恒河猴肝移植急性排斥反应中核因子κB p65的表达

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2013.31.001

中国组织工程研究

• 肝移植 liver transplantation • 下一篇

恒河猴肝移植急性排斥反应中核因子κB p65的表达

张升宁，冉江华，刘静，李铸，李来邦，高杨，张熙冰，吴淑媛，李立

昆明市第一人民医院暨昆明医科大学附属甘美医院肝胆胰一科，云南省器官移植研究所肝移植研究中心，云南省昆明市 650011

收稿日期:2013-03-22 修回日期:2013-03-27 出版日期:2013-07-30 发布日期:2013-07-30
通讯作者: 冉江华，博士，教授、主任医师，昆明市第一人民医院暨昆明医科大学附属甘美医院肝胆胰一科，云南省器官移植研究所肝移植研究中心，云南省昆明市 650011 rjh2u@163.com
作者简介:张升宁☆，男，1973年生，四川省巴中市人，汉族，2008年昆明医科大学毕业，博士，副主任医师，硕士生导师，主要从事肝移植、免疫耐受、肝胆胰外科等方面的研究。 zsn813@163.com

Expression of nuclear factor-kappa B p65 in acute rejection of liver transplantation in rhesus monkey

Zhang Sheng-ning, Ran Jiang-hua, Liu Jing, Li Zhu, Li Lai-bang, Gao Yang, Zhang Xi-bing, Wu Shu-yuan, Li Li

First Department of Hepatopancreatobiliary Surgery, the Affiliated Ganmei Hospital of Kunming Medical University and the First People’s Hospital of Kunming City, Liver Transplantation Center of Organ Transplantation Institute of Yunnan Province, Kunming 650011, Yunnan Province, China

Received:2013-03-22 Revised:2013-03-27 Online:2013-07-30 Published:2013-07-30
Contact: Ran Jiang-hua, M.D., Professor, Chief physician, First Department of Hepatopancreatobiliary Surgery, the Affiliated Ganmei Hospital of Kunming Medical University and the First People’s Hospital of Kunming City, Liver Transplantation Center of Organ Transplantation Institute of Yunnan Province, Kunming 650011, Yunnan Province, China rjh2u@163.com
About author:Zhang Sheng-ning☆, M.D., Associate chief physician, Master’s supervisor, First Department of Hepatopancreatobiliary Surgery, the Affiliated Ganmei Hospital of Kunming Medical University and the First People’s Hospital of Kunming City, Liver Transplantation Center of Organ Transplantation Institute of Yunnan Province, Kunming 650011, Yunnan Province, China zsn813@163.com

摘要/Abstract

摘要：

背景：核因子κB作为一种重要的核内转录因子，是多种信号转导途径的汇聚点，参与机体免疫细胞的增殖、分化及细胞凋亡等多种反应物质基因的表达调控，在体液和细胞免疫中发挥重要作用。
目的：探讨恒河猴移植肝组织内核因子κB P65蛋白表达与急性排斥反应的关系。
方法：将恒河猴随机分为2组：急性排斥反应组肝移植后不给予抗排斥处理，对照组肝移植过程中及移植后均给予抗排斥处理。分别在移植后6，12，24和72 h 4个时间点收集血标本，全自动生化分析仪测定丙氨酸氨基转移酶、总胆红素，取移植肝脏组织行苏木精-伊红染色观察组织形态结构和排斥反应，根据Banff评分系统判断排斥反应程度，采用Western blot法检测肝脏组织中核因子κB p65的表达。
结果与结论：肝移植急性排斥反应发生时肝功能变化滞后于肝组织病理学检查。当急性排斥反应发生时，移植肝组织中核因子κB p65表达上调，急性排斥反应程度也随之加剧。并且在急性排斥反应早期，肝功能、病理学仅有轻微改变时，核因子κB p65表达显著升高。因此移植肝组织中核因子κB p65表达水平的检测对移植后急性排斥反应的早期诊断有重要意义，同时核因子κB可能成为控制移植急性排斥反应的新靶点。

关键词: 器官移植, 肝移植, 急性排斥反应, 核因子κB, 丙氨酸氨基转移酶, 总胆红素, 灵长类动物, 恒河猴

Abstract:

