3-甲基腺嘌呤调控自噬基因Beclin1可降低模型兔激素性股骨头缺血坏死的发生与发展

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.1164

中国组织工程研究 ›› 2019, Vol. 23 ›› Issue (15): 2391-2396.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.1164

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3-甲基腺嘌呤调控自噬基因Beclin1可降低模型兔激素性股骨头缺血坏死的发生与发展

孙亮1，刘万林1，娜日松2，赵振群1

(1内蒙古医科大学第二附属医院小儿骨科，内蒙古自治区呼和浩特市 010030；2内蒙古自治区人民医院干部保健所，内蒙古自治区呼和浩特市 010020)

收稿日期:2018-12-15 出版日期:2019-05-28 发布日期:2019-05-28
通讯作者: 刘万林，硕士，教授，硕士生导师，内蒙古医科大学第二附属医院小儿骨科，内蒙古自治区呼和浩特市 010030 并列通讯作者：赵振群，硕士，主任医师，硕士生导师，内蒙古医科大学第二附属医院小儿骨科，内蒙古自治区呼和浩特市 010030
作者简介:孙亮，男，1987年生，河北省张家口市人，汉族，2013年内蒙古医科大学毕业，硕士，主治医师，主要从事小儿骨科临床工作与激素性股骨头坏死发病机制基础研究。并列第一作者：娜日松，女，1989年生，内蒙古自治区呼和浩特市人，汉族，2013年内蒙古医科大学毕业，硕士，主治医师，主要从老年疾病的临床和基础研究。
基金资助:
国家自然科学基金(81360273)，项目负责人：刘万林；国家自然科学基金(81460331)，项目负责人：白锐；国家自然科学基金(81560349)，项目负责人：刘万林；国家自然科学基金(81760391)，项目负责人：赵振群

3-Methyladenine regulating autophagy gene Beclin1 can alleviate the occurrence and development of steroid-induced avascular necrosis of the femoral head

Sun Liang1, Liu Wanlin1, Na Risong2, Zhao Zhenqun1

(1Department of Pediatric Orthopedics, the Second Affiliated Hospital of Inner Mongolia Medical University, Hohhot 010030, Inner Mongolia Autonomous Region, China; 2Health Center of Cadre, Inner Mongolia People’s Hospital, Hohhot 010020, Inner Mongolia Autonomous Region, China)

Received:2018-12-15 Online:2019-05-28 Published:2019-05-28
Contact: Liu Wanlin, Master, Professor, Master’s supervisor, Department of Pediatric Orthopedics, the Second Affiliated Hospital of Inner Mongolia Medical University, Hohhot 010030, Inner Mongolia Autonomous Region, China Corresponding author: Zhao Zhenqun, Master, Chief physician, Master’s supervisor, Department of Pediatric Orthopedics, the Second Affiliated Hospital of Inner Mongolia Medical University, Hohhot 010030, Inner Mongolia Autonomous Region, China
About author:Sun Liang, Master, Attending physician, Department of Pediatric Orthopedics, the Second Affiliated Hospital of Inner Mongolia Medical University, Hohhot 010030, Inner Mongolia Autonomous Region, China Na Risong, Master, Attending physician, Health Center of Cadre, Inner Mongolia People’s Hospital, Hohhot 010020, Inner Mongolia Autonomous Region, China Sun Liang and Na Risong contributed equally to this work.
Supported by:
the National Natural Science Foundation of China, No. 81360273 (to LWL), 81460331 (to BR), 81560349 (to LWL) and 81760391 (to ZZQ)

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：
自噬基因Beclin-1：是哺乳动物体内参与自噬的特异性基因，是自噬的“守门人”，作为自噬的标志性分子，已经被广泛应用于自噬活性的检测。研究表明，自噬基因Beclin1可以调节自噬活性。
3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine，3-MA)：是常见的一种细胞自噬抑制剂，它通过抑制三型磷脂酰肌醇激酶3来抑制自噬体的形成，从而抑制自噬过程。

