石膏铁丝固定法建立兔膝痹模型

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2016.18.003

中国组织工程研究 ›› 2016, Vol. 20 ›› Issue (18): 2603-2608.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.18.003

• 骨及关节损伤动物模型 Animal models of bone and joint injuries • 上一篇下一篇

石膏铁丝固定法建立兔膝痹模型

摆雪¹，张洪平^1，2，刘俊昌^1，2，王新军^1，2，孙芸¹，周冬冬¹

1新疆医科大学中医学院，新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市 830011；2新疆维吾尔自治区中医医院，新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市 830011

收稿日期:2016-02-22 出版日期:2016-04-29 发布日期:2016-04-29
通讯作者: 王新军，教授，主任医师，硕士生导师，新疆医科大学中医学院，新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市 830011；新疆维吾尔自治区中医医院，新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市 830011
作者简介:摆雪，女，1989年生，新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市人，回族，新疆医科大学在读硕士，主要从事推拿治疗骨与关节疾病的基础与临床研究。
基金资助:
新疆维吾尔自治区自然科学基金项目(2014211C007)

Establishing a rabbit model of knee paralysis by the knee fixation with plaster casts and wire

Bai Xue¹, Zhang Hong-ping^{1, 2,} Liu Jun-chang^{1, 2}, Wang Xin-jun^{1, 2}, Sun Yun¹, Zhou Dong-dong¹

1School of Traditional Chinese Medicine, Xinjiang Medical University, Urumqi 830011, Xinjiang Uygur Autonomous Region, China; 2Chinese Medicine Hospital of Xinjiang Uygur Autonomous Region, Urumqi 830011, Xinjiang Uygur Autonomous Region, China

Received:2016-02-22 Online:2016-04-29 Published:2016-04-29
Contact: Wang Xin-jun, Professor, Chief physician, Master’s supervisor, School of Traditional Chinese Medicine, Xinjiang Medical University, Urumqi 830011, Xinjiang Uygur Autonomous Region, China; Chinese Medicine Hospital of Xinjiang Uygur Autonomous Region, Urumqi 830011, Xinjiang Uygur Autonomous Region, China
About author:Bai Xue, Studying for master’s degree, School of Traditional Chinese Medicine, Xinjiang Medical University, Urumqi 830011, Xinjiang Uygur Autonomous Region, China
Supported by:
the Natural Science Foundation of Xinjiang Uygur Autonomous Region, No. 2014211C007

摘要/Abstract

摘要：

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文题释义：

膝痹：乃西医所讲的骨性关节炎，是骨科常见病，又称增生性关节炎、老年性关节炎，是一种慢性关节疾病，它的主要改变是关节软骨面的退行性变和继发性的骨质增生，主要表现是关节疼痛和活动不灵活，X射线表现关节间隙变窄，软骨下骨质致密，骨小梁断裂，有硬化和囊性变，关节边缘有唇样增生，后期骨端变形，关节面凹凸不平，关节内软骨剥落，骨质碎裂进入关节，形成关节内游离体。

背景：目前国内外均有采用石膏固定法复制膝痹动物模型，但存在实验动物选择不佳、石膏选取不合适、单纯石膏固定不稳定等问题，影响后续实验结果。

目的：采用石膏铁丝固定法建立兔膝痹模型。

方法：将20只新西兰大白兔随机均分为2组，模型组在应用树脂石膏屈曲位固定的基础上外层缠绕铁丝以保护石膏，建立右侧膝痹模型；对照组为正常对照。固定后8周，进行右膝关节大体观察与病理组织学观察。
结果与结论：对照组膝关节半透明，光滑，有光泽，无软骨缺损，软骨弹性及硬度好，软骨细胞排列正常，关节囊内未见炎细胞浸润；模型组膝关节无光泽，不透明，关节软骨变薄，弹性较差，关节软骨退变，关节面变粗糙，部分有缺损，关节内仅有少量关节液或无关节液，软骨细胞萎缩或消失，数量减少，软骨变性、坏死，软骨下骨组织骨质硬化，骨小梁增生，软骨细胞紊乱无序，玻璃样变，滑膜绒毛肥大，细胞成簇现象，可见大量淋巴细胞、浆细胞、中性粒细胞浸润，呈现典型的膝痹病理改变。表明采用石膏铁丝固定法能成功建立兔膝痹模型，具有简单易行、固定牢固、无创伤等优点。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程|
ORCID: 0000-0003-2249-8324(摆雪)

