局部注射布比卡因建立大鼠骨骼肌损伤模型的组织形态学评价

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2016.18.005

中国组织工程研究 ›› 2016, Vol. 20 ›› Issue (18): 2615-2621.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.18.005

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局部注射布比卡因建立大鼠骨骼肌损伤模型的组织形态学评价

陈玉佩¹，刘通¹，邹德辉¹，张莉¹，毛颖秋²，霍则军³

北京中医药大学，1针灸推拿学院，2科研实验中心，北京市 100029；3北京大学第三医院中医科，北京市 100191

收稿日期:2016-02-15 出版日期:2016-04-29 发布日期:2016-04-29
通讯作者: 张莉，博士，教授，北京中医药大学针灸推拿学院，北京市 100029
作者简介:陈玉佩，女，1990年生，陕西省安康市人，汉族，北京中医药大学在读硕士，主要从事针灸临床机制研究。
基金资助:
国家自然科学基金面上项目(81574052)，电针“委中穴”对多裂肌卫星细胞增殖过程中的自噬调控

Histomorphological assessment of a rat model of skeletal muscle injury induced by local injection of bupivacaine

Chen Yu-pei¹, Liu Tong¹, Zou De-hui¹, Zhang Li¹, Mao Ying-qiu², Huo Ze-jun³

1School of Acupuncture-Moxibustion and Tuina, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100029, China; 2Center of Scientific Experiment, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100029, China; 3Department of Traditional Chinese Medicine, Third Hospital, Peking University, Beijing 100191, China

Received:2016-02-15 Online:2016-04-29 Published:2016-04-29
Contact: Zhang Li, M.D., Professor, School of Acupuncture- Moxibustion and Tuina, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100029, China
About author:Chen Yu-pei, Studying for master’s degree, School of Acupuncture-Moxibustion and Tuina, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100029, China
Supported by:
the National Natural Science Foundation of China, No. 81574052

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：
布比卡因：属于一种局麻药，1959年Brunm报道局麻药会引起骨骼肌形态的异常改变。所有的局麻药都具有肌肉毒性，其中利多卡因最轻而布比卡因最为严重。有研究称一次性直接注射局麻药0.5%盐酸布比卡因致大面积肌纤维坏死和广泛吞噬作用之后快速再生。值得关注的是，肌卫星细胞不受局麻药的影响，这也是肌纤维损伤后再生的关键所在。
多裂肌：腰骶段多裂肌起自骶骨背面，胸腰椎横突，向上斜行，止于上方2-4个椎体横突，与腰椎紧密相连，主要的功能是稳定腰椎，参与脊柱背伸运动，维持脊柱腰段前凸，是脊柱动力性稳定的重要因素。研究证明，腰部多裂肌对L_4/5节段稳定性的贡献高达2/3，其中以深部多裂肌为主，而浅部多裂肌则更多地参与腰椎的伸和旋转。

背景：布比卡因神经毒性、心脏毒性的报道屡见不鲜，而关于布比卡因所致肌肉毒性的文章却不多。

目的：建立并评价局部肌肉注射布比卡因不同时间点大鼠多裂肌组织形态和超微结构变化。

方法：选用体质量280-320 g的雄性SD大鼠54只随机分为空白组(18只)、模型组(18只)、模型对照组(18只)，每组随机分为4，7，14 d 3个亚组，每个亚组6只大鼠。麻醉后于双侧L₄_-₅多裂肌注射0.5%布比卡因溶液，通过光学显微镜和透射电子显微镜观察分析造模后4，7，14 d多裂肌形态及超微结构改变。

结果与结论：①肌肉注射0.5%布比卡因可导致大鼠骨骼肌损伤。②苏木精-伊红染色可见局部多裂肌纤维出现坏死、炎细胞浸润、少量巨噬细胞等。③透射电镜下可见肌原纤维以及各带、线排列紊乱，结构崩解，甚至消失；线粒体结构异常，嵴减少、消失等；模型7，14 d组可见多裂肌增生、修复等变化。