BACKGROUND: Nuclear factor-κB as an important nuclear transcription factor, is a converge point for various signal transduction pathways, and participate in the regulation of reactive substances gene expression such as the immune cell proliferation, differentiation and apoptosis. The nuclear factor-κB plays an important role in humoral and cellular immune.
OBJECTIVE: To investigate the relationship between the nuclear factor-κB p65 protein expression and acute rejection in transplanted liver tissue of rhesus monkey.
METHODS: The rhesus monkey recipients were randomly divided into two groups: acute rejection group and control group. The acute rejection group did not received anti-rejection treatment after liver transplantation, and the control group was given anti-rejection treatment during and after liver transplantation. The blood samples were collected at 6, 12, 24 and 72 hours after transplantation, and the automatic biochemical analyzer was used to detect the levels of alanine aminotransferase and total bilirubin. Hematoxylin-eosin staining of transplanted liver tissue was performed to observe the morphological structure and rejection. The degree of rejection was evaluated according to the Banff scoring system, and the expression of nuclear factor-κB p65 in the liver tissue was detected with Western blot.
RESULTS AND CONCLUSION: When the acute rejection occurred after liver transplantation, the liver function change was observed after liver histopathological examination, the expression of nuclear factor-κB p65 in the liver tissue was up-regulated, and the degree of acute rejection was increased. In the early stage of acute rejection, the liver function and pathology were changed slightly, while the expression of nuclear factor-κB p65 was significantly increased. The results indicate that the detection of nuclear factor-κB p65 in the transplanted liver tissue has great significance for the early diagnosis of acute rejection after liver transplantation, and the nuclear factor-κB may be the new target for controlling the acute rejection.

Key words: organ transplantation, liver transplantation, acute rejection, nuclear factor-κB, alanine aminotransferase, total bilirubin, primates, rhesus monkey

中图分类号:

R318

张升宁，冉江华，刘静，李铸，李来邦，高杨，张熙冰，吴淑媛，李立. 恒河猴肝移植急性排斥反应中核因子κB p65的表达[J]. 中国组织工程研究, doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2013.31.001.

Zhang Sheng-ning, Ran Jiang-hua, Liu Jing, Li Zhu, Li Lai-bang, Gao Yang, Zhang Xi-bing, Wu Shu-yuan, Li Li. Expression of nuclear factor-kappa B p65 in acute rejection of liver transplantation in rhesus monkey[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2013.31.001.

图/表（结果） 4

2.1 实验动物数量分析肝移植后受体动物共8只，急性排斥反应组和对照组各4只，急性排斥反应组中途丢失2只，对照组中途丢失1只，丢失原因为移植后腹腔出血及呼吸循环功能衰竭，丢失动物均及时补齐，计4个时点，每个时点获取标本4个，每组共获取肝脏标本16个。
2.2 肝移植后血清丙氨酸氨基转移酶活性 2组恒河猴肝移植后血清丙氨酸氨基转移酶活性同期比较，急性排斥反应组由于没有使用抗免疫排斥药物，移植后未使用激素等原因导致肝细胞受到机体炎性细胞的攻击损伤较对照组严重。2组移植后6 h和12 h的丙氨酸氨基转移酶活性比较接近，组间比较差异无显著性意义(P > 0.05)。恒河猴肝移植后，随着时间的延长，肝移植后6，12，24和72 h的肝功能丙氨酸氨基转移酶活性呈逐渐上升趋势，因而2组组内比较，差异有显著性意义(P < 0.05)；并且急性排斥反应组比对照组变化大，肝移植后24 h到72 h的变化趋势最明显，见表1。

表2可见，2组恒河猴肝移植后血清总胆红素同期比较，急性排斥反应组由于没有使用抗免疫排斥药物，移植后未使用激素等原因导致肝细胞受到机体炎性细胞的攻击损伤较对照组严重。2组随着移植后时间的延长总胆红素呈逐渐上升的趋势，2组移植后6 h和12 h的总胆红素水平比较接近，组间比较差异无显著性意义(P > 0.05)。恒河猴肝移植后，随着时间的延长，肝移植后6，12，24和72 h的肝功能总胆红素逐渐上升趋势，因而2组组内比较差异有显著性意义(P < 0.05)；并且急性排斥反应组比对照组变化大，肝移植后24 h到72 h的变化趋势最明显。
2.4 肝移植后白细胞介素2水平 2组随着移植后时间延的长白细胞介素2呈逐渐上升的趋势，2组移植后6 h白细胞介素2水平比较接近，组间比较差异无显著性意义(P > 0.05)。恒河猴肝移植后，随着时间的延长，肝移植后6，12，24和72 h的血清白细胞介素2呈逐渐上升趋势，因而2组组内比较，差异有显著性意义(P < 0.05)；并且急性排斥反应组比对照组变化大，肝移植后24 h到72 h的变化趋势最明显，见表3。

