大环内酯类抗生素对大鼠肝移植后缺血再灌注损伤的保护作用

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2732

中国组织工程研究 ›› 2020, Vol. 24 ›› Issue (26): 4176-4182.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2732

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大环内酯类抗生素对大鼠肝移植后缺血再灌注损伤的保护作用

杨峰¹，常利普²，黄长山³，宫晓光⁴，常顺伍⁴

郑州卫生健康职业学院，¹实验用品中心，²基础教学系，河南省郑州市 450005；³河南省肿瘤医院肝胆外科，河南省郑州市 450008；⁴海南省人民医院普通外科，海南省海口市 570311

收稿日期:2019-09-05 修回日期:2019-09-07 接受日期:2019-11-07 出版日期:2020-09-18 发布日期:2020-09-02
通讯作者: 常顺伍，博士，副主任医师，海南省人民医院普通外科，海南省海口市 570311
作者简介:杨峰，男，1975年生，汉族，河南省郑州市人，新乡医学院毕业，硕士，高级讲师，主治医师，主要从事肝移植研究。
基金资助:
海南省自然科学基金资助项目(SQ2015ZRJJ0364)

Macrolide antibiotics protects against ischemia-reperfusion injury after liver transplantation in rats

Yang Feng¹, Chang Lipu², Huang Changshan³, Gong Xiaoguang⁴, Chang Shunwu⁴

¹Laboratory Supplies Center, ²Department of Basic Education, Zhengzhou Health Vocational College, Zhengzhou 450005, Henan Province, China; ³Department of Hepatobiliary Surgery, Henan Cancer Hospital, Zhengzhou 450008, Henan Province, China; ⁴Department of General Surgery, Hainan General Hospital, Haikou 570311, Hainan Province, China

Received:2019-09-05 Revised:2019-09-07 Accepted:2019-11-07 Online:2020-09-18 Published:2020-09-02
Contact: Chang Shunwu, MD, Associate chief physician, Department of General Surgery, Hainan General Hospital, Haikou 570311, Hainan Province, China
About author:Yang Feng, Master, Senior lecturer, Attending physician, Laboratory Supplies Center, Zhengzhou Health Vocational College, Zhengzhou 450005, Henan Province, China
Supported by:
the Natural Science Foundation of Hainan Province, No. SQ2015ZRJJ0364

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：

原位肝移植：又称正位肝移植，指在术中阻断受体肝的下腔静脉，并切除受体肝和下腔静脉，并利用供体肝的肝上、肝下下腔静脉重建和恢复肝脏的流出道与下腔静脉的连续性。

缺血再灌注损伤：指缺血组织或器官再次恢复血液供应后，会导致自由基过量生成，且过量的自由基会对再灌注组织或器官造成氧化应激损伤。

背景：肝移植是终末期肝病和肝衰竭的标准治疗方法，而缺血再灌注损伤能影响肝移植成功率。当有限的肝脏供体可供移植时，如何降低肝缺血再灌注损伤成了肝移植的首要问题。

目的：探究大环内酯类抗生素对大鼠肝移植后肝缺血再灌注损伤的作用及机制。

方法：构建自体原位肝移植大鼠模型，将Wistar大鼠随机分为大环内酯类抗生素组和对照组。大环内酯类抗生素组大鼠在肝切除前30 min，采用大环内酯类抗生素(含60 mg/kg罗红霉素、20 mg/kg克拉霉素和40 mg/kg红霉素)混合液预处理供体肝脏，在原位肝移植时向门静脉中推注上述大环内酯类抗生素混合液；对照组大鼠在肝切除前30 min，同体积生理盐水预处理供体肝脏，在原位肝移植时向门静脉中推注同体积的生理盐水。肝移植后连续7 d观察大鼠存活率；检测肝移植后48，72 h大鼠血清天冬氨酸氨基转移酶和丙氨酸氨基转移酶活性；苏木精-伊红染色和免疫组化检测大鼠肝组织形态学改变和Ki-67阳性细胞数；TUNEL法和蛋白质免疫印迹分别检测大鼠肝细胞凋亡数量和caspase-3、cleaved caspase-3蛋白表达水平；免疫荧光和ELISA法分别检测肝移植后大鼠肝组织中Kupffer细胞数量改变和白细胞介素6、肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β水平。