④模型组骨骼肌超微结构变化分值明显高于空白组和模型对照组(P < 0.05)；模型4 d组高于模型7，14 d组(P < 0.05)；模型7 d组高于模型14 d组(P < 0.05)。⑤结果表明一次性肌肉注射0.5%布比卡因，可发生大鼠骨骼肌形态学超微结构上的病理改变，以此建立的大鼠多裂肌损伤模型较为理想。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程
ORCID: 0000-0002-0402-6916(陈玉佩)

关键词: 实验动物, 运动系统动物模型, 布比卡因, 骨骼肌病理损伤, 大鼠, 动物模型, 国家自然科学基金

Abstract:

BACKGROUND: The neurotoxicity and cardiotoxicity of bupivacaine have been reported frequently. However, the studies on bupivacaine-induced muscle toxicity are few.

OBJECTIVE: To establish and evaluate local intramuscular injection of bupivacaine on the changes in histomorphology and ultrastructure of rat multifidus muscle at various time points.

METHODS: A total of 54 male Sprague-Dawley rats weighing 280-320 g were randomly divided into black group (n=18), model group (n=18) and model control group (n=18). Each group was then equally subdivided into three subgroups according to time points (4, 7 and 14 days) (n=6). Both sides of multifidus muscle of the rats (L₄ and L₅) were injected with 0.5% bupivacaine. The morphological and ultrastructural changes of multifidus muscle were observed and analyzed with light microscope and transmission electron microscope at 4, 7 and 14 days after model establishment.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) A single intramuscular injection of 0.5% bupivacaine induced muscular damage. (2) Hematoxylin-eosin staining results showed fiber necrosis, inflammatory cell infiltration, and a small amount of macrophages in local skeletal muscle. (3) Under the transmission electron microscope, the structure of myofibrils was destroyed or disintegrated; kinds of bands and lines were indistinct, disrupted or disappeared; the structure of mitochondria was abnormal, the mitochondrial cristae were reduced or disappeared. In the 7- and 14-day groups, multifidus muscle proliferated and repaired. (4) Ultrastructural change scores in skeletal muscle were significantly higher in the model group than in the blank and model control groups (P < 0.05). Above scores were significantly greater in the 4-day group than in the 7- and 14-day groups (P < 0.05), and higher in the 7-day group than in the 14-day group (P < 0.05). (5) Results suggest that a single intramuscular injection of 0.5% bupivacaine can result in pathological changes of skeletal muscle from morphology and ultrastructure. This method can establish a suitable model of skeletal muscle injury.
中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程

Key words: Bupivacaine, Muscle, Skeletal, Models, Animal, Tissue Engineering

陈玉佩，刘通，邹德辉，张莉，毛颖秋，霍则军. 局部注射布比卡因建立大鼠骨骼肌损伤模型的组织形态学评价[J]. 中国组织工程研究, 2016, 20(18): 2615-2621.

Chen Yu-pei, Liu Tong, Zou De-hui, Zhang Li, Mao Ying-qiu, Huo Ze-jun. Histomorphological assessment of a rat model of skeletal muscle injury induced by local injection of bupivacaine[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2016, 20(18): 2615-2621.

图/表（结果） 2

2.1 造模成功动物数量参加实验的SD大鼠共54只，均进入结果分析，中途无脱落。

2.2 模型创新性目前，常用的药物注射所致骨骼肌损伤动物模型有完全弗氏佐剂及布比卡因等。布比卡因多用于造成比目鱼肌、腓肠肌、胫前肌等损伤。实验使用布比卡因致与腰痛密切相关的多裂肌损伤，不仅可以观察布比卡因的肌肉毒性，还用于观察腰痛与多裂肌相关关系的研究。

2.3 模型更接近临床实践腰痛致病原因多、机制复杂，越来越多的研究发现，腰痛在很大程度上与维持腰椎稳定的腰部多裂肌功能状态之间有着互为因果的关系，多裂肌的损伤、萎缩以及功能紊乱与腰痛的发生密切相关。因此该模型不仅能够研究布比卡因的肌肉毒性，还能更好的揭示腰痛与多裂肌损伤之间的关系。

