独活寄生汤干预食蟹猴自发性膝骨关节炎模型炎症的作用

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.0828

中国组织工程研究 ›› 2018, Vol. 22 ›› Issue (12): 1866-1871.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.0828

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独活寄生汤干预食蟹猴自发性膝骨关节炎模型炎症的作用

陈巧玉1，周鑫2，扶世杰2

1西南医科大学，四川省泸州市 646000；2西南医科大学附属中医院，四川省泸州市 646000

收稿日期:2017-12-28 出版日期:2018-04-28 发布日期:2018-04-28
通讯作者: 扶世杰，硕士，主任医师，西南医科大学附属中医院，四川省泸州市 646000
作者简介:陈巧玉，女，1979年生，四川省泸县人，汉族，2016西南医科大学毕业，硕士，讲师，主要从事骨关节炎等老年病学的研究。
基金资助:
四川省科技支撑计划项目(2014SZ0185)；泸州市科技计划项目课题(2013LZLY-K59)；泸州医学院-泸州医学院附属中医院联合专项项目(LYYK201312-10)

Effect of Duhuojisheng Decoction on primary knee osteoarthritis in macaca fascicularis

Chen Qiao-yu1, Zhou Xin2, Fu Shi-jie2

1Southwest Medical University, Luzhou 646000, Sichuan Province, China; 2Affiliated Hospital of TCM, Southwest Medical University, Luzhou 646000, Sichuan Province, China

Received:2017-12-28 Online:2018-04-28 Published:2018-04-28
Contact: Fu Shi-jie, Master, Chief physician, Affiliated Hospital of TCM, Southwest Medical University, Luzhou 646000, Sichuan Province, China
About author:Chen Qiao-yu, Master, Lecturer, Southwest Medical University, Luzhou 646000, Sichuan Province, China
Supported by:
the Science and Technology Support Program Project of Sichuan Province, No. 2014SZ0185; the Science and Technology Program of Luzhou, No. 2013LZLY-K59; the Joint Project of Luzhou Medical University & Affiliated Traditional Chinese Medicine Hospital of Luzhou Medical University, No. LYYK201312-10

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：
食蟹猴：属灵长类动物，与人类基因型和行走方式十分类似。研究发现，食蟹猴存在较高的自发性骨关节炎的发病率，食蟹猴自发性骨关节炎模型的流行病学和关节病理学改变与人相似；其关节的大小适中，不但可以满足对于生物化学指标的采集研究，也能够满足放射学和组织学方面的研究。
独活寄生汤：出自《备急千金要方》，其功能主治为肝肾两亏，气血不足，风寒湿邪外侵，腰膝冷痛，酸重无力，屈伸不利，或麻木偏枯，冷痹日久不愈。现用于慢性关节炎，坐骨神经痛等属肝肾不足，气血两亏者。陈无择《三因方》说：如加附子，则其效益佳。

摘要
背景：Meta分析显示：独活寄生汤可改善膝骨关节炎患者的临床症状，缓解患者的疼痛，但具体的作用机制与途径还不十分清楚。
目的：进一步验证独活寄生汤药物治疗食蟹猴自发性膝骨关节炎模型疗效。
方法：自然条件下，从12只食蟹猴选取清洁级青年型(年龄3-5岁)6只食蟹猴为正常组，老年型(年龄≥20岁)食蟹猴建立自发性膝骨关节炎模型6只为模型组；再将老年型食蟹猴随机分为模型对照组和干预组，干预组采用独活寄生汤进行干预，对比两组间全血白细胞计数、C-反应蛋白、血沉，以及关节液性状和肿瘤坏死因子α的表达变化。
结果与结论：①老年型食蟹猴自发性膝骨关节炎模型会出现典型与人类相似的骨关节炎相关指标的改变；②独活寄生汤干预可下调肿瘤坏死因子α的表达，降低全血白细胞水平、C-反应蛋白，干预前后差异有统计学意义；③结果说明，老年型食蟹猴自发性膝骨关节炎模型是一个能有效模拟人类自发性膝骨关节炎发生发展的动物模型，独活寄生汤干预可能通过抑制肿瘤坏死因子α的表达，降低关节软骨的炎症因子水平，从而缓解膝骨关节炎病程，产生治疗作用；全血白细胞水平、C-反应蛋白可作为疗效判断的重要参考指标。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程
ORCID: 0000-0001-8998-1391(陈巧玉)