结果与结论：大环内酯类抗生素提高了肝移植大鼠的整体存活率，改善了移植肝脏的功能失调，减轻了肝移植后缺血再灌注的损伤程度，提高了移植肝脏的再生能力，降低了移植肝组织中凋亡细胞数和凋亡蛋白cleaved caspase-3/ caspase-3比值，降低了移植肝组织中Kupffer细胞数量和白细胞介素6、肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β水平。以上结果提示，大环内酯类抗生素对大鼠肝移植后的肝缺血再灌注损伤起保护作用。

ORCID: 0000-0002-5646-1426(杨峰)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

关键词: 大环内酯类抗生素, 原位肝移植, 缺血再灌注损伤, 肝再生, 肝功能, 保护

Abstract:

BACKGROUND: Liver transplantation is the standard treatment for end-stage liver disease and liver failure. However, ischemia-reperfusion injury can reduce the success rate of liver transplantation. When a limited number of liver donors are available for transplantation, how to reduce liver ischemia-reperfusion injury has become the primary issue in liver transplantation.

OBJECTIVE: To evaluate the effect of macrolide antibiotics on ischemia-reperfusion injury after liver transplantation in rats.

METHODS: Rat autologous orthotopic liver transplantation model was constructed. Wistar rats were randomly divided into macrolide antibiotics group and control group. In the macrolide antibiotics group, the donor liver was treated with macrolide antibiotics (60 mg/kg roxithromycin, 20 mg/kg clarithromycin and 40 mg/kg erythromycin) 30 minutes before hepatectomy, and the above macrolide antibiotic mixture was injected into the portal vein immediately after orthotopic liver transplantation. In the control group, rats were pretreated with the same volume of saline for 30 minutes before hepatectomy, and the same volume of saline was injected into the portal vein immediately after orthotopic liver transplantation. The survival rate of the rats was observed within 7 days after liver transplantation. The serum aspartate aminotransferase and alanine aminotransferase activities were detected by automatic biochemical analyzer at 48 and 72 hours after liver transplantation. Hematoxylin-eosin staining and immunohistochemistry assay were used to detect the morphological changes of liver tissues and the number of Ki-67 positive cells in liver transplantation rats. TUNEL and western blot assay were used to detect the number of apoptotic hepatocytes and the expression of caspase-3 and cleaved caspase-3 proteins in liver transplantation rats, respectively. The Kupffer cell number changes and levels of interleukin-6, interleukin-1β, and tumor necrosis factor-α in rat liver tissues after liver transplantation were detected by immunofluorescence and ELISA, respectively.

RESULTS AND CONCLUSION: Macrolide antibiotics increased the overall survival rate of liver transplanted rats, improved the dysfunction of transplanted liver, reduced the severity of ischemia-reperfusion injury after liver transplantation, increased the regenerative capacity of transplanted liver, reduced the number of apoptotic cells and the ratio of cleaved caspase-3/caspase-3 in the transplanted liver tissue, and decreased the number of Kupffer cells and the levels of interleukin-6, interleukin-1β and tumor necrosis factor-α in the transplanted liver. All the results indicate that macrolide antibiotics protect against ischemia-reperfusion injury in rats undergoing liver transplantation.

Key words: macrolide antibiotics, orthotopic liver transplantation, ischemia-reperfusion injury, liver regeneration, liver function, protection

中图分类号:

杨峰, 常利普, 黄长山, 宫晓光, 常顺伍. 大环内酯类抗生素对大鼠肝移植后缺血再灌注损伤的保护作用[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(26): 4176-4182.

Yang Feng, Chang Lipu, Huang Changshan, Gong Xiaoguang, Chang Shunwu. Macrolide antibiotics protects against ischemia-reperfusion injury after liver transplantation in rats[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2020, 24(26): 4176-4182.