2.4 各组大鼠腰多裂肌形态学改变

空白组(图1A，B)：纵切面可见排列紧密、规律的纵向肌纤维，肌纤维粗细均匀，肌间隙大小基本一致，可见有若干个胞核分布于每个肌纤维膜下。横切面可见肌细胞呈较为规则的多边形，大小均匀，排列整齐，肌间隙大小一致，一个或数个胞核位于细胞的边缘。

模型对照组(图1C，D)：纵切面和横切面观察均与空白组类似，偶见细胞间质轻微水肿，肌纤维排列仍整齐，形态未见异常。

模型4 d组(图1E，F，G)：低倍显微镜下见骨骼肌大片坏死，极少数未受损肌细胞，高倍显微镜下见大量坏死肌纤维碎片，以炎性细胞浸润为主，散在可见巨噬细胞吞噬坏死碎片，可见少量新生的肌纤维。

模型7 d组(图1H，I)：纵切面可见损伤局部出现较多的红色新生肌纤维，纤维直径小，胞核多数在肌纤维的中央。横切面可见中央核的新生纤维。

模型14 d组(图1J，K)：纵切面可见损伤区域大部分被新生的肌纤维所代替。横切面可见新生中央核细胞，新生肌纤维直径较正常肌纤维小。

空白组(图2A，B)：横切面可见肌丝束被肌浆膜分隔，形成肌原纤维，肌丝横断面呈点状，线粒体结构正常，肌节和肌浆膜完整。纵切面可见肌原纤维排列紧密，横纹明显，A带、I带、Z线、H区、M线清晰，呈交替规则排列，肌浆膜完整无破裂，肌核形态正常，核膜光滑。

线粒体分布均匀，包膜完整，嵴无断裂。

模型对照组(图2C，D)：纵切面和横切面超微结构与空白组类似，偶可见单个肌原纤维结构不连续，但总体排列整齐，个别线粒体肿胀，整体结构未见异常。

模型4 d组(图2E，F)：可见肌原纤维排列混乱，无法区分A、I带，其中I带结构坏死，M线消失，Z线模糊、扭曲，甚至流失、断裂，呈锯齿状、波纹状变化；单个肌节、肌原纤维或多个相连续的肌节、肌原纤维的结构完全崩解、消失，肌节短缩，可能与I、H、M线流失有关；肌丝排列紊乱，甚至肌丝溶解、消失，肌间隙加宽，肌原纤维变得疏松，有空泡现象，有可能是降解的肌原纤维或细胞器；细胞间质水肿明显；核肿胀或固缩，肌膜皱缩，肌膜局部呈三角形状“delta”损伤；线粒体肿胀、增生、有的缩小，甚至结构消失，线粒体嵴减少、消失，但包含絮状物，伴溶酶体空泡出现，这有可能是病灶所在。肌膜间可见肿大、扭曲、变形的卫星细胞。

模型7 d组(图2G)：相比模型4 d组肌原纤维排列紊乱情况减轻，基本可分辨A、I带，Z线扭曲，流失，呈波纹状，肌节增长、肌原纤维结构松散，肌丝不完整，肌间隙较4 d模型组相比变窄；基膜下仍有线粒体聚集，大小不一或形状异常，线粒体内包含少量絮状物，有空泡现象。

模型14 d组(图2H)：肌原纤维排列比较整齐，与模型7 d组相比A、I、H带、Z、M线较清晰，界限较清楚，少量Z线扭曲；与模型7 d组相比，肌原纤维、肌节结构较完整，但仍有少量纤维和肌节断裂处，肌浆网轻微肿胀；肌间隙接近正常；线粒体结构接近正常，但仍有少量肿胀线粒体存在。与模型7 d组相比，模型14 d组超微结构有明显好转。

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引言

材料方法

1.1 材料

1.1.1 造模动物及分组清洁级健康成年雄性SD大鼠54只，体质量280-320 g，由维通利华实验动物中心提供，许可证号：SCXK(京)2012-0001。所有大鼠按体质量分层，采用随机数字表法分为空白组(18只)、模型组(18只)、模型对照组(18只)，每组再随机分为4，7，14 d亚组，每个亚组6只大鼠。

