脐血间充质干细胞移植治疗肾性贫血：热点与问题

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2013.32.023

中国组织工程研究 ›› 2013, Vol. 17 ›› Issue (32): 5895-5900.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2013.32.023

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脐血间充质干细胞移植治疗肾性贫血：热点与问题

王凯¹，焦红亮²，李建斌¹，吴宪鸣³

1河南省红十字血液中心，河南省郑州市 450012
2郑州大学第一附属医院神经外科，河南省郑州市 450052
3郑州市第三人民医院肾内科，河南省郑州市 450012

收稿日期:2013-04-28 修回日期:2013-07-31 出版日期:2013-08-06 发布日期:2013-08-06
通讯作者: 李建斌，硕士，主任医师，河南省红十字血液中心，河南省郑州市 450012 ljb8938@163.com
作者简介:王凯，男，1964年生，河南省杞县人，汉族，郑州大学医学院毕业，副主任技师，主要从事血液成分、输血治疗等研究。 kaiwang1965@126.com

Umbilical cord blood mesenchymal stem cell transplantation for the treatment of renal anemia: Hot spots and issues

Wang Kai¹, Jiao Hong-liang², Li Jian-bin¹, Wu Xian-ming³

1Henan Red Cross Blood Center, Zhengzhou 450012, Henan Province, China
2Department of Neurosurgery, the First Affiliated Hospital of Zhengzhou University, Zhengzhou 450052, Henan Province, China
3Department of Nephrology, the Third Hospital of Zhengzhou, Zhengzhou 450012, Henan Province, China

Received:2013-04-28 Revised:2013-07-31 Online:2013-08-06 Published:2013-08-06
Contact: Li Jian-bin, Master, Chief physician, Henan Red Cross Blood Center, Zhengzhou 450012, Henan Province, China ljb8938@163.com
About author:Wang Kai, Associate chief technician, Henan Red Cross Blood Center, Zhengzhou 450012, Henan Province, China kaiwang1965@126.com

摘要/Abstract

摘要：

背景：脐血作为造血干细胞来源已成为研究热点，脐血输注辅助治疗已在国内使用，临床已将脐血输注用于纠正尿毒症患者的肾性贫血。
目的：评价脐血间充质干细胞移植治疗肾性贫血的有效性及安全性，并与不同来源的间充质干细胞不同移植途径对肾脏病的治疗作用进行比较。
方法：回顾分析2010年1月至2012年12月在河南省红十字血液中心门诊部收治的6例肾性贫血患者，实验经医学伦理委员会批准，6例患者对治疗方案均知情同意，产妇及其家属均签署知情同意书，以无菌塑料采血袋密闭式采集足月新生儿脐血80-140 mL，分离获得的人脐血间质干细胞通过手背浅静脉输注入肾性贫血患者体内，细胞数≥1×10⁸/份，2份/次，间隔4 d后再次输注，共3次，观察治疗前后血红细胞压积、血红蛋白、尿中红细胞、肾血流量变化。
结果与结论：治疗前后患者的血红蛋白、血红细胞压积、尿中红细胞、肾血流量显著增加(P < 0.05)。经手背浅静脉多份输注脐血间充质干细胞，方法简便且安全有效，是治疗肾性贫血的一种新方法。但此次临床研究设计为自身前后对照，数据结论具有一定局限性，需进一步验证。

关键词: 干细胞, 干细胞学术探讨, 肾性贫血, 肾功能衰竭, 脐血, 间充质干细胞, 造血干细胞, 移植途径, 归巢, 红细胞生成素, 细胞因子

Abstract:

