针刺干预大负荷运动损伤模型大鼠骨骼肌线粒体功能的动态变化

doi:10.12307/2021.034

中国组织工程研究 ›› 2021, Vol. 25 ›› Issue (23): 3648-3653.doi: 10.12307/2021.034

• 肌肉肌腱韧带组织构建 tissue construction of the muscle, tendon and ligament • 上一篇下一篇

针刺干预大负荷运动损伤模型大鼠骨骼肌线粒体功能的动态变化

白胜超1，高扬2，王博3，李俊平2，王瑞元2

1南京理工大学体育部，江苏省南京市 210094；北京体育大学，2运动人体科学学院，3运动医学与康复学院，北京市 100084

收稿日期:2020-06-29 修回日期:2020-07-04 接受日期:2020-07-27 出版日期:2021-08-18 发布日期:2021-01-26
通讯作者: 王瑞元，教授，博士生导师，北京体育大学运动人体科学学院，北京市 100084
作者简介:白胜超，男，1988年生，山东省济南市人，2018年北京体育大学毕业，博士，讲师，主要从事运动对骨骼肌机能影响的研究。
基金资助:
国家自然科学基金项目(31471133)，项目负责人：王瑞元；中央高校基本科研业务费专项资金资助课题(2019PT013)，项目负责人：李俊平

Dynamic changes of mitochondrial function of the skeletal muscle after acupuncture intervention in rats with heavy load exercise-induced injury

Bai Shengchao1, Gao Yang2, Wang Bo3, Li Junping2, Wang Ruiyuan2

1Department of Sports, Nanjing University of Science and Technology, Nanjing 210094, China; 2School of Sports Human Sciences, 3School of Sports Medicine and Rehabilitation, Beijing Sport University, Beijing 100084, China

Received:2020-06-29 Revised:2020-07-04 Accepted:2020-07-27 Online:2021-08-18 Published:2021-01-26
Contact: Wang Ruiyuan, Professor, Doctoral supervisor, School of Sports Human Sciences, Beijing Sport University, Beijing 100084, China
About author:Bai Shengchao, MD, Lecturer, Department of Sports, Nanjing University of Science and Technology, Nanjing 210094, China
Supported by:
国家自然科学基金项目(31471133)，项目负责人：王瑞元；中央高校基本科研业务费专项资金资助课题(2019PT013)，项目负责人：李俊平

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：
大负荷运动损伤：机体长时间进行大负荷运动或是承受不适应的运动负荷后，出现骨骼肌超微结构改变、肌肉僵硬、收缩能力下降等现象。

左室射血分数：为目前评估心功能的主要指标，其计算方法为：(左室舒张末容积-左室收缩末容积)/左室舒张末容积×100%，正常值>50%，射血分数下降提示心脏供血不能满足全身代谢需要，表现为心功能下降，主要为冠心病引起，因此射血分数的提高提示心功能改善。

背景：一次大负荷运动后骨骼肌会出现损伤并导致线粒体功能下降，针刺作为重要的治疗措施，在损伤修复中应当发挥一定的作用。
目的：观察一次大负荷运动及针刺干预后不同时相下骨骼肌线粒体的损伤变化，进一步探究针刺在防治运动性骨骼肌损伤中的作用。
方法：雄性SD大鼠随机分为安静对照组、单纯针刺组、单纯运动组和运动针刺组，单纯运动组、运动针刺组进行一次性下坡跑离心运动，单纯针刺组、运动针刺组进行针刺干预。单纯针刺组、单纯运动组、运动针刺组又按干预后取材的时相点划分为0，2，6，12，24，48，72 h相组。透射电镜观察不同时相下骨骼肌线粒体超微结构的变化，荧光酶标技术检测JC-1的荧光比值，ELISA法测定胞浆细胞色素C含量和线粒体功能指标琥珀酸-泛醌氧化还原酶活性。
结果与结论：①运动后线粒体超微结构出现明显损伤，在12-24 h时间段损伤最为严重，胞浆细胞色素C含量升高(P < 0.05)，JC-1比值、琥珀酸-泛醌氧化还原酶活性均下降(P < 0.05)；②单纯进行针刺后线粒体形态正常，各检测指标均未有明显变化(P > 0.05)；③针刺干预使运动后大鼠骨骼肌线粒体超微结构损伤下降，并且胞浆细胞色素C含量降低(P < 0.05)，JC-1比值、琥珀酸-泛醌氧化还原酶活性均有所升高(P < 0.05)；④提示一次离心运动后线粒体出现不同程度损伤并呈时相性变化，在12-24 h时间段损伤最为严重；单纯进行针刺并未引起明显的骨骼肌线粒体损伤；针刺干预可有效改善运动引起的线粒体损伤情况，可能促进运动后线粒体的功能恢复。

https://orcid.org/0000-0001-7152-7676 (白胜超)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