关键词: 实验动物, 骨软骨损伤与修复动物模型, 膝痹, 骨性关节炎, 动物模型, 石膏铁丝固定法, 新疆维吾尔自治区自然科学基金

Abstract:

BACKGROUND: Currently, the researches on knee plaster immobilization paralysis animal models are popular in the world, but there are some insufficiencies with the knee paralysis animals, for example, poor animal selection, inappropriate plaster selection and pure gypsum instability, which affect the subsequent results.

OBJECTIVE: To establish a rabbit model of knee paralysis by the knee fixation with plaster casts and wire.

METHODS: A total of 20 New Zealand white rabbits were randomly divided into two groups. Models of right knee paralysis were established and fixed by plaster casts and wire. Normal controls were considered as the control group. At 8 weeks after fixation, right knee and pathologic histology were observed in the right knee.

RESULTS AND CONCLUSION: The knee joints were translucent, smooth, and shiny, without the cartilage defect in the control group, and the cartilaginous elasticity and rigidity were good, and the arrangement of chondrocytes was normal. There were no inflammatory infiltrations in the articular capsule of the normal rabbits. In the model group, the knee joint was matt and opaque. Articular cartilage became thin, and showed poor elasticity. The cartilages were degenerated. Articular surface was rough, and had defects. There were small amount of joint fluid orno joint fluid. Cartilage cells shrank or disappeared, and the number of cartilage cells reduced with degeneration and necrosis. Subchondral bone became sclerosis with trabecular bone of hyperplasia. The arrangement of cartilage cells was disordered, with hyalinization and synovial villous hypertrophy. Cell clustering phenomenon was seen. There were a large number of lymphocytes, plasma cells and neutrophil infiltration in cartilages. The typical pathological changes of the knee paralysis present in the rabbit cartilage. These results demonstrate that the rabbit model of knee paralysis can be successfully established by using fixation method with plaster casts and wire, which has the advantages of simple operation, strong fixation and no injury.
中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程

Key words: Models, Animal, Osteoarthritis, Knee, Tissue Engineering

摆雪，张洪平，刘俊昌，王新军，孙芸，周冬冬. 石膏铁丝固定法建立兔膝痹模型[J]. 中国组织工程研究, 2016, 20(18): 2603-2608.

Bai Xue, Zhang Hong-ping, Liu Jun-chang, Wang Xin-jun, Sun Yun, Zhou Dong-dong. Establishing a rabbit model of knee paralysis by the knee fixation with plaster casts and wire[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2016, 20(18): 2603-2608.

图/表（结果） 2

2.1 实验动物数量分析实验选用新西兰大白兔20只，实验过程无脱失，全部进入结果分析。

2.2 模型方法的改进实验在应用树脂石膏屈曲位固定的基础上外层缠绕铁丝以保护石膏，避免石膏被啃脱，是在传统固定方法上做了改进，也是继前人实验上的创新，确保膝痹模型的稳定性和时效性。

2.3 大体观察

对照组：兔膝关节外观呈浅蓝色，半透明，光滑，有光泽，无软骨缺损，无裂纹形成，软骨弹性及硬度好，关节液清澈透明质黏，集中分布在关节腔内，见图2A。

模型组：兔膝关节外观呈黄色改变，无光泽，不透明，关节软骨变薄，弹性较差，触之较软，关节软骨退变，有裂纹形成，关节面变粗糙，部分有缺损，关节内仅有少量关节液或无关节液，关节周围滑膜肥大，质韧，见图2B。

