红花黄色素对糖尿病肾病模型大鼠肾脏细胞血管紧张素Ⅱ1型受体的影响

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2016.18.014

中国组织工程研究 ›› 2016, Vol. 20 ›› Issue (18): 2677-2683.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.18.014

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红花黄色素对糖尿病肾病模型大鼠肾脏细胞血管紧张素Ⅱ1型受体的影响

高燕¹，袁鲁亮²，张海松¹

1河北大学附属医院肾内科，河北省保定市 071000；2解放军66165部队卫生队，河北省保定市 071000

收稿日期:2016-02-07 出版日期:2016-04-29 发布日期:2016-04-29
通讯作者: 张海松，硕士，主任医师，河北大学附属医院肾内科，河北省保定市 071000
作者简介:高燕，女，1976年生，河北省保定市人，汉族，2004年河北医科大学毕业，硕士，副主任医师，副教授，主要从事肾小球疾病及肾小管间质肾病的研究。
基金资助:
河北省医学适用技术跟踪项目(GL201311)

Effects of safflower yellow on angiotensin receptor II1 of kidney cells in diabetic nephropathy rats

Gao Yan¹, Yuan Lu-liang², Zhang Hai-song¹

1Department of Nephrology, Affiliated Hospital of Hebei University, Baoding 071000, Hebei Province, China; 2Health Team of the 66165 Troops of Chinese PLA, Baoding 071000, Hebei Province, China

Received:2016-02-07 Online:2016-04-29 Published:2016-04-29
Contact: Zhang Hai-song, Master, Chief physician, Department of Nephrology, Affiliated Hospital of Hebei University, Baoding 071000, Hebei Province, China
About author:Gao Yan, Master, Associate chief physician, Associate professor, Department of Nephrology, Affiliated Hospital of Hebei University, Baoding 071000, Hebei Province, China
Supported by:
the Tracking Project of Medical Application Technology in Hebei Province, No. GL201311

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：

红花黄色素：从红花的花瓣中提取出的天然黄色素，为查耳酮类化合物，不仅具有色泽艳丽，耐高温、耐高压、耐低温、耐光、耐酸、耐还原和抗微生物等优点，而且还具有扩张冠状动脉、抗氧化、保护心肌、降血压、免疫抑制和脑保护等多种药理功能。

肾素-血管紧张素系统或肾素-血管紧张素-醛固酮系统：是人体内重要的体液调节系统。肾素-血管紧张素系统既存在于循环系统中，也存在于血管壁、心脏、中枢、肾脏和肾上腺等组织中，共同参与对靶器官的调节。在正常情况下，它对心血管系统的正常发育，心血管功能稳态、电解质和体液平衡的维持，以及血压的调节均有重要作用。

背景：红花黄色素有治疗糖尿病肾病等作用，能够保护肾脏功能，减少损害，延缓或阻止糖尿病肾病的发展。

目的：进一步验证红花黄色素对糖尿病肾病大鼠肾脏的作用以及其对肾脏细胞血管紧张素Ⅱ1型受体的表达的影响。

方法：选择30只大鼠，随机分为3组，正常对照组、模型组和实验组，每组10只大鼠。实验组和模型组大鼠建立糖尿病肾病模型。建模成功后1周开始实验组大鼠每天给予红花黄色素注射液27.8 mg/kg腹腔注射，1次/d，模型组和对照组每天给予等量生理盐水腹腔注射，共给药23周。观察大鼠的各项肾脏相关生化指标、肾脏组织的病理学变化以及肾脏组织血管紧张素Ⅱ1型受体的表达情况。

结果与结论：①实验组和模型组大鼠的肥大指数明显高于对照组(P < 0.05)。②模型组的24 h蛋白尿、糖化血红蛋白、总胆固醇、三酰甘油、肌酐及尿素氮均高于对照组(P < 0.05)；实验组的24 h蛋白尿、糖化血红蛋白、总胆固醇及尿素氮均高于对照组(P < 0.05)；实验组的24 h蛋白尿、总胆固醇、三酰甘油、肌酐及尿素氮均低于模型组(P < 0.05)。③模型组大鼠肾小球肥大，毛细血管的基底膜明显增厚，细胞增生，系膜增宽；对照组大鼠肾脏组织结构发现异常改变；实验组大鼠的肾脏组织病理学损害程度介于对照组和模型组之间。④实验组和模型组的肾脏组织血管紧张素Ⅱ1型受体表达水平高于对照组(P < 0.05)，实验组的肾脏组织血管紧张素Ⅱ1型受体表达水平低于模型组(P < 0.05)。结果说明，红花黄色素对糖尿病肾病的肾脏具有保护作用，其作用机制可能与其阻断肾脏局部的肾素-血管紧张素系统有关。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程
ORCID: 0000-0002-4122-8373(高燕)

关键词: 实验动物, 细胞损伤与修复模型, 红花黄色素, 糖尿病肾病, 肾素-血管紧张素系统, 血管紧张素Ⅱ1 型受体

Abstract:

BACKGROUND: Safflower yellow is known to treat diabetic nephropathy, can protect kidney function, reduce lesions, delay or prevent the development of diabetic nephropathy.