摘要
背景：激素性股骨头缺血坏死发病机制一直不太清楚，研究其发病机制仍是该领域的重点。
目的：探讨自噬基因Beclin-1在激素性股骨头缺血坏死中的作用及3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine，3-MA)对其的影响。
方法：5月龄日本大耳白兔36只，购于西安市迪乐普生物资源开发有限公司。将动物随机分成3组，每组12只。对照组：单纯肌肉注射生理盐水；股骨头坏死组：肌肉注射甲基强的松龙；3-MA组：肌肉注射甲基强的松龙，并于注射甲基强的松龙后随即肌肉注射3-MA，每组共注射4次，间隔1周，分别将每组实验动物于造模后1，2，3，4周取材，光镜下计数各组空缺骨陷窝，RT-PCR检测各组细胞内Beclin1基因的表达，Western Blot鉴定各组Beclin1蛋白表达。
结果及结论：①光镜下组织形态学观察，股骨头坏死组和3-MA组标本空缺骨陷窝率均明显上升(P < 0.05)，但3-MA组均明显低于股骨头坏死组(P < 0.05)；②糖皮质激素可以快速的刺激股骨头组织细胞Beclin1 mRNA表达，蛋白水平在前2周明显升高，提示激活细胞自噬；3-MA可以抑制这一过程；③结果提示：检测到激素性股骨头缺血坏死模型中Beclin1的表达，证实了自噬在激素性股骨头缺血坏死发病过程中发挥了一定作用；通过3-MA对Beclin1调控，进而调控自噬的发生，一定程度上降低了激素性股骨头缺血坏死的发生及发展。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程
ORCID: 0000-0002-1799-9418(孙亮)；0000-0001-9690-5346(娜日松)

关键词: 骨组织工程, 糖皮质激素, 股骨头, 骨坏死, 骨细胞, 自噬, 激素性股骨头坏死, 骨陷窝, 国家自然科学基金

Abstract:

BACKGROUND: Steroid-induced avascular necrosis of the femoral head is a worldwide problem, and its pathogenesis still remains unclear. Its pathogenesis is still the focus of research in this field.
OBJECTIVE: To discuss the role of autophagy gene Beclin1 in steroid-induced avascular necrosis of the femoral head and the effect of 3-methyladenine on Beclin1.
METHODS: Thirty-six 5-month-old Japanese white rabbits (provided by Xi’an Dilepu Biological Resource Development Co., Ltd.) were included and randomly divided into control group (intramuscular injection of normal saline), avascular necrosis of the femoral head group (intramuscular injection of methylprednisolone) and 3-methyladenine group (intramuscular injection of methylprednisolone and 3-methyladenine), with 12 rabbits in each group. The injection was conducted four times, with 1 week in between. The animals from each group were sacrificed at 1, 2, 3 and 4 weeks for sample taken. Vacant bone lacunae were counted under optical microscope. mRNA and protein expression levels of Beclin1 were detected by RT-PCR and western blot assay.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) Histomorphological observation under optical microscope showed that the rate of vacant lacunae in the avascular necrosis of the femoral head and 3-methyladenine groups was significantly increased (P < 0.05), and was significantly lower in the 3-methyladenine group than that in the avascular necrosis of the femoral head group (P < 0.05). (2) Glucocorticoid could rapidly stimulate the expression of Beclin1 mRNA in the femoral head tissue, and the protein level was significantly increased at the first two weeks, suggesting that autophagy was activated. 3-Methyladenine could inhibit this process. (3) These findings indicate that enhanced autophagy gene Beclin1 expression is important for avascular necrosis of the femoral head. 3-Methyladenine can regulate Beclin1, thereby controlling autophagy, which alleviates the occurrence and development of avascular necrosis of the femoral head.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

Key words: Femur Head Necrosis, Glucocorticoid, Autophagy

中图分类号:

R446，R318

孙亮，刘万林，娜日松，赵振群. 3-甲基腺嘌呤调控自噬基因Beclin1可降低模型兔激素性股骨头缺血坏死的发生与发展[J]. 中国组织工程研究, 2019, 23(15): 2391-2396.

Sun Liang1, Liu Wanlin1, Na Risong2, Zhao Zhenqun1. 3-Methyladenine regulating autophagy gene Beclin1 can alleviate the occurrence and development of steroid-induced avascular necrosis of the femoral head [J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2019, 23(15): 2391-2396.

