阿仑膦酸钠与雷洛昔芬对牙槽骨吸收的影响

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2013.07.002

中国组织工程研究 ›› 2013, Vol. 17 ›› Issue (7): 1146-1150.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2013.07.002

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阿仑膦酸钠与雷洛昔芬对牙槽骨吸收的影响

陈锦波¹，刘铁玉²，阎美凤²，曲晓娟³

1大连大学附属口腔医院，辽宁省大连市 116012
2大连大学附属新华医院，辽宁省大连市 116012
3大连大学医学院口腔医学系，辽宁省大连市 116622

收稿日期:2012-06-08 修回日期:2012-07-19 出版日期:2013-02-12 发布日期:2013-02-12
通讯作者: 曲晓娟，硕士，教授，大连大学医学院口腔医学系，辽宁省大连市 116622 qxj1028@126.com
作者简介:陈锦波，女，1959年生，辽宁省大连市人，汉族，1982年大连医学院毕业，副主任医师，主要从事牙体牙髓病及牙槽骨改建方面研究。 369maple@sina.com

Alendronate and raloxifene affect alveolar bone resorption

Chen Jin-bo¹, Liu Tie-yu², Yan Mei-feng², Qu Xiao-juan³

1 Dalian University Dental Hospital, Dalian 116012, Liaoning Province, China
2 Xinhua Hospital Affiliated to Dalian University, Dalian 116012, Liaoning Province, China
3 Department of Oral Medicine, Dalian University School of Medicine, Dalian 116622, Liaoning Province, China

Received:2012-06-08 Revised:2012-07-19 Online:2013-02-12 Published:2013-02-12
Contact: Qu Xiao-juan, Master, Professor, Department of Oral Medicine, Dalian University School of Medicine, Dalian 116622, Liaoning Province, China qxj1028@126.com
About author:Chen Jin-bo, Associate chief physician, Dalian University Dental Hospital, Dalian 116012, Liaoning Province, China 369maple@sina.com

摘要/Abstract

摘要：

背景：研究证明阿仑膦酸钠与雷洛昔芬对骨质疏松有抑制作用。
目的：建立实验性大鼠骨质疏松及牙槽骨吸收模型，评价阿仑膦酸钠与雷洛昔芬对骨吸收的防治作用。
方法：56只雌性SD大鼠建立骨质疏松及牙槽骨吸收的动物模型，实验动物分组：①去势+结扎组和单纯结扎组又分别分为3个亚组：阿仑膦酸钠组、雷洛昔芬组和非用药组。②单纯去势非用药组。③假手术组做空白对照。建模手术后第5日开始灌胃给药，1次/d，治疗3个月。用血生化指标、骨密度测量及组织形态学方法进行药效评价。
结果与结论：阿仑膦酸钠治疗组较雷洛昔芬组有更强的降低去势组碱性磷酸酶和血钙的作用；提高去势组骨密度。结果证实阿仑膦酸钠与雷洛昔芬均能减少骨质丢失，从而可以防止骨质疏松及病理性牙槽骨骨吸收，且阿仑膦酸钠作用较好。

关键词: 组织构建, 口腔组织构建, 阿仑膦酸钠, 雷洛昔芬, 骨密度, 骨质疏松, 牙槽骨质丢失, 省级基金

Abstract:

BACKGROUND: Studies have shown that alendronate and raloxifene can suppress osteoporosis.
OBJECTIVE: To evaluate the anti-osteoporosis effect of alendronate and raloxifene in rat models of osteoporosis and alveolar bone resorption.
METHODS: Totally 56 female Sprague-Dawley rats were enrolled to establish animal models of osteoporosis and alveolar bone resorption. Ovariectomized+ligation group and ligation group were respectively divided into three subgroups: alendronate, raloxifene and non-drug groups. Ovariectomized group and sham operation group (blank control) were set. Intragastric administration was performed at 5 days after modeling, once a day, totally for 3 months. Blood biochemical markers, bone mineral density measurement and histomorphological method were done for evaluation of drug effectiveness.
RESULTS AND CONCLUSION: As compared with the raloxifene groups, alendronate groups could significantly reduce alkaline phosphatase and serum calcium levels and promote bone mineral density in the ovariectomized rats. It is confirmed that both alendronate and raloxifene can reduce bone loss to prevent osteoporosis and alveolar bone resorption, but alendronate is a better one.

Key words: tissue construction, oral tissue construction, alendroinate, raloxifene, bone mineral density, osteoporosis, alveolar bone resorption, provincial grants-supported paper

中图分类号:

R318

陈锦波，刘铁玉，阎美凤，曲晓娟. 阿仑膦酸钠与雷洛昔芬对牙槽骨吸收的影响[J]. 中国组织工程研究, 2013, 17(7): 1146-1150.

Chen Jin-bo, Liu Tie-yu, Yan Mei-feng, Qu Xiao-juan. Alendronate and raloxifene affect alveolar bone resorption[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2013, 17(7): 1146-1150.