OBJECTIVE: To further verify the effects of safflower yellow on the kidney in rats with diabetic nephropathy and the impact of safflower yellow on the expression of renal cell receptor of angiotensin II1.

METHODS: Thirty rats were equally and randomly divided into three groups: normal control group, model group and experimental group. In the experimental group and model group, rat models of diabetic nephropathy were established. At 1 week after model establishment, rats were daily intraperitoneally given safflower yellow injection 27.8 mg/kg, once a day. In the model and control groups, rats were daily intraperitoneally given an equal volume of saline. All rats were administered for 23 weeks. The kidney-related biochemical indicators and pathological changes in kidney tissue and the expression of angiotensin II1 type receptor on kidney tissue of rats were observed.

RESULTS AND CONCLUSION: (1) Hypertrophy index of experimental group and model group was significantly higher than that of control group (P < 0.05). (2) 24-hour proteinuria, glycosylated hemoglobin, total cholesterol, triglycerides, creatinine and urea nitrogen of model group were higher than that of control group (P < 0.05). 24-hour proteinuria, glycated hemoglobin, total cholesterol and urea nitrogen in experimental group were higher than that of control group (P < 0.05). 24-hour proteinuria, total cholesterol, triglycerides, creatinine and urea nitrogen in the experimental group were lower than that of model group (P < 0.05). (3) Glomerular hypertrophy, thickening of capillary basement membrane, cell proliferation, and mesangial widening were detected in the model group. Abnormal changes in the kidney structure were found in the control group. The extent of damage of kidney of histopathology in the experimental group was between the control group and the model group. (4) The expression level of angiotensin receptor II1 of experimental group and model group was higher than that of control group (P < 0.05). The expression level of angiotensin receptor II1 of experimental group was lower than that of model group (P < 0.05). These results indicated that safflower yellow has a protective effect on diabetic nephropathy; the mechanism of action may be associated with blocking kidney partial renin-angiotensin system.
中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程

Key words: Diabetic Nephropathies, Renin-Angiotensin System, Carthamus Tinctorius, Tissue Engineering

高燕，袁鲁亮，张海松. 红花黄色素对糖尿病肾病模型大鼠肾脏细胞血管紧张素Ⅱ1型受体的影响[J]. 中国组织工程研究, 2016, 20(18): 2677-2683.

Gao Yan, Yuan Lu-liang, Zhang Hai-song. Effects of safflower yellow on angiotensin receptor II1 of kidney cells in diabetic nephropathy rats [J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2016, 20(18): 2677-2683.

图/表（结果） 5

2.1 实验动物数量分析实验选用大鼠30只，分为3组，实验过程无脱失，全部进入结果分析。动物分组流程图见图1。

2.2 模型改进实验使用大剂量的链脲佐菌素一次性注射造模，保证了动物之间差异的最小化。有效的提高药物研究的准确性。相对于多次小剂量注射，该种方法操作更加便捷且提高血糖的效果更加良好。

2.3 模型稳定性评价实验使用链脲佐菌素注射造大鼠糖尿病肾病模型，使用60 mg/kg注射剂量可以有效的造成高血糖模型，控制注射链脲佐菌素的用量可以有效的避免动物死亡。血糖在长时间内尽管有一定的下降，但总体保持稳定，随机血糖≥16.7 mmol/L，空腹血糖≥6.7 mmol/L，动物指标更加接近临床患者的实际情况。稳定的高血糖更容易导致稳定的糖尿病肾病的发生。

2.4 各组大鼠的一般情况治疗期间3组大鼠均未出现死亡，实验组和模型组大鼠反应比较迟缓，精神萎靡不振，出现多饮多食多尿的糖尿病三多症状，治疗结束时实验组和模型组大鼠较对照组大鼠明显消瘦，其中模型组消瘦最为明显；对照组大鼠饮食饮水及尿量正常，反应快，精神状态好，未出现消瘦症状。