2.4 光镜观察

对照组：关节软骨基质着色均匀，细胞排列及形态均正常，表层细胞较小呈单个排列分布，深层细胞较大，分层排列清楚，呈柱状排列整齐，潮线清楚，见图3A；骨髓腔中见浆细胞及淋巴细胞，关节囊内未见炎细胞浸润，见图3B。

模型组：关节软骨基质着色不均一，潮线模糊，见图3C；软骨细胞增多，软骨变性坏死，细胞核浓缩消失，软骨下骨骨组织骨质硬化，骨小梁增生，软骨细胞结构紊乱无序，滑膜纤维组织替代(软骨膜)，玻璃样变，滑膜绒毛肥大，细胞成簇现象，可见大量炎细胞(淋巴细胞、浆细胞、中性粒细胞)浸润，见图3D。

对照组Mankin评分为0.70±0.68，模型组Mankin评分为10.10±2.54，两组间比较差异有显著性意义(P < 0.01)。

参考文献

[1] 王金涛,周顺利,易锦,等.分期推拿治疗膝痹病69例[J].北京中医药,2010,29(12):927-928.

[2] 余庆阳,黄巍.膝骨关节炎从痹论治的病因与证候探讨[J].风湿病与关节炎,2015,4(3):40-43.

[3] 李坤,肖四旺,陈孟交,等.丹紫康膝冲剂对大鼠膝骨性关节炎软骨细胞凋亡的影响[J].湖南中医药大学学报,2014, 34(3):20-23.

[4] 欧云生,安洪.鼠骨关节炎动物模型建立的现状[J].中国比较医学杂志,2004,14(1):41-44.

[5] Guzman RE,Evans MG,Bore S,et al.Mono-iodoacetate- induced histologic changes in subchondrla bone and articular cartilage of rat femorotial joints: an animal model of osteoarthritis.Taxied Pathol.2003;31(6):619-624.

[6] Mahr S,Menard J,Krenn V,et al.Sexual dimorphism in the osteoarthritis of STR/ort mice may eh link to articulra cytokines.Ann Rheum Dis.2003;62(12): 1234-1237.

[7] Yamamoto H,Iwase N.Spontaneous osteoarthritis lesions in a new mutant strain of the mouse.J Exp Anim Sic.1998;47(2):131-135.

[8] Yamamoto H,Iwase N,Kohno M.Histopathological characterization of spontaneously developing osteoarthropathy in the BCBC/Y mouse established newly from B6C3F1 mice. ExpToxicol Pathol.1999; 51(1):15-20.

[9] Muraoka T,Hagino H,Okano T,et al.Role of subchondral bone in osteoarthritis development: a comparative study of two strains of guinea pigs with and without spontaneously occurring osteoarthritis. Arthritis Rheum.2007;56(10):3366-3374.

[10] 熊勇,张照庆,夏数数,等.改良伸直位固定法建立兔膝骨性关节炎模型的研究[J].湖北中医药大学学报,2010,12(5): 19-21.

[11] Muehleman C,Green J,Williams JM,et al.The effect of bone remodeling inhibition by zoledronic acid in an animal model of cartilage matrix damage.Osteoarthr Cartilage.2002;10(3): 226-233.

[12] Kikuchi T,Sakuta T,Yamaguchi T.Intra-articular injection of collagenase induces experimental osteoarthritis in mature rabbit.Osteoarthr Cartilage.1998;6(3):177-186.

[13] Bouchgua M,Alexander K,D`Anjou MA,et al.Use of routine elinical multimodality imaging in a rabbit model of osteoarthritis- -partⅠ.Osteoarthr Cartilage.2009; 17(12): 188-196.