图/表（结果） 5

2.1 实验动物数量分析实验选用大白兔36只，分为3组，实验过程无脱失，全部进入结果分析。

2.2 光镜下组织形态学观察结果正常空缺骨陷窝率为8%-12%，同等制片条件下股骨头软骨下空缺骨陷窝率超过此数目即提示出现股骨头坏死。光镜下观察对照组各周标本空缺骨陷窝率均小于12%，且4周之间无统计学差异(F=3.448；P < 0.05)。股骨头坏死组和3-MA组标本空缺骨陷窝率均明显上升(P < 0.05)，但3-MA组均明显低于股骨头坏死组(P < 0.05，见表1，图1)。且股骨头坏死组标本空缺骨陷窝率在前2周快速升高，考虑与注射激素初期股骨头组织大量坏死有关，第3，4周标本空缺骨陷窝率缓慢升高，考虑此时股骨头组织已大部分坏死，见图2。而3-MA组股骨头组织坏死程度明显低于股骨头坏死组，且坏死速度也相对减慢。

2.3 荧光定量PCR检测组织中Beclin1 mRNA表达以实验第1周对照组兔子股骨头组织中Beclin1 mRNA表达的量为基线，假设其值为1，其他各组均与该组作比较。对照组在实验的4周内，股骨头组织中Beclin1 mRNA表达基本稳定，无明显变化。

第1周，股骨头坏死组兔股骨头组织中Beclin1 mRNA是基线的16.01倍；第2到3周股骨头组织中Beclin1 mRNA表达量逐渐下降，分别降至基线的8倍和3倍，但仍明显高于对照组；至第4周，组织中Beclin1 mRNA表达量将至对照组以下，是基线的0.46倍。提示糖皮质激素可以快速的刺激股骨头组织Beclin1 mRNA表达，激活自噬。3-MA组兔股骨头组织中Beclin1 mRNA表达较为缓和，其峰值出现在实验第2周，股骨头组织中Beclin1 mRNA表达量是基线的6倍，明显低于股骨头坏死组，见图3；第3周和第4周，3-MA组Beclin1 mRNA表达量均低于对照组，分别为基线水平的0.28倍和0.48倍。提示给予3-MA治疗可以抑制糖皮质激素作用，股骨头组织Beclin1 mRNA的表达较股骨头坏死组水平降低，峰值延迟。

2.4 Western Blot鉴定股骨头组织中Beclin1蛋白表达以内参(β-actin)为参照物，对兔股骨头组织中Beclin1蛋白表达进行蛋白定量见图4，5，其变化趋势与mRNA变化趋势基本相同。实验前2周3组样本中Beclin1蛋白表达差异有显著性意义(P < 0.05)。
进一步进行LSD-t 检验，结果显示第1周股骨头坏死组Beclin1蛋白表达量较对照组和3-MA组均明显升高(P=0.033，P=0.007，均P < 0.05)；第2周股骨头坏死组Beclin1蛋白表达量较前有所升高，仍明显高于对照组和3-MA组(P=0.035，P=0.024，均P < 0.05)，前2周3-MA组和对照组Beclin1蛋白表达差异无显著性意义(P > 0.05)；第3，4周，股骨头坏死组Beclin1蛋白表达量明显下降，与对照组和3-MA组比较差异无显著性意义(P > 0.05，见表2)。实验早期，股骨头坏死组组织内Beclin1蛋白表达出现明显升高，提示激素可以激活细胞自噬，应用激素抑制剂3-MA后，组织内Beclin1蛋白无明显表达，且有被抑制倾向，证实3-MA可以抑制自噬。

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引言

股骨头缺血性坏死已成为一个世界难题，好发年龄为20-50岁^[1]。它通常是由于各种原因引起股骨头血供中断或受损，进一步导致股骨头结构发生变化，晚期常常伴有股骨头塌陷，从而引起患者髋关节疼痛及功能活动受限^[2-3]，而激素性股骨头缺血坏死占股骨头坏死一定比例，因此研究激素性股骨头缺血坏死的发病机制有助于该病的诊断及治疗。研究发现，该病发病机制可能同时受多因子调控^[4]，最为普遍接受的3个导致股骨头坏死的机制是：机械性血管中断、血栓性血管内闭塞以及血管外压缩^[5-6]。当然目前发病机制的学说有多种：如脂类代谢紊乱、二次碰撞、氧自由基代谢异常、细胞凋亡^[7]、局部血管内凝血等学说。