2.5 各组大鼠肥大指数情况大鼠的肥大指数=肾脏质量/体质量。由表1可以看出：实验组和模型组大鼠的体质量较对照组轻(P < 0.05)，而实验组和模型组之间差异无显著性意义(P > 0.05)；3组大鼠右肾质量无明显差异(P > 0.05)；实验组和模型组大鼠的肥大指数明显大于对照组(P < 0.05)，实验组和模型组之间差异无显著性意义(P > 0.05)。

2.6 各组大鼠生化指标比较由表2可以看出：实验组和模型组大鼠的24 h尿蛋白定量明显高于对照组(P < 0.05)，实验组大鼠的24 h尿蛋白定量低于模型组(P < 0.05)，表明红花黄色素有降低糖尿病肾病模型大鼠24 h尿蛋白的作用；实验组和模型组糖化血红单边明显高于对照组(P < 0.05)，实验组和模型组之间比较无明显差异(P > 0.05)，表明红花黄色素对糖尿病肾病模型大鼠的糖化血红蛋白没有太大影响；实验组和模型组大鼠的总胆固醇明显高于对照组(P < 0.05)，实验组大鼠的总胆固醇低于模型组(P < 0.05)，表明红花黄色素可以降低糖尿病肾病模型大鼠的总胆固醇水平；模型组的三酰甘油水平最高，高于对照组和实验组(P < 0.05)，表明红花黄色素有降低糖尿病肾病模型大鼠三酰甘油的作用；模型组的肌酐水平最高，高于对照组和实验组(P < 0.05)，实验组和对照组之间无差异(P > 0.05)，表明红花黄色素有降低糖尿病肾病模型大鼠肌酐的作用；实验组和模型组大鼠的尿素氮明显高于对照组(P < 0.05)，实验组大鼠的尿素氮低于模型组(P < 0.05)，表明红花黄色素可以降低糖尿病肾病模型大鼠的尿素氮水平。

2.7 各组大鼠的肾脏形态学情况模型组大鼠肾小球肥大，毛细血管的基底膜明显增厚，细胞增生，系膜增宽；对照组大鼠肾小球结构正常，毛细血管基底膜、细胞、系膜等均没有发现异常改变；实验组大鼠的肾脏组织病理学显示轻度损害，程度介于对照组和模型组之间。见图2。

2.8 各组大鼠血管紧张素Ⅱ1型受体比较血管紧张素Ⅱ1型受体比较在3组大鼠肾脏组织中均有表达，主要集中在肾小管内，以近端为主，远端表达较弱，血管周围也可见表达，肾小球内未发现有表达。由表3可以看出：3组之间比较，实验组和模型组大鼠的血管紧张素Ⅱ1型受体表达高于对照组(P < 0.05)，实验组大鼠的表达低于模型组(P < 0.05)，表明红花黄色素可以抑制血管紧张素Ⅱ1型受体在糖尿病肾病模型大鼠肾脏中的表达。

参考文献

[1] Hotta N, Kawamori R, Fukuda M, et al. Short Report: TreatmentLong-term clinical effects of epalrestat, an aldose reductase inhibitor, on progression of diabetic neuropathy and other microvascular complications: multivariate epidemiological analysis based on patient background factors and severity of diabetic neuropathy. Diabet Med. 2012;29 (12):1529-1533.

[2] 苏彦君,郝存勖,王青菊,等.姜黄素对实验性糖尿病大鼠肾脏蛋白激酶C移位活化的抑制作用[J].河北医药, 2010, 32(24): 3434-3436.

[3] Shepler B,Nash C,Smith C,et al.Update on Potential Drugs for the Treatment of Diabetic Kidney Disease. Clin Ther. 2012;34(6):1237-1246.

[4] Zhou X, Wang B, Zhu L, et al. A novel improved therapy strategy for diabetic nephropathy:Targeting AGEs. Organogenesis.2012;8(1):18-21.

[5] 丁瑞恒,廖蕴华. 黄芪对晚期糖基化终末产物作用下肾小球系膜细胞的影响[J].江苏中医药.2011,43(3):82-84.

[6] 余伍中,高国胜,翁光明.黄芪注射液对早期糖尿病肾病肾功能指标的影响[J].浙江临床医学.2012,14(12):1508- 1509.

[7] 施海涛,王雪峰,董春玲,等.冬虫夏草制剂治疗糖尿病肾病的作用机制研究进展[J].健康必读.2011,(9):332-332.

[8] 施海涛,杨庆春,王雪峰,等.冬虫夏草对延缓糖尿病肾病肾小球系膜细胞增殖的研究[J].中国现代医生.2011,49(22): 11-12.

