外周血干细胞移植治疗恶性血液病已经广泛运用于临床,能否采集到足够的外周血干细胞是移植成功的前提和关键。正常人外周血中造血干细胞为骨髓中的0.1%~1%,CD34
+细胞仅占外周血单个核细胞的0.01%~0.1%,欲获得足够量的造血干细胞,必须有良好的动员方案。目前异体外周血干细胞动员以单用粒细胞集落刺激因子为动员剂,国内外对干细胞的动员采集的研究大多集中在动员剂的安全性、剂量和用法方面,多项研究证明粒细胞集落刺激因子动员剂近期是安全有效的,远期不良反应仍需大量的研究资料跟踪判断。
关于粒细胞集落刺激因子的应用剂量,是影响外周血干细胞动员结果的主要因素之一。不同的粒细胞集落刺激因子动员剂量在一定范围,其浓度与其对干细胞动员的效果直接相关。CD34
+细胞随粒细胞集落刺激因子动员剂量的增加而增多,动员的细胞数高峰一般出现在第5,6天,所以粒细胞集落刺激因子连用5 d,第5天开始采集。目前成功移植的CD34
+细胞没有一个公认标准,多数认为CD34
+细胞大于2.0×10
9 L
-1是移植的理想值。目前欧洲血液和骨髓移植中心推荐的粒细胞集落刺激因子动员剂量为10.0~16.0 μg/(kg·d),连续运用4~6 d发现16.0 μg/(kg·d)组的CD34
+细胞量高于10.0 μg/(kg.d)组
[5-7],且伴随更多的不良反应及更高的不良费用
[8-10]。Zhu等
[11]认为粒细胞集落刺激因子的使用剂量越大,则干细胞获得率越高,但副作用越大。国内李佩等
[1]用粒细胞集落刺激因子5 μg/(kg·d)对56例正常供者进行动员4~6 d,采集CD34
+细胞数平均达(4.31±2.02)×10
6/kg。采集细胞数达到植入标准,提示小剂量粒细胞集落刺激因子动员可能为动员健康供者理想方案。梁赜隐等
[12]采取回顾性方法对431例健康供者外周血干细胞动员及采集多因素分析,发现粒细胞集落刺激因子动员剂量不如采集时间对采集物质量影响明显。
目前国内外对自体外周血造血干细胞采集的报告较多,报道中一致认为对于选择高效低毒的动员方案,掌握采集峰及把握最佳采集时机是自体外周血干细胞采集成功的关键。但由于异基因供者采集后的得率受到各种因素的影响,需要经过几次采集才能获得患者所需的移植剂量,这样既增加了供者穿刺所受的痛苦,又增加了患者的移植费用。所以要想减少分离次数,提高外周血干细胞的得率,把握最佳的采集时机就显得很重要
[13-18]。经动员后外周血干细胞高浓度持续的时间很短,所以一定要准确判断达到峰值的时间。
目前不能及时检测外周血造血干细胞峰值及采集量,国内外常用的选择采集时间的参数为:①在外周血造血干细胞采集中,CD34
+细胞的检测已经作为外周血造血干/祖细胞最佳采集时机的判断和采集是预测的主要方法。流式细胞仪价格昂贵操作复杂,在普通医院难以开展
[19-23]。②李志祥等
[24]利用集落生成法来预测采集时间,但方法复杂,结果判定有较大的主观性,费时较长,不能快速判断最佳采集时机。③白细胞计数与CD34
+细胞呈显著相关,所以以白细胞可以作为确定采集干细胞时机的指标之一,但单采的时机尚有争议
[25]。④利用Sysmex血细胞分析仪间接检测祖细胞,对判断最佳采集时机提供准确的信息。但它准确性与流式细胞仪相比有一定差距,不能完全取代流式细胞仪
[26-27]。无论使用粒细胞集落刺激因子后的第4或第5天进行采集,4 h采集物的单个核细胞浓度均较2 h高,故其采集的最佳时间是采集日皮下注射动员剂后的4 h开始采集。实验首次将采集时间的探讨深入到采集日用动员剂后2 h及4 h,而以前国内外的研究只停留在天数。结果显示供者采集时循环血量是其自身循环血量的1.8~2.2倍时,已能一次采集足够量的细胞数(通过高浓度达到),而既往国内外采集时循环血量为2.5~3.0倍。实验通过减少动员剂剂量及采集时循环血量,提高采集干细胞浓度,从而保障采集到足量的造血干细胞的同时,最大限度减少供者的不良反应及费用,而且供者安全性显著提高。
实验既节约了粒细胞集落刺激因子的用量,又在采集时总循环量少且细胞浓度高,具有较合理的价值-效应作用,且粒细胞集落刺激因子剂量较小对供者不良反应更小。