1.1.2 药品和给药方式布比卡因(美国Sigma公司(B5274-1G)；10%水合氯醛(北京百诺威生物科技有限公司)；40 g/L多聚甲醛(北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司)；2.5%戊二醛水溶液(北京百诺威生物科技有限公司)；生理盐水(北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司)。水合氯醛使用腹腔注射，布比卡因和生理盐水均使用肌肉注射。

1.2 多裂肌损伤动物模型制备模型组大鼠适应性喂养1周后，10%水合氯醛(350 mg/kg)腹腔注射麻醉，选择双侧脊柱L₄、L₅水平两旁的4个点，使用一次性4号针头注射器抽取0.5%布比卡因肌肉注射400 μL(100 μL× 4)，针头紧贴棘突旁进入肌肉，直到接触关节突和乳突所在的骨面回抽套管1 mm无血，表明针头已到达多裂肌，各点分别注射布比卡因100 μL，时间不得小于 3 s，以利于药物的吸收^[9]。单次注射完成造模。模型对照组采用同样方法注射生理盐水。空白组不做任何处理。苏木精-伊红染色及电镜观察结果作为模型成功标准。

1.3 取材方法各组分别在造模后的第4，7，14天同步取材6只。10%水合氯醛(350 mg/kg)腹腔注射麻醉后，剔除背部皮毛、筋膜，充分暴露腰部肌肉，剥离最长肌和髂肋肌，锐性切取L₄和L₅水平多裂肌组织，左侧多裂肌置于40 g/L多聚甲醛溶液固定，取右侧约1 mm× 1 mm×1 mm多裂肌迅速置于2.5%戊二醛溶液固定，操作过程保证无菌。

1.4 样本处理

1.4.1 苏木精-伊红染色方法左侧多裂肌经40 g/L多聚甲醛溶液固定48 h之后，常规梯度乙醇(体积分数分别为50%，70%，80%，90%，95%，100%)脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，连续切片，然后对切片进行二甲苯脱蜡，梯度乙醇(体积分数分别为100%，95%，90%，80%，70%)至水洗；苏木精染色5 min，自来水冲洗；盐酸乙醇分化10 s，自来水冲洗10 min，置于伊红液2 min，经苏木精-伊红染色后，再脱水、透明，封固。

显微镜下观察、釆集图像，利用无偏体视学技术，光镜下(×400)全视野无偏采样方法每张切片选取3个视野，采用Image-professional plus 6.0软件进行图像分析。

1.4.2 透射电子显微镜技术取右侧1 mm×1 mm× 1 mm多裂肌，经2.5%戊二醛固定24 h，PBS冲洗3次，1%四氧化锇后固定1. 5 h，冲洗2次，丙酮(50%，70%，80%，90%，100%)梯度脱水，环氧树脂包埋，半薄切片定位，超薄切片机(LEICA-EMUC7，德国)进行超薄切片，2%醋酸双氧铀、2%柠檬酸铅染色。使用透射电子显微镜(JEM-1230型)进行拍照，观察各组样本的骨骼肌超微结构变化。采用张学林等^[10]方法，用得分分值量化骨骼肌超微结构变化，评分标准：肌膜下出现线粒体聚积且大小不一得1分；Z线水纹状、肌原纤维之间出现脂褐素或降解小体，符合其中任何一项得2分；线粒体肿胀、横跨两个Z线或呈晶格状，符合其中任何一项得3分。上述得分分值在同一样本中可累加，由此得出骨骼肌超微结构变化分值。

1.5 主要观察指标 ①各组大鼠腰多裂肌形态学改变。②各组大鼠骨骼肌超微结构变化。

1.6 统计学分析应用SAS 9.3统计软件进行统计学处理。计量资料以x(_)±s表示，各组均服从正态分布，进行独立样本t 检验。P < 0.05为差异有显著性意义，P < 0.01为差异有非常显著性意义。