[14] Díaz-Gallego L,Prieton JG,Coronel P,et al.Apoptosis and nitric oxide in an experimental model of osteoarthritis in rabbit after hyaluronic acid treatment. J Orthop Res.2005;23(6):1370-1376.

[15] Hulmes DJ,Marsden ME,Strachan RK,et al. Intra-aricular hyaluronate in experimental rabbit osteoarthritis can prevent changes in cartilage proteoglycan content.Osteoarthr Cartilage.2004; 12(3):232-238.

[16] 汪青春,沈培芝,王海彬.骨关节炎动物模型的建立及选择[J].中医正骨,1998,10(3):39-40.

[17] Videman T.Experimental osteoarthritis in the rabbit：comparison of different periods of repeated immobilization. Acta Orthop Scand.1982;53(3): 339-347.

[18] 胡炯,杜宁,代岭辉,等.建立膝骨性关节炎关节软骨缺损的动物模型的研究[J].中国中医骨伤科杂志,2009,17(11): 3-16.

[19] 李澄.SD大鼠膝关节骨性关节炎模型的建立及其病理特征[D].中山大学,2010.

[20] 周海蓉,肖振良.健骨胶囊对免骨性关节炎软骨及滑膜影响的实验研究[J].中国中医药科技,2008,15(5):337-338.

[21] 郭玉冬,王宸,魏波,等.骨关节炎动物模型研究进展[J].东南大学学报:医学版,2012, 31(5):652-656.

[22] 熊勇,彭锐,夏数数,等.兔膝骨性关节炎关节液中白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α表达与艾灸的影响[J].中国组织工程研究与临床康复,2010,14(41):7700-7703.

[23] 钟远鸣,全迪,贺启荣,等.舒筋汤熏洗加被动功能锻炼治疗膝骨性关节炎的实验研究[J].广西中医药,2008,31(1): 42-46.

[24] 罗灿峤,莫木琼,钟觉民.不同的脱钙液在骨组织制片中的比较应用[J].中国实用医药,2011, 6(19):27-28.

[25] 程永.膝痹病经筋病机与针刺治疗探讨[J].实用中医药杂志,2012,28(8):695-696.

[26] 葛广勇,赵建宁,刘刚,等.膝骨性关节炎模型的分期特征[J].中国临床康复,2006,10(4): 47-49.

[27] Mankin HJ,Dorfman H,Lippiello L,et al. Biochemical and metabolic abnormalities in articular cartilage from osteo-arthritic human hips.Ⅱ.Correlation of morphology with biochemical and metabolic data.J Bone Surg Am.1971;53(3):523-537.

[28] 于娟,李莎莎,叶莹仪,等.关节腔内注射高乌甲素对兔膝骨性关节炎的影响[J].中国比较医学杂志,2013,23(8): 34-37.

[29] 黄少君,孙升云,徐梅,等.淫羊藿对早期兔膝骨性关节炎软骨的影响[J].暨南大学学报:自然科学与医学版, 2014, 35(3):273-278.

[30] 谢希,高洁生.骨关节炎动物模型研究进展[J].医学综述, 2005,11(1):67-69.

[31] 钱洁,邢雪松,梁军.大鼠膝关节骨性关节炎动物模型的两种实验方案[J].实验室研究与探索,2014,33(11):23-27.

许文娟.树脂石膏与传统石膏应用在四肢骨折患者的效果优劣分析[J].医学美学美容:中旬刊,2013,22(10): 55-56.