BACKGROUND: Umbilical cord blood as a source of hematopoietic stem cells has become a hot topic. Adjuvant therapy of umbilical cord blood transfusion has been used in China to correct renal anemia of uremia patients.
OBJECTIVE: To evaluate the efficacy and safety of umbilical cord blood mesenchymal stem cells in the treatment of renal anemia, and to compare with the effects of different sources of mesenchymal stem cells with different transplantation methods on the treatment of kidney diseases.
METHODS: A retrospective analysis was conducted on six renal anemia patients in the Department of Outpatient, Henan Red Cross Blood Center between January 2010 and December 2012. The experiment was approved by Medical Ethics Committee, six patients were informed consent for treatment programs, and parturients and their families have signed the informed consent. The newborns umbilical cord blood of 80-140 mL were collected with closed sterile plastic blood bags, and then the separated umbilical cord blood mesenchymal stem cells were transfused into the renal anemia patients through the superficial vein in the back of the hand with the number of ≥1×10⁸/copy, two copies per time, and re-transfused after 4 days, a total of three times. The blood hematocrit, hemoglobin, red blood cells in urine, renal blood flow changes were observed before and after treatment.
RESULTS AND CONCLUSION: The hemoglobin, blood hematocrit, red blood cells in urine and renal blood flow were significantly increased before and after treatment (P < 0.05). Transfusion of multiple copies of umbilical cord blood mesenchymal stem cells through the superficial vein in the back of the hand is convenient and safe, which is considered as a new method for the treatment of renal anemia. But there are certain limitation in the data and the conclusion as the clinical research was designed as self-control, so further confirm is needed.

Key words: stem cells, stem cell academic discussion, renal anemia, renal failure, umbilical cord blood, mesenchymal stem cells, hematopoietic stem cells, transplantation method, homing, erythropoietin, cytokines

中图分类号:

R318

王凯，焦红亮，李建斌，吴宪鸣. 脐血间充质干细胞移植治疗肾性贫血：热点与问题[J]. 中国组织工程研究, 2013, 17(32): 5895-5900.

Wang Kai, Jiao Hong-liang, Li Jian-bin, Wu Xian-ming. Umbilical cord blood mesenchymal stem cell transplantation for the treatment of renal anemia: Hot spots and issues[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2013, 17(32): 5895-5900.

图/表（结果） 1

2.1 相关研究资料的获取 检索CNKI数据库和SCI数据库的方法获取相关研究文献^[12-13]。检索时间范围1990至2012年，检索词为“肾脏病（kidney disease）；肾性贫血（renal anemia）；肾功能衰竭(renal failure；动物模型(animal models)；脐血(umbilical cord blood)；间充质干细胞(mesenchymal stem cells)；胚胎干细胞(embryonic stem cells)；骨髓干细胞(bone marrow stem cells)；造血干细胞(hematopoietic stem cells)；移植途径(migration path)；红细胞生成素(erythropoietin)”，检索出相关研究文献36篇，其中CNKI数据库文献20篇，学术期刊15篇，学位论文3篇，会议论文2篇。SCI数据库文献16篇。按设定的主题要求，纳入研究的文献共14篇^[14-27]。

2.2 入选标准 ①研究的主题包括治疗肾性贫血间充质干细胞的生物学特性、间充质干细胞种类及不同移植途径的特点进行比较等，排除与研究主题无关的文献。②研究所撰写的文章类型包括原著、实验分析及病例分析等，排除综述类文献。③文献内容筛选如下，检索的文献中对间充质干细胞的生物学特性进行研究的文献共3篇，3篇文献为同一实验项目，且为同一组实验人员进行的研究，定为重复研究文献，选取其中1篇进行深入分析。同样对常见的间充质干细胞在肾性贫血中应用研究的3篇文献也为重复文献，选取其中1篇进行深入分析。在间充质干细胞不同移植途径的特点比较中，同样检索出重复的2篇研究文献，选取其中1篇进行深入分析。

2.3 质量评估 符合纳入标准的14篇研究中，分析治疗肾性贫血患者间充质干细胞的生物学特性^[14]；不同来源的间充质干细胞对肾性贫血的治疗作用^[15-20]；间充质干细胞不同移植途径对肾性贫血的治疗作用^[21-27]。

2.4 不同来源的间充质干细胞对肾性贫血的治疗作用 间充质干细胞是造血微环境的重要组成部分，关于肾性贫血患者的间充质干细胞的生物学特性的研究目前尚不多见。间充质干细胞来源于发育早期的中胚层和外胚层，最初在骨髓中发现，因其具有多向分化潜能、造血支持和促进干细胞植入、免疫调控和自我复制等特点而日益受到人们的关注^[14]。因此，间充质干细胞生物学特性稳定，具有多向分化潜能，在改善肾性贫血方面显示了更大的应用前景。

自体骨髓间充质干细胞：Fouillard等^[15]学者对1例68岁的贫血患者给予自体骨髓间充质干细胞贫血输注治疗。结果第1次输注后3周未发现造血功能改善，第2次输注后34 d，仍未发现造血功能恢复且患者死于之前的真菌感染，但患者的骨髓活检显示部分骨髓基质有所改善，造血基质祖细胞较之前也明显增加。此次实验虽未能使患者的造血功能改善，但提示自体骨髓间充质干细胞成功植入并在患者体内发挥支持造血的作用。