[9] 张煜敏,杨丽萍,沈波.金水宝胶囊治疗糖尿病肾病的系统评价[J].现代中西医结合杂志.2012,21(23):2509-2512.

[10] 陈艳,吴晨光,王丽,等.α-硫辛酸对糖尿病大鼠肾脏聚 ADP-核糖多聚酶表达的影响[J].江苏医药，2011,37(6): 624-626.

[11] Yi X, Xu L, Hiller S, et al. Reduced expression of lipoic acid synthase accelerates diabetic nephropathy.J Am Soc Nephrol. 2012;23(1): 103-111.

[12] 李雪峰,李艳颖,贾文红,等.a-硫辛酸治疗43例Ⅲ期糖尿病肾病患者疗效分析[J].中国慢性病预防与控制, 2011, 19(5): 506-508.

[13] Hwang I,Lee J, Huh JY, et al. Catalase deficiency accelerates diabetic renal injury through peroxisomal dysfunction. Diabetes. 2012;61(3):728-738.

[14] Zhang Y, Peng F,Gao B,et al.High glucose-induced RhoA activation requires caveolae and PKCβ1-mediated ROS generation.Am J Physiol Renal Physiol.2012;302(1): F159-172.

[15] 王雅芸,徐家蓉,缪珩,等.白藜芦醇对糖尿病大鼠肾皮质氧化应激损伤的保护作用[J].中华糖尿病杂志，2012,4(4): 229-233.

[16] 田华生,宋丹玲.尿毒清颗粒治疗糖尿病肾病肾功能不全的疗效观察[J].临床内科杂志,2011,28(5):350-351.

[17] 李群苑,毛林浩.糖尿病肾病患者的临床分析[J].当代医学，2011,17(23):49-50.

[18] 刘会贞,刘雯,李金荣,等.RAS 双重阻断治疗糖尿病肾病患者的疗效[J].中国老年学杂志,2011,31(11):1964-1966

[19] Banki NF,Ver A,WagnerLJ,et al.Aldosterone Antagonists in Monotherapy Are Protective against Streptozotocin-Induced Diabetic Nephropathy in Rats.PLoS One. 2012;7 (6): e39938.

[20] 李世云,李勤,李黎,等.螺内酯对 2 型糖尿病肾病患者尿清蛋白的影响[J].中国全科医学,2011,14(33):3784- 3786.

[21] 刘小娟,杨藕罗,冯辉亮.厄贝沙坦联合螺内酯治疗糖尿病肾病微量蛋白尿的临床疗效观察[J].中国医药指南,2012, 10(2):25-26.

[22] 梁国瑞,刘俊霞.贝那普利和螺内酯联合治疗糖尿病肾病的临床研究[J].中国医药科.2012,2(2):99-99.

[23] 马东蔚,王秋月. Rho/Rho激酶信号通路与糖尿病肾病[J].国际内分泌代谢杂志,2011,31(3):193-195.

[24] 王丹,施辉范,亚平,等.螺内酯对 ROCK1 在单肾切除糖尿病大鼠肾组织中表达及活性的影响[J].中华肾脏病杂志,2012,28(7): 512-517.

[25] 王洋.TSC-mTOR 信号通路在糖尿病及糖尿病肾病发病机制中的作用[J].广西医学,2010,32(3):354-358

[26] Zhang S,Cai G,Fu B,et al.SIRT1 is required for the effects of rapamycin on high glucose-inducing mesangial cells senescence. Mech Ageing Dev. 2012;133 (6): 387-400.

[27] 刘磊,常保超,郝丽.霉酚酸酯对糖尿病大鼠肾组织中TGF-β1 与 OPN 表达的影响[J].中华全科医学, 2011, 9(5):676-677.

[28] YU WM,WANG H,REN XJ,et al. Experimental study of leflunomide on renal Protective effect and on inflammatory response of streptozotocin induced diabetic rats.Nephrology (Carlton).2012;17(4): 380-389.

[29] 李洁,张乾坤,金烈.糖尿病肾病大鼠足细胞的影响[J].浙江实用医学.2012,17(1):10-12.

[30] 宋纯东,薛黎明.雷公藤多甙对早期糖尿病肾病大鼠肾组织 TGF-β1表达的影响[J].中国中医药科技,2011, 18(2): 125-126.

[31] 辛小龙,王静.不同剂量雷公藤多甙治疗糖尿病肾病的短期疗效差异[J]. 现代中西医结合杂志.2011,20(30): 3815-3816.

[32] 中国医师协会内分泌代谢科医师分会.2 型糖尿病合并慢性肾脏病患者口服降糖药用药原则中国专家共识[J].中国糖尿病杂志,2013,21(10):865-870.