2.5 肝移植后肝脏组织病理学变化见图1。
移植后6 h：2组的肝脏组织基本上正常，没有排斥反应的镜下特点，可见肝小叶结构正常，汇管区有少量以中性粒细胞为主的炎性细胞浸润，未见淋巴细胞浸润或者仅有极少量的淋巴细胞，小叶间静脉内膜基本正常，但小叶间静脉内膜水肿，内膜下可见少量中性粒细胞侵润，汇管区可见有少量的混合炎症细胞侵润，胆管、血管均存在，但胆管上皮未受损伤。
移植后12 h：急性排斥反应组肝脏苏木精-伊红染色显示，肝小叶结构基本正常，汇管区有中等量以中性粒细胞为主的炎性细胞侵润，其中可以看到较多的淋巴细胞侵润，小叶间静脉内膜水肿明显增厚，内膜下可见中等量中性粒细胞侵润(淋巴细胞占的比例增多)，胆管、血管均存在，但胆管上皮未明显受损伤，Banff评分Ⅰ-Ⅱ级。
对照组可见肝脏实质内有中等量的中性粒细胞侵润，汇管区仅见有少量中性粒细胞侵润(其中的淋巴细胞极少)，排斥反应的分级不明确，Banff评分0-Ⅰ级。
移植后24 h：急性排斥反应组肝脏苏木精-伊红染色，中到重度排斥反应，汇管区大量单个核细胞浸润，并累及胆管、血管，肝小叶结构消失，伴有局灶性的出血、坏死。Banff评分Ⅱ-Ⅲ级。
对照组汇管区出现少量的单核细胞浸润，但侵及肝实质、胆管和血管的炎细胞浸润程度达到轻度急性排斥的诊断标准，Banff评分0-Ⅰ级。

移植后72 h：急性排斥反应组肝脏苏木精-伊红染色，重度排斥反应，汇管区大量单个核细胞浸润，并累及胆管、血管，肝小叶结构消失明显，且伴有明显的局灶性出血、坏死，Banff评分Ⅲ级。
对照组汇管区出现少到中等量的单核细胞浸润，侵及肝实质程度较急性排斥反应组轻，Banff评分0-Ⅰ级。
2.6 肝移植后核因子κB p65蛋白表达变化核因子κB p65条带(Mr 65 000)与相应β-actin(Mr 42 000)做比值后得到的数据进行统计学分析，对不同组采用单因素方差分析，组间对比采用t 检验。
整体变化趋势：急性排斥反应组6 h开始明显增高；对照组呈现下降趋势，12，24和72 h 3个时间点组急性排斥反应组明显高于对照组，差异有显著性意义(P=0.023，0.002，0.001，均< 0.05)；6 h 2组之间差异无显著性意义(P=0.364，> 0.05)，见表4及图2。

参考文献

[1] Molinero LL, Alegre ML.Role of T cell-nuclear factor κB in ransplantation.Transplant Rev (Orlando). 2012 ;26(3): 189-200.

[2] Tsoulfas G, Geller DA. NF-kappaB in transplantation: friend or foe? Transpl Infect Dis. 2001;3(4):212-219.

[3] 冉江华,张升宁,刘静,等. 恒河猴同种异体原位肝移模型的改进[J].中国普外基础与临床杂志,2010;17(7):694-798.

[4] Demetris A, Adams D, Bellamy C,et al.Update of the International Banff Schema for Liver Allograft Rejection: working recommendations for the histopathologic staging and reporting of chronic rejection. An International Panel. Hepatology. 2000;31(3):792-799.