关键词: 独活寄生汤, 食蟹猴, 自发性膝骨关节炎模型, 肿瘤坏死因子α, C-反应蛋白, 组织构建

Abstract:

BACKGROUND: Meta-analysis results have shown that Duhuojisheng Decoction can improve the symptoms and relieve the pain of patients with knee osteoarthritis, but the mechanism and pathway are not very clear.
OBJECTIVE: To further verify the curative effect of Duhuojisheng Decoction for primary knee osteoarthritis in macaca fascicularis.
METHODS: Under natural conditions, 6 clean young macaca fascicularis (aged 3-5 years, normal group) and 6 elderly macaca fascicularis (aged more than 20 years, model group) were selected from 24 macaca fascicularis. The models of primary knee osteoarthritis were established in the model group, then aged animals were randomly divided into control and intervention (given the treatment of Duhuojisheng Decoction) groups. The number of whole blood leukocytes, C-reactive protein, erythrocyte sedimentation rate, properties of the joint fluid and expression level of tumor necrosis factor-α were compared between the control and intervention groups.
RESULTS AND CONCLUSION: The aged macaca fascicularis was characterized by a typical osteoarthritis similar to human. Treatment with Duhuojisheng Decoction significantly down-regulated the expression level of tumor necrosis factor-α and significantly reduced the levels of whole blood leukocytes, and C-reactive protein. Our results suggest that the aged macaca fascicularis model of primary knee osteoarthritis is an effective animal model to simulate the occurrence and development of human primary knee osteoarthritis. Duhuojisheng decoction alleviates the progression of primary knee osteoarthritis probably by inhibiting the expression level of tumor necrosis factor-α and decreasing the levels of inflammatory factors in the articular cartilage. Additionally, the levels of whole blood leukocytes and C-reactive protein are important parameters for the prediction of curative effects.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

Key words: Heracleum, Drugs,Chinese Herbal, Osteoarthritis, Knee, Tumor Necrosis Factor-alpha, C-Reactive Protein, Tissue Engineering

中图分类号:

R318

陈巧玉，周鑫，扶世杰. 独活寄生汤干预食蟹猴自发性膝骨关节炎模型炎症的作用[J]. 中国组织工程研究, 2018, 22(12): 1866-1871.

Chen Qiao-yu1, Zhou Xin2, Fu Shi-jie2. Effect of Duhuojisheng Decoction on primary knee osteoarthritis in macaca fascicularis[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2018, 22(12): 1866-1871.

图/表（结果） 1

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引言

材料方法

1.1 设计分组对照观察。

1.2 时间及地点实验于2016年1至11月在云南英茂生物科技有限公司完成。

1.3 材料

1.3.1 实验动物清洁级青年型(年龄3-5岁)食蟹猴和老年型食蟹猴(年龄≥20岁)各6只，体质量4-6 kg，由云南灵长类实验动物有限公司提供。对12只食蟹猴适应性喂养2周，自然光照、温度16-26 ℃；给予充足的食物和洁静水，允许其自由活动。动物实验的整个过程符合《关于善待实验动物的指导性意见》的相关规定。

1.3.2 独活寄生汤由西南医科大学附属中医医院药剂科提供，药物组成：独活20 g、桑寄生20 g、杜仲20 g、牛膝20 g、秦艽15 g、防风12 g、细辛6 g、桂心12 g、茯苓20 g、当归12 g、熟地12 g、川芎12 g、路路通15 g、海桐皮15 g、伸筋草15 g、桃仁12 g、红花12 g、丁香 15 g、甘草6 g。该计量为临床成人有效用药量，药物剂量和浓度按人与猴用药量比进行换算(Meeh Rubner公式)。

1.4 实验方法

1.4.1 实验动物分组及干预自然条件下，对12只食蟹猴(3-30岁，雌雄各半)进行一般生理指标、血液生理生化指标的检测，排除干扰实验结果的相关疾病因素后，通过影像学X射线检查，选取影像学显示正常膝关节的青年型(年龄3-5岁)食蟹猴6只为正常组；选取影像学符合膝关节自然退变的老年型食蟹猴(年龄≥20岁)6只为自发性膝骨关节炎模型组(模型组)。