脐血间充质干细胞：脐血干细胞作为间充质干细胞的一种，具有间充质干细胞的多向分化潜能、免疫调控及自我复制等特点。Lee等^[16]用含质量分数20%胎牛血清，L-谷氨酰胺的IMDM培养基，并加入碱性成纤维生长因子，也培养出生长良好的干细胞。2011年，Xu等^[17]研究了半相合异基因骨髓或外周血造血干细胞移植结合脐血间充质干细胞输注治疗贫血的效果，结果显示，5例实现造血重建，白细胞计数> 2×10⁹L^-¹的平均时间为13.8 d，而血小板水平>20×10⁹ L^-¹的平均时间为17.8 d。总之，结合脐血间充质干细胞输注的半相合异基因造血干细胞移植是一种治疗贫血的有效方法，但还有待进一步大样本研究。

人脐带间充质干细胞：脐带血来源的脐血间充质干细胞优势在于脐血还有丰富的间质干细胞，不仅可用于造血系统疾病，也可用于非造血系统疾病的治疗。胡凯猛等^[18]以人脐带间充质干细胞为诱导前体细胞，采用贴壁法和酶消化法获得原代细胞，纯化后再分选出较为均一的有多系分化潜能的多能干细胞群，经过化学诱导的方法，改变其表观遗传学表达，对诱导后细胞进行形态、免疫学和造血功能等方面的检测，探讨其向造血细胞方向分化的可行性。进一步研究细胞分化过程中微小RNA的表达变化，分析诱导后细胞内表观遗传学变化的方式和方法。与成体来源，如骨髓间充质干细胞相比，人脐带间充质干细胞的幼稚程度更低，白细胞抗原表达更弱，其扩增和多向分化能力也较强；与造血干细胞相比，两者都属于来源于胚外中胚层的间充质组织，所以从理论上具有转化的可能。2011年，Chao等^[19]应用脐带间充质干细胞移植治疗贫血，取得了较好的效果，验证了这一理论。以往在造血干细胞中间充质干细胞一直作为辅助使用细胞，但是如果能够稳定的将间充质干细胞诱导形成造血干细胞，将解决造血干细胞中存在的来源不稳定和异体移植的问题，在临床上发挥不可估量的作用。

胚胎干细胞:胚胎干细胞中的胚胎造血干细胞进入人体后，能够按机体的需求恢复和增加机体的造血干细胞的数量和质量，恢复人体血细胞的数量和质量，恢复造血功能，从根本上补充和修复因肾脏病而造成的血细胞的死亡和流失^[20]。胚胎干细胞能够在整体上对贫血的患者进行细胞水平上的治疗，使患者的造血功能有所改善，甚至痊愈。但其是否可能对肾性贫血的治疗及所引起的各种并发症也有很好的疗效值得研究。

2.5 间充质干细胞不同移植途径对肾性贫血的治疗作用 如何将间充质干细胞安全、准确、有效的移植入宿主体内的目标区域，是间充质干细胞对肾性贫血发挥治疗作用的重要环节。目前间充质干细胞治疗肾性贫血方面的研究很多，而实验所用的移植途径也不尽相同，国内外尚未有统一的标准。

动脉移植：Tögel等^[21]在动物模型中，通过左侧颈动脉单次移植1.5×10⁶个间充质干细胞，发现肌酐清除率明显增加，并且随后的肾脏纤维化也有减轻，总之肾功能有了明显的提高。这与Lange等^[22]在同样的动物模型中的实验结果相似。Kunter等^[23]在大鼠模型中，通过左肾动脉单次注射2×10⁶个大鼠骨髓间充质干细胞，实验显示动脉移植比静脉移植更能促进肾功能的恢复。Behr等^[24]以同样的方式在绵羊的动物模型中发现，虽然经肾动脉移植的5×10⁷个自体骨髓间充质干细胞可以在归巢至肾脏，但是对此类大型动物模型肾功能的恢复没有表现出促进作用，而且组织学检查也没有改善的现象，这项研究提示干细胞的生物学行为和再生功能在啮齿类动物和大型动物中不同，可能是由于物种的差异导致的。由此可见，经动脉移植注射法定位准确，可以使体外培养的细胞准确移植到目标区域，达到最佳治疗效果。但其缺点同样明显，例如创伤性较大，对技术水平及设备要求高，在临床上广泛开展比较困难。