[5] Sánchez-Fueyo A, Strom TB.Immunologic basis of graft rejection and tolerance following transplantation of liver or other solid organs. Gastroenterology. 2011;140(1):51-64.

[6] Uemura T, Ikegami T, Sanchez EQ,et al. Late acute rejection after liver transplantation impacts patient survival.Clin Transplant. 2008;22(3):316-323.

[7] Finn PW, Stone JR, Boothby MR,et al. Inhibition of NF-kappaB-dependent T cell activation abrogates acute allograft rejection.J Immunol.2001;167(10): 5994-6001.

[8] Ding X, Wang X, Xue W,et al. Blockade of the nuclear factor kappa B pathway prolonged islet allograft survival.Artif Organs. 2012;36(3):E21-27.

[9] Wei JF, Zheng SS.NF-kappa B in allograft rejection. Hepatobiliary Pancreat Dis Int. 2003;2(2):180-183.

[10] May MJ, Ghosh S. Rel/NF-kappa B and I kappa B proteins: an overview. Semin Cancer Biol. 1997;8(2):63-73.

[11] Oeckinghaus A, Hayden MS, Ghosh S. Crosstalk in NF-κB signaling pathways.Nat Immunol. 2011;12(8):695-708.

[12] Pasparakis M. Role of NF-κB in epithelial biology. Immunol Rev. 2012;246(1):346-458.

[13] Vallabhapurapu S, Karin M.Regulation and function of NF-kappaB transcription factors in the immune system. Annu Rev Immunol. 2009;27:693-733.

[14] Gilmore TD, Wolenski FS.NF-κB: where did it come from and why? Immunol Rev. 2012;246(1):14-35.

[15] Urbanova M, Brabcova I, Girmanova E,et al. Differential regulation of the nuclear factor-κB pathway by rabbit antithymocyte globulins in kidney transplantation. Transplantation. 2012;93(6):589-556.

[16] Hayden MS, West AP, Ghosh S.NF-kappaB and the immune response. Oncogene. 2006;25(51):6758-6780.

[17] Mason NJ, Artis D, Hunter CA.New lessons from old pathogens: what parasitic infections have taught us about the role of nuclear factor-kappaB in the regulation of immunity. Immunol Rev. 2004;201:48-56.

[18] Lan W, Petznick A, Heryati S, et al.Nuclear Factor-κB: central regulator in ocular surface inflammation and diseases.Ocul Surf. 2012;10(3):137-148.

[19] Shih VF, Davis-Turak J, Macal M,et al.Control of RelB during dendritic cell activation integrates canonical and noncanonical NF-κB pathways.Nat Immunol. 2012;13(12):1162-1170.

[20] Xie J, Wang Y, Bao J,et al.Immune tolerance induced by RelB short-hairpin RNA interference dendritic cells in liver transplantation. J Surg Res. 2013;180(1):169-175.

[21] Hayden MS. A less-canonical, canonical NF-κB pathway in DCs.Nat Immunol. 2012;13(12):1139-1141.

[22] Eldor R, Abel R, Sever D,et al. Inhibition of nuclear factor-κB activation in pancreatic β-cells has a protective effect on allogeneic pancreatic islet graft survival. PLoS One. 2013; 8(2):e56924.

[23] Kaileh M, Sen R.NF-κB function in B lymphocytes. Immunol Rev. 2012 ;246(1):254-271.

[24] Gerondakis S, Siebenlist U. Roles of the NF-kappaB pathway in lymphocyte development and function.Cold Spring Harb Perspect Biol. 2010;2(5):a000182.

[25] Porras DL, Wang Y, Zhou P,et al.Role of T-cell-specific nuclear factor κB in islet allograft rejection. Transplantation. 2012;93(10):976-982.

[26] Goebeler M, Gillitzer R, Kilian K,et al.Multiple signaling pathways regulate NF-kappaB-dependent transcription of the monocyte chemoattractant protein-1 gene in primary endothelial cells. Blood. 2001;97(1):46-55.

[27] Visekruna A, Volkov A, Steinhoff U. A key role for NF-κB transcription factor c-Rel in T-lymphocyte-differentiation and effector functions.Clin Dev Immunol. 2012;2012:239368.

[28] van den Hoogen MW, Hoitsma AJ. Anti-T-cell antibodies for the treatment of acute rejection after renal transplantation.Expert Opin Biol Ther. 2012;12(8):1031-1042.