[33] 叶俊鹏,黄培良,赖瑞平. 门诊常用降脂药物的用药分析[J].现代医院2013,13(12):65-67.

[34] 金秀名. 血液透析与腹膜透析治疗糖尿病肾病的疗效观察[J].中国实用医药,2014,9(1):118-119.

[35] 陆翰澜,陈瑜,傅尚希,等. 亲属活体肾移植后供者安全性评价[J].中国组织工程研究,2013,17(44):7681-7686.

[36] 李建国,胡齐鸣,张宝霞,等.益气养阴收敛固涩方治疗气阴两虚型糖尿病肾病30例临床观察[J].实用中西医结合临床,2014,14(3):77-78

[37] 郭彦军.益肾化瘀方治疗糖尿病肾病疗效观察[J].陕西中医,2013,34(8):954-955.

[38] 蒋丙义. 血府逐瘀汤治疗43例糖尿病肾病临床效果观察[J].基础医学论坛,2014,18(14):1854-1855.

[39] 万秋,刘秀明,杨文婷.红花黄色素研究概述[J].生命的化学, 2013,33(2):54-58．

[40] 刘俐,魏云,卜振军,等.红花黄色素对犬心肌缺血及血流动力学的影响[J].中国医药科学,2013,24:26-28．

[41] 郭雪婷,杨晓君,王颖．复合红花黄色素抗凝血作用研究[J].新疆农业科学,2012,49(9):1759-1763．

[42] 苏慧,刘萍,温薇,等.红花黄色素冻干粉针对大鼠体内体外血栓形成的影响[J].中医药信息,2012,29(6):29-30．

[43] 韩进庭．红花黄色素在髋关节置换术后预防下肢静脉血栓中的应用[J].中国实用医药,2013,8(26):192-193．

[44] 薛新宏,赵小明,彭延波,等．雌激素联合依达拉奉对大鼠脑缺血再灌注的神经保护作用[J].河北医药,2013,35(3): 325-327．

[45] 王晓丽,王毅,张赛,等.红花黄色素对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用[J].中华实用诊断与治疗杂志,2014,28(1): 12-14．

[46] Zhang N,Xing MY,Wang YY,et al．Hydroxysaf ower yellow A improves learning and memory in a rat model of vascular dementia by increasing VEGF and NR1 in the hippocampus.Neurosci Bull.2014;30(3):417-424．

[47] 胡波,裴昌录,李小川．注射用红花黄色素对股骨折患者炎症因子影响探讨[J].辽宁中医药大学学报,2013,15(8): 201-203．

[48] 白雪梅,李向东,宋洁,等. 红花黄色素对早期糖尿病肾病患者hs-CRP、IL-8的影响[J].中国中西医结合肾病杂志, 2012,13(8):698-700．

[49] 郭登洲,王月华,边东,等．红花黄色素对糖尿病肾病大鼠血管紧张素系统的影响[J].中成药,2009,31(12): 1832-1836．

引言

材料方法

1.1 造模动物及材料实验在2013年6月至2014年11月在河北大学附属医院实验室完成。

实验动物：选取体质量180-220 g雄性SD大鼠30只，大鼠购于河北动物中心。

试剂：注射用红花黄色素(国药准字Z20050146，浙江永宁药业股份有限公司)、链脲佐菌素(美国Sigma公司)、兔抗大鼠血管紧张素Ⅱ1型受体多克隆抗体(美国Bioworld公司)、SABC 试剂盒(海军总医院科技开发中心)、抗体稀释液(北京博奥森生物技术有限公司)、DAB 显色试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司)等。

仪器：血糖仪(北京怡成生物电子技术有限公司)、电热恒温水箱(上海一恒科技有限公司)、低温冰箱(日本三洋公司)、电热式蒸气消毒器(山东新华医疗器械厂)、透射电镜(日本HITACHI公司)、光学显微镜(日本奥林巴斯公司)、电子天平(常熟双杰测试仪器厂)、切片机(德国LEICA公司)、水浴振荡器(哈尔滨东联电子技术开发有限公司)、生化分析仪(美国贝克曼公司)、pH计(上海雷磁仪器厂)、高速冷冻离心机(德国Andreas Hettich GmbH8 CO.KG)、电热恒温鼓风干燥箱(上海一恒科技有限公司)、Versa Doc成像系统(美国Bio-Rad)等。