图/表（结果） 5

2.1 大环内酯类抗生素对肝移植后大鼠存活率的影响实验观察了大鼠原位肝移植后7 d内的存活率。结果发现，对照组大鼠在肝移植后第5天全部死亡；与对照组比较，大环内酯类抗生素组大鼠肝移植后存活率显著增加(P < 0.05)，见图1。

2.2 大环内酯类抗生素对肝移植后大鼠血清肝酶活性的影响 ELISA检测肝移植后48，72 h大鼠血清中AST和ALT的活性，结果显示：肝移植后48 h，与对照组相比，大环内酯类抗生素组大鼠的ALT(图2A)和AST(图2C)活性均明显降低(P < 0.05)；同样，肝移植后72 h，与对照组相比，大环内酯类抗生素组大鼠的ALT(图2B)和AST(图2D)活性均降低(P < 0.01)。

2.3 大环内酯类抗生素对肝移植后大鼠肝组织形态学和再生能力的影响在对照组肝组织显示炎性细胞浸润，同时伴有肝细胞水肿，体积增大，胞浆淡染、疏松化，甚至出现肝细胞气球样变；相对于对照组，大环内酯类抗生素组移植肝组织以上现象明显改善(图3A)。

相对于对照组，大环内酯类抗生素组移植后肝组织的Suzuki评分显著降低(图3C，P < 0.01)。

Ki-67的免疫组化结果(图3B)显示，相对于对照组，大环内酯类抗生素组移植后肝组织中Ki-67阳性细胞数显著增加(图3D，P < 0.01)。

2.4 大环内酯类抗生素对肝移植后大鼠肝细胞凋亡的影响 TUNEL法结果显示，相对于对照组，大环内酯类抗生素组肝组织中TUNEL阳性细胞数量(图4A和B)和cleaved caspase-3/caspase-3比率(图4C和D)均显著降低(P < 0.001)。

2.5 大环内酯类抗生素对肝移植后大鼠肝组织中Kupffer细胞表达和炎性细胞因子的影响免疫荧光结果显示，对照组肝组织中有大量的Kupffer细胞浸润，而大环内酯类抗生素组的肝脏显示较少的Kupffer细胞(图5A和B，P < 0.001)。

ELISA结果显示，与对照组相比，大环内酯类抗生素组肝移植后大鼠肝组织中促炎性细胞因子肿瘤坏死因子α(图5C)、白细胞介素1β(图5D)、白细胞介素6(图5E)水平均显著下降(P < 0.01)。

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引言

尽管为寻找新的治疗肝衰竭的方法做出了巨大努力，但肝移植仍然是终末期肝病和急性肝衰竭的标准治疗方法^[1]，而缺血再灌注损伤(ischemia/reperfusion injury，IRI)的存在直接降低了肝移植的成功率。当有限的肝脏供体可供移植时，如何解决或降低肝IRI成了肝移植的首要的问题^[2]。IRI级联是多个步骤的结果：最初，缺血会造成肝供体线粒体损伤并导致氧化应激和细胞损伤^[3]；植入后，再灌注会诱导肝供体促炎细胞因子的释放和活性氧的产生，这会进一步损害肝细胞^[4]；这些因素的组合可导致肝脏中微循环障碍和血栓形成，并最终导致肝组织坏死^[4-6]；此外，由于边缘供体移植物对缺血性损伤的敏感性较高，IRI导致缺乏适合移植的肝脏^[7]。因此，减少IRI的疗法可能会增加合适供体肝脏的储备并降低等待肝移植的患者的死亡率。在肝移植手术中，冷藏后缺血性损伤和再灌注损伤仍然是移植肝功能受损和移植肝脏再衰竭的主要危险因素^[8-9]。虽然，研究人员进行了大量关于限制肝供体冷缺血时间方面的研究工作^[10]，然而，随着可用移植器官的需求增加，冷缺血期通常会延长，这通常导致移植时肝脏质量降低。临床已经进行了各种研究发掘最小化IRI的药物^[11]，但该问题仍未得到妥善解决。因此，关于该问题的改进仍需要进一步探究。

大环内酯类抗生素如红霉素、克拉霉素和罗红霉素长期以来在临床一直作为抗菌药物使用，不良反应很小。有研究报道，临床使用剂量的红霉素等大环内酯类抗生素预处理可诱导体外缺氧耐受和体内心/脑缺血的耐受^[12-13]。并且，红霉素等大环内酯类抗生素在应用于器官移植手术中可减轻炎症反应^[14-15]。然而，关于大环内酯类抗生素对原位肝移植中IRI影响的研究尚少见文献报道。因此，该研究中构建自体原位肝移植大鼠模型，探讨大环内酯类抗生素(罗红霉素+克拉霉素+红霉素)对自体原位肝移植中IRI的作用，并对其机制进行初步探讨。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