引言

膝痹病是国家中医药管理局专病专科建设规范病名^[1]，膝痹的病因早在《素问•痹论》指出“风寒湿三气杂至，合而为痹也。其风气胜者为行痹，寒气胜者为痛痹，湿气胜者为著痹也”。《症因脉治》有“痹者闭也，经络闭塞，麻痹不仁，或攻注作痛，或凝结关节，或重著难移，手足偏废，故名曰痹”的观点。膝痹的现代认识以“十一五”重点专科中医优势病种诊疗方案为例，具体分型为：风寒湿痹证、风湿热痹证、瘀血闭阻证、肝肾亏虚证四个证型^[2]。膝痹乃西医所讲的骨性关节炎，是骨科常见病，又称增生性关节炎、老年性关节炎，以关节软骨进行性退变、关节边缘增生和软骨下骨质的反应性变化为主要病理特点^[3]。膝痹实验动物模型的建立是研究膝痹病理机制及防治的必要手段，对该模型准确无误的复制是膝痹实验研究的基础。目前尚无公认的标准化膝痹动物模型，从前人对膝痹动物模型的研究结果看^[4-5]，膝痹动物模型主要可分为自发性膝痹动物模型和人工诱发膝痹动物模型两类。研究表明，自发性膝痹动物模型是指没有经过刻意人工处理自然发生的，常见的有STR/ort小鼠模型、Hartley豚鼠、Ⅱ型前胶原基因缺陷小鼠模型、栗鼠等，这类模型随着年龄增加而逐步出现膝痹病理改变，病变进程比较自然^[6-9]，但也存在局限性：动物生命周期较长，无法控制环境因素影响，受伦理和资金限制等^[10]。人工诱发骨性关节炎动物模型，是通过各种人为操作方法如关节内注射^[11-12]、手术关节制动等诱导骨性关节炎产生^[13-16]，其中关节制动法是对动物进行关节的机械性制动，不论是否施以局部外力，关节软骨都会产生类似人骨性关节炎的病理改变，最为经典的是Videman法^[17]，该方法最接近人类疾病模式，因此本实验利用关节制动法暨石膏铁丝固定法建立兔膝痹模型，为进一步研究膝痹的防治提供了研究基础。石膏铁丝固定法是对动物膝关节进行机械性制动，使关节软骨产生类似人膝痹的病理改变。中医认为“痹”有闭阻不通之义，所以不论何因，只要出现经络闭阻，营卫涩滞，脏腑气血运行不畅而发生的病证均可称之“痹证”^[2]。因此制动关节形成膝痹也符合中医使其经脉闭阻而为膝痹，偏向于中医辩证分型中瘀血闭阻证。实验首次采用树脂石膏与铁丝将兔膝关节固定，不仅加强了固定的牢靠性，而且可防止兔子啃脱石膏。造模8周，采用石膏外加铁丝缠绕固定方法制作的膝痹模型无手术创伤和关节内的影响，更接近自然过程^[17]，避免了石膏被啃脱造成的实验结果不稳定，影响后期实验结果。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程

材料方法

1.1 造模动物及材料

实验动物及分组：选用健康6月龄雄性新西兰大白兔20只，清洁级，由新疆医科大学动物实验中心提供，许可证号：SCXK(新)2011-0004，体质量2.4-2.8 kg^[18]。实验动物单笼喂养，饲养房温度20-25 ℃，湿度30%-60%，自由饮食，昼夜节律按照12 h明12 h暗进行^[19]。利用随机数字表法产生随机数字将实验动物随机均分为模型组和对照组。

仪器：低温生化培养箱(B1-80A)，上海施都凯仪器设备有限公司；半自动切片机(RM2245)，徕卡显微系统(上海)贸易有限公司；漂片仪(TEC2601)，常州市郝思琳医用仪器有限公司；Leica全自动智能数字正置荧光显微系统(DM6000B)，徕卡显微系统(上海)贸易有限公司；泰洲树脂绷带，广东省揭西县泰洲医疗科技有限公司，批号140901。

实验试剂：40%甲醛(批号：20140419，天津永晟精细化工有限公司)；EDTA-Na2(批号：0105，Amresco)；苏木精(批号：120120，上海蓝季科技发展有限公司)；伊红(批号：20150309，天津市百世化工有限公司)；其他试剂为国产分析纯。