12只食蟹猴适应性喂养2周；将6只老年型食蟹猴(模型组)随机分为模型对照组和独活寄生汤干预组，每组3只。模型对照组以生理盐水热敷6周；干预组以独活寄生汤热敷6周，每日早晚各1次，每次30 min，温度为45 ℃。热敷方法为将棉垫在药液内充分浸渍后拧干，以不滴水为度，置于食蟹猴膝关节处。

1.4.2 一般生理指标、血液生理生化指标测定用盐酸氯胺酮将动物麻醉后，用深圳MEC-509B多参数生理记录仪测定心电图(ECGII)、心率(HR)、呼吸率(RR)、血压(BP)、体温(TPR)。选取上述动物，禁食16 h后，后肢隐静脉采血0.5 mL，用深圳BC-2200血细胞分析仪测定白细胞总数、分类、红细胞总数、血红蛋白水平。

1.4.3 标本采集及效应指标测定将各组食蟹猴仰卧捆绑于动物手术台上，股动脉取血3 mL置于5 mL试管中，在37 ℃温箱中温浴0.5-1 h后以3 000 r/min离心15 min，然后取血清1 mL置于-20 ℃冰箱保存。后分别于干预2，4，6周，抽取模型对照组和独活寄生汤干预组食蟹猴股动脉取血3 mL采取上述方法置于-20 ℃冰箱保存；抽取各组食蟹猴右侧膝关节冲洗液(无菌蒸馏水冲洗)1 mL，大体观察其各组关节液性状，包括颜色、透明度和黏稠度，然后以3 000 r/min离心15 min，取上清液置于-20 ℃冰箱保存。待所有标本均采集完毕后，采用酶联免疫吸附法检测血清白细胞、血沉、C-反应蛋白，关节液肿瘤坏死因子α水平，具体操作严格按照试剂盒使用说明书进行。

1.5 主要观察指标 ①食蟹猴正常膝关节与自发退变膝关节的比较；②关节液性状、血沉、关节液肿瘤坏死因子α质量浓度、全血白细胞计数及全血C-反应蛋白水平。

1.6 统计学分析统计学分析采用IBM SPSS Statistics 19.0软件进行。所得数值均用x(_)±s表示，各组食蟹猴血清及关节液肿瘤坏死因子α质量浓度比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t 检验，P < 0.05为差异有显著性意义，P < 0.01为差异有非常显著性意义。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

讨论

3.1 灵长类自发性骨关节炎动物模型食蟹猴属灵长类动物，与人类基因型和行走方式十分类似。研究发现，食蟹猴存在较高的自发性骨关节炎的发病率，食蟹猴自发性骨关节炎模型的流行病学和关节病理学改变与人相似^[2-4]；其关节的大小适中，不但可以满足对于生物化学指标的采集研究，也能够满足放射学和组织学方面的研究。随着年龄老化，会出现典型的骨关节炎改变^[5]；与本实验中老年型食蟹猴自发性骨关节炎模型出现的结果相符。此外，此类动物有着较长的生命跨度，是人类慢性疾病的最佳实验材料之一，也很容易于找到与实验组年龄相匹配非骨关节炎的对照，更有利于进行平行对照实验研究^[6]。

综合以上观点，本实验选用食蟹猴自发性膝骨关节炎模型不仅能够避免由于人工诱导的骨关节炎，如手术、注射等带来的诸多干扰膝骨关节炎研究的不利因素；能够更有效的模拟人类膝骨关节炎发生发展的过程，在关节软骨生化改变、骨关节炎发病机制、尤其在疗效比较等方面的优势明显。为独活寄生汤对膝骨关节炎防治作用机制的研究及以后的临床应用提供了保障，有利于基础研究向临床研究的转化。关于食蟹猴自发性膝骨关节炎模型的研究，在国内还尚未有研究报道。

3.2 影响食蟹猴自发性膝骨关节炎模型疾病进程、结构和行为表现的变量分析自发性骨关节炎动物模型的研究受众多可变因素，刺激和环境条件都能够影响动物实验的结

果。比如所使用动物的种系、年龄、性别、饮食、居住环

境、昼夜节律、干预时间、应力水平等。实验同组动物大小不同，其关节解剖、关节组织代谢、随机发育变异(SDV)等都存在个体的差异；导致其关节软骨厚度、软骨细胞密度，自发性膝骨关节炎中关节损伤的初始量的变化和差异。这些参数的变化和不同都能够导致动物模型建立、干预实验乃至结果的差异。

