普鲁士蓝纳米颗粒促进糖尿病皮肤创面愈合

doi:10.12307/2024.249

中国组织工程研究 ›› 2024, Vol. 28 ›› Issue (10): 1526-1532.doi: 10.12307/2024.249

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普鲁士蓝纳米颗粒促进糖尿病皮肤创面愈合

贝颖1，李文靖2，李美运1，苏梦1，张津1，黄玉1，朱彦兆1，李嘉丽1，武艳1

1牡丹江医学院生命科学学院，黑龙江省牡丹江市 157000；2苏州大学材料与化学化工学部，江苏省苏州市 215123

收稿日期:2023-01-30 接受日期:2023-03-06 出版日期:2024-04-08 发布日期:2023-08-18
通讯作者: 武艳，副教授，牡丹江医学院生命科学学院生物材料教研室，黑龙江省牡丹江市 157000
作者简介:贝颖，女，1996年生，海南省海口市人，汉族，硕士，主要从事组织损伤与修复研究。
基金资助:
黑龙江省自然科学基金联合引导项目(LH2020H076)，项目负责人：武艳；牡丹江市指导性科技计划项目(HT2022JG125)，项目负责人：武艳

Prussian blue nanoparticles promote wound healing of diabetic skin

Bei Ying1, Li Wenjing2, Li Meiyun1, Su Meng1, Zhang Jin1, Huang Yu1, Zhu Yanzhao1, Li Jiali1, Wu Yan1

1College of Life Sciences, Mudanjiang Medical University, Mudanjiang 157000, Heilongjiang Province, China; 2Department of Chemical Engineering and Materials Science, Soochow University, Suzhou 215123, Jiangsu Province, China

Received:2023-01-30 Accepted:2023-03-06 Online:2024-04-08 Published:2023-08-18
Contact: Wu Yan, Associate professor, College of Life Sciences, Mudanjiang Medical University, Mudanjiang 157000, Heilongjiang Province, China
About author:Bei Ying, Master, College of Life Sciences, Mudanjiang Medical University, Mudanjiang 157000, Heilongjiang Province, China
Supported by:
Natural Science Foundation of Heilongjiang Province, No. LH2020H076 (to WY); Mudanjiang City Guiding Science and Technology Plan Project, No. HT2022JG125 (to WY)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：

普鲁士蓝纳米颗粒：具有氧化还原活性，是一种有效的电子转运体。普鲁士蓝可以提供电子并转化为氧化形式的普鲁士黄或柏林绿；同样，普鲁士蓝也可以接受电子并还原为普鲁士白。普鲁士蓝丰富的氧化还原活性被认为是多酶模拟活性和清除活性氧能力的主要机制。
光热效应：指材料受光照射后，光子能量与晶格相互作用，振动加剧，温度升高，由于温度的变化而造成物质的电学特性。

背景：炎症、氧化应激及细菌感染是糖尿病创面难愈合的主要原因，近年来各种无机纳米材料以其抗菌活性被广泛应用于皮肤创面愈合的治疗，但抗氧化和抗炎方面的作用有限。

目的：考察普鲁士蓝纳米颗粒在抗氧化、抗炎和光热抗菌多方面的糖尿病创伤修复的效果。
方法：制备普鲁士蓝纳米颗粒并进行表征。①体外实验：采用MTT法检测不同浓度普鲁士蓝纳米颗粒的生物相容性；在过氧化氢条件下，检测普鲁士蓝纳米颗粒的细胞保护作用及活性氧荧光表达；检测普鲁士蓝纳米颗粒分解过氧化氢和超氧阴离子自由基的能力；考察普鲁士蓝纳米颗粒抑制脂多糖诱导巨噬细胞炎症的作用；采用平板菌落计数法检测普鲁士蓝纳米颗粒的光热抗菌能力。②体内实验：腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病ICR小鼠模型，使用打孔器在背部建立直径6 mm全厚皮肤创面，分对照组(未给予治疗)、普鲁士蓝组及普鲁士蓝光照组干预，观察创面愈合与组织形态学变化。

结果与结论：①体外实验：普鲁士蓝纳米颗粒在25-200 μg/mL质量浓度下对细胞无毒性；普鲁士蓝纳米颗粒具有极强的抗氧化能力，能够抑制氧化应激条件下过度活性氧的产生及对细胞的杀伤，对过氧化氢有降解活性且具有很强的清除超氧阴离子自由基的能力；普鲁士蓝纳米颗粒还显示出显著的抗炎活性，并且在光照后显示出极强的抗菌能力。②体内实验：造模14 d后，普鲁士蓝组、普鲁士蓝光照组创面明显缩小，其中普鲁士蓝光照组创面愈合速度最快。苏木精-伊红和Masson染色显示，普鲁士蓝组、普鲁士蓝光照组创面可见大量的肉芽组织形成及胶原沉积，其中以普鲁士蓝光照组最多；免疫荧光染色显示，与对照组比较，普鲁士蓝组和普鲁士蓝光照组α-SMA和CD31表达明显增多(P < 0.05)，F4/80表达明显减少(P < 0.05)，其中以普鲁士蓝光照组改善更明显。③结果表明，普鲁士蓝纳米颗粒通过发挥抗炎、抗氧化及抗菌作用促进糖尿病小鼠模型皮肤创面的愈合。

https://orcid.org/0000-0002-8058-2105(贝颖)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料；口腔生物材料；纳米材料；缓释材料；材料相容性；组织工程