关键词: 大负荷运动, 骨骼肌, 线粒体损伤, 针刺, 大鼠

Abstract: BACKGROUND: A heavy load exercise may lead to skeletal muscle damage and the mitochondrial dysfunction. As an important treatment measure, acupuncture should play a certain role in the repair of injury.
OBJECTIVE: To investigate the damage of skeletal muscle mitochondria in different phases after a heavy load exercise and acupuncture intervention, and further explore the role of acupuncture in preventing and treating exercise-induced skeletal muscle injury.
METHODS: Male Sprague-Dawley rats were randomly divided into a control group, an acupuncture group, an exercise group and an exercise+acupuncture group. Among them, exercise and exercise+acupuncture groups performed a single bout heavy load exercise; and acupuncture and exercise+acupuncture groups performed acupuncture intervention. The acupuncture, exercise and exercise+acupuncture groups were further divided into 0, 2, 6, 12, 24, 48, and 72 hours groups according to the time points of sampling after the intervention. The ultrastructural changes of skeletal muscle mitochondria were observed by transmission electron microscopy. The fluorescence ratio of JC-1 was detected by fluorescent enzyme labeling technique. The content of cytoplasmic cytochrome C and mitochondrial function index, the activity of succinate ubiquinone oxidoreductase, were determined by ELISA.
RESULTS AND CONCLUSION: After exercise, the mitochondrial ultrastructure was obviously damaged (severest at 12-24 hours), the cytoplasmic cytochrome C content was increased (P < 0.05), and the JC-1 ratio and succinate ubiquinone oxidoreductase activity were decreased (P < 0.05). The mitochondria were normal after acupuncture, and there was no significant changes in each test index (P > 0.05). Acupuncture intervention decreased the ultrastructural damage of skeletal muscle mitochondria, reduced the cytoplasmic cytochrome C content (P < 0.05), and increased the JC-1 ratio and succinate ubiquinone oxidoreductase activity (P < 0.05). To conclude, after a bout of eccentric exercise, the mitochondria have different degrees of damage and temporal changes, which peak from 12 to 24 hours. Acupuncture alone cannot cause obvious damage of skeletal muscle mitochondria. Acupuncture intervention can effectively improve mitochondrial damage caused by exercise and promote the recovery of mitochondrial function after exercise.

Key words: heavy load exercise, skeletal muscle, mitochondrial damage, acupuncture, rat

中图分类号:

白胜超, 高扬, 王博, 李俊平, 王瑞元. 针刺干预大负荷运动损伤模型大鼠骨骼肌线粒体功能的动态变化[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(23): 3648-3653.

Bai Shengchao, Gao Yang, Wang Bo, Li Junping, Wang Ruiyuan. Dynamic changes of mitochondrial function of the skeletal muscle after acupuncture intervention in rats with heavy load exercise-induced injury[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2021, 25(23): 3648-3653.

图/表（结果） 7

2.1 实验动物数量分析纳入SD大鼠176只，共分为22组，每组8只，无脱失。
2.2 大负荷运动及针刺后不同时相骨骼肌线粒体的损伤情况首先使用透射电镜对运动及针刺后不同时相下骨骼肌线粒体超微结构进行观察，结果详见图1-4。

2.3 运动及针刺干预后不同时相下骨骼肌线粒体损伤的变化采用荧光酶标检测线粒体JC-1荧光比值，ELISA法检测胞浆中细胞色素C含量，确定运动后针刺对线粒体损伤的影响。
2.3.1 JC-1荧光比值见表2。骨骼肌线粒体JC-1荧光比值越低说明线粒体损伤越严重。

组间整体比较，单纯针刺组JC-1趋势几乎无明显变化，与安静对照组相比差异无显著性意义(P > 0.05)。单纯运动组骨骼肌线粒体JC-1变化明显，呈现先降低后升高趋势，在运动后12 h达到最低值，整体显著低于安静对照组及单纯针刺组(P < 0.05)。运动针刺组同样先降低后升高，72 h明显恢复，整体显著高于单纯运动组(P < 0.05)，但低于安静对照组及单纯针刺组(P < 0.05)。
2.3.2 胞浆中细胞色素C含量见表3。骨骼肌胞浆中细胞色素C含量越高说明线粒体损伤程度越深。