图/表（结果） 3

参考文献

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引言

材料方法

设计：随机对照动物实验。
时间及地点：实验于2007年12月至2008年8月在大连大学医学研究中心口腔医学研究实验室完成。实验室生物安全防护水平P2，为辽宁省重点实验室大连大学生物有机化学重点实验室。
材料：
实验动物：3月龄雌性SD大鼠60只，体质量210 g左右，购自大连大学实验动物中心，许可证号为2002，实验过程中对动物的处置符合彼得•辛格的动物解放论。每天12 h光(7:00- 19:00)/12 h黑(19:00-次晨7:00)环境中，室温下分笼饲养，自由摄入自来水和混合饲料(含蛋白质18%，钙3.8%,磷0.9%，脂肪2.5%，纤维5%)
药品、试剂及仪器：
Drugs, reagents and instruments:

实验方法：
动物分组：将60只大鼠适应性喂养1周后随机分组：去势+结扎组24只，又分为3个亚组：阿仑膦酸钠组、雷洛昔芬组和非用药组各8只；单纯结扎组24只，又分为3个亚组：阿仑膦酸钠组、雷洛昔芬组和非用药组各8只；单纯去势非用药组 8只；假手术组4只做空白对照。
结扎方法：20 g/L戊巴比妥钠35-55 mg/kg麻醉下，使用0.2 mm正畸结扎钢丝，从舌侧穿过左上颌第1和第2磨牙间隙，环绕第1磨牙牙颈部结扎。定期检查，发现脱落重新结扎。
去势方法：20 g/L戊巴比妥钠(35-55 mg/kg)腹腔注射麻醉，大鼠腹部正中切口，找到卵巢后输卵管结扎，完整摘除双侧卵巢，彻底止血后，分两层缝合腹膜、肌肉和皮肤。假手术组切口同上，切除质量与卵巢相同的肠系膜组织而非卵巢，其余操作同上。两组动物均于1周后拆线。动物自由进食、饮水，标准食料喂养。
用药组给药方法：阿仑膦酸钠组给予阿仑膦酸钠每只1 mg/(kg•d)，雷洛昔芬组给予雷洛昔芬每只 3 mg/(kg•d)。两种药物均予碾碎，用蒸馏水制成混悬液灌胃。其余各组只用生理盐水1 mL/d灌胃。各组均在手术后第5天起开始治疗，疗程3个月。
动物处死方法及标本采集：全部动物在同等条件下饲养，12周后称质量。眼后动脉采血，血凝后立即分离出血清，-20 ℃保存备用,乙醚过量麻醉处死大鼠。取大鼠左侧股骨、左下颌骨和左上颌牙体-牙周组织标本，置于体积分数4%甲醛中固定24 h，再置于体积分数75%的乙醇中，进行骨密度测定和组织形态学检查。
一般观察：观察大鼠活动状态、毛发、饮食、牙周组织变化等情况。
血清碱性磷酸酶活性测定：采用全自动生化分析仪测定血清标本中的碱性磷酸酶活性，采用对硝基苯磷酸二钠基质为底物的动力学方法，波长404 nm。
血清Ca²⁺测定：采用全自动生化分析仪测定血清标本中的Ca²⁺浓度，采用放免法测定。
血清P³⁺测定：采用全自动生化分析仪测定血清标本中的P³⁺浓度，采用钼兰比色法测定。
骨密度测定：采用双能X射线吸收骨密度测量扫描仪(DEXA)，美国Hologic公司生产，型号：QDR-2000+(由广东省人民医院核医学科提供)。放射源为X射线，精密度为1%扫描速度60 mm/s，分辨率1.0 mm×1.0 mm，扫描宽度20.0 cm，并配置了专用动物测量软件包。骨密度分析仪测定骨密度的变化远远早于X射线可见的骨吸收,是敏感、直接地反映骨量是否丢失的指标。股骨分别测每块股骨颈骨密度和左上颌骨牙体-牙周组织标本骨密度。测定数据处理采用586微机+DSP+单片控制机进行。
主要观察指标：①各组大鼠大体观察及体质量变化。②各组大鼠血清中的碱性磷酸酶、钙、磷的变化。③各组大鼠股骨及上下颌骨的骨密度变化。
统计学分析：应用SPSS 11.5软件包作均值方差分析，并作组间的独立t 检验。

讨论

3.1 动物模型的建立 牙周炎是细菌和宿主反应共同作用的结果，局部菌斑刺激是牙周炎的始动因子，而宿主的内分泌、营养代谢状况及免疫功能等全身因素是影响牙周炎严重程度的重要因素^[1-3]。实验利用正畸钢丝结扎大鼠左上颌第1磨牙，使局部滞留食物形成菌斑、牙石，造成局部刺激。研究结果表明,于手术后第5天开始给去势加结扎组和单纯结扎组灌服阿仑膦酸钠和雷洛昔芬并持续3个月，其骨密度及形态学指标均明显优于对照组,其生化指标显示碱性磷酸酶明显低于对照组，有可能是由于减少骨重建过程中骨激活单位的结果。说明不论是全身骨质疏松还是局部致炎因子刺激引起的骨吸收，阿仑膦酸钠均对其有明显的抑制作用^[4]，即阿仑膦酸钠和雷洛昔芬可抑制破骨细胞活化所致骨吸收。而牙周病的牙槽骨吸收是致炎因子导致破骨细胞异常活跃的结果。