3.2.1 年龄骨关节炎动物模型最终实验结果受到实验动物间的年龄差异的高度影响。McNulty等^[7]的一项研究表明：只有4周年龄差异的DMM模型中，老龄较长的老鼠获得较高的骨关节炎评分。在面对组织损伤时，年轻的动物比年老的表现出更强的组织修复能力^[8]。对于受损软骨的愈合能力来说也是一样的^[9-10]。同组不同年龄的骨关节炎实验动物，在关节软骨的组成和代谢、老化关节软骨的细胞外基质合成和结构、晚期糖基化终产物的积累、细胞构成、细胞衰老、生长因子活性和表观遗传学等等，其受年龄影响都在发生变化。在本实验同组的老年型食蟹猴自发性膝骨关节炎模型中，虽然排除了人工诱导方法(注射、创伤、转基因修饰)等引起的干扰膝骨关节炎研究的不利因素，但因其年龄和个体随机发育变异的差异，导致的不同实验动物个体间其关节软骨损伤的初始量、关节软骨的组成和代谢等有所差异，也是不可避免的。

3.2.2 性别近年来，众多的研究显示，选用骨关节炎动物模型的性别能够影响骨关节炎发展。在小鼠自发性骨关节炎模型中，其雄性患病率高于雌性^[11-13]；在创伤性骨关节炎模型中，雄性也表现出更高的发病率^[14]。Ma等^[14]关于性激素在小鼠骨关节炎模型中作用的实验研究中发现：雄性小鼠的骨关节炎严重程度明显高于雌性；或者去除睾丸的雄性小鼠的骨关节炎严重程度低于正常雄性小鼠模型。此外，有研究已经测得中老年食蟹猴(11-16岁)一般生理指标(体质量、腰围、体长)表现出极显著的性别差异。结合李冰^[15]的研究结果，可以得出：随着年龄的增长，食蟹猴雌雄个体间体质量的差异性越来越显著。可见，性激素是造成肌肉骨骼特征差异的重要基础因素。在食蟹猴自发性骨关节炎模型中，其他条件因素相同的情况下，雄性发生自发性骨关节炎的概率高于雌性，且较雌性更为严重。但本实验研究结果中，食蟹猴自发性膝骨关节炎组的雄性并未表现出更为严重，可能由于样本数量过小，还需要进一步补充研究数据。

3.2.3 体质量和饮食肥胖不仅是人类骨关节炎的发生发展中的危险因素，在动物模型中也同样是。现有研究已发现，实验动物的体质量影响骨关节炎的发生发展。一项在雄性豚鼠的比较研究表明：体质量减少能延缓骨关节炎的进展^[16]。动物的体质量虽然与自身的遗传相关，但与其生活条件(居住环境、身体活动、饮食等)是相关的。高脂肪的饮食能够使大鼠体质量增加，在生物力学、神经行为、炎症的影响以及膝骨关节炎的严重程度也都会随之增加^[17]。体质量的增加不仅能够从结构上影响骨性关节炎，还能改变骨性关节炎的症状，如：疼痛的相关行为表现，并增加关节损害的程度。但也有相反的研究观察显示：终身限制热量体质量的小鼠，并不会减少骨关节炎的严重程度^[18]。除开与肥胖体质量相关的高脂肪饮食外，与体质量无关的高胆固醇水平的饮食也能导致更为严重的骨关节炎^[19]。体质量和饮食影响着骨关节炎的发生和发展。也为临床治疗骨关节炎提供了新的思路，如降胆固醇药物的应用。此外，饮食还可通过影响肠道微生物群的组成从而影响关节组织的新陈代谢，还可调节药物的药代动力学。在动物模型的药物干预实验中，在不同的实验室、使用不同的饮食，都将可能会导致不同的结果。

3.2.4 心理、行为据最新文献资料显示，与社会应激相关的成年雌性食蟹猴的抑郁与人类抑郁症在生理学、神经生物学、行为特征等方面十分相似，包括减轻体质量，下丘脑-垂体-肾上腺轴的摄动，自主神经功能紊乱，患心血管疾病风险增加，海马体积缩小，羟色胺的功能改变；此外，抑郁的雌性食蟹猴较低的卵巢类固醇浓度也可能是关键因素。而研究显示：骨关节炎患者可表现出不同程度的抑郁相关。因此，抑郁也可影响食蟹猴膝骨关节炎模型疾病进程、结构和行为表现的因素之一。