1.2 造模方法

动物模型的制备及评价：模型组采用屈曲位石膏铁丝固定建立兔膝骨性关节炎模型造模方法制动^[20]，因减少了横跨膝关节的肌肉收缩而导致关节软骨的萎缩性变化^[21]，对模型组新西兰大白兔进行骨性关节炎造模，使右侧膝关节不能活动，制作膝骨性关节炎模型，8周后去除石膏^[22](图1)。具体步骤如下：①剪取长约12 cm (保证足够包绕家兔下肢一圈)、宽约家兔踝关节至腹股沟长度的树脂石膏2块，将其中一块沿着垂直于横轴的方向对折后剪为等大的2块。②将所得3块树脂石膏水浴加热至70 ℃，待其变软后，用镊子夹出第1块较大的树脂石膏，用纱布吸去其表面水分后，横向包绕伸直位的家兔右下肢一圈，注意要松紧适度，范围从踝关节至腹股沟处。为了减轻兔子的痛苦，缠绕石膏之前在固定区域包裹少许脱脂棉。③待树脂石膏两个侧边粘连牢固后(约15 s即可)，将家兔膝关节屈曲至约90°，制动家兔直至石膏干燥变硬(约3 min即可)。④将家兔放回饲养笼中，观察30 min内家兔右侧下肢足掌是否出现淤血、青紫和水肿等症状，如果有则立即剪下石膏消肿后重新固定；如果没有，再用剩余的两块等大的石膏分别在家兔右侧下肢大腿和小腿的石膏表面再包一层。⑤与单纯石膏固定法相比较，此次实验改良之处是在石膏干燥变硬后在上面缠绕铁丝固定，防止因石膏被啃脱而延误实验及影响结果的真实性。每日检查石膏固定情况，若有铁丝松脱则只需重新缠绕铁丝即可。对照组仅予常规饲养，不做任何特殊处理^[23]。

1.3 造模成功的检测标准为确保课题所需模型的成功建立，所以模型的制备均在兽医指导下完成。固定8周后随机抽取2只结合形态学及行为学测评结果，示造模成功后，将所有动物的铁丝石膏拆除，通过大体与病理组织学观察判定是否造模成功。

1.4 标本取材及处理此次次造模在以往的研究基础上利用了防石膏脱落的屈曲位，选择了成形快、厚度薄、硬度高的树脂石膏，在干燥的石膏上缠以铁丝防止啃脱等优点。模型组固定8周后，随机抽取2只兔子结合形态学及行为学测评结果，示造模成功后，将所有动物的铁丝石膏拆除，安乐死，首先膝关节处去毛并剔除周围肌肉和结缔组织，然后用咬骨钳取下膝关节，将右膝股骨髁部置于预先配置的脱钙液中，使组织、细胞蛋白质变性凝固，以防止细胞死后的自溶或细菌分解，保持细胞本来的形态结构。对照组用同样的方法将取下右膝股骨髁浸入脱钙液中2-7 d，脱钙液的配制参考罗灿峤等^[24]方法，每日换新液1次，并用大头针针刺骨组织以查看骨组织的硬度和脱钙情况。常规石蜡包埋后纵行切片，切片厚度5 µm，再行苏木精-伊红染色。

1.5 主要观察指标此次实验采取人工诱发法建立膝痹模型，从产生机制上与人类膝痹相似，故对新鲜标本行大体观察和光镜观察。①大体观察：根据《灵枢 •经脉》指出“诸络脉皆不能经大节之间，必行绝道而出，人复合于皮中，其会皆见于外”。因此，视膝部及其周围皮肤颜色与血络形态、色泽，可知病之寒热、邪之久渐、病性之虚实。视关节外形、对比健侧，可知关节是否肿胀、筋肉有否痿缩、骨之是否变形^[25]。②光镜下观察：标本行苏木精伊红染色、光镜下对其结构仔细观察。参考Mankin评分标准，镜下观察术后不同时间膝关节滑膜、关节液、软骨的病理特点^[26]，对结果评分，并进行统计学分析。