材料方法

1.1 设计随机对照动物实验。

1.2 时间及地点动物造模、血液标本采集与检测和组织标本采集与制作于2018年12月至2019年1月在海南省人民医院医学实验动物中心完成；组织标本检测于2019年3月至5月在郑州卫生健康职业学院基础医学实验室完成。

1.3 材料

1.3.1 实验动物 60只七八周龄SPF级雄性Wistar大鼠，体质量240-260 g，购自河南省实验动物中心[SCXK(豫) 2017-0001]。将大鼠饲养在室温(24±1) ℃、湿度45%- 55%RH、昼夜循环12 h/12 h的SPF级动物饲养室中，可自由获取水和标准实验室食物，适应饲养5 d。

所有动物实验遵从动物福利，实验方案通过实验动物伦理委员会审查。

1.3.2 实验用主要药品和试剂罗红霉素(roxithromycin，RXM)、克拉霉素(clarithromycin，CAM)和红霉素(erythromycin，EM)均购自美国Sigma公司；丁丙诺啡购自青海制药厂有限公司；UW溶液购自美国Bristol-Myers Squibb公司。

1.4 实验方法

1.4.1 原位肝移植模型构建与分组处理吸入0.8%-3%异氟烷(Intervet KK，日本)麻醉大鼠。在肝脏采集前静脉注射1 mL含200 U肝素的生理盐水。大鼠随机分为2组，大环内酯类抗生素组和对照组，每组30只。在肝切除前30 min，大环内酯类抗生素组供体大鼠采用大环内酯类抗生素(含60 mg/kg罗红霉素、20 mg/kg克拉霉素和40 mg/kg红霉素)混合液2 mL注入门静脉；对照组供体大鼠门静脉注入生理盐水2 mL。肝切除后，通过门静脉用10 mL冷(4 ℃)生理盐水冲洗供体肝脏，然后供体肝脏在UW溶液中冷缺血储存18 h。为了类似于人肝移植过程中的热缺血时间，在手术植入开始之前将肝脏维持在21 ℃无菌环境中15 min。所有肝脏通过门静脉用10 mL盐水溶液重新冲洗并称质量。然后用袖带技术的改进版本进行原位肝移植^[16-17]，将两组大鼠置于循环温水垫上，在外科手术过程中将其体温保持在37.8-38.7 ℃的正常范围内。大环内酯类抗生素组大鼠在原位肝移植时立即向门静脉中推注大环内酯类抗生素(含60 mg/kg罗红霉素、20 mg/kg克拉霉素和40 mg/kg红霉素)混合液2 mL；对照组大鼠推注同剂量的生理盐水 2 mL。在手术结束时，切口闭合后立即皮下注射丁丙诺啡0.05 mg/kg。

大鼠恢复意识后，每组随机挑选20只大鼠，用于观察1-7 d生存率。剩余每组10只大鼠在移植后48 h和72 h收集血清，并在72 h时麻醉处死大鼠，收集肝组织。

1.4.2 肝功能生化指标检测原位肝移植后48，72 h，尾静脉收集血样(n=10)，通过离心获得血清并储存在-20 ℃直至分析；通过全自动生化分析仪测定天冬氨酸氨基转移酶(aspartate transaminase，AST)和丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase，ALT)活性。

1.4.3 肝脏的组织学分析移植后72 h的肝组织(n=10)制作石蜡组织，并制作5 µm厚的石蜡切片。肝组织石蜡切片行常规苏木精-伊红染色。每张切片随机选6个视野，采用改良的Suzuki评分标准对6个视野进行评分^[18]，评估肝组织IRI的严重程度(充血，空泡化，细胞浸润和坏死)，评分越高，病理改变越重。

1.4.4 肝脏再生检测用Ki-67免疫组化染色评估移植后 72 h的肝组织(n=10)再生。肝组织石蜡切片行常规脱蜡、复水和抗原修复后，滴加1︰200的Ki-67抗体(#sc-23900；Santa Cruz，美国)室温孵育1 h，PBS洗涤3次后；滴加 1︰200二抗，室温孵育45 min，PBS洗涤3次后；滴加SABC孵育15 min，PBS洗涤后，滴加DAB显示液孵育5 min，自来水冲洗后；常规脱水和中性树脂封固。显微镜下任选6个视野拍照，通过Image J软件对Ki-67阳性细胞进行计数。