关键词: 普鲁士蓝纳米颗粒, 光热治疗, 糖尿病小鼠模型, 活性氧清除, 巨噬细胞极化, 创面愈合

Abstract: BACKGROUND: Inflammation, oxidative stress and bacterial infection are the main causes of delayed wound healing in diabetes. In recent years, various inorganic nanomaterials have been widely used in the treatment of skin wound healing due to their antibacterial activities, but their effects on anti-oxidation and anti-inflammation are limited.
OBJECTIVE: To investigate the effect of Prussian blue nanoparticles on the wound repair of diabetes in terms of antioxidant, anti-inflammatory and photothermal antibacterial activities.
METHODS: Prussian blue nanoparticles were prepared and characterized. (1) In vitro: The biocompatibility of Prussian blue nanoparticles with different concentrations was detected by MTT assay. The cytoprotective effect of Prussian blue nanoparticles and the intracellular reactive oxidative species level were examined under the condition of hydrogen peroxide. The ability of Prussian blue nanoparticles to decompose hydrogen peroxide and superoxide anion radicals was tested; the effect of Prussian blue nanoparticles on lipopolysaccharide-induced macrophage inflammation was investigated. The photothermal antibacterial activity of Prussian blue nanoparticles was detected by the plate colony counting method. (2) In vivo: ICR mice were intraperitoneally injected with streptozotocin to establish a diabetes mouse model. After the model was successfully established, a 6 mm wound was created on the back with a hole punch. There were the control group (no treatment), the Prussian blue group and the Prussian blue with light group. The wound healing and histomorphological changes were observed.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) In vitro: Prussian blue nanoparticles in 25-200 μg/mL were non-toxic to cells. Prussian blue nanoparticles had the extremely strong antioxidant capacity and mitigated the intracellular reactive oxidative species at a high oxidative stress environment, resulting in a pronounced cytoprotective effect. The Prussian blue nanoparticles not only exhibited hydrogen peroxide degradation activity but also showed strong superoxide scavenging ability. Prussian blue nanoparticles also displayed significant anti-inflammatory activity and extremely strong antibacterial ability after light irradiation. (2) In vivo: After 14 days, the wound sizes of the Prussian blue group and Prussian blue with light group were significantly reduced, and the healing speed of Prussian blue with light group was the fastest. Hematoxylin-eosin and Masson staining showed a lot of granulation tissue formation and collagen deposition in the Prussian blue group and the Prussian blue with light group, of which the Prussian blue with light group was the most. Immunofluorescence staining displayed that, compared with the control group, the expressions of α-SMA and CD31 were increased significantly in Prussian blue group and Prussian blue with light group (P < 0.05), but F4/80 expression was decreased significantly in Prussian blue group and Prussian blue with light group (P < 0.05), indicating more obvious improvement in the Prussian blue with light group. (3) These results showed that Prussian blue nanoparticles could promote the skin wound healing of the diabetes mouse model by exerting anti-inflammatory, antioxidant and antibacterial effects.

Key words: Prussian blue nanoparticle, photothermal treatment, diabetic mouse model, reactive oxygen species clearance, macrophage polarization, wound healing

中图分类号:

贝颖, 李文靖, 李美运, 苏梦, 张津, 黄玉, 朱彦兆, 李嘉丽, 武艳. 普鲁士蓝纳米颗粒促进糖尿病皮肤创面愈合[J]. 中国组织工程研究, 2024, 28(10): 1526-1532.

Bei Ying, Li Wenjing, Li Meiyun, Su Meng, Zhang Jin, Huang Yu, Zhu Yanzhao, Li Jiali, Wu Yan. Prussian blue nanoparticles promote wound healing of diabetic skin[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2024, 28(10): 1526-1532.