1.2 造模方法

1.2.1 动物分组将30只大鼠随机分为3组，正常对照组、模型组和实验组，每组10只大鼠。

1.2.2 建立糖尿病肾病模型模型组和实验组大鼠腹腔内一次性注射链脲佐菌素(STZ)60 mg/kg，正常对照组腹腔注射等量生理盐水。注射后观察大鼠饮水和进食情况，模型组和实验组在注射STZ 72 h后经尾静脉抽血检测大鼠随机血糖，随机血糖≥16.7 mmol/L表明糖尿病建模成功。

1.2.3 建模大鼠处理建模成功后1周开始实验组大鼠每天给予红花黄色素注射液27.8 mg/kg腹腔注射，1次/d，模型组和对照组每天给予等量生理盐水腹腔注射，共给药23周。每天记录大鼠体质量、饮水及进食量。

1.3 主要观察指标

1.3.1 各项肾脏相关生化指标检测建模成功后24周结束时留取标本：留取大鼠24 h尿液用双缩脲法测定大鼠的24 h尿蛋白定量；麻醉大鼠后腹主动脉抽血，测定血肌酐、尿素氮、糖化血红蛋白、三酰甘油及总胆固醇指标。

1.3.2 大鼠肾脏组织观察建模成功后24周结束时称取大鼠体质量，麻醉大鼠，生理盐水冲洗肾脏，然后将右肾脏取出称质量，留取部分肾脏组织进行检测。将部分肾脏组织固定、脱水、透明、石蜡包埋后进行切片，然后进行染色，观察肾脏组织的变化。

1.3.3 大鼠肾脏组织血管紧张素Ⅱ1型受体的免疫组织化学法检测将肾脏组织标本多聚甲醛固定、乙醇脱水、二甲苯透明、石蜡包埋。切成5 μm厚切片。将上述切片常规脱蜡，双蒸水及PBS洗涤，浸入枸橼酸缓冲液中加热修复，山羊血清封闭，加入第一抗体过夜孵育，洗涤，加入第二抗体孵育，洗涤，加入SABC试剂孵育，洗涤，加入显示液进行显色，显微镜下观察控制染色时间，苏木红复染，中性树胶进行封固。高倍镜下采集分析图像，每张切片选择10个视野进行免疫组化结果测定，取10个视野的平均值，计算肾小管间质的相对阳性面积。

1.4 统计学分析所有数据输入SPSS 18.0软件进行处理,计量资料用x(_)±s表示，组间比较采用t 检验，取P < 0.05为差异有显著性意义。

讨论

3.1 糖尿病模型 STZ造大鼠糖尿病模型是目前最常用的糖尿病模型之一，主要的造模方法包括链脲佐菌素注射造模法，胰腺切除法及转基因动物法等。其中，胰腺切除法是采用手术法切除胰腺，造成血糖升高，该种方法不方便定量，切除的多和少对实验结果影响极大，且胰腺切除法造成的模型更类似与一型糖尿病。这一类型糖尿病发病率低，临床上较少出现，不具有太大临床意义。转基因动物法虽然成模更加稳定准确，但由于价格昂贵，因此不适合用于大规模的饲养及实验。STZ注射可以有效的破坏胰腺细胞，造成血糖的升高，是一种国内外公认的造糖尿病模型的方法，结果稳定，且在一段时间后可以成功诱导大鼠产生各类型的糖尿病并发症，使用这一模型进行临床药物研究，更加贴近于临床情况。