1.4.5 细胞凋亡检测移植后72 h的肝组织(n=10)的石蜡切片行常规脱蜡和复水后，采用TUNEL试剂盒(#C1086，碧云天，上海)进行检测。将肝切片与20 mg/L蛋白酶K溶液在室温下孵育10 min后，PBS洗3遍，37 ℃下孵育用TUNEL标记试剂1 h后，滴加DAB显示液孵育15 min，自来水冲洗后；常规脱水和中性树脂封固。显微镜下任选6个视野拍照，通过Image J软件对Ki-67阳性细胞进行计数。

1.4.6 蛋白质免疫印迹测定移植后72 h的肝组织(n=10)经匀浆后，经RIPA(#P0013C，碧云天，上海)提取蛋白。通过BCA蛋白浓度测定试剂盒(#P0012S，碧云天，上海)测定蛋白浓度。蛋白经SDS-PAGE电泳后，将蛋白电转至PVDF膜，PVDF膜经封闭后，室温分别孵育一抗[1︰1 000稀释的cleaved caspase-3抗体(#9654，Cell Signaling Technology，美国)和caspase-3(#9662，Cell Signaling Technology，美国)]1.5 h，TBST洗膜3次后，室温孵育 1︰2 000稀释的二抗(HRP标记的IgG，#7076，Cell Signaling Technology，美国)45 min，TBST洗膜3次后，利用增强的ECL化学发光试剂盒(#P0018AS，碧云天，上海)对目的条带显影，以β-actin(#AF0003，碧云天，上海)为内参，采用AlphaView软件测量目的条带的吸光度。

1.4.7 酶联免疫吸附测定移植后72 h的肝组织(n=10)样品中白细胞介素6、肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β水平分别采用相应的ELISA试剂盒(#R600B；#RTA00；#RLB00；R&D Systems，美国)按照试剂盒说明书进行测定。待反应结束后，使用酶标仪测450 nm处的吸光度。

按照制作的标准曲线样品中白细胞介素6、肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β水平并标准化为肝组织匀浆中的总蛋白，并表示为白细胞介素6、肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β的相对值。

1.4.8 Kuffer 细胞计数用CD68免疫荧光染色评估移植后72 h肝组织(n=10)的石蜡切片中肝组织Kuffer细胞数。肝组织石蜡切片行常规脱蜡和复水后，滴加1︰200的CD68抗体(#ab33786，Abcam，美国)室温孵育1 h。PBS洗3遍后，室温避光孵育1︰200的Dylight 488标记IgG(#072-03- 18-06，KPL，美国)1 h。将DAPI染核5 min。荧光显微镜下随机拍摄6个视野，计数6个视野中的Kuffer细胞(CD68阳性)数，取平均值，表示为每个视野的细胞数。

1.5 主要观察指标 ①连续7 d观察各组大鼠生存率；②术后48，72 h血清AST和ALT活性；③术后72 h肝组织形态、肝组织Ki-67和cleaved caspase-3表达、肝细胞凋亡情况、肝组织中Kupffer细胞数及肝组织白细胞介素6、白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α水平。

1.6 统计学分析采用GraphPad Prism 6软件将实验所得数据进行分析。计量资料用x(_)±s表示，组与组之间比较采用t 检验。大鼠的生存率采用生存(Survival)分析，绘制生存曲线(Survival curve)，采用Kaplan-Meier法比较各组间小鼠生存率。以P < 0.05为界限判断是否具有统计学意义。

讨论

肝移植中通常会发生肝脏IRI，而肝I/R是导致肝损伤、肝功能障碍、肝移植后急性和慢性排斥反应的发生率增加的主要原因^[19-20]。缺血期的病理特征是ATP消耗和代谢紊乱，而再灌注后发生活性氧的积累、促炎细胞因子的上调和炎性细胞的浸润，这些变化诱导肝细胞进一步坏死和凋亡^[21]。肝IRI已被确定为肝移植后病因学中最重要的因素之一，其会导致早期肝移植体功能障碍和衰竭^[22]。当供体肝脏短暂缺血缺氧和复血复氧时，触发IRI，导致再灌注早期不受控制的炎症反应和活性氧物质释放^[23]。因此，肝移植后IRI已引起全世界广泛的关注，急需开发有效的干预策略或药物。