[29] Wang YL, Tang ZQ, Gao W, et al. Influence of Th1, Th2, and Th3 cytokines during the early phase after liver transplantation. Transplant Proc. 2003;35(8):3024-3025.

[30] Millán O, Rafael-Valdivia L, Torrademé E,et al. Intracellular IFN-γ and IL-2 expression monitoring as surrogate markers of the risk of acute rejection and personal drug response in de novo liver transplant recipients.Cytokine. 2013;61(2):556-564.

[31] Brunet M.Cytokines as predictive biomarkers of alloreactivity. Clin Chim Acta. 2012;413(17-18):1354-1358.

[32] Millán O, Rafael-Valdivia L, Torrademé E,et al. Intracellular IFN-γ and IL-2 expression monitoring as surrogate markers of the risk of acute rejection and personal drug response in de novo liver transplant recipients. Cytokine. 2013;61(2): 556-564.

[33] Maguire O, Collins C, O'Loughlin K,et al.Quantifying nuclear p65 as a parameter for NF-κB activation: Correlation between ImageStream cytometry, microscopy, and Western blot. Cytometry A. 2011;79(6):461-469.

[34] Giardino Torchia ML, Conze DB, Jankovic D,et al.Balance between NF-κB p100 and p52 regulates T cell costimulation dependence. J Immunol. 2013;190(2):549-555.

[35] Koch L, Fritzsching B, Frommhold D,et al.Lipopolysaccharide-induced expression of Th1/Th2 cytokines in whole neonatal cord and adult blood: role of nuclear factor-kappa B and p38 MAPK. Neonatology. 2011; 99(2):140-145.

[36] Schmitz ML, Krappmann D.Controlling NF-kappaB activation in T cells by costimulatory receptors. Cell Death Differ. 2006;13(5):834-842.

[37] Scheinman RI, Cogswell PC, Lofquist AK,et al.Role of transcriptional activation of I kappa B alpha in mediation of immunosuppression by glucocorticoids. Science. 1995; 270 (5234):283-286.

[38] 万云乐,吴丽花,赵志成，等.他克莫司对移植免疫反应中核因子κB活性和淋巴细胞趋化因子表达的影响[J]. 中华移植杂志: 电子版, 2010,4(1):38-42.

[39] Ouk S, Liou ML, Liou HC. Direct Rel/NF-κB inhibitors: structural basis for mechanism of action.Future Med Chem. 2009;1(9):1683-1707.

[40] Ueki S, Yamashita K, Aoyagi T, et al. Control of allograft rejection by applying a novel nuclear factor-kappaB inhibitor, dehydroxymethylepoxyquinomicin. Transplantation. 2006; 82(12):1720-1727.

引言

材料方法

设计：随机对照动物实验。

时间及地点：于2009年9月至2011年12月在昆明医科大学动物实验中心完成。

材料：五六岁健康恒河猴16只，清洁级，供体雌雄不限，受体为雄性，体质量3.8- 11 kg；均由昆明医科大学动物实验中心提供，许可证号：SCXK(滇)2009-0004。实验过程中对动物的处置符合2009年《Ethical issues in animal experimentation》相关动物伦理学标准的条例。

核因子κB p65在恒河猴肝移植急性排斥反应中表达实验的主要试剂及仪器：

方法：

动物分组：供受体均为健康的恒河猴16只，按随机数字表法分为2组，每组供、受体各4只，各组受体接受不同处理。急性排斥反应组成功建立恒河猴肝移植模型后，受体不行抗排斥处理。对照组术中给予甲强龙250 mg静脉注射，移植后给予他克莫司抗免疫排斥药物，剂量为0.1 mg/(kg•d)。分别在6，12，24和72 h 4个时间点麻醉下取标本。

动物模型制备：采用作者改进的方法，建立恒河猴同种异体原位肝移植模型^[3]。将供肝置入受体腹腔内，以5-0 Prolene线分别连续缝合肝上下腔静脉。门静脉袖套套入，开放门静脉，从肝下下腔静脉放血约5 mL后阻断，开放肝上下腔静脉。恢复肝脏血流，结束无肝期。以5-0 Prolene线连续缝合吻合肝下下腔静脉，开放下腔静脉血流。10-0 Prolene线在4倍放入镜下行供-受体肝总动脉端-端吻合重建肝动脉。胆总管支架套入。