讨论

3.1 布比卡因与骨骼肌损伤骨骼肌损伤是临床常见疾病所发生的病理变化之一，研究骨骼肌损伤修复过程及干预手段的有效性，对于运动系统疾病的预防、治疗和康复具有重要意义。建立符合临床发病机制的哺乳类动物模型则是研究骨骼肌损伤修复的第一步，目前公认的骨骼肌损伤动物模型有肌肉拉伸实验模型^[11]、电刺激损伤模型^[12]、下坡跑骨骼肌损伤模型^[13]、骨骼肌钝挫伤模型^[14]、缺血再灌注损伤模型^[15]、药物注射等^[16]。

布比卡因被认为是肌肉毒性最强的一种局麻药^[17-19]。早在1959年，Burn就首次提出了局麻药会引起肌组织形态学改变的观点^[20]。Gergin等^[21]分别以0.5%的布比卡因、罗哌卡因、左布比卡因单次注入大鼠腓肠肌，结果显示0.5%布比卡因引起的细胞和肌肉组织损伤最严重。Benoit等^[22]以0.5%布比卡因单次注入股薄肌和股后侧肌，观察不同时间点骨骼肌结构的变化，结果显示布比卡因会引起骨骼肌损伤，并诱导骨骼肌修复。Galbes等^[23]使用成肌细胞培养的方法来研究布比卡因的肌肉毒性，结果显示布比卡因引起活性氧增多、氧化应激、肌质网破坏、激活caspases-9和 caspases-7等系列变化。Cherng等^[24]研究表明，布比卡因引起的损伤与剂量有关，其中0.5%、1%布比卡因可引起明显肌肉损伤。因此，实验选取单次肌肉注射0.5%布比卡因建立大鼠骨骼肌损伤模型，结果空白组与模型4，7 d组相比差异有非常显著性意义(P < 0.01)；空白组与模型14 d组相比差异有显著性意义(P < 0.05)；模型4，7，14 d组与模型对照4，7，14 d组相比差异有非常显著性意义(P < 0.01)。因此，从骨骼肌的形态学以及超微机构变化来看，单次肌肉注射0.5%布比卡因(100 μL×4)可以模拟大鼠骨骼肌损伤。

布比卡因引起骨骼肌损伤的机制目前尚不十分明确。有研究认为细胞内Ca²⁺浓度的升高是布比卡因引起骨骼肌病理变化的可能原因^[25-26]。Cherng等^[24]认为骨骼肌内谷氨酸水平升高与布比卡因引起的剂量依赖性肌肉损伤可能有一定的关联。Li等^[27]研究表明自噬体清除障碍可能是布比卡因肌肉毒性的机制。从实验结果看，Z线的变化可能是布比卡因导致肌肉毒性的可能原因。从骨骼肌超微结构分析，空白组的Z线清晰，界限清楚，排列整齐；模型4 d组Z线模糊、扭曲、甚至流失、断裂，呈锯齿状、波纹状变化等；模型7 d组Z线扭曲，流失，呈波纹状，整体情况较模型4 d组有好转；模型14 d组Z线较清晰，界限较清楚，少量Z线扭曲。Z线是骨骼肌肌节形态上的分界线，是肌原纤维的骨架结构，是形成肌节的基础。研究表明，肌节中肌原纤维的降解与更新也是从Z线中解离，而后被降解^[28]。有学者认为，Z线是肌原纤维中对机械、化学变化最敏感的部位，也最容易产生形态学变化^[29-31]。由此可见，Z线在保持正常肌节结构方面发挥重要作用。

综上所述，实验通过局部一次性注射布比卡因观察到肌纤维以Z线变化为代表的超微结构病理改变。以此模拟的大鼠多裂肌损伤模型较为理想，为进一步研究哺乳动物骨骼肌损伤修复提供了研究基础。

3.2 模型创新点实验采用布比卡因致骨骼肌损伤模型，已被国内外学者广泛应用于研究比目鱼肌、腓肠肌、胫前肌等骨骼肌损伤的相关研究，文章的创新点主要体现在：①量化了损伤标准。虽然已有研究表明0.5%布比卡因可致局部骨骼肌坏死和肌卫星细胞再生^[32]，但其损伤范围没有得到量化，实验采用多点定量注射布比卡因可以更好地量化观察布比卡因的肌肉毒性，为进一步研究布比卡因肌肉毒性与药量之间的关系打下基础。②选用腰部多裂肌为损伤点。腰部竖脊肌深面的多裂肌是稳定腰椎的“钢索”，多裂肌损伤、萎缩等功能紊乱可以影响腰椎稳定性，引发腰痛。因此，实验所采用的骨骼肌损伤模型，不仅可以研究布比卡因对骨骼肌损伤程度，而且为该课题的后续研究建立良好的腰痛模型。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程