大环内酯类抗生素(如依维莫司、西罗莫司等)最近已被证明是温肝缺血的保护剂，还证实了其能通过抗排斥、抗炎、抗氧化应激损伤、抗凋亡和促增殖等机制增强大体积部分肝切除术后肝再生和存活能力^[14，24-27]。然而，其他大环内酯类抗生素对大鼠原位肝移植后肝缺血再灌注损伤的作用报道不多。此次研究提供的所有数据均证实了大环内酯类抗生素(罗红霉素+克拉霉素+红霉素)可减轻肝移植后肝IRI，这一结果是通过大环内酯类抗生素(罗红霉素+克拉霉素+红霉素)提高原位肝移植后大鼠的存活率、降低肝脏转氨酶水平和肝细胞凋亡来体现的。

肝细胞凋亡是肝移植后肝坏死或损伤和早期无肝功能的重要原因，也是影响肝移植成功的决定因素之一^[28]。此次研究显示，大环内酯类抗生素(罗红霉素+克拉霉素+红霉素)干预可减轻大鼠原位肝移植后肝组织中的肝细胞损伤程度和炎细胞浸润，降低TUNEL阳性细胞数和cleaved caspase-3/caspase-3比率，这说明大环内酯类抗生素(罗红霉素+克拉霉素+红霉素)干预能降低肝移植后肝损伤和肝细胞凋亡；大环内酯类抗生素组肝移植48 h和72 h后肝组织的ALT和AST水平低于对照组，说明大环内酯类抗生素(罗红霉素+克拉霉素+红霉素)干预改善了移植后肝功能失调。另外，此次研究发现大环内酯类抗生素(罗红霉素+克拉霉素+红霉素)干预能促进肝组织中Ki-67表达，说明大环内酯类抗生素(罗红霉素+克拉霉素+红霉素)干预增强了移植后肝脏的再生能力。

同时，在此次研究中对大环内酯类抗生素(罗红霉素+克拉霉素+红霉素)在大鼠原位肝移植后IRI的保护作用的潜在机制进行了初步探讨。有研究表明，肝IRI能促使肝内巨噬细胞和树突状细胞的激活，氧化应激和促炎细胞因子产生^[20]。巨噬细胞活化和下游炎症级联反应在IRI过程中起重要作用^[29]。Kupffer细胞是最大的肝巨噬细胞群，参与吞噬作用、抗原呈递和炎性细胞因子的产生，在肝损伤和再生的发展中起关键作用^[^30-32^]。有文献报道，肝移植后活化的Kupffer细胞释放活性氧、活性氮物质和促炎递质加重肝损伤；而减少Kupffer细胞活化则肝损伤减轻，肝移植成功率增加^[³⁰^]。同时，有研究发现原位肝移植后肝移植体促炎因子包括肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素6以及激活的TLR4/NF-κB信号通路显著增加^[3³^]。且这些促炎因子可在再灌注期间向受损肝组织募集循环中性粒细胞，对肝IRI的起始和级联放大起促进作用，而抑制这些促炎因子的分泌能减轻肝IRI并提高肝移植成功率^[2⁹^]。在此次研究中，发现大环内酯类抗生素(罗红霉素+克拉霉素+红霉素)干预能显著降低大鼠肝移植后肝组织中的Kupffer细胞数量和促炎性细胞因子肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素6水平；说明大环内酯类抗生素(罗红霉素+克拉霉素+红霉素)干预可能通过抑制Kupffer细胞活化与减少促炎因子分泌来达到减轻肝IRI。

此次研究的局限性在于只关注了对照组(生理盐水)做比较，并没有与用于肝移植中的活性药物相比。虽然，此次研究得出大环内酯类抗生素(罗红霉素+克拉霉素+红霉素)处理能降低肝移植术后IRI和提高肝功能和肝再生，但其与目前用于肝移植中活性药物的抗术后IRI的效果比较有待进一步研究。另外，大环内酯类抗生素(罗红霉素+克拉霉素+红霉素)药物配比剂量也待进一步研究探索。

总之，就目前研究结果而言，大环内酯类抗生素(罗红霉素+克拉霉素+红霉素)对大鼠原位肝移植后的IRI起保护作用；这为大环内酯类抗生素(罗红霉素+克拉霉素+红霉素)作为肝移植后IRI的保护剂提供实验依据。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

大环内酯类抗生素对大鼠肝移植后缺血再灌注损伤的保护作用

Macrolide antibiotics protects against ischemia-reperfusion injury after liver transplantation in rats

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