近年，随着分子生物学的发展，研究者更多倾向于关注基因表达与调控在疾病中的作用。程序性细胞死亡(凋亡型与自噬型)理论逐渐受到重视，当程序性细胞死亡调控发生改变时便可引起疾病的发生，因而成为研究组织器官衰老、损伤等发病机制的重要研究方向^[8]。已有学者开始对骨细胞、成骨细胞凋亡型程序性细胞死亡在激素性股骨头缺血坏死中的作用进行了初步探讨，对其发病机制有了新的认识^[9]。但对于自噬型程序性细胞死亡在激素性股骨头缺血坏死中的作用鲜有公开研究报道。

Beclin1是哺乳动物体内参与自噬的特异性基因^[10]，是自噬的“守门人”，作为自噬的标志性分子，已经被广泛应用于自噬活性的检测。相关研究表明，自噬基因Beclin1可以调节自噬活性^[11]。3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine，3-MA)是常见的一种细胞自噬抑制剂，它通过抑制三型磷脂酰肌醇激酶3来抑制自噬体的形成，从而抑制自噬过程。作者的前期研究结果表明：激素对股骨头节段血管中血小板衍生生长因子与血管内皮生长因子的抑制而引起的缺血缺氧状态及其众多差异表达基因的调控与激素性股骨头缺血坏死发生存在关联性。推测由激素导致激素性股骨头缺血坏死发生过程中极有可能存在细胞自噬型死亡这一生物学特性。因此，研究通过检测激素性股骨头缺血坏死动物模型中Beclin1基因表达以及3-MA在调控激素性股骨头缺血坏死中扮演的重要角色，为探明激素性股骨头缺血坏死的发病机制及防治开辟新的思路。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

材料方法

1.1 设计随机对照动物实验。

1.2 时间及地点实验于2017年6月至2018年6月在内蒙古医科大学分子病理实验室完成。

1.3 材料

1.3.1 实验动物 5月龄日本大耳白兔36只，体质量(2.5±0.5) kg，雌雄各18只，购于西安市迪乐普生物资源开发有限公司。

1.3.2 实验用主要试剂 Beclin1及内参β-Actin引物均购自于生工生物工程(上海)股份有限公司。RT-PCR相关试剂盒均购自于天根生化科技(北京)有限公司。Beclin1兔单克隆抗体、内参β-Actin兔单克隆抗体、荧光二抗均购自于Cell Signaling公司。Western Blot相关试剂盒均购自于赛默飞世尔科技(中国)有限公司。

1.4 实验方法

1.4.1 造模及干预取材将日本大耳白兔36只随机分成3组：①对照组：单纯肌肉注射生理盐水，2 mL/次，共4次，间隔1周；②股骨头坏死组：肌肉注射甲基强的松龙， 4 mg/kg，共4次，间隔1周；③3-MA组：肌肉注射甲基强的松龙，4 mg/kg，共4次，间隔1周，并于注射甲基强的松龙后随即肌肉注射3-MA 2 μL/只。

分别将每组实验动物于造模后1，2，3，4周处死，每次处死3只。相对无菌条件下取出实验动物双侧后肢的股骨头，一侧股骨头制成普通病理切片后进行苏木精-伊红染色，用于光镜下组织形态学观察；另一侧股骨头迅速置于液氮中保存，用于提取mRNA和蛋白，进行RT-PCR试验和Western Blot试验。

1.4.2 光镜下组织形态学观察取石蜡包埋股骨头组织块，制成厚4 μm切片，苏木精-伊红染色，中性树胶封固制成切片。在400倍放大倍率下观察空缺骨陷窝形态，并留取图像。在100倍放大倍率下，随机选5个视野，每个视野依次计数50个骨陷窝，分别数出空缺骨陷窝数，求出空缺骨陷窝占骨陷窝的百分数，取5组数据的均值，即为该切片的空缺骨陷窝率。每只兔随机选取3张切片计算空骨陷窝率，取各组3只兔所有切片的平均值为该组的空骨陷窝率。