标本收集：分别在移植后6，12，24， 72 h 4个时间点各取4个动物样本，麻醉下取标本，抽取静脉血3-5 mL，血样离心(4 ℃，3 000 r/min，10 min)，取上清液，入-80 ℃超低温冰箱保存待测，待标本齐备后，行肝功能、白细胞介素2等检测。以抗凝聚试管收集到少量血液1.0 mL，立即送流式细胞检测。腹壁切开一小切口，取肝脏边缘约 0.5 cm×0.5 cm×1 cm大小肝组织(遇在各时点前后 30 min内死亡的受体动物，亦取同样大小的肝组织及等量下腔静脉血列入该时点样本)，体积分数10%中性甲醛固定，分别做成石蜡切片，苏木精-伊红染色，Western blot法检测核因子κB p65。

肝功能检测：取-70 ℃保存待测血清标本行肝功能检测。应用全自动生化分析仪，以直接活力测定法测定血清丙氨酸氨基转移酶及血清总胆红素的表达变化。

ELISA法检测白细胞介素2：按白细胞介素2试剂盒说明进行操作检测，取-70 ℃保存待测血清标本行血清细胞因子检测。

组织病理学检查：将固定于甲醛中的肝组织制成石蜡切片，用苏木精染色, 光镜下观察急性排斥反应，根据目前国际公认的Banff系统评估标准，将急性免疫排斥反应的病理改变分为4级^[4]：不明确(0级)：汇管区三体(肝动脉、门静脉和胆管)炎细胞浸润程度未达到急性排斥的诊断标准；轻度(Ⅰ级)：排斥性炎细胞浸润少数汇管区的胆管和血管，炎细胞数量较少，仅局限在汇管区间隙中；中度(Ⅱ级)：排斥性炎细胞浸及多数或全部汇管区的胆管和血管；重度(Ⅲ级)：在中度的基础上，炎细胞浸润汇管区周围，伴有中至重度静脉炎并扩展到肝实质，引起静脉周围肝细胞坏死。

肝组织总蛋白提取和western blot分析核因子κB p65表达：提取各组总蛋白，SDS凝胶电泳，电转，抗体孵育和显色。抗核因子κB p65多克隆抗体(兔抗鼠)购自(美国 Santa cruz)。以相应蛋白条带与内参照β-actin的相应条带平均吸光度值的比值来表示核因子κB p65蛋白表达。

主要观察指标：移植后恒河猴肝脏功能的变化、急性排斥反应的程度及核因子κB p65表达。

统计学分析：由第三方采用SPSS 13. 0软件在计算机上将资料进行统计分析，计量资料以x(_)±s表示，采用方差分析、t 检验。

讨论

急性排斥反应是肝移植后最常见的并发症之一，影响到移植物功能和肝移植后患者生活质量^[5-6]，目前大量的研究表明核因子κB是调节同种异体移植免疫排斥反应相关基因表达的关键转录因子^[7-9]。

核因子κB作为一种重要的核内转录因子，几乎存在于所有细胞中，哺乳动物中已发现5个核因子κB/Rel家族的成员：核因子κB1(p50)、核因子κB2(p52)、 RelA(p65)、RelB、c-Rel，在细胞中核因子κB中发挥主要生理作用的是p50/p65异源二聚体。在一般情况下以同源或异源一聚体的形式组成复合体再与其细胞质中3个抑制因子(IκBα、IκBβ、IκBε)中的一个结合而以无活性的状态存在滞留于细胞质中^[10]，当细胞受到外源刺激通过信号传导使IκB发生降解，核因子κB则进入细胞核与DNA特定靶κB部位结合，调控特定基因转   录^[11-12]。激活的核因子κB从细胞质向胞核移位，参与免疫反应、炎性反应以及细胞凋亡等多种反应物质基因的表达调控，在器官移植排斥反应中起着关键性作    用^[13-16]。 核因子κB对许多参与免疫和炎症反应物质的基因都有诱导调控的作用^[17-18]，如细胞因子白细胞介素 2、白细胞介素 6、白细胞介素 12等，核因子κB对树突状细胞及免疫T、B淋巴细胞和的增殖生长和分化也有调节作用，在体液和细胞免疫中发挥重要的作     用^[19-26]。