静脉移植：经周围静脉移植的途径，虽然具有较低的归巢率，但因其操作简单，并且损伤小，还是受到很多研究者的关注和采用。李芳等^[25]对经外周静脉注射与股动脉介入经肾动脉直接注射两种移植途径的治疗效果进行了比较，结果表明两种途径移植后，肾脏组织的荧光强度对比无显著差异，说明通过外周静脉注射途径移植不影响间充质干细胞在体内定植，修复肾脏组织结果，是一种创伤小，且有效的移植方法。Herrera等^[26]将表达绿色荧光蛋白的骨髓基质干细胞通过外周静脉植入动物模型中，结果显示，表达绿色荧光蛋白的骨髓基质干细胞不能在正常肾脏中检测到，但可以归巢至受损肾脏，不仅能刺激肾小管细胞的增殖，而且还促进受损肾脏形态和功能的恢复，同时组织学结果提示一部分表达绿色荧光蛋白的骨髓基质干细胞分化为肾小管上皮细胞。

局部移植：尽管局部移植最具有侵害性，但适合一些准备接受外科手术的宿主，因为治疗过程中，整个注射过程可以在直视下进行，允许操作者对病变区域先进行评估，再针对性移植。Cavaglieri等^[27]在包膜下注射间充质干细胞进Wistar大鼠动物模型体内。结果显示大量移植的细胞弥散至损伤部位并发挥作用，这些结果表明，局部注射间充质干细胞是一种有效的途径。其它的移植方式包括心脏注射和腹腔注射等，经心脏的移植方式同动脉移植相似，腹腔移植很少应用。

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引言

肾性贫血是指各种因素造成肾脏促红细胞生成素产生不足或尿毒症血浆中一些毒素物质干扰红细胞的生成和代谢而导致的贫血^[1]。肾性贫血是慢性肾衰竭的主要并发症之一，当各种慢性肾脏疾病患者肾小球滤过功能下降50%以上时，即可发生贫血，贫血程度与肾功能减退程度呈正相关。肾性贫血的有效治疗对慢性肾衰患者的预后及生存质量有着重要影响，若未治疗或治疗不当，可引起多种生理功能异常，包括氧转运及组织氧利用的减少、心排血量的增加、心脏扩大、心室肥厚、心绞痛、心力衰竭、认知能力下降、神经过敏、月经混乱、性功能减退及免疫功能下降等。自从1985年促红细胞生成素用于临床以来，使肾性贫血的治疗取得了突破性进展，极大改善了肾衰竭患者的状况^[2]。但是在治疗过程中存在铁缺乏是促红细胞生成素治疗效果不理想的重要原因之一。

目前认为肾性贫血是由多因素所致，产生的主要原因有^[3]：①红细胞生成素产生不足或缺乏，因为肾脏可产生促红细胞生成素，它可以刺激骨髓产生红细胞，当肾脏受损时，促红细胞生成素的产生明显减少是导致贫血的主要原因。②红细胞破坏增多，如尿毒症患者体内过氧化物使红细胞先期破坏，寿命缩短，并有破坏增加。③红细胞丢失增加，肾脏病的患者多合并消化道出血，经常抽血化验，血液透析患者透析器及管路中残留血的丢失也可加重贫血。④晚期肾功能不全的患者血清中有红系造血的抑制物，抑制红细胞生成的作用，可增加红细胞的脆性，缩短红细胞的寿命。⑤铁和叶酸缺乏以及铝中毒，血液透析患者铝中毒时可以和转铁蛋白结合干扰铁与血红蛋白的合成^[4]。⑥甲状旁腺功能亢进，可导致骨髓纤维使红系细胞生成减少外，还能抑制骨髓红系造血和加速红细胞的破坏。针对肾性贫血的原因如何治疗？

