蓖麻油引产餐提取物影响子宫收缩和羊膜组织前列腺素E2的含量

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2015.49.028

摘要/Abstract

摘要：

背景：有研究显示蓖麻籽提取物具有一定的抗生育作用，然而国内对蓖麻籽在抗生育方面的报道很少。
目的：探讨蓖麻油引产餐提取物对大鼠子宫收缩和羊膜组织前列腺素E2含量的影响。
方法：选取60只Wistar未孕成年雌性大鼠，随机分为生理盐水组、缩宫素组及引产餐提取物组，各20只，观察并记录给药前后各组大鼠离体子宫的收缩强度、频率及活动力。选取90只妊娠18 d的Wistar成年雌性大鼠，随机分为生理盐水组、缩宫素组及引产餐提取物组，各30只，利用放射免疫方法测定给药后各组大鼠羊膜组织前列腺素E2水平。取生理盐水组大鼠羊膜组织，体外培养羊膜细胞，在培养液中加入不同质量浓度蓖麻酸，培养18 h，利用放射免疫方法测定羊膜细胞前列腺素E2水平。
结果与结论：与给药前及生理盐水组相比，给药后引产餐提取物组大鼠子宫的收缩强度、频率及活动力均明显提高，与缩宫素组相比，给药后引产餐提取物组大鼠子宫的收缩强度、频率差异无显著性意义(t=2.321， P > 0.05)，而活动力较低(t=2.765，P < 0.05)；与生理盐水组相比，引产餐提取物组妊娠大鼠羊膜组织前列腺素E2水平显著增高(t=14.91，P < 0.01)，但引产餐提取物组妊娠大鼠羊膜组织前列腺素E2水平低于缩宫素组(t=2.769，P < 0.05)。大鼠羊膜细胞前列腺素E2水平与蓖麻酸质量浓度及培养时间呈正相关。提示蓖麻油引产餐提取物能够增强宫缩效果、增加羊膜组织前列腺素E2水平，蓖麻酸可能是蓖麻油引产餐的活性成分。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程

关键词: 实验动物模型, 细胞损伤与修复模型, 蓖麻油, 蓖麻粗蛋白, 蓖麻籽提取物, 子宫收缩, 羊膜组织, 前列腺素E2

Abstract:

BACKGROUND: Studies have shown that castor bean extract has certain anti-fertility effect; however, there are few reports in China about anti-fertility aspect of castor bean.
OBJECTIVE: To explore the effects of castor oil diet extract on uterine contraction of rats and the content of prostaglandin E2 in amniotic tissue.
METHODS: Sixty Wistar unfertilized adult female rats were selected and randomly divided into normal saline, oxytocin and castor oil diet extract group (n=20 rats/group). Before and after drug administration, contraction intensity, frequency and motility of isolated uterus of rats in each group were observed and recorded. Ninety Wistar adult female rats of gestation for 18 days were selected and randomly divided into normal saline, oxytocin and castor oil diet extract groups (n=30 rats/group). Prostaglandin E2 level in amniotic tissues of rats was measured by radioimmunoassay method. The amniotic tissue of rats in normal saline group was obtained. The amniotic cells were cultured in vitro by adding different concentrations of ricinoleic acid in the culture medium for 18 hours. Prostaglandin E2 level in amniotic cells was measured by radioimmunoassay method.
RESULTS AND CONCLUSION: Compared with before drug administration and normal saline group, contraction intensity, frequency and motility of isolated uterus of rats in castor oil diet extract group were significantly improved after administration. There were no significant differences in contraction intensity and frequency (t=2.321, P > 0.05) after drug administration between oxytoxin and castor oil diet extract groups, however, after drug administration, motility in the castor oil diet extract group was significantly lower (t=2.765, P < 0.05) than in the oxytoxin group. Compared with normal saline group, prostaglandin E2 level in amniotic tissues of pregnant rats in castor oil diet extract group was significantly higher (t=14.91, P < 0.01); however, prostaglandin E2 level in
amniotic tissue of pregnant rats in the castor oil diet extract group was significantly lower than in the oxytocin group (t=2.769, P < 0.05). Prostaglandin E2 levels in amniotic cells of rats were positively correlated with ricinoleic acid concentration and culture time. These results suggested that castor oil diet extract can enhance contractions and increase prostaglandin E2 levels in amniotic tissue. Ricinoleic acid may be the active ingredient of castor oil diet to induce aboration.

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中图分类号:

R318

刘海彬. 蓖麻油引产餐提取物影响子宫收缩和羊膜组织前列腺素E2的含量[J]. 中国组织工程研究, 2015, 19(49): 8032-8036.

