关性[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(20): 3144-3149.
[15]	胡广, 关智宇, 张开伟. 三七总皂苷干预去势骨质疏松性骨折模型大鼠的作用机制[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(2): 172-177.