肾性贫血的传统治疗方法主要是基因重组红细胞生成素，还有补充铁剂、左卡尼汀、叶酸、还原型谷胱甘肽以及纠正继发性甲旁亢、充分透析与避免感染和炎症等一系列综合性治疗。在肾性贫血的治疗领域，以上治疗方式尤其是基因重组人促红细胞生成素补充人体生成不足，纠正肾性贫血的临床效果已被国内外大量的临床和动物实验研究所证实^[5]。极大程度的改善了肾性贫血患者的治疗预后，但基因重组人促红细胞生成素最常见的不良反应是高血压，发生率20%-30%^[6]。并且如何优化肾性贫血的治疗使之能最大程度的改善患者的生活质量，提高生存率，降低病死率及再住院率，最大限度的减少、避免药物不良反应的发生仍然是肾脏病学界持续关注的问题。

干细胞是指一类具有高度增殖和自我更新能力，并具有多项分化能力的原始细胞，骨髓造血干细胞是较早发现的一类成体干细胞，随后人们发现骨髓中除造血干细胞外还存在另一类干细胞，即间充质干细胞，脐带血是脐带内及胎盘近胎儿一侧血管内的血液，含有丰富的干细胞和祖细胞，主要包含造血干细胞和间充质干细胞，脐血间充质干细胞有多向分化潜能，脐血作为外周血取材方便，来源广泛，因此脐血间充质干细胞的发现引起神经科学研究者极大的兴趣^[7-8]。脐血含有大量的造血干细胞及造血生成因子，能刺激骨髓造血，脐血中的红细胞抗渗透性强，能较持久的改善贫血状态。脐血间充质干细胞由Erices等^[9]于2003年最早报道，它是作为一种具有全能干细胞特点的细胞，是中胚层发育的早期细胞，具有多向分化潜能，其形态和生物学特点与骨髓源性间充质干细胞相似。

近年来，脐血间充质干细胞潜在的临床应用价值日益受到重视，初步证明胎盘是一个非常复杂的内分泌器官，除产生甾体类激素外，还能产生种类繁多的调节肽、生长因子及细胞因子。国外Bertolini等^[10]的实验表明脐血间充质干细胞可通过旁分泌作用分泌细胞因子对周围组织发挥营养支持，这些神经营养因子对受损伤组织发挥营养支持，促进功能恢复。国内张勇等^[11]报道脐血与小剂量人类重组红细胞生成素联合应用对肾性贫血有明显效果。

文章对2010年1月至2012年12月在河南省红十字血液中心门诊部收治的6例肾性贫血患者，通过脐血间充质干细胞移植治疗后进行临床治疗分析，并与不同来源的间充质干细胞不同移植途径对肾脏病的治疗作用进行比较，探讨脐血间充质干细胞移植治疗肾性贫血的有效性及安全性。

材料方法

1.1 病例资料 选取2010年1月至2012年12月在河南省红十字血液中心门诊部收治的肾性贫血患者6例，男4例，女2例，平均年龄(46.0±18.4)岁。实验经医学伦理委员会批准，6例患者对治疗方案均知情同意，产妇健康，产妇及其家属均签署知情同意书。

纳入标准：①终末期尿毒症，血肌酐≥707 μmol/L，肌酐清除率≤10 mL/min。②血红蛋白60-90 g/L，血红细胞压积≤30%。试验前2周及试验期内未用其它重组红细胞生成素制剂，且2周内无输血史。

排除标准：①患者有严重的感染和炎症。②慢性活动性出血。③骨髓病变。④溶血性贫血。⑤严重继发性甲状旁腺功能亢进症及药物难以控制的高血压。

剔除标准：①未完成疗程者。②治疗过程中输血者。③治疗中出现严重不良反应者。

1.2 治疗方法

脐血间充质干细胞的原代分离和培养：脐血来源于郑州大学第一附属医院，医院具有细胞移植资质。将脐血收集在含有抗凝剂的200 mL采血袋，配平后用离心机离心，2 500 r/min，5 min。将上面的血浆收集在50 mL采血袋内，加入等量的生理盐水，充分混匀。缓慢加入预先加有密度为1.077 g/cm的淋巴细胞分离液。1 900 r/min水平离心25 min后，弃去上面的液体，小心吸取中间的含有单个核细胞的白膜层。加入生理盐水，1 000 r/min，离心5 min后，洗涤2次，弃上清。用含B27的DMEM/F12培养基，加质量浓度为20 g/L碱性成纤维细胞生长因子，将脐带血单个核细胞分装于75 cm²培养瓶中，置于37 ℃，体积分数为5%的CO₂培养箱中培养两三天后，更换培养液，弃去未贴壁的细胞，根据细胞的生长情况，每三四天全量换液。当细胞铺满培养瓶后，用细胞刮刀刮去细胞，每三四天全量更换培养液，直至贴壁细胞铺满瓶底，彼此融合，重复上述的实验操作。脐血血浆悬浮间充质干细胞。