图/表（结果） 10

2.1 普鲁士蓝纳米颗粒的合成与表征通过三氯化铁和亚铁氰化钾的常规反应合成了普鲁士蓝纳米颗粒，蓝色的颗粒出现表明普鲁士蓝纳米颗粒的形成。纳米颗粒的吸收光谱显示了典型的普鲁士蓝纳米颗粒的紫外光谱，由于二价铁和三价铁之间的价间电荷转移，在700 nm附近有一个峰值，见图1A。普鲁士蓝纳米颗粒的红外光谱在2 075 cm?1处有一个主峰，这是?C≡N?从Fe(Ⅱ)-CN-Fe(Ⅲ)键延伸出来的特征峰，见图1B。在3 443 cm?1附近的宽峰可归属于羟基(O-H)的伸缩，而1 660 cm?1处的峰来自H-O-H的弯曲，表明普鲁士蓝纳米颗粒中存在间隙水。在动态光散射分析中，普鲁士蓝纳米颗粒的平均粒径约为80 nm，多分散性指数为0.2，见图1C。普鲁士蓝纳米颗粒的Zeta电位为-12.9 mV，表面带负电荷。透射电子显微镜成像显示，普鲁士蓝纳米颗粒呈直径为20 nm左右的立方体形状，见图1D。动态光散射和透射电镜测量结果之间的差异是因为动态光散射表示水动力尺寸，而透射电镜表示纳米颗粒的干燥尺寸。

2.2 体外实验结果
2.2.1 普鲁士蓝纳米颗粒清除活性氧活性的结果通过二甲酚橙法分析了普鲁士蓝纳米颗粒对过氧化氢的总降解能力，结果表明：普鲁士蓝纳米颗粒对过氧化氢的降解具有时间和剂量依赖性(图2A)，过氧化氢的降解率随着普鲁士蓝纳米颗粒质量浓度的增加而显著增加，在反应体系中加入100 μg/mL的普鲁士蓝纳米颗粒，60 min内过氧化氢几乎完全被降解。
通过测定黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶反应体系产生的超氧阴离子自由基的歧化程度，定量测定了普鲁士蓝纳米颗粒对超氧化物歧化酶的模拟活性。与过氧化氢的降解类似，普鲁士蓝纳米颗粒也显示出很强的清除超氧化物的能力，并呈剂量和时间依赖关系(图2B)。25 μg/mL的普鲁士蓝纳米颗粒可在反应60 min和120 min内分别清除(25±1)%和(31±1)%的超氧阴离子自由基；当普鲁士蓝纳米颗粒质量浓度增加到100 μg/mL时，超氧化物歧化能力增强，120 min内可清除50%以上的超氧化物。这些结果表明，合成的普鲁士蓝纳米颗粒具有呈剂量和时间依赖的有效清除活性氧的能力。

2.2.2 普鲁士蓝纳米颗粒的体外细胞保护作用以NIH-3T3细胞为模型细胞，评价了普鲁士蓝纳米颗粒的生物相容性，结果显示：普鲁士蓝纳米颗粒无明显的细胞毒性，且在200 μg/mL普鲁士蓝纳米颗粒存在下细胞存活率将近100%(图3A)；此外，普鲁士蓝光照组细胞存活率和普鲁士蓝组无明显差异。
接下来，探索了普鲁士蓝纳米颗粒在氧化应激环境下对细胞的保护作用，将细胞与过氧化氢(100 μmol/L)孵育，模拟氧化应激环境，结果显示：仅用过氧化氢处理导致细胞损伤，细胞存活率仅(28±1)%，然而随着普鲁士蓝纳米颗粒质量浓度的增加，细胞存活率显著提高，均达到60%以上；其中，加入100 μg/mL的普鲁士蓝纳米颗粒时细胞存活率高达(86±3)%(图3B)。
为了验证这种细胞保护作用是由于普鲁士蓝纳米颗粒清除活性氧减少氧化应激，使用DCFH-DA作为荧光探针检测了细胞内活性氧水平，如图3C所示，过氧化氢处理导致细胞内高荧光信号，与细胞内活性氧水平增强相对应；在普鲁士蓝纳米颗粒的存在下荧光信号显著减弱，表明纳米颗粒具有有效清除活性氧的活性。

2.2.3 普鲁士蓝纳米颗粒的体外抗炎作用通过炎性基因表达分析来评估普鲁士蓝纳米颗粒的抗炎作用。在炎性环境中，巨噬细胞中促炎基因的表达可能显著增加，而抗炎基因的表达则减少。如图4所示，脂多糖刺激后巨噬细胞中促炎症细胞因子(CD86、白细胞介素1β、白细胞介素6及肿瘤坏死因子α)的表达显著增加；与脂多糖单独处理的细胞相比，脂多糖和普鲁士蓝纳米颗粒共同处理的细胞显示出明显的CD86、白细胞介素1β、白细胞介素6及肿瘤坏死因子α的表达减少；此外，在脂多糖刺激后，细胞CD206和白细胞介素10的表达减少；相比之下，在脂多糖和普鲁士蓝纳米颗粒共同处理的细胞中，CD206和白细胞介素10的表达显著增加(P < 0.05)。结果表明，普鲁士蓝纳米颗粒抑制了脂多糖刺激巨噬细胞后所引发的炎症反应。