3.2 大鼠体质量 有文献报道，体质量的增加可部分抑制去卵巢大鼠骨丢失^[5]。实验提示，尽管去势大鼠体质量明显增加(P < 0.05)，但股骨近端最终仍发生骨质疏松。说明体质量的增加是机体抵抗去势对骨骼影响的一种自我保护反应，不能完全阻止骨质疏松的发展。另外，去卵巢大鼠的雌激素水平下降，引起脂代谢紊乱，导致肥胖^[6]。雷洛昔芬组去势大鼠的体质量较非用药组明显降低(P < 0.05)，接近体质量的正常值水平(P > 0.05)；而阿仑膦酸钠治疗组效果不显著(P > 0.05)。

3.3 大鼠血生化指标 血清Ca²⁺，P³⁺水平反映与骨Ca²⁺，P³⁺代谢的平衡关系；血液碱性磷酸酶是最常用的评价骨形成和骨转换的指标^[7-8]，参与骨形成过程，且活性在血清中稳定,因此血清碱性磷酸酶检测可观察骨形成率，为骨质疏松症的治疗监测提供一个有效的手段。各组大鼠血清Ca²⁺，P³⁺碱性磷酸酶水平测定结果：去势后大鼠血清P³⁺，几乎无变化；与王毅等^[8]研究结果一致。Ca²⁺，碱性磷酸酶与假手术组比较，明显升高 (P < 0.01)，说明去势后大鼠骨改建呈高转换状态，骨形成和骨吸收同时增加，但骨吸收大于骨形成,骨形成和骨吸收的失衡最终导致了骨质疏松。阿仑膦酸钠组治疗后，大鼠血清Ca²⁺及碱性磷酸酶明显降低(P < 0.01),与假手术组已无明显差异,说明骨转换降低，阿仑膦酸钠抑制了去势大鼠的骨高转换状态，纠正了骨形成和骨吸收的失衡，使骨形成大于骨吸收；雷洛昔芬治疗后，碱性磷酸酶有所降低(0.01 < P < 0.05)，但是大鼠血清Ca2+未见明显降低，且与单纯去势+假手术组相比处于较高水平(P < 0.01)。结扎+去势+阿仑膦酸钠组碱性磷酸酶较去势+结扎非用药组显著降低(P < 0.01)，去势+结扎+雷洛昔芬组碱性磷酸酶较去势+结扎非用药组显著降低(P < 0.05)，显示阿仑膦酸钠较雷洛昔芬有更明显的降低碱性磷酸酶的作用。

3.4 大鼠骨密度 骨密度测量是明确骨质疏松诊断及疗效评价的必要手段^[9]。实验结果显示去势大鼠股骨和牙槽骨骨密度值与假手术组相比明显降低，说明本实验的骨质疏松模型建立较为成功，系统骨质疏松出现的同时颌骨也疏松^[10]。阿仑膦酸钠与雷洛昔芬对抑制骨质疏松均有作用，且阿仑膦酸钠治疗组股骨和牙槽骨骨密度值均较非用药组显著升高。

由于实验采取切除大鼠卵巢的方法造模，模型鼠的骨形成和骨吸收面均增加，骨矿化速度加快，提示此模型为高转换型骨质疏松，类似人类绝经后骨质疏松症^[11-12]，所以本实验结果仅说明阿仑膦酸钠和雷洛昔芬对绝经后骨质疏松均有疗效^[13-16]，且阿仑膦酸钠有更好的防治骨质疏松和牙槽骨吸收的作用。对骨转换低下的老年性骨质疏松症的作用效果如何尚不清楚。另外，由于实验时间和条件的限制，阿仑膦酸钠和雷洛昔芬的长期作用有待进一步观察。

基金资助：辽宁省教育厅高等学校科学研究项目计划(20040055)。
作者贡献：实验设计、评估为通讯作者，实施为第一作者及其他作者。盲法评估。
利益冲突：课题未涉及任何厂家及相关雇主或其他经济组织直接或间接的经济或利益的赞助。
伦理要求：实验过程中对动物的处置符合2009年《Ethical issues in animal experimentation》相关动物伦理学标准的条例。
作者声明：文章为原创作品，数据准确，内容不涉及泄密，无一稿两投，无抄袭，无内容剽窃，无作者署名争议，无与他人课题以及专利技术的争执，内容真实，文责自负。

阿仑膦酸钠与雷洛昔芬对牙槽骨吸收的影响

Alendronate and raloxifene affect alveolar bone resorption

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