3.2 糖尿病肾病的发病机制糖尿病肾病是导致终末肾病的主要原因，主要病理特点为肾小球肥大，基底膜增厚，系膜区细胞外基质堆积，晚期出现间质纤维化，最终发展为肾功能不全。糖尿病肾病的发病机制比较复杂：①多元醇代谢通道激活：糖尿病肾病的发病与多元醇代谢通道密切相关，细胞内的高糖状态会激活多元醇代谢通道，使葡萄糖转化成山梨醇，在细胞内聚集引起细胞损伤，并且增加肾小球的氧化反应，导致肾小管间质纤维化以及肾小球硬化。醛糖还原酶抑制剂可以抑制多元醇代谢通路激活，降低山梨醇生成，抑制氧化应激以及炎症反应，起到保护肾脏的作用^[1]。②PKC：PKC是一种蛋白激酶，在细胞多种功能中起主要作用，在糖尿病肾病的发生发展中起信号传导作用，体内高血糖状态可引起PKC活化，激活多种炎症因子，影响血管功能以及血管通透性，从而引起肾脏损伤，PKC抑制剂通过抑制PKC起到保护肾脏作用^[2]。③AGEs：糖尿病肾病的高糖状态引起AGEs的生成，AGEs与其受体结合激活多种通路，释放细胞因子引起肾脏损伤，AGEs抑制剂或AGEs受体抑制剂可以抑制肾脏组织的酶糖化和氧化，保护肾脏细胞，减轻肾脏纤维化及硬化^[3-7]。④炎症反应：体内的高血糖使肾脏细胞产生多种炎症因子，导致肾脏损伤，转化生长因子(TGF)是主要的致纤维化因子，肿瘤坏死因子a增加肾小球通透性，诱导成纤维细胞的增加，抗炎治疗通过抑制炎症反应，减轻肾脏损害，保护肾功能^[8-9]。⑤氧化应激：氧化应激与糖尿病肾病关系密切，高糖状态下，氧化应激反应被启动，生成大量氧自由基，同时高糖状态降低抗氧化酶的活性，使氧自由基的清除减少，导致肾脏损伤。抗氧化治疗是治疗糖尿病肾病的另一种途径，能够降低氧自由基的生产，并清除已经生成的氧自由基，减轻肾脏损害^[10-16]。⑥肾素-血管紧张素-醛固酮系统：高糖状态增强肾素-血管紧张素-醛固酮系统的活性，引起肾脏内的跨膜压力增高，细胞通透性增加，还可引起肾间质纤维化，促进细胞凋亡，所以抑制肾素-血管紧张素-醛固酮系统可以延缓糖尿病肾病的发生发展。ARB和ACEI是肾素-血管紧张素-醛固酮系统的两种抑制剂，通过抑制肾素-血管紧张素-醛固酮系统的活性起到保护肾脏的作用^[17-22]。⑦Rho激酶：Rho激酶可以激活Rho/ROCK信号通路，激活多种炎症因子，参与细胞的增殖和凋亡，与肾脏的纤维化有关，其抑制剂可以阻止或者延缓糖尿病肾病的发生发展^[23-24]。⑧TSC-mTOR信号通路：TSC-mTOR信号通路参与胰岛素抵抗，与糖尿病肾病的发生发展有关^[25]。其抑制剂可以改善糖尿病肾病的病理生理过程，提高对胰岛素的敏感性^[26-31]。

3.3 糖尿病肾病的治疗糖尿病肾病的治疗主要有西医治疗和中医治疗。西医治疗根据不用期别采用以下治疗：①控制血糖：高血糖是糖尿病肾病及其并发症发生发展的主要原因，防止糖尿病肾病最主要的是控制好血糖^[32]。②控制血压：高血压在糖尿病肾病中比较常见，并且是导致糖尿病肾病发生发展的主要因素，控制血压可以减少对肾脏的损害。③控制血脂：糖尿病肾病经常伴有高血脂^[33]。④饮食控制：糖尿病肾病的饮食以优质蛋白为主，限制植物蛋白的摄入，适当控制主食。⑤替代治疗：对于进入终末期肾衰竭的患者可以采用肾脏替代治疗^[34]。⑥器官移植：肾移植是目前治疗终末期肾病有效的治疗方法^[35]。⑦中医治疗：糖尿病肾病在中医里属于消渴病的范畴，根据中医辨证论治的原则治疗糖尿病肾病效果显著，可以降低蛋白尿，保护肾脏，较中医治疗副反应少。其中益气养阴收敛固涩方可以改善气阴两虚型糖尿病肾病的症状，减少蛋白尿，延缓病情发展^[36]；益肾化瘀方可以脾肾两虚型糖尿病肾病增加肾脏血流，恢复肾脏功能^[37]；血府逐瘀汤也可以改善肾脏血流，保护肾功能，延缓或阻断病情发展^[38]。

3.4 红花黄色素的药理作用红花具有痛经止痛和活血散瘀的作用，红花黄色素是红花的主要活性成分，属于天然色素，是国家批准使用的新药^[39]。红花黄色素的药理作用有一下几种：①对于心血管系统具有扩张动脉，改善心肌缺血缺氧状态^[40]；降低血压、改善组织器官的血液供应。②具有抗凝作用，可以阻止血栓形成^[41-43]。③具有明显的降低血脂的作用。④具有清除氧自由基^[44-45]，抑制细胞凋亡，降低血液黏度，改善记忆的作用^[46]。⑤具有抗炎、抗氧化作用，并具有耐受缺氧的能力^[47]。红花黄色素在治疗糖尿病肾病中的作用主要为：通过降低血清白细胞介素8和高敏C反应蛋白的表达抑制炎症反应^[48]，通过抑制肾素-血管紧张素-醛固酮系统活性减少肾脏损害，从而达到保护肾脏的作用^[49]。