1.4.3 RT-PCR检测组织内Beclin1 mRNA水平 Beclin1的上游引物序列为5’-ATC CTG GAC CGT GTC ACC ATC CAG G-3’，下游引物序列为5’-GTT GAG CTG AGT GTC CAG CTG G-3’，目的片段为363 bp。内参β-Actin的上游引物序列为5’-ACT CGT CAT ACT CCT GCT-3’，下游引物序列为5’-GAA ACT ACC TTC AAC TCC-3’，目的片段132 bp。提取样品组织中的RNA，获得RNA溶液，在冰上反转录为cDNA，将所得的cDNA溶液与购买的引物溶液混合，配置反应体系，移入八连管，放入ABI 7500 Fast荧光定量PCR仪，按照说明设置反应程序，数据用PCR仪原机软件进行分析。

1.4.4 Western Blot鉴定蛋白表达量液氮硬化组织，研磨后抽提组织蛋白，制备10%分离胶，将蛋白样本和蛋白上样缓冲液混合，加入上样孔内，80 V电泳1 h，160 V电泳 1.5 h，将NC膜与分离胶紧贴，135 mA转膜1.5 h，转好的NC膜在稀释的内参蛋白和Beclin1蛋白一抗溶液中孵育过夜，在稀释的荧光二抗溶液中孵育1 h，放入ODESSY荧光红外扫描系统中检测目的蛋白的表达情况。分别测量每只兔组织标本中内参蛋白和Beclin1蛋白条带的灰度值，计算每只兔组织标本灰度值比值=灰度值_Beclin1/灰度值_β-actin，取3只兔组织标本灰度值比值平均值为该组的平均灰度值比值。

1.5 主要观察指标 ①光镜下组织形态学观察；②荧光定量PCR检测组织中Beclin1 mRNA表达；③Western Blot 鉴定股骨头组织中Beclin1蛋白表达。

1.6 统计学分析用SPSS 17.0统计软件进行结果统计。方差齐性检验采用levene检验，以P > 0.05为方差齐性假设成立。x(_)±s描述数据，计量资料多组间比较采用方差分析，进一步进行组间比较采用LSD-t 检验。统计结果以P < 0.05为差异有显著性意义。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

讨论

长期使用或短期内大量使用肾上腺糖皮质激素(简称激素)引起的股骨头缺血坏死已得到医学领域的共同认可。激素性股骨头缺血坏死致残率极高，给患者及家属带来极大的生活及心理负担，严重影响患病者生活质量，因此成为学术研究热门。对于激素性股骨头缺血坏死的病因，有多种探讨，其中程序性细胞死亡(凋亡型与自噬型)理论逐渐受到重视。Jia等^[12]研究发现，糖皮质激素可诱导骨细胞发生凋亡和自噬，并且与其剂量有关，较低剂量的激素可以激活自噬，而较高剂量的激素会导致细胞凋亡。研究表明，激素性股骨头缺血坏死发病机制与骨细胞和成骨细胞凋亡相关，细胞自噬与细胞凋亡亦密切相关^[13]，例如细胞自噬可以增加或减少细胞凋亡、改变骨量等。作者团队在前期研究中也发现，骨髓造血细胞DNA氧化损伤和骨细胞凋亡参与了激素性股骨头缺血坏死的早期病理过程，并且前者先于后者发生^[14]。同时，进一步研究证实了在激素性股骨头缺血坏死早期，激素抑制了低氧诱导因子1α的表达，并促进骨细胞凋亡的发生^[15]。但对于自噬型程序性细胞死亡在激素性股骨头缺血坏死中的作用鲜有公开研究报道。

自噬是细胞对缺血缺氧等条件的一种应激反应，而在激素性股骨头缺血坏死的发生过程中，正是股骨头局部发生缺血缺氧的改变，从而引起骨细胞、成骨细胞发生的一系列病理变化^[16]。自噬在细胞起到双重调节作用，可以分解细胞内受到氧化损伤的细胞器来保护细胞免受凋亡，但是细胞自噬功能失调时，过度激活的自噬可以破坏细胞结构，反而会加速细胞凋亡^[17]。当组织细胞出现自噬功能失调时，就会导致疾病的发生。目前的研究证实，癌症、衰老和大部分退行性疾病均与自噬密切相关^[18-19]。