2.2.4 普鲁士蓝纳米颗粒的杀菌作用以大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌为模型，研究了普鲁士蓝纳米颗粒的光照抗菌效果。如图5A显示，在避光条件下，所有组的平板菌落数量和细菌存活率无明显差异；而在光照条件下，普鲁士蓝光照组中细菌菌落数量明显减少。图5B，C显示，在660 nm的红光照射下，普鲁士蓝纳米颗粒处理后的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的菌落数量明显减少，细菌存活率均不到1%，表明普鲁士蓝纳米颗粒经过光照处理后有显著的抗菌效果。

2.3 体内实验结果
2.3.1 实验动物数量分析实验过程中无小鼠死亡，36只小鼠全部进入结果分析。
2.3.2 各组小鼠创面宏观愈合情况观察使用全层糖尿病创面模型检测了普鲁士蓝纳米颗粒的促创面愈合能力。
图6A，B显示了不同时间点的创面愈合情况。创面造模第7天，与对照组相比较，普鲁士蓝组和普鲁士蓝光照组小鼠创面面积显著缩小，创面愈合率分别为(46.8±2.1)%和(65.8±0.7)%，创面造模第14天，各组创面面积进一步缩小，其中普鲁士蓝光照组愈合最快，创面愈合率高达(89.8±1.0)%，见图6C、表2。结果表明，普鲁士蓝纳米颗粒明显改善了糖尿病小鼠创面修复，且光照进一步加强了这一作用。

2.3.3 各组小鼠创面组织学变化分析通过组织学分析评价不同处理组的创面愈合效果。如图7A所示，创面造模第7天，苏木精-伊红染色结果显示，普鲁士蓝组和普鲁士蓝光照组小鼠创面肉芽组织明显增厚，且创面长度开始有明显差距，其中对照组创面长度最长，为(3.38±0.10) mm；普鲁士蓝光照组的创面长度最短，为(2.01±0.10) mm(图7C)。创面造模第14天，各组小鼠创面长度进一步缩短，普鲁士蓝组和普鲁士蓝光照组创面长度分别为(1.17±0.10) mm和(0.79±0.10) mm，与对照组(2.26±0.10) mm相比创面愈合更快(图7C)。此外，普鲁士蓝光照组的组织中可见大量皮肤附属器，而其他组中均未见或见少量。
在创面愈合过程中胶原是细胞外基质的主要成分，创面部位胶原的形成对创面的最终修复至关重要。如图7B所示，Masson染色结果显示，创面造模第7天，除对照组外，其余两组创面均产生了丰富的胶原纤维，其中普鲁士蓝光照组最多。创面造模第14 天，各组相对于第7天均显示出更多的胶原沉积，尤其以普鲁士蓝光照组胶原沉积最多。此外，普鲁士蓝光照组中也清晰可见大量的皮肤附属器形成，这证实了上述苏木精-伊红染色结果。

2.3.4 各组小鼠创面新生血管表达和体内抗炎作用见图8。

通过α-SMA、CD31染色来分析创面区域血管形成情况，F4/80以分析创面区域炎症情况。然而，α-SMA 不仅在血管平滑肌细胞中表达，也在肌成纤维细胞中表达，因此仅分析了代表新生小动脉的 α-SMA 阳性圆形结构(如图8A中的白色箭头所示)，以估计创面区域内的血管形成情况。与对照组相比较，普鲁士蓝组和普鲁士蓝光照组α-SMA表达显著增加；与普鲁士蓝组相比，普鲁士蓝光照组α-SMA表达显然更多[(16±7)，(57±4)，(112±16)个/mm2](图8B)。此外，采用CD31抗体染色来检测创面区域的毛细血管，结果显示：普鲁士蓝光照组CD31的表达[(5.9±0.1)%]显著高于其他组，几乎是对照组[(0.8±0.2)%]的7倍(图8C)。
普鲁士蓝纳米颗粒可能会减弱创面处巨噬细胞的募集[28]。为了分析巨噬细胞募集的程度，检测了表达在巨噬细胞表面的F4/80糖蛋白的免疫荧光染色，这种糖蛋白通常用于识别组织巨噬细胞。如图8D所示，对照组 F4/80阳性区域的百分比[(5.3±0.5)%]显著高于其他组，普鲁士蓝组F4/80阳性率较对照组明显降低，为(1.4±0.2)%，普鲁士蓝光照组F4/80阳性率最低，为(0.5±0.1)%。
2.4 材料生物相容性由体外实验与体内实验结果可知，普鲁士蓝纳米颗粒具有良好的生物相容性。