3.3 独活寄生汤干预对老年食蟹猴自发性膝骨关节炎模型炎症调节的作用

3.3.1 关节液性状的改变参照《兽医临床病理学》(夏兆飞^[20]，2014)：一般情况下，健康动物的关节液呈无色至淡黄色，澄清透明，含有黏蛋白，故较为黏稠。临床上一般通过主观印象判断。当出现炎症时，由于细胞数和纤维蛋白原含量增加，则出现不同程度的混浊，主观上也可表现为关节液颜色变深；而炎症时透明质酸酶下降导致黏蛋白降解，或因关节液量增多，黏蛋白被稀释可导致黏稠度降低。本实验结果提示：独活寄生汤干预可能减轻因炎症引起的关节液细胞数量增多而导致的混浊，但对于与透明质酸质量相关的关节液黏稠度改变不明显。

3.3.2 关节液中肿瘤坏死因α水平的改变研究表明：在膝骨关节炎患者关节滑液中肿瘤坏死因α的水平增加，参与了关节局部炎症反应；不仅在骨关节炎患者，正常软骨细胞采用肿瘤坏死因α刺激，其基质金属蛋白酶1、3的mRNA和基质金属蛋白酶组织抑制物(TIMP-1)的表达明显上调^[21]。肿瘤坏死因α可通过多途径参与骨关节炎，如经典的细胞凋亡途径、细胞基质金属蛋白酶介导的软骨细胞外基质降解，对Ⅱ/Ⅰ型胶原蛋白的诱导分化导致的软骨基质降解。可见，肿瘤坏死因α在骨关节炎软骨退变中扮演着重要角色。

那么，药物治疗或可通过抑制肿瘤坏死因α等炎症相关因子的表达来缓解膝骨关节炎。多年的临床研究验证了这一有效途径，在一定程度上延缓了病程、改善骨关节炎患者的症状。但肿瘤坏死因α是否还通过其他途径参与骨关节炎与近年来慢性炎症反应研究热点之一的内质网应激(ER stress)调控又是否存在关联？Guo等^[22]的研究已发现了内质网应激相关分子在骨关节炎患者的活性，特别是XBP1S片段在肿瘤坏死因α处理后表达显著增加。这种联系，可能为骨关节炎提供新的治疗途径。不止于此，最新细胞模型和动物实验发现：骨关节炎与糖酵解代谢紊乱之间存在一定关系^[23-24]，6-磷酸果糖-2-激酶/果糖-2，6-二磷酸酶3(PFKFB3)在骨关节炎软骨中调节糖酵解作用的表达变化^[25]，发现PFKFB3在骨关节炎软骨组织或是肿瘤坏死因子α刺激软骨细胞时的表达下调。骨关节炎炎症与这些内源性途径之间存在的关系，还有待进一步探明，也可能为骨关节炎提供一个潜在的预防或治疗靶点。

3.3.3 全血白细胞、血沉的改变在自发性膝骨关节炎中，患者关节液的白细胞计数常见增高，但外周血白细胞改变并不明显。可能是源于自发性膝骨关节炎的炎症绝大多数属于无菌性炎症。除外合并类风湿性关节炎或其他感染性疾病时，可见全血白细胞和血沉的异常。本实验中，独活寄生汤干预对模型组的全血白细胞和血沉影响并不明显；其改变在统计学上虽是有意义的，但从药物治疗的效果来看，随着时间的延长，并未呈现降低的趋势。这也可能与实验动物模型个体间本身的差异有关。总体说来，全血(白细胞)和血沉对于自发性骨关节炎的诊断价值是有限的，但可作为关节炎鉴别诊断和的疗效判断的指标之一。