局部注射布比卡因建立大鼠骨骼肌损伤模型的组织形态学评价

Histomorphological assessment of a rat model of skeletal muscle injury induced by local injection of bupivacaine

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[1]	曾祯, 胡经纬, 李璇, 唐琳梅, 黄志强, 李明星. 超声造影定量分析重度失血性休克再灌注模型大鼠复苏期的肾血流灌注[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(8): 1201-1206.
[2]	唐辉, 姚志浩, 罗道文, 彭双麟, 杨双林, 王浪, 肖金刚. 高脂高糖饮食结合链脲佐菌素建立2型糖尿病性骨质疏松症大鼠模型[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(8): 1207-1211.
[3]	伦志刚, 金晶, 王添艳, 李爱民. 过氧化物还原酶6干预骨髓间充质干细胞增殖及体外向神经谱系诱导分化[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1014-1018.
[4]	邹刚, 徐志, 刘子铭, 李豫皖, 杨继滨, 金瑛, 张骏, 葛振, 刘毅. 人脱细胞羊膜支架促进Scleraxis修饰人羊膜间充质干细胞体外成韧带分化[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1037-1044.
[5]	陈俊毅, 王宁, 彭称飞, 朱伦井, 段江涛, 王烨, 贝朝涌. 脱钙骨基质与慢病毒介导沉默P75神经营养因子受体转染骨髓间充质干细胞构建组织工程骨[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(4): 510-515.
[6]	姜涛, 马磊, 李志强, 寿玺, 段明军, 吴硕, 马创, 魏琴. 血小板衍生生长因子BB诱导骨髓间充质干细胞向血管内皮细胞分化[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(25): 3937-3942.
[7]	徐晓明, 陈艳, 宋倩, 袁露, 顾加明, 张丽娟, 耿洁, 董坚. 人胎盘间充质干细胞凝胶促进SD大鼠放射性皮肤损伤的愈合[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(25): 3976-3980.
[8]	郝晓娜, 张英杰, 李玉云, 许涛. 过表达脯氨酰寡肽酶的骨髓间充质干细胞修复肝纤维化模型大鼠[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(25): 3988-3993.
[9]	徐伟龙, 左媛, 辛大奇, 贺晨阳, 赵鹏, 史鸣, 周博源, 刘雅婷, 赵岩. 急性钳夹型脊髓损伤模型大鼠造模方式的选择：一项网状Meta分析[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(23): 3767-3772.
[10]	白胜超, 高扬, 王博, 李俊平, 王瑞元. 针刺干预大负荷运动损伤模型大鼠骨骼肌线粒体功能的动态变化[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(23): 3648-3653.
[11]	张亮, 马晓燕, 王佳虹. 肾衰饮调控慢性肾功能衰竭大鼠肾脏细胞凋亡的机制[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(23): 3672-3677.
[12]	董丽萍, 罗怀青, 袁衡, 龙娟, 许少辉. 增龄对大鼠缺血后肢侧支血管生长的影响[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(20): 3156-3161.
[13]	王朝格, 翁锡全, 林宝璇, 陈丽娜, 徐国琴. 低温运动干预肥胖大鼠的脂肪组织类型及功能改变[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(20): 3162-3167.
[14]	崔田田, 易岚, 欧阳厚淦, 吴慧婷, 欧阳彦楚, 陈楚. 热敏灸对盆腔炎症模型大鼠影响的三焦焦膜理论分析[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(20): 3168-3172.
[15]	李平, 林煜, 陈翔, 刘振涛, 肖莉莉, 林学义, 华鹏. 二至丸提取物干预去势骨质疏松雌性模型大鼠的骨重建特点[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(2): 191-195.