组间整体比较，单纯针刺组细胞色素C趋势几乎无明显变化，与安静对照组相比差异无显著性意义(P > 0.05)。单纯运动组变化明显，呈现先升高后降低趋势，在运动后24 h达到最高值，整体显著高于安静对照组、单纯针刺组(P < 0.05)。运动针刺组同样先升高后降低，72 h明显减轻，整体显著低于单纯运动组(P < 0.05)，但高于安静对照组及单纯针刺组(P < 0.05)。整体结果与线粒体JC-1所反映的意义一致。
2.4 运动及针刺干预后不同时相下线粒体功能的变化见表4。骨骼肌细胞中SQR活性越高说明线粒体功能越好。

组间整体比较，单纯针刺组SQR趋势无显著变化，与安静对照组相比差异无显著性意义(P > 0.05)。单纯运动组变化明显，呈现先降低后升高趋势，运动后24 h达到最低值，整体显著低于安静对照组、单纯针刺组(P < 0.05)。运动针刺组同样先降低后升高，72 h已恢复并达到最高值，整体显著高于单纯运动组(P < 0.05)，但低于安静对照组及单纯针刺组

(P < 0.05)。

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引言

人体长时间进行大负荷运动后会出现肌肉僵硬、收缩能力下降等现象，微观形态上表现为骨骼肌超微结构发生改变，造成运动性骨骼肌损伤，影响运动功能和日常生活。大负荷运动后骨骼肌细胞内出现钙离子(Ca2+)超载现象[1]，是线粒体损伤的重要原因之一[2]，影响机体的能量代谢。研究发现针刺作为传统治疗方法能够促进运动后的功能恢复，并且效果显著[3-5]，在运动后进行针刺干预能够促进骨骼肌细胞内Ca2+恢复，缓解Ca2+超载现象[1]，这提示针刺可能会降低运动后骨骼肌线粒体的损伤程度。
线粒体作为能量代谢场所，是一种高度动态的细胞器，不断处在分裂和融合的平衡之中[6-7]。目前在运动方面关于线粒体的研究多集中于运动后某一时间点，对运动后骨骼肌线粒体损伤进行前后多时相观察的动态研究相对较少，而从骨骼肌线粒体损伤角度进行针刺方面的探讨更少见。因此探究大负荷运动及针刺干预后不同时相下骨骼肌线粒体的损伤情况具有重要意义，能够发现线粒体在运动性骨骼肌损伤过程中的动态变化，提高运动损伤的深层认识，进一步丰富针刺修复骨骼肌损伤的理论基础。
此次实验采用一次性大负荷离心运动，并进行针刺干预，使用透射电镜观察大鼠骨骼肌线粒损伤情况，以ELISA法检测胞浆中细胞色素C含量，以及荧光酶标技术检测线粒体荧光探针JC-1的荧光比值确定线粒体损伤程度，最后检测骨骼肌中琥珀酸-泛醌氧化还原酶(succinate ubiquinone oxidoreductase，SQR)活性确定线粒体功能，从而明确大负荷运动后不同时相下骨骼肌线粒体损伤的动态变化，以及针刺干预的改善效果。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

材料方法

1.1 设计随机对照动物实验。
1.2 时间及地点于2016年1至12月在北京体育大学实验动物中心及骨骼肌实验室完成。
1.3 材料
1.3.1 实验动物 SPF级别8周龄雄性 Spraque-Dawley (SD)大鼠176只，体质量(220.14±9.38) g，购于北京维通利华实验动物技术有限公司：使用许可证号：SCXK京2012-0001。北京体育大学标准动物房内分笼饲养，自由进食、饮水，饲养环境为温度(23±3) ℃，相对湿度40%-70%，室内12 h明暗切换模拟白昼，该实验已获得北京体育大学运动科学实验伦理委员会批准，批准号为2015020。
1.3.2 实验分组大鼠均进行适应性3 d饲养，之后开始按随机数字表法分组，安静对照组(n=8)、单纯针刺组(n=56)、单纯运动组(n=56)、运动针刺组(n=56)。除安静对照组外其余组别根据干预后的时间点不同，又分为0，2，6，12，24，48，72 h时相组，详见表1。