Liu Hai-bin. Castor oil diet extract affects uterine contraction and the content of prostaglandin E2 in amniotic tissue [J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2015, 19(49): 8032-8036.

图/表（结果） 5

2.1 造模成功动物数量及过程所有大鼠均进入结果分析。实验流程见图1。

2.2 模型创新性及更接近人类实践实验1使用的是动情前期或动情期的大鼠，子宫对药物比较敏感。实验2使用的是妊娠18 d的大鼠。实验3使用的是实验2引产餐提取物组大鼠取出羊膜组织。与需要分析的人类子宫收缩时机相符。
2.3 大鼠子宫收缩情况与给药前及生理盐水组相比，给药后引产餐提取物组大鼠子宫的收缩强度、频率及活动力均明显提高(t=9.132，P < 0.01)；与缩宫素组相比，给药后引产餐提取物组大鼠子宫的收缩强度、频率差异无显著性意义(t=2.321，P > 0.05)，而活动力较低(t=2.765，P < 0.05；图2)，3组大鼠干预后子宫的收缩强度、频率及活动力差异有显著性意义(F=5.135，P < 0.05)。

2.4 受孕雌性大鼠羊膜组织及细胞中前列腺素E2水平 3组大鼠羊膜组织前列腺素E2水平差异有显著性意义(F=4.175， P < 0.05)。与生理盐水组相比，引产餐提取物组大鼠羊膜组织前列腺素E2水平显著增高(t=14.91，P < 0.01)；与缩宫素组相比，引产餐提取物组大鼠羊膜组织前列腺素E2水平较少(t=2.769，P < 0.05；图3)。

2.5 蓖麻酸对受孕雌性大鼠羊膜细胞前列腺素E2水平的影响不同浓度不同培养时间条件下大鼠羊膜细胞前列腺素E2水平测定值如表1所示。
以培养18 h后的前列腺素E2水平为例(培养18 h后处理)，使用Pearson相关性分析，结果显示大鼠羊膜细胞前列腺素E2水平与蓖麻酸浓度呈正相关(r=0.853，P < 0.05；图4)。

以加入10 ng/L组为例，使用Pearson相关性分析，结果显示大鼠羊膜细胞前列腺素E2水平与培养时间呈正相关(r=0.775，P < 0.05；图5)。

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引言

材料方法

1.4.1 实验1 选取60只Wistar未孕成年雌性大鼠，随机分为生理盐水组、缩宫素组及引产餐提取物组，各20只。为了使大鼠处于动情前期或动情期、提高大鼠子宫对药物的敏感，每只大鼠需给予己烯雌酚，剂量1 mg/kg。给药24 h后，将大鼠颈椎脱臼处死，快速将腹腔剖开，取约2 cm长度的暴露子宫，作为标本，迅速转移至50 mL台式液溶槽中，在体积分数95%O2和5%CO2气体中、(37±1) ℃的温度下保存0.5 h。维持1 g左右张力，待自发活动平稳则可通过生理记录仪记录各组大鼠子宫收缩收缩强度、频率及活动力。3组大鼠子宫分别注射给予生理盐水2 mL、缩宫素0.9 μg/kg、引产餐提取物4.4 mL/kg^[16]。给药0.5 h后再次记录各组大鼠子宫收缩收缩强度、频率及活动力。强度取收缩最高点，频率为每10 min的收缩次数，活动力为强度与频率的乘积。
1.4.2 实验2 将30只雄性大鼠与90只雌性大鼠进行交配，将受孕雌性大鼠正常饲养至妊娠18 d，随机分为生理盐水组、缩宫素组及引产餐提取物组，各30只，分别给予生理盐水2 mL、缩宫素0.9 μg/kg、引产餐提取物2.2 mL/kg灌胃。妊娠18-20 d每天10：00和18：00给药，共6次。给药前后3 h禁止饮食饮水，最后1次给药2 h后将大鼠颈椎脱臼处死，快速将腹腔剖开，分离暴露子宫内的无血羊膜组织(含水分，称取取样前后的差值)，称取约10 mg置于微型匀浆器内。加1 mL乙醇、2 mL生理盐水研制成匀浆后离心，转速3 000 r/min，时间10 min。取上层清液，置于-30 ℃下保存待测。测量大鼠羊膜组织的前列腺素E2含量。
1.4.3 实验3 将实验2生理盐水组大鼠取出羊膜组织使用胰蛋白酶-乙二胺四乙酸钠消化液进于37 ℃下消化1 h后采用200目筛网过滤细胞，加入含体积分数10%胎牛血清RPMI-1640培养液终止消化，离心去上清液。利用含体积分数10%胎牛血清RPMI-1640培养液制成细胞悬液培养，间隔24，48 h换液，至80%铺满后换成不含血清的RPMI-1640培养液，在体积分数95%O2和5%CO2气体中、(37±1) ℃的温度下、相对湿度100%的环境下进行培养，持续18 h。另在培养液中加入5，10，15 ng/L蓖麻酸培养18 h；分别测定培养0.5，1，3，6，12，18 h后羊膜细胞的前列腺素E2含量。所有测定操作过程按照前列腺素E2放免试剂盒说明书进行。结果检测450 nm波长处的吸光度值。
1.5 主要观察指标大鼠子宫的收缩强度、频率及活动力及羊膜组织前列腺素E2含量。
1.6 统计学分析数据均采取SPSS 18.0统计学软件进行分析，计量资料以x(_)±s表示，两组计量资料之间的比较检验采用t 检验，多组计量资料之间的比较检验用单因素方差分析；相关性分析使用SPSS 20.0统计学分析软件作Pearson相关性分析，P < 0.05为差异有显著性意义。