实验通过建立大鼠糖尿病肾病模型，对其进行红花黄色素治疗，观察大鼠治疗后的生化指标、大鼠的肾脏病理形态变化以及血管紧张素Ⅱ1型受体的表达情况，发现红花黄色素对肾脏有保护作用，可以调节代谢紊乱状态，降低蛋白尿排泄，减轻肾脏组织的病理学改变；可以抑制血管紧张素Ⅱ1型受体在糖尿病肾病模型大鼠肾脏中的表达。肾素-血管紧张素系统的激活在糖尿病肾病发生发展中的作用越来越受到重视，红花黄色素有抑制血管紧张素Ⅱ1型受体表达的作用，可以初步认为红花黄色素对糖尿病肾病的治疗是通过抑制肾素-血管紧张素系统的激活发挥作用。

综上所述，红花黄色素对糖尿病肾病的肾脏具有保护作用，其作用机制可能与其阻断肾脏局部的肾素-血管紧张素系统有关。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程

红花黄色素对糖尿病肾病模型大鼠肾脏细胞血管紧张素Ⅱ1型受体的影响

Effects of safflower yellow on angiotensin receptor II1 of kidney cells in diabetic nephropathy rats

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[1]	陈盛, 刘建航, 刘本涛, 张兆剑, 李本澈, 张帆, 李东飞. 脊髓型颈椎病动物模型制作的关注热点[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(24): 3890-3896.
[2]	刘玥彤, 王琴, 杨烨, 朱筠, 阿布力克木•吐尔地. 1,25(OH)₂D3干预糖尿病肾病模型大鼠肾脏组织MicroRNA-130b及转化生长因子β1的变化 [J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(2): 248-253.
[3]	刘晓晨, 王改凤, 张社峰. 有氧运动可改善糖尿病肾病模型小鼠肾脏的氧化应激损伤[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(17): 2712-2717.
[4]	王迪生，孔刘莎，王佳，李霞. 红细胞生成素预处理脂肪间充质干细胞移植治疗大鼠糖尿病肾病[J]. 中国组织工程研究, 2019, 23(9): 1370-1376.
[5]	高俊丽，朱赟洁，刘国香，王巍巍，张金元 . 黄芪甲苷孵育的脂肪干细胞治疗糖尿病肾病[J]. 中国组织工程研究, 2019, 23(29): 4629-4636.
[6]	梁丽嫦，范雅雯，牟雷，谢天，江晓兵，任辉，张天奉1. 理中汤干预2型糖尿病模型大鼠肾脏的变化[J]. 中国组织工程研究, 2019, 23(27): 4356-4362.
[7]	尹逊路，冯敏山，朱立国，李学朋，陈琳，李玲慧，展嘉文，魏戌. 椎间盘退行性变动物模型：经济性、易行性、可靠性和可控性[J]. 中国组织工程研究, 2018, 22(4): 619-624.
[8]	朱立国，唐彬，魏戌，银河. 神经根型颈椎病动物模型的研究进展及评价[J]. 中国组织工程研究, 2018, 22(35): 5700-5705.
[9]	王天行，陈跃来，尹平，徐世芬，郑慧敏. 压力性尿失禁动物模型：正确选择与研究目的相关实验动物模型的构建方法[J]. 中国组织工程研究, 2018, 22(28): 4557-4561.
[10]	杨辉，牛美芝，郭晓丽，刘福垒. 重组腺病毒介导MRTF-A基因干预缺血再灌注损伤模型大鼠心肌细胞的凋亡[J]. 中国组织工程研究, 2018, 22(24): 3843-3848.
[11]	宾文婷，常加松，吴剑平. 四氯化碳加乙醇复合法诱导肝硬化大鼠模型的建立及验证[J]. 中国组织工程研究, 2018, 22(20): 3224-3229.
[12]	李艳芬，叶晓阳，陈晓帆，张伟. 白细胞介素17A在视神经损伤模型小鼠神经再生中的作用[J]. 中国组织工程研究, 2018, 22(12): 1883-1888.
[13]	杜俊文，吴韬，张坤，苏白玉，卢彩萍，王伟超，雷琳，郭静霞. 骨髓间充质干细胞移植改善糖尿病肾病大鼠血糖及尿总蛋白[J]. 中国组织工程研究, 2016, 20(6): 855-860.
[14]	张春丽，李忠海，周颖，刘彦，侯树勋. 构建骨质疏松动物模型建模方法的改进及评价[J]. 中国组织工程研究, 2016, 20(5): 754-759.
[15]	曲春涛. 构建双足类大型鸟类鸸鹋股骨头坏死模型[J]. 中国组织工程研究, 2016, 20(5): 611-615.