1.4 方法
1.4.1 实验模型制备及干预
(1)运动模型：单纯运动组和运动针刺组大鼠在小动物电动跑台上进行规定速度的运动，正式实验前进行为期3 d的适应性训练，参数为坡度0°，速度16 m/min，第1天训练
5 min，第2天训练10 min，第3天休息。正式实验中运动方案按照ARMSTRONG等[8]经典离心运动方式，并参照运动损伤模型[9]，大负荷运动的速度与时间的设定参照文献中的设置方式[5，10]，参数为跑台坡度-16°，跑台速度16 m/min，运动持续时间1.5 h。
(2)针刺方案：针刺依据实验室传统方式进行[1，3，9-10]，类似人体阿是穴[3]。运动针刺组大鼠在运动结束后即刻进行针刺，单纯针刺组大鼠同时间进行针刺干预。用固定器对大鼠后肢进行固定并消毒，顺着大鼠小腿三头肌位置走向，远端30°纵向斜刺到达比目鱼肌肌腹位置，留针2 min，针灸针[汉医牌，津食药监械(准)字2009第2270002号]直径为
0.25 mm。为保证针刺部位准确，预实验中实验员反复练习针刺手法，在熟练掌握且12只大鼠的针刺部位准确率达到100%后开始正式实验。
1.4.2 样本采集分别在实验相应时相点进行取材，按照
3.5 mL/kg剂量进行10%水合氯醛麻药腹腔注射，腹主动脉取血，之后取出比目鱼肌，用于后续样品制备。骨骼肌取材时注意避免过多的牵拉现象。
取部分比目鱼肌，体积为1 mm×1 mm×1 mm，置于4 ℃预冷的2.5%戊二醛固定液中，用于后续电镜检测。取出部分比目鱼肌，称质量后加入pH 7.4的PBS，进行匀浆制备待测样品，用于SQR分析。取100 mg新鲜比目鱼肌，严格按照碧云天线粒体分离试剂盒(C3606)进行操作，差速离心提取线粒体，用于JC-1检测。在提取线粒体的最后一步按照说明书要求，收集上清并离心，即为去除线粒体的胞浆蛋白，用于细胞色素C的分析。

1.5 主要观察指标
1.5.1 透射电子显微镜观察骨骼肌线粒体超微结构的变化比目鱼肌从固定液取出，用PBS冲洗样品，锇酸固定再冲洗，之后用梯度乙醇脱水，用环氧树脂包埋后制成切片，干燥后进行观察结构，最后在高倍电镜下随机进行拍摄。
1.5.2 荧光酶标仪检测JC-1线粒体膜电位按照试剂盒(中国，碧云天公司)说明书配制缓冲液，充分溶解之后再加 JC-1染色缓冲液，再配制染色工作液备用，黑板透明底 96 孔酶标板，加入0.01 mL的线粒体中加入0.09 mL的工作液，并进行充分混匀，荧光酶标仪检测，测定参数为红色荧光 Ex488/Em530 和绿色荧光 Ex543/Em590，实验结果为红/绿荧光的比值来表示。
1.5.3 ELISA法检测胞浆细胞色素C含量、骨骼肌SQR活性按照细胞色素C分析试剂盒(中国，南京建成生物工程研究所)、SQR分析试剂盒(中国，乔羽生物科技公司)说明书进行测定，主要步骤为：标准品梯度稀释，加样并设空白孔和待测样品孔、温育、洗涤，加入酶标试剂液、温育、洗涤、显色，加入终止液，放入酶标仪进行测定，以空白孔进行调零，在450 nm的波长下测定每孔的吸光度(A)值。
1.6 统计学分析采用SPSS 19.0统计软件分析，实验数据均以x±s形式表示。实验数据采用双因素方差分析
(Two-way ANOVA)进行主体间效应分析，若主效应显著则进行事后多重检验。各因素内的比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA)，方差齐时用LSD方法进行组间多重比较，方差不齐时采用Tamhanes’方法；P < 0.05为差异有显著性意义。