肝功能是判断肝移植后急性排斥反应导致肝细胞损害的敏感指标，因为肝脏内转氨酶的含量为血中含量的100倍，只要1%的肝细胞坏死，血清中酶活性可增加1倍同时出现总胆红素升高。实验6 h，12 h急性排斥反应组与对照组丙氨酸氨基转移酶和总胆红素差异无显著性意义，24 h后急性排斥反应组丙氨酸氨基转移酶和总胆红素才明显高于对照组(P < 0.05)，此时病理学检测已显示出中度排斥。急性排斥反应组肝组织病理学苏木精-伊红染色在移植后12 h表现为Ⅰ-Ⅱ级急性排斥反应，因此急性排斥反应时肝功能变化滞后于肝组织病理学检查。

肝移植后急性排斥反应发生时，血清的白细胞介素2和γ-干扰素会升高。T淋巴细胞在机体免疫反应中起着重要的作用^[27-28]，它在接受抗原刺激后，抗原递呈细胞将抗原提呈给T细胞，T细胞首先通过T细胞抗原受体与抗原递呈细胞之间的相互作用而激活。其途径有2条：经典的磷脂肌醇途径或者旁路途径。2条途径均可促发蛋白激酶C从胞浆转位至胞膜而被活化。蛋白激酶则通过对核因子等的磷酸化作用发挥生理效应。核因子κB等核因子的磷酸化将细胞外信号传至细胞核，诱导编码细胞因子及受体的基因活化，促进细胞因子的表达、分泌，最终导致T细胞分化为Th1、Th2 2个亚群的辅助性T细胞，Th1细胞是介导移植排斥反应的重要效应细胞，在移植物急性排斥反应发生过程中起着重要的作用，它分泌的细胞因子，其中最重要是白细胞介素2、γ-干扰素，在肝移植急性排斥反应中会明显升     高^[29-31]。白细胞介素2 作为移植排斥反应的标记     物^[32]，本实验2组随着移植后时间的延长白细胞介素2呈逐渐上升的趋势，2组移植后6 h的白细胞介素2水平比较接近，组间比较差异无显著性意义(P > 0.05)。恒河猴肝移植后，随着时间的延长，肝移植后12 h、    24 h和72 h的血清白细胞介素2呈逐渐上升趋势，急性排斥反应组显著高于对照组，差异有显著性意义(P < 0.05)。此时与病理学急性排斥反应出现时间相一致。

实验采用蛋白印迹(Western blot)检测核因子κB蛋白表达，当急性排斥反应发生时，细胞受到外源刺激核因子κB表达量发生异常改变，并且核因子κB与IκB分离，核因子κB进入细胞核，IκB则被降解。Western blot简便经济、可以反映核因子κB蛋白表达量的变化情况，是检测核因子κB的一种常用方法^[33]。急性排斥反应组核因子κB p65在移植后12，24，72 h明显高于对照组，差异有显著性意义(P < 0.05)。核因子κB p65表达上调，可激活T细胞，有研究表明核因子κB p65可通过多种途径激活T细胞，导致白细胞介素2分泌增加，产生急性排斥反应^[34-36]。

实验证实了移植后急性排斥反应组12 h在核因子κB p65表达上调后，同时细胞因子白细胞介素2表达明显增加，病理检测为Ⅰ-Ⅱ级急性排斥反应，肝功能在移植后24 h急性排斥反应组与对照组比较差异有显著性意义。24 h后急性排斥反应组的排斥反应逐渐增强，而对照组急性排斥反应不明显。因此核因子κB导致T细胞的活化分泌白细胞介素 2，引起T细胞分化增殖，在肝移植的急性排斥反应中起重要的作用。有实验证实临床上常用的抗排斥药物如：糖皮质激素、他克莫司等^[37-38]，能抑制核因子κB表达，免疫抑制剂通过增强IκB分子的表达，使核因子κB滞留于细胞中而不能被活化。该实验中对照组给予免疫抑制剂，故移植后   12 h核因子κB p65表达明显低于急性排斥反应组，病理检查排斥反应表现不明显。