将切片置于光学显微镜下，观察关节软骨细胞的形态、数目、排列等情况，并参照Mankin评分对各组切片进行评分，关节软骨组织病理学评分Mankin满分10分^[27]。

关节软骨组织病理学评分表(Mankin评分表)：
分类	分级	计分
结构	正常	0
	表面不规则	1
	血管翳和表面不规则	2
	到过渡带的裂隙	3
	到放射带的裂隙	4
	到钙化带的裂隙	5
细胞	正常	0
	弥漫性细胞过多	1
	局部细胞增多	2
	细胞过少	3
基质染色(异染性)	正常	0
	轻度减少	1
	中度减少	2
	重度减少	3
	未着色	0
潮线完整性	完整	0
	被血管破坏	1

1.6 统计学分析各组 Mankin评分采用非参数检验，经过SPSS 17.0统计软件包进行统计学分析。

讨论

目前，膝痹仍然是影响人类健康最常见的关节疾患之一，其发病机制尚不十分清楚，但炎症细胞因子的参与已经获得认同^[28]。骨性关节炎病理变化虽累及整个关节，其中包括关节软骨、软骨下骨、滑膜等关节及关节周围组织结构^[29]。因此，膝骨性关节炎模型的建立是研究膝骨性关节炎的重要环节。目前国内外有多种造模方法^[30]，大部分造模的证型偏向于中医膝痹瘀血闭阻证，此次实验在参考经典Videman造模法的基础上改进为增加铁丝外固定，以加强固定效果，此方法制作的膝骨性关节炎模型无手术创伤和关节内影响，更接近自然过程。关节制动，使得经络闭阻、营卫涩滞、脏腑气血运行不畅而形成瘀血闭阻证，为临床研究膝痹中瘀血闭阻证提供实验依据。实验大体观察对照组兔膝关节外观正常，无软骨缺损及裂纹，软骨弹性及硬度好，关节液清澈透明质黏；模型组兔膝关节无光泽，软骨有裂纹，变粗糙，甚至部分缺损，关节液明显变少。该模型组大体改变与临床上膝痹的病理变化极为相似，即视膝部血络形态、色泽，可知病之寒热、邪之久渐、病性之虚实。光镜观察对照组软骨细胞正常，且未见炎细胞浸润；模型组呈现关节软骨变薄、软骨细胞萎缩、骨小梁增生、大量炎细胞等膝痹的改变，经Mankin评分(10.10± 2.54)，示造模成功。与以往实验相比较，实验不仅可以简单易行的复制兔膝痹模型，而且具有固定牢固、成功率高等优点^[15-16]。

实验在造模过程中有很多优点：①实验动物的选择及固定方式。有学者采用大鼠进行研究，因大鼠下肢呈倒锥形，大腿较粗、小腿较细且其跟骨仅有略微的后

突，伸直位固定的石膏极易脱落，而兔下肢解剖结构较为合适，因其下肢足部的跟骨有明显的向后突起，可起到固定石膏防止脱落的作用，因此实验采用兔屈曲位固定，保证石膏固定的牢固性^[31]。②石膏的选择^[32]。普通的粉石膏成型较慢，需要叠加至一定厚度才可具有固定效果，且其延展性较差，透气性差，容易造成伤口腐烂。骨科使用的有机石膏，成形快、厚度薄且硬度高、耐磨损，但价格较高且氧化速度过快，一卷打开之后5 min内即迅速硬化，无法长时间连续使用。实验采用的树脂绷带厚度薄、强度高，双层即可达到强度要求，塑形快延展性好，可以满足塑形成90°的屈曲固定角度，水浴加热至70 ℃即可进行塑形。③实验在应用树脂石膏屈曲位固定的基础上外层缠绕铁丝以保护石膏，避免石膏被啃脱，是在传统的固定方法上做了改进，也是继前人实验上的创新，确保膝痹模型的稳定性和时效性。