讨论

线粒体为双层膜结构，主要由线粒体外膜、内膜、基质等组成，能够合成ATP为细胞提供大量能量，在调控代谢过程中起到重要作用[11-12]。大量实验证实，骨骼肌细胞内线粒体与运动性骨骼肌损伤紧密相关，运动后线粒体呼吸链受到抑制或酶活性降低均能引起能量代谢障碍，加重损伤过程[13]。一次大负荷运动后骨骼肌线粒体会出现不同程度损伤，此次研究通过透射电镜和骨骼肌细胞胞浆细胞色素C和线粒体JC-1来共同反映线粒体不同时相下损伤的动态变化[14-15]。
透射电镜可以检测到骨骼肌线粒体微观结构，为超微结构损伤方面提供直接证据，能够发现骨骼肌损伤程度以及细胞器损伤现象。骨骼肌细胞中线粒体受损后会从网状结构上分裂下来，形成细小片段[16]，通过线粒体融合或是自噬途径来完成自身的修复，因此，此次研究把细小线粒体片段也作为超微结构损伤的间接证据。孙良等[17]研究发现，在进行一次力竭运动后骨骼肌线粒体会出现病理学样变化，肿胀甚至空泡化，线粒体嵴模糊，有的甚至消失。此次研究中发现，安静对照组大鼠骨骼肌线粒体呈长线形或卵圆形，膜结构清晰完整，未观察到明显的片段。单独进行针刺后线粒体超微结构变化不明显，进行大负荷运动后0，2 h线粒体未有明显变化；6 h部分线粒体肿胀变圆，膜结构不清晰；12 h线粒体分布不均匀，肌原纤维间积聚大量线粒体片段，出现不同体积的细小线粒体，线粒体损伤程度严重；24 h肌原纤维间细小线粒体数量仍较多，虽然形态较大较圆但膜结构较清晰；运动后48 h线粒体片段化程度远远轻于运动后12 h表现；运动后72 h线粒体形态已经基本恢复到正常水平，肌原纤维间未观察到明显细小线粒体，但略有缺失。运动后进行针刺，能够发现线粒体变化趋势同单纯运动组相似，但在24，48 h等损伤峰值时相中，线粒体形态以及细小片段的数量要优于单纯运动组；72 h线粒体形态较好，膜结构完整清晰，分布均匀，与安静对照组基本一致，说明针刺对运动后线粒体损伤起到一定程度的改善作用，并能够在微观结构上反映出来。
细胞浆细胞色素C和线粒体膜电位荧光探针JC-1能够反映线粒体的损伤程度。单纯针刺后骨骼肌线粒体变化趋势并不明显，与安静对照组相比未有明显变化，说明单独进行针刺并未对骨骼肌线粒体产生有统计学意义的损伤，值得注意的是在单纯针刺后上述2项指标都出现了轻微线粒体损伤倾向，尤其是在JC-1的检测中更为明显，说明单纯进行针刺在一定程度上可能有造成损伤的趋势。AMEIS等[18]研究发现运动后骨骼肌白细胞介素6等蛋白表达升高，同时进行针刺干预使这些指标表达下降，但单纯进行针刺也会使针刺部位骨骼肌中白细胞介素6等蛋白表达升高，认为针刺也是一种产生损伤的手段。虽然AMEIS等[18]的研究和此文所针对指标不同，但说明针刺同时也是一种损伤方式，可较好地解释单独进行针刺也使数值产生一些轻微浮动。大负荷运动后骨骼肌线粒体产生了明显损伤，随着时相的推移其损伤逐渐加深，在运动后12-24 h损伤最为严重，之后逐渐减轻，但在运动后72 h还未完全恢复。运动后进行针刺干预，可发现线粒体损伤程度低于单纯运动组，在12，24 h更为明显，72 h线粒体损伤较低，恢复程度好于单纯运动组。张学林等[4]研究发现，大鼠运动后进行针刺可以修复骨骼肌超微结构，有效治疗骨骼肌劳损现象，认为其效应可能和骨骼肌线粒体的改善具有重要关系，在此次研究的结果中也得到证实。
此次研究发现运动后线粒体损伤变化的主要时间点是12，24，72 h等时相，说明时间点对损伤程度同样具有重要作用。另一方面，线粒体损伤的时相性结果也提示单纯检测运动后某一时间点的指标来反映运动对线粒体损伤的影响存在一定局限性，并不能体现动态变化。在研究中细胞色素C和JC-1变化趋势反映的意义相同，所不同的是在峰值出现的时相上细胞色素C出现在运动后24 h，而JC-1出现在运动后12 h，是由于线粒体出现损伤后细胞色素C释放到胞浆中，检验胞浆中的浓度变化在时间上存在一定的滞后，而JC-1是线粒体膜电位损伤的直接表现，同时再结合透射电镜下的观察，此次研究更倾向于JC-1的结果。