参考文献

[1] BURGESS JL, WYANT WA, ABDO ABUJAMRA B, et al. Diabetic Wound-Healing Science. Medicina (Kaunas). 2021;57(10):1072.
[2] DUNNILL C, PATTON T, BRENNAN J, et al. Reactive oxygen species (ROS) and wound healing: the functional role of ROS and emerging ROS-modulating technologies for augmentation of the healing process. Int Wound J. 2017;14(1):89-96.
[3] DENG L, DU C, SONG P, et al. The Role of Oxidative Stress and Antioxidants in Diabetic Wound Healing. Oxid Med Cell Longev. 2021;2021:8852759.
[4] KUNKEMOELLER B, KYRIAKIDES TR. Redox Signaling in Diabetic Wound Healing Regulates Extracellular Matrix Deposition. Antioxid Redox Signal. 2017;27(12): 823-838.
[5] CHANG M, NGUYEN TT. Strategy for Treatment of Infected Diabetic Foot Ulcers. Acc Chem Res. 2021;54(5):1080-1093.
[6] PATEL S, SRIVASTAVA S, SINGH MR, et al. Mechanistic insight into diabetic wounds: Pathogenesis, molecular targets and treatment strategies to pace wound healing. Biomed Pharmacother. 2019;112:108615.
[7] OYEBODE O, HOURELD NN, ABRAHAMSE H. Photobiomodulation in diabetic wound healing: A review of red and near-infrared wavelength applications. Cell Biochem Funct. 2021;39(5):596-612.
[8] EZHILARASU H, VISHALLI D, DHEEN ST, et al. Nanoparticle-Based Therapeutic Approach for Diabetic Wound Healing. Nanomaterials (Basel). 2020;10(6):1234.
[9] WANG F, ZHANG W, LI H, et al. How Effective are Nano-Based Dressings in Diabetic Wound Healing? A Comprehensive Review of Literature. Int J Nanomedicine. 2022;17:2097-2119.
[10] BAI Q, HAN K, DONG K, et al. Potential Applications of Nanomaterials and Technology for Diabetic Wound Healing. Int J Nanomedicine. 2020;15:9717-9743.
[11] SABAREES G, VELMURUGAN V, TAMILARASI GP, et al. Recent Advances in Silver Nanoparticles Containing Nanofibers for Chronic Wound Management. Polymers (Basel). 2022;14(19):3994.
[12] MASOOD N, AHMED R, TARIQ M, et al. Silver nanoparticle impregnated chitosan-PEG hydrogel enhances wound healing in diabetes induced rabbits. Int J Pharm. 2019;559:23-36.
[13] ZHAO X, CHANG L, HU Y, et al. Preparation of Photocatalytic and Antibacterial MOF Nanozyme Used for Infected Diabetic Wound Healing. ACS Appl Mater Interfaces. 2022;14(16):18194-18208.
[14] CHEN YH, RAO ZF, LIU YJ, et al. Multifunctional Injectable Hydrogel Loaded with Cerium-Containing Bioactive Glass Nanoparticles for Diabetic Wound Healing. Biomolecules. 2021; 11(5):702.
[15] LI S, WANG X, CHEN J, et al. Calcium ion cross-linked sodium alginate hydrogels containing deferoxamine and copper nanoparticles for diabetic wound healing. Int J Biol Macromol. 2022;202:657-670.
[16] GAN J, LIU C, LI H, et al. Accelerated wound healing in diabetes by reprogramming the macrophages with particle-induced clustering of the mannose receptors. Biomaterials. 2019; 219:119340.
[17] 吴海能,耿康,王静,等.富血小板纤维蛋白联合姜黄素纳米颗粒水凝胶促糖尿病小鼠创面愈合[J].中国组织工程研究,2022,26(27):4300-4307.
[18] WANG Y, PANG X, WANG J, et al. Magnetically-targeted and near infrared fluorescence/magnetic resonance/photoacoustic imaging-guided combinational anti-tumor phototherapy based on polydopamine-capped magnetic Prussian blue nanoparticles. J Mater Chem B. 2018;6(16):2460-2473.
[19] LU L, ZHANG C, ZOU B, et al. Hollow Prussian Blue Nanospheres for Photothermal/Chemo-Synergistic Therapy. Int J Nanomedicine. 2020;15: 5165-5177.
[20] WANG S, ZENG N, ZHANG Q, et al. Nanozyme Hydrogels for Self-Augmented Sonodynamic/Photothermal Combination Therapy. Front Oncol. 2022;12:888855.
[21] XU M, GAO H, JI Q, et al. Construction multifunctional nanozyme for synergistic catalytic therapy and phototherapy based on controllable performance. J Colloid Interface Sci. 2022; 609:364-374.
[22] MAAOUI H, JIJIE R, PAN GH, et al. A 980nm driven photothermal ablation of virulent and antibiotic resistant Gram-positive and Gram-negative bacteria strains using Prussian blue nanoparticles. J Colloid Interface Sci. 2016;480:63-68.
[23] BORZENKOV M, CHIRICO G, PALLAVICINI P, et al. Nanocomposite Sprayed Films with Photo-Thermal Properties for Remote Bacteria Eradication. Nanomaterials (Basel). 2020;10(4):786.