综上，实验建立的膝痹模型在临床上偏向瘀血闭阻证，该造模方法具有简单易行、固定牢固、无创伤和造模成功率高，更接近人类疾病模式，具有转化医学意义，益于推广。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程

石膏铁丝固定法建立兔膝痹模型

Establishing a rabbit model of knee paralysis by the knee fixation with plaster casts and wire

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[1]	吕家兴, 白磊鹏, 杨朝昕, 苗岳松, 金宇, 李哲宏, 孙广普, 徐莹, 张擎柱. 膝关节骨性关节炎老年股骨转子间骨折行股骨近端防旋髓内钉内固定评价[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(3): 391-396.
[2]	高坤, 陈大宇, 张勇, 刘伟东, 孙淑芬, 赖文强, 马笃军, 吴益宏, 林展鹏, 蒋鹰鹭, 余伟吉. 牛膝醇提物调控滑膜成纤维细胞外泌体抑制软骨细胞外基质降解[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(23): 3636-3640.
[3]	彭超, 刘云鹏, 华国军, 杨家骥, 王星亮, 王小龙. 退行性内侧半月板后根撕裂半月板部分切除前后髋膝踝角与骨性关节炎进展的影像学评估[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(21): 3368-3373.
[4]	米尔阿里木•木尔提扎, 艾尼瓦尔江•达毛拉, 蔺海山, 王利. 全膝关节置换后冠状位股骨-胫骨机械轴偏移与早期关节功能恢复的关系[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(21): 3300-3304.
[5]	魏锦强, 黄登承, 曹学伟, 周建伟, 孙赫, 李泽晖. 中医药治疗软骨疾病近20年文献知识图谱分析[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(20): 3202-3209.
[6]	陈宇彤, 李晨晨, 刘阳, 郑亚琴, 杨喜花, 安美文. 急性放射性皮肤损伤Wistar大鼠模型的建立[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(2): 237-241.
[7]	王岩, 董本超, 王颖, 孙磊, 卢斌, 柏豪豪, 田爱现, 马剑雄, 马信龙. 股骨头坏死动物模型的造模方法及特点[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(2): 292-297.
[8]	马笃军, 彭力平, 陈锋, 蒋顺琬, 姜劲挺, 高坤, 林展鹏. 基因编辑技术在骨关节炎基因治疗中的作用与意义[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(2): 298-303.
[9]	朱仕强, 许建峰, 黑晓燕, 陈耘东, 田心保, 张金晨, 林瑞珠. 内热针干预膝骨性关节炎兔软骨下骨Ⅰ型胶原、基质金属蛋白酶3和骨桥蛋白的表达[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(17): 2636-2642.
[10]	刘冯, 张瑜, 王燕丽, 骆威, 韩超珊, 李杨欣. 温敏型壳聚糖水凝胶包封外泌体在缺血性疾病中的应用[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(16): 2479-2487.
[11]	刘红, 万哲, 张真, 张勤. Beagle犬磨牙压低过程中牙根吸收与压低力值的关系[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(14): 2172-2176.
[12]	王越, 王新军, 袁银鹏, 王宇泽. DAIa2GIP 抑制软骨细胞线粒体凋亡的机制[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(11): 1652-1657.
[13]	莫财锋, 程晓阳, 廖明, 何冬凌, 黄智. 竹叶青蛇咬伤广西巴马小香猪动物模型的构建与评价[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(11): 1688-1692.
[14]	阮光萍, 姚翔, 蔡学敏, 李自安, 庞荣清, 潘兴华. 脐带间充质干细胞移植治疗系统性红斑狼疮树鼩模型的效果评价[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(1): 90-95.
[15]	彭旭, 杨继滨, 尤奇, 金瑛, 张骏, 葛振, 邹刚, 江孔军, 刘毅. 金骨莲灌胃对兔骨关节炎模型软骨细胞凋亡相关蛋白表达的影响[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(8): 1188-1194.