Beclin1是哺乳动物体内参与自噬的特异性基因^[10]，主要是通过与Ⅲ型磷脂酰肌醇3磷酸激酶 (ClassⅢ PI3K)形成复合体来调节其他自噬相关基因(autophagy associated gene，ATG)的表达，同时定位自噬前体结构来调控自噬。Kim等^[20]研究发现，肝癌与前列腺癌组织中Beclin1基因mRNA表达水平明显增高，Beclin-1与癌细胞的存活及治疗反应密切相关，并可能因其可调控细胞自噬而成为癌症治疗的靶点。Yue等^[21]研究发现，实验中将大鼠的Beclin1基因敲除，Beclin1基因的表达降低，活性降低，自噬体的形成明显缺失，因此认为Beclin1是自噬所必须的。作者前期的研究发现低氧诱导因子、Beclin1、MAP1LC3在激素性股骨头缺血性坏死中表达增加^[22-23]。Liu等^[24]研究发现，Dex可以通过增加Beclin1和LC3BII的水平并降低P62的表达引起自噬。

此次实验重复了前期实验的造模过程，通过对家兔直接大剂量注射糖皮质激素，诱导出典型的激素性股骨头缺血坏死的动物模型。在前期实验的基础上，作者重点研究了造模过程中，Beclin1 mRNA和蛋白水平的动态变化。实验结果显示，在大剂量注射糖皮质激素时，兔股骨头组织空缺骨陷窝率在实验前2周快速升高，提示股骨头组织快速坏死，测定组织中Beclin1 mRNA的转录活性明显增强，组织内Beclin1蛋白水平也明显升高，提示在激素性股骨头坏死的早期，股骨头组织内自噬活跃。而在第3，4周，组织空缺骨陷窝率缓慢升高，股骨头组织中Beclin1 mRNA的表达量较前明显下降，Beclin1蛋白水平与对照组没有明显区别，可能是由于此时股骨头组织细胞已大量坏死。

Li等^[25]通过实验发现，在地塞米松诱导的体外成骨细胞损伤中，自噬被过度激活，而抑制自噬可以减弱地塞米松诱导的细胞损伤。Du等^[26]认为血管再生在心肌缺血及周围性血管疾病中起着重要作用，而细胞自噬又与血管再生存在关联性，研究发现，应用3-MA对细胞自噬进行抑制的同时，血管再生亦受到抑制，从而通过调节细胞自噬可以治疗心血管疾病。杨楷桢等^[27]的研究中指出，注射3-MA等自噬抑制剂，实现了对自噬及凋亡的调控，从而干预了肿瘤细胞的发生及发展。基于以上研究，此次实验观测到，3-MA组的组织坏死程度较股骨头坏死组偏低，且坏死速度相对缓慢；同样3-MA组的组织中Beclin1 mRNA的表达峰值较股骨头坏死组降低且峰值延迟，Beclin1蛋白水平在实验全程与对照组无明显差异，提示3-MA可以明显抑制组织中Beclin1的表达，抑制了组织内自噬水平，从而延缓了股骨头组织坏死速度及程度。因此作者认为，自噬参与了激素性股骨头坏死的过程，加速了坏死速度。通过3-MA治疗延缓了股骨头坏死速度及程度，从而为治疗股骨头坏死争取了时间，也为股骨头坏死的治疗提供一个新的思路。

综上所述，此次研究在前期团队研究的基础上检测到激素性股骨头缺血坏死模型中Beclin1的表达，证实了自噬在激素性股骨头缺血坏死发病过程中发挥了一定作用。通过3-MA对Beclin1调控，进而调控自噬的发生，最终一定程度上降低了激素性股骨头缺血坏死的发生及发展，早期尤为明显。为进一步研究激素性股骨头缺血坏死病理学机制奠定基础，从而为激素性股骨头缺血坏死的防治提供了一种新的思路或方法。但此次实验仅是体内实验研究，不能排除本体以及其他因素的影响，下一步的体外实验(细胞培养)将成为研究的重点。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

3-甲基腺嘌呤调控自噬基因Beclin1可降低模型兔激素性股骨头缺血坏死的发生与发展

3-Methyladenine regulating autophagy gene Beclin1 can alleviate the occurrence and development of steroid-induced avascular necrosis of the femoral head

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