总之，当肝移植发生急性排斥反应时，移植肝组织中核因子κB p65表达上调，急性排斥反应程度也随之加剧，并且在急性排斥反应早期，肝功能、病理学仅有轻微改变时，核因子κB p65表达显著升高。因此急性排斥反应中肝组织中核因子κB p65表达水平的检测对移植后急性排斥反应的早期诊断有重要意义，同时核因子κB可能成为控制移植急性排斥反应的新靶点^[39-40]。

恒河猴肝移植急性排斥反应中核因子κB p65的表达

Expression of nuclear factor-kappa B p65 in acute rejection of liver transplantation in rhesus monkey

PDF

可视化

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

图/表（结果） 4

参考文献

相关文章 15

引言

材料方法

讨论

文章快阅

延伸阅读

编辑推荐

Metrics

本文评价

[1]	蒋欣, 乔良伟, 孙东, 李明, 房军, 曲青山. 肾移植患者血清中长链非编码RNA PGM5-AS1表达及调控人肾小球内皮细胞的作用[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(5): 741-745.
[2]	杨鑫, 金喆, 冯旭, 卢兵. 沈阳市居民对器官、眼组织及遗体捐献的认知及意愿调查[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(5): 779-784.
[3]	李立强, 焦龙杏, 张武 , 闫文涛, 李健, 李明皓. 骨髓来源未成熟树突状细胞干预大鼠原位肝移植的排斥反应[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(13): 2025-2029.
[4]	杨峰, 常利普, 黄长山, 宫晓光, 常顺伍. 大环内酯类抗生素对大鼠肝移植后缺血再灌注损伤的保护作用[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(26): 4176-4182.
[5]	郭伟, 卢姗, 范红, 李君. 肝衰竭修复替代治疗的现状与发展对策[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(20): 3248-3255.
[6]	刘梦元，方芳 . 肝移植后多重耐药菌感染的相关危险因素[J]. 中国组织工程研究, 2019, 23(7): 1109-1114.
[7]	冯芳，董晨明，陈宇，齐艳. 脂肪间充质干细胞移植治疗脓毒症大鼠急性呼吸窘迫综合征及机制[J]. 中国组织工程研究, 2019, 23(5): 741-748.
[8]	季秋实，董明，许诺，姜龙，牛卫东. 小眼畸形相关转录因子及其信号通路在破骨细胞分化中的作用[J]. 中国组织工程研究, 2019, 23(36): 5882-5888.
[9]	马秋华，王云文，马慧，齐杰，张清潭. Klotho基因多态性与60岁以上老年原发性骨质疏松症的相关性[J]. 中国组织工程研究, 2019, 23(35): 5587-5591.
[10]	高红强，刘静，李志强，王海雷，赵雄齐，张升宁，冉江华，李立. 乌司他丁干预减体积肝移植模型大鼠的肝脏代谢[J]. 中国组织工程研究, 2019, 23(3): 435-440.
[11]	李翔翮，罗伟，胡峻贤，杨静，韩欣赟，董世武，杨先腾，李森磊，鄢志辉，聂瑛洁，田晓宾，孙立5. 白杨素抑制核因子κB受体活化因子配体诱导的小鼠破骨细胞生成[J]. 中国组织工程研究, 2019, 23(25): 3978-3986.
[12]	孙治中，江艳君，纪树亮，石础硕，张填，周小琦，杨智华，陈悦轩，罗川晋. 黄芩苷治疗小鼠动脉粥样硬化模型的作用与机制[J]. 中国组织工程研究, 2019, 23(19): 3037-3043.
[13]	黄晓林，廖健，洪伟，李芳，程余婷，周倩，董强. 破骨细胞形成过程中唑来膦酸的作用途径及机制[J]. 中国组织工程研究, 2019, 23(17): 2716-2721.
[14]	蔡秋程，范洪凯，熊日晖，江艺. 骨髓间充质干细胞对心脏死亡脂肪变供肝移植后肝功能的保护[J]. 中国组织工程研究, 2019, 23(17): 2625-2629.
[15]	王宇翾. 白藜芦醇和胎肝干细胞移植联合治疗大鼠肝硬化[J]. 中国组织工程研究, 2019, 23(13): 2049-2054.