[24] LI Y, YU P, WEN J, et al. Nanozyme‐Based Stretchable Hydrogel of Low Hysteresis with Antibacterial and Antioxidant Dual Functions for Closely Fitting and Wound Healing in Movable Parts. Adv Funct Mater. 2021;32(13):2110720.
[25] ESTELRICH J, BUSQUETS MA. Prussian Blue: A Nanozyme with Versatile Catalytic Properties. Int J Mol Sci. 2021;22(11):5993.
[26] 王青,刘学,孙亚娟,等.负载普鲁士蓝的CoOOH纳米片用于抗氧化活性检测的研究[J].现代化工,2023,43(2):234-238.
[27] WANG Y, LIANG Z, LIANG Z, et al. Advancements of Prussian blue-based nanoplatforms in biomedical fields: Progress and perspectives. J Control Release. 2022;351:752-778.
[28] SAHU A, JEON J, LEE MS, et al. Antioxidant and anti-inflammatory activities of Prussian blue nanozyme promotes full-thickness skin wound healing. Mater Sci Eng C Mater Biol Appl. 2021;119:111596.
[29] GANTWERKER EA, HOM DB. Skin: histology and physiology of wound healing. Clin Plast Surg. 2012;39(1):85-97.
[30] VELNAR T, BAILEY T, SMRKOLJ V. The wound healing process: an overview of the cellular and molecular mechanisms. J Int Med Res. 2009;37(5):1528-1542.
[31] MARTIN P, NUNAN R. Cellular and molecular mechanisms of repair in acute and chronic wound healing. Br J Dermatol. 2015;173(2):370-378.
[32] BURANASIN P, MIZUTANI K, IWASAKI K, et al. High glucose-induced oxidative stress impairs proliferation and migration of human gingival fibroblasts. PLoS One. 2018;13(8):e0201855.
[33] GONG F, ZHANG Y, CHENG S, et al. Inhibition of TGFbeta1/Smad pathway by NF-kappaB induces inflammation leading to poor wound healing in high glucose. Cells Dev. 2022;172:203814.
[34] QIN W, WU Y, LIU J, et al. A Comprehensive Review of the Application of Nanoparticles in Diabetic Wound Healing: Therapeutic Potential and Future Perspectives. Int J Nanomedicine. 2022;17:6007-6029.
[35] SAYED FA, EISSA NG, SHEN Y, et al. Morphologic design of nanostructures for enhanced antimicrobial activity. J Nanobiotechnology. 2022;20(1):536.
[36] SAHOO BM, BANIK BK, BORAH P, et al. Reactive Oxygen Species (ROS): Key Components in Cancer Therapies. Anticancer Agents Med Chem. 2022; 22(2):215-222.
[37] NIKITINA VN, ZAVOLSKOVA MD, KARYAKIN AA. Protein-sized nanozymes <<artificial peroxidase>> based on template catalytic synthesis of Prussian Blue. Bioelectrochemistry. 2023;149:108275.
[38] LI Z, GUO X, QIN J, et al. Size-effect on the intracellular antioxidative activity of Prussian blue nanoparticles investigated by atomic force microscopy. Anal Chim Acta. 2022;1227:340321.
[39] AITCHESON SM, FRENTIU FD, HURN SE, et al. Skin Wound Healing: Normal Macrophage Function and Macrophage Dysfunction in Diabetic Wounds. Molecules. 2021;26(16):4917.
[40] RAZIYEVA K, KIM Y, ZHARKINBEKOV Z, et al. Immunology of Acute and Chronic Wound Healing. Biomolecules. 2021;11(5):700.
[41] LOUISELLE AE, NIEMIEC SM, ZGHEIB C, et al. Macrophage polarization and diabetic wound healing. Transl Res. 2021;236:109-116.
[42] LI D, LIU M, LI W, et al. Synthesis of Prussian Blue Nanoparticles and Their Antibacterial, Antiinflammation and Antitumor Applications. Pharmaceuticals (Basel). 2022;15(7):769.
[43] SAHU A, JEON J, LEE MS, et al. Nanozyme Impregnated Mesenchymal Stem Cells for Hepatic Ischemia-Reperfusion Injury Alleviation. ACS Appl Mater Interfaces. 2021;13(22):25649-25662.
[44] TONG C, ZHONG X, YANG Y, et al. PB@PDA@Ag nanosystem for synergistically eradicating MRSA and accelerating diabetic wound healing assisted with laser irradiation. Biomaterials. 2020;243:119936.
[45] TAN L, LI J, LIU X, et al. Rapid Biofilm Eradication on Bone Implants Using Red Phosphorus and Near-Infrared Light. Adv Mater. 2018;30(31):e1801808.
[46] SUN J, SONG L, FAN Y, et al. Synergistic Photodynamic and Photothermal Antibacterial Nanocomposite Membrane Triggered by Single NIR Light Source. ACS Appl Mater Interfaces. 2019;11(30):26581-26589.
[47] WANG X, SUN X, BU T, et al. Construction of a photothermal hydrogel platform with two-dimensional PEG@zirconium-ferrocene MOF nanozymes for rapid tissue repair of bacteria-infected wounds. Acta Biomater. 2021; 135:342-355.