3.3.4 全血C-反应蛋白的改变 C-反应蛋白是在感染和组织损伤时血浆浓度快速、急剧升高的主要急性炎相期蛋白。传统的观点认为C-反应蛋白为非特异性的炎症标志物。从过去的临床研究看来：C-反应蛋白常作为反映类风湿关节炎疗效的指标，其与风湿性关节炎病情及骨质破坏的发生和发展呈正相关。但在骨关节炎诊断中，C-反应蛋白的检测意义往往并不具特异性，而常被作为疗效判断的指标之一。一份关于膝骨关节炎疼痛患者C-反应蛋白变化的回顾调查结果显示：在1 156例检测C-反应蛋白的患者中，C-反应蛋白异常者占5.5%(64例)，检测血沉的834例患者中，血沉异常者占23.14%(193例)^{[²⁶^]。C-反应蛋白虽不能作为诊断骨关节炎的特异性指标，但对于炎症严重者，以及骨关节炎合并类风湿关节炎或伴随其他感染性疾病的鉴别诊断，C-反应蛋白检测具有重要参考价值。}

随着检测技术的不断发展，临床上可以用新的敏感方法检测出低浓度C-反应蛋白，称为高敏C-反应蛋白 (hs-CRP)。目前，高敏C-反应蛋白已被证实是由细胞因子尤其是白细胞介素6刺激而产生，与慢性低水平活动的细胞因子相关联，是慢性炎症引发心血管疾病的独立危险因素^[^27-28^]。一项对大样本的中老年人群(包括健康人群、骨关节炎早期患者)血浆高敏C-反应蛋白水平的检测结果显示：骨关节炎组明显高于对照组，与炎症程度正相关^[²⁹^]。说明骨关节炎患者在早期是有炎症存在的。另有对比研究发现：处于膝骨关节炎活动期表现为关节疼痛的患者，其血浆高敏C-反应蛋白水平明显高于放射学(无症状)的膝骨关节炎患者，且后者的血清高敏C-反应蛋白水平是高于正常对照组^[³⁰^]。高敏C-反应蛋白在骨关节炎早期阶段可能具有诊断意义，有望成为骨关节炎的常规检测手段。但高敏C-反应蛋白参与骨关节炎具体机制尚不清楚。国外有研究认为：高敏C-反应蛋白可能诱导了白细胞介素6的分泌，激活巨噬细胞表达细胞因子，也可能放大了其他介质的炎症前作用^[^31-33^]。但高敏C-反应蛋白是否直接参与滑膜关节的破坏，又是通过什么路径参与？也都有待于去探究。

3.3.5 独活寄生汤对膝骨关节炎的治疗作用最新的两份关于独活寄生汤治疗骨关节炎的Meta分析显示：该方剂可改善膝骨关节炎患者的临床症状，缓解患者的疼痛，其疗效优于西医治疗^[^34-35^]。但具体的作用机制与途径还不十分清楚；再者，在临床长期持续的疗效方面还有待验证；对于不同人群存在疗效差异，也还缺乏较充分的临床研究数据。因此，还需要从基础的实验研究出发。就目前的关于独活寄生汤治疗膝骨关节炎作用的实验研究看来，还存在些许试验设计(包括实验动物筛选、治疗时间、指标采集等)问题，可影响治疗作用乃至进一步的研究。本研究选用食蟹猴自发性膝骨关节炎模型，能够有效模拟人类自发性膝骨关节炎发生发展，正是为了更有效地将医学的基础研究向临床转化。实验结果显示：独活寄生汤干预对食蟹猴自发性膝骨关节炎关节液肿瘤坏死因子α有直接抑制的作用，能够降低全血白细胞以及C-反应蛋白水平，且具有统计学意义。在国内外还未见相关的研究报道。这为进一步对于独活寄生汤治疗膝骨关节炎的作用机制研究奠定了试验基础。

此外，最新研究中发现的一些与骨关节炎疾病严重程度相关的潜在生物标志物，如：血清和滑膜中抵抗素^[22]、Ihh^[^36]、Toll样受体^[37]；与软骨修复和重塑相关的干细胞或祖细胞(CSPCs)^[^38]，一些软骨基质蛋白酶，如软骨蛋白激酶B(Akt)、蛋白激酶C(PKCα)也参与了骨关节炎的进展等等^[39]，或许对研究者有所启发，提供更多的研究思路。它们之间复杂的相互作用，独活寄生汤与其是否有作用及其作用的机制如何，当然还包括许多未知的因子，以及与一些严重的相关疾病如癌症、糖尿病、心血管疾病和神经退行性疾病的发展联系，都等待进一步去探索和发现。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

独活寄生汤干预食蟹猴自发性膝骨关节炎模型炎症的作用

Effect of Duhuojisheng Decoction on primary knee osteoarthritis in macaca fascicularis

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