移植途径：通过手背浅静脉将分离获得的脐血间充质干细胞输注入肾性贫血患者体内，细胞数≥ 1×10⁸/份，2 份/次，间隔4 d后再次输注，共3次。

1.3 效果评估

主要观察指标：①治疗前及治疗后8周随访患者，记录贫血症状评价指标，食欲、心悸、气短、乏力，精神状况、社会活动能力，测量血压、脉搏、监测血红蛋白、红细胞比容、网织红细胞计数，外周血白细胞、血小板计数。②治疗前及治疗后每月化验检测肝酶谱、胆红素、胆固醇、三酰甘油、血糖、血肌酐及电解质等项目。③整个过程随时记录患者出现的各种不良反应，治疗前及治疗后8周分别对患者做肾动态ECT显像，比较肾血流量的变化。

疗效判断标准：①显效：治疗后红细胞比容≥30%，上升幅度≥5%，血红蛋白≥100 g/L，或较治疗前升高≥30 g/L。②有效：治疗后3%≤红细胞比容上升幅度< 5%，血红蛋白较治疗前升高≥15 g/L，贫血症状改善。③无效：红细胞比容上升幅度< 3%，血红蛋白较治疗前升高< 15 g/L，贫血症状无明显改善。

1.4 统计学分析 统计处理由第一作者来完成。实验数据采用x(_)±s表示，并经国际通用统计学分析系统SPSS10.0统计软件进行分析，使用前先行正态性检验和方差齐性检验，符合正态分布并方差齐的根据数据类型应用参数检验中的单因素方差分析或t 检验，不符合正态分布的应用非参数检验中秩和检验，以α=0.05作为显著性水准。

1.5 治疗结果 6例患者在脐血间充质干细胞移植过程中及移植后均未发生并发症和不良反应。观察治疗前后红细胞比容、血红蛋白、尿中红细胞、肾血流量变化，见表1，2。

讨论

研究发现把两份不同脐带血间充质干细胞混合后，细胞贴壁比单份脐带血间充质干细胞快的多，并且细胞增殖也非常快，单份脐带血间充质干细胞一般贴壁需要48 h左右，而混合脐带血间充质干细胞只需要2 h左右，混合的脐带血间充质干细胞贴壁后形成多个很大的细胞克隆团。有关这种机制可能是一份脐带血间充质干细胞分泌生长因子，与另一份脐带血间充质干细胞上的受体结合，同时，另一份脐带血间充质干细胞也分泌细胞生长因子，与第一份细胞表面的受体结合，形成生长因子-受体复合物后，受体所包含的酪氨酸激酶被活化，使细胞内的相关蛋白直接被磷酸化^[28]，这些被磷酸化的蛋白质，再活化核内的转录因子，引发基因转录，达到调节生长与分化的作用。这些生长因子可能包括：表皮生长因子、促红细胞生成素、神经生长因子、转化生长因子、血小板源生长因子、类胰岛素生长因子等。细胞受体包括细胞膜上的受体和细胞内受体。体外实验证实，脐带血间充质干细胞可分泌神经生长因子及转化生长因子^[29]。已有研究表明间充质干细胞可通过旁分泌作用分泌细胞因子对周围组织发挥营养支持，这些营养因子对受损伤神经组织发挥营养支持，促进功能恢复^[30-31]。文章研究发现治疗前后红细胞比容、血红蛋白和尿中红细胞明显增加，说明多份脐血间充质干细胞可以治疗肾性贫血。

脐血间充质干细胞静脉移植治疗肾性贫血需解决的问题：①临床疗效持续性及其不良反应还需进行大宗病例长期系统观察及统计学分析。②静脉输注最佳开始时间及间隔时间。③干细胞输注数量。④干细胞输注后在缺血组织内增殖分化潜能及影响因素。

总之，人脐血间充质干细胞是一种极具潜力的替代细胞来源，为肾性贫血的治疗开辟了广阔前景。相信随着这一技术不断深入应用研究，必将对各种疾病的治疗产生深远影响。

脐血间充质干细胞移植治疗肾性贫血：热点与问题

Umbilical cord blood mesenchymal stem cell transplantation for the treatment of renal anemia: Hot spots and issues

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