引言

糖尿病是一种临床常见的慢性代谢性疾病，长期的高血糖状态容易导致各种严重的并发症，其中之一便是难愈合性创面，其影响了大约25%的糖尿病患者，可能导致下肢截肢，严重影响患者的健康与生活质量[1]。糖尿病创面难愈合的机制尚不清楚，目前认为活性氧过量产生导致的氧化应激是阻碍创面愈合的关键因素之一[2]。在糖尿病创面中，因为内源性抗氧化剂水平降低使得创面持续产生活性氧，破坏抗氧化系统，继而损害成纤维细胞等皮肤细胞的功能、影响细胞增殖、减少血管生成和胶原形成、促进促炎细胞因子分泌[2-4]。除此之外，糖尿病创面通常还会伴随细菌感染，最终表现为创面难以愈合[5]。临床上对于糖尿病创面的治疗主要是控制血糖、清除创面部位受损或坏死组织、使用抗生素遏制感染等[6]。对于顽固性创面，则实施以清除创面上的黏液和感染为目的的负压创面治疗、局部应用生长因子、高压氧治疗以及皮肤移植[7]，然而这些治疗方式均未取得很好的疗效，因此，利用外源性材料有效抗氧化、抑制炎症以及预防感染是促进糖尿病创面愈合和恢复组织功能的必要手段。
长期以来，纳米材料由于其粒径小、用途广及易于改性等优点受到人们关注[8]，国内外对于各种无机纳米颗粒促糖尿病创面愈合的研究更是层出不穷[9-10]。无机纳米颗粒分为金属和非金属两类，金属纳米颗粒主要以抗菌活性闻名，其中银纳米颗粒的应用最为广泛[11-12]。类似的，如金、铈或铜等纳米颗粒也能通过抗菌性能有效促进糖尿病创面的愈合[13-15]。然而，高糖环境对创面的负面影响远不止于此，仅仅是预防感染对于糖尿病创面的修复作用是有限的。而非金属纳米颗粒如二氧化硅、姜黄素纳米颗粒等，虽然能够通过发挥抗炎、抗氧化作用治疗糖尿病创面[16-17]，但缺少抗菌的能力，可能会导致反复的细菌感染，这也限制了其在临床上的应用。因此，迫切需要一种纳米颗粒能够在发挥抗菌作用的同时改善糖尿病创面紊乱的微环境。
普鲁士蓝是一种基于三价铁、亚铁和氰化物的配位化合物，呈深蓝色，化学式为FeⅢ4[FeⅡ(CN)6]3·xH2O。普鲁士蓝纳米颗粒在650-900 nm的波长下显示出高吸光度，可由二价铁和三价铁之间的电荷转移实现由光到热的转换[18-19]。虽然目前大多数研究将光热疗法应用于肿瘤治疗[20-21]，但也有研究人员发现了光热效应在抗菌方面的潜力[22-24]。除此之外，普鲁士蓝纳米颗粒还具有优异的抗炎和抗氧化特性[25-26]，能够治疗肝损伤、炎症性肠病、骨关节炎等炎症相关疾病[27]。目前对于普鲁士蓝纳米颗粒是否可以通过改善糖尿病创面微环境发挥治疗作用尚不清楚。因此，此次实验首先考察了普鲁士蓝纳米颗粒的抗氧化及抗炎作用，接着引入光照验证其光热抗菌作用，最后评估普鲁士蓝纳米颗粒光热促糖尿病小鼠创面修复效果，进一步探讨其改善创面微环境的机制，为普鲁士蓝纳米颗粒光热治疗糖尿病创面的研究提供理论依据。中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料；口腔生物材料；纳米材料；缓释材料；材料相容性；组织工程