线粒体损伤会导致其功能下降，最终影响机体功能状况，而运动形式和运动时间对线粒体影响也存有较大差异。郭彦青等[19]对不同运动形式进行研究，在对大鼠进行无氧运动、有氧运动以及交替运动后，检测线粒体呼吸链复合体酶活性，发现长期进行有氧运动可以提高线粒体功能，而长期无氧运动只能在短期内提高线粒体活性。HUERTAS等[20]对14名长跑运动员进行研究，4周长跑训练并进行肌肉活检，检测发现运动组细胞色素C氧化酶、柠檬酸合成酶等活性明显提高，有氧氧化酶适应性得到提高。以上研究可以发现，长期适当的运动训练可以提高线粒体功能和适应性，从而使运动能力得到提升，对整个机体产生积极影响。由于长期的训练效应是在单次训练基础上机体对运动应激逐渐适应的过程，因此探究一次性运动后机体的反应对于揭示运动后机体变化的机制同样具有重要作用。此次研究结果显示，线粒体功能指标SQR活性整体趋势上，单纯针刺组略有变化，但各时相与安静对照组相比均无明显差异，说明单纯进行针刺对正常骨骼肌线粒体活性没有产生具有统计学意义的影响。大负荷运动后即刻线粒体功能开始下降，24 h达到最低值，之后开始逐渐恢复，运动后72 h线粒体的功能已出现明显升高，但与安静对照组相比还未完全恢复，说明运动会导致骨骼肌线粒体功能下降并呈时相性变化。尚画雨等[21]在探究线粒体自噬的过程中采用与此次研究相同的运动模型和针刺干预方式，发现大负荷运动后线粒体呼吸链复合体Ⅱ、Ⅳ的活性下降，针刺后能够明显改善线粒体酶的活性，在一定程度上对此文的结果起到辅助支撑。GAO等[22]通过对40只急性游泳前的大鼠进行针刺或电针干预，运动后发现针刺组超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、Ca2+-ATP酶等活性明显提高，认为针刺有利于维持线粒体功能和延缓疲劳，这为针刺提高线粒体功能提供了有力依据，但需要说明的是在运动前进行针刺是否会影响运动能力，以及进行单一时间点的检测能否反映运动后长时间的恢复效果，这些还需要进一步验证。因而此次研究在此基础上进行了改进，发现运动后进行针刺使线粒体活性在各个时相下都显著增强，其作用效果持续时间较长且呈动态变化，在时相研究中发现针刺干预后12，24 h是变化的关键点，损伤程度也低于单纯运动组，说明运动后进行针刺可降低线粒体损伤，而72 h时相下运动针刺组数值已经达到安静对照组水平，并且显著高于单纯运动组，说明运动后进行针刺可促进线粒体功能恢复。
此次研究认为运动后骨骼肌内环境产生了较大变化，如何使这种紊乱状态更快地回到常态是影响功能恢复的重要因素，运动后进行针刺可以改善微环境，加快钙离子等的恢复速度[3]。而钙离子作为重要的第二信使，在某一局部出现的浓度变化更会影响后续一系列反应，由此引发广泛效应，发挥一定的恢复与治疗作用[23-24]，例如促使肌纤维、微管蛋白、以及内质网相关蛋白的恢复等，这可能是运动后针刺发挥广泛作用的重要机制。运动后12，24 h是线粒体损伤的重要时间点，严重影响了线粒体的功能，因而作者建议在进行运动后线粒体损伤的相关研究时，若要只取单个时间点，最好选在运动后12-24 h可能会更为准确，不同的针刺手法是否影响线粒体的损伤程度，也有将是后续探究的重要方面。另外，此文中的时相点是在运动后的72 h之内，并未涉及到运动后的长期影响机制，可在今后的研究中进一步探讨。
结论：①一次离心运动后线粒体出现不同程度损伤并呈时相性变化，在12-24 h时间段损伤最为严重；②单纯进行针刺并未引起明显的骨骼肌线粒体损伤；针刺干预有效改善了运动引起的线粒体损伤情况，可能促进运动后线粒体的功能恢复。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

针刺干预大负荷运动损伤模型大鼠骨骼肌线粒体功能的动态变化

Dynamic changes of mitochondrial function of the skeletal muscle after acupuncture intervention in rats with heavy load exercise-induced injury

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