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讨论

引产是常用的妇产科手段，合理的引产能够减少孕妇痛苦，争取阴道分娩，减少剖宫产，降低母体产褥感染、后续瘢痕妊娠以及新生儿肺部发育不良等并发症发生率^[17-19]。蓖麻油引产餐是临床引产方法之一，临床已经证明其能够加强宫缩、缩短产程、降低产后并发症发生率等，临床使用安全高效，深受广大产妇的青睐^[15，20-22]。
本实验结果显示，相同剂量水平下，与给药前及生理盐水组相比，给药后引产餐提取物组大鼠子宫的收缩强度、频率及活动力均明显提高；与缩宫素组相比，给药后引产餐提取物组大鼠子宫的收缩强度、频率差异无显著性意义，而活动力较低；与生理盐水组相比，引产餐提取物组羊膜组织前列腺素E2水平显著增高，与缩宫素组相比，则较少，然而引产餐提取物效果相比于缩宫素有所欠缺，但相关研究显示引产餐更为安全^[23]。
蓖麻油引产餐是蓖麻油与鸡蛋煎制而成。前列腺素合成的底物是不饱和脂肪酸以及磷脂，而蓖麻油引产餐中正含有以上2种底物，因此有研究认为产妇食用蓖麻油引产餐后可增加体内前列腺素的合成以及释放，从而加强子宫平滑肌收缩；钙离子是平滑肌收缩系统的激动剂，而鸡蛋含有足够的钙，因此有研究认为孕妇食用后，可增加子宫平滑肌细胞内的钙离子浓度从而加强子宫收缩；此外，鸡蛋丰富的营养及热量能够为产妇提供充沛的体力、保持良好的精神状态，确保子宫收缩有力。而有研究表明鸡蛋中的磷脂，钙离子及蛋白质等均不是蓖麻油引产餐加强子宫收缩的物质基础。作者认为前列腺素合成条件苛刻，单纯的摄入不饱和脂肪酸及磷脂无法启动前列腺素的合成；鸡蛋中的钙含量虽然很高，但能够转运到子宫平滑肌中却不会很多；目前的生活水平下，产妇营养已经足够充足，鸡蛋的营养不会起到决定性作用；此外在高温制作条件下，鸡蛋的磷脂、蛋白质可能已经被破坏^[24]。因此蓖麻油引产餐疗效的物质基础仍存在于蓖麻油中。
据文献报道，蓖麻油与蓖麻油引产餐中的脂肪酸没有显著差别^[25]，单纯的蓖麻油也能够加强子宫收缩[26]。本实验结果显示大鼠羊膜细胞前列腺素E2水平与蓖麻酸浓度及培养时间呈正相关，结果表明蓖麻酸能够促进羊膜细胞合成前列腺素E2，浓度越高时间越长，前列腺素E2水平越高。而蓖麻酸是蓖麻油的主要成分，因此蓖麻酸可能是疗效的物质基础。其作用机制可能是蓖麻酸在肠道内皂化为蓖麻酸钠，间接刺激羊膜和蜕膜感受器分泌羊膜酯酶，同时磷脂分解为花生四烯酸而促进合成前列腺素，加强子宫收缩。而本实验则可能是蓖麻酸间接增加子宫平滑肌细胞中的钙离子浓度，从而引发子宫收缩；此外还有可能是引产餐刺激子宫组织合成并释放前列腺素而引发子宫收缩^[27]。
综上所述，在大鼠动物模型中，蓖麻油引产餐提取物能够增强宫缩效果、增加羊膜组织前列腺素E2水平。将蓖麻油主要成分分离，对所有成分进行更加深入的动物实验是后续研究的重点。

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