材料方法

1.1 设计材料制备、体外细胞实验与体内动物实验，组间比较进行方差分析(ANOVA)，然后进行Tukey检验。
1.2 时间及地点实验于2021年9月至2022年10月在牡丹江医学院科研共享平台完成。
1.3 材料
1.3.1 实验细胞 NIH-3T3成纤维细胞和RAW 264.7巨噬细胞购于上海酶研生物科技有限公司。
1.3.2 实验动物七八周龄雄性ICR小鼠36只，体质量25-28 g，SPF级，用于制备糖尿病创面模型，购于辽宁长生生物技术股份有限公司，许可证号：SCXK(黑)2019-003，饲养于牡丹江医学院比较医学中心，饲养条件：温度(22±2) ℃，相对湿度(50±10)%，12 h交替照明，自由进食进水。动物实验流程经牡丹江医学院动物伦理委员会审查批准，批准号：20220621-13。
1.3.3 药物与试剂氯化铁、聚乙烯基吡咯烷酮和亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6]均购于上海麦克林生化科技股份有限公司；过氧化氢购于上海懋康生物科技有限公司；过氧化氢测定试剂盒、活性氧荧光探针、脂多糖均购于上海碧云天生物技术有限公司；总超氧化物歧化酶试剂盒购于南京建成生物工程研究所；DMEM高糖培养基、胎牛血清购于美国Gibco公司；所有引物均购于上海生工生物工程公司；RNA提取试剂盒购于美国Omega公司；RNA反转录试剂盒购于瑞士Roche公司；异氟烷购于深圳瑞沃德公司；大肠杆菌和金黄色葡萄球菌来源于湖南丰晖生物科技有限公司；链脲佐菌素和Masson试剂盒均购于北京索莱宝科技有限公司；免疫荧光所有抗体购于江苏Affinity公司。
1.3.4 实验仪器酶标仪购于美国 Molecular Devices公司；共聚焦显微镜购于日本Olympus公司。
1.4 实验方法
1.4.1 普鲁士蓝纳米颗粒的合成与表征将氯化铁(0.16 g，1 mmol)和聚乙烯基吡咯烷酮(2.22 g，20 mmol)加入到20 mL去离子水中制备溶液A；将1 mmol亚铁氰化钾加入到20 mL去离子水中制备溶液B；将溶液A与溶液B混合，在60 ℃下大力搅拌30 min；混合液冷却到25 ℃，15 000 r/min离心60 min，收集沉淀得到普鲁士蓝纳米颗粒。使用紫外分光光度计获得普鲁士蓝纳米颗粒的紫外吸收光谱，在傅里叶变换红外光谱仪上获得普鲁士蓝纳米颗粒的傅里叶变换红外光谱，采用动态光散射法测定了普鲁士蓝纳米颗粒的粒径和多分散性指数，通过透射电镜检测了普鲁士蓝纳米颗粒的形态。
1.4.2 体外实验
普鲁士蓝纳米颗粒的过氧化氢降解活性：将过氧化氢溶液(600 μmol/L)与不同质量浓度(25，50，100 μg/mL)普鲁士蓝纳米颗粒混合，将混合液在37 ℃摇动(100 r/min)孵育。于孵育30，60，90及120 min时，按照过氧化氢测定试剂盒的说明，取混合液50 μL溶液与100 μL二甲酚橙指示剂混合，室温孵育30 min，然后用酶标仪在595 nm处测量吸光度值。根据已知纯过氧化氢浓度的标准曲线，将吸光度值换算成过氧化氢浓度，即得到剩余过氧化氢浓度。
普鲁士蓝纳米颗粒的超氧阴离子自由基清除活性：将5 mg普鲁士蓝纳米颗粒分散在1 mL三蒸水中，稀释至不同质量浓度(25，50，100 μg/mL)后加入到相应的测定孔，对照孔加入三蒸水，根据超氧化物歧化酶试剂盒说明书的方法依次加入其他试剂，用漩涡混匀器充分混匀，置37 ℃恒温箱中孵育。孵育30，60，120 min时取出，加入显色剂室温放置10 min，最后于波长550 nm处测定吸光度值，根据公式分析普鲁士蓝纳米颗粒的超氧阴离子自由基清除活性。在该方法中，黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶反应体系产生的超氧阴离子与WST-1试剂反应生成黄色的福尔马赞产物，在450 nm处的吸光度值用酶标仪进行测定。吸光度值的变化与超氧化物浓度呈正比。

超氧阴离子清除活性(%)=100%×[A(对照)-A(样品)]/A(对照)

普鲁士蓝纳米颗粒的生物相容性：将NIH-3T3成纤维细胞在含有体积分数10%胎牛血清和1%青霉素-链霉素的DMEM中培养，置于37 ℃的CO2孵箱孵育，然后将细胞接种在96孔组织培养板中，细胞密度为5×103个/孔；接种16 h后，将不同质量浓度(0，25，50，100，200 μg/mL)的普鲁士蓝纳米颗粒加入细胞中，光照组将加入不同质量浓度普鲁士蓝纳米颗粒的孔使用660 nm红光照射15 min。放入培养箱内孵育24 h后，洗涤细胞，用含MTT试剂的新鲜培养液37 ℃孵育4 h，最后用酶标仪在490 nm波长处测定甲瓒晶体在二甲基亚砜中的吸光度值。

普鲁士蓝纳米颗粒抑制细胞内活性氧的产生及细胞保护作用：用DCFH-DA作为活性氧荧光探针分析细胞内活性氧的产生。将NIH-3T3细胞铺于共聚焦小皿中，细胞密度为3×105个/孔，置于培养箱内孵育16 h。然后将其暴露在过氧化氢 (100 μmol/L)中，加或不加普鲁士蓝纳米颗粒(100 μg/mL)，作用24 h后，洗涤细胞，与10 μmol/L 探针孵育30 min；用PBS洗涤细胞，使用Hoechst染细胞核10 min；最后，用共聚焦显微镜观察细胞内的荧光信号。为了验证普鲁士蓝纳米颗粒的细胞保护作用，将细胞培养在96孔板中，然后用不同质量浓度(0，25，50，100 μg/mL)的普鲁士蓝纳米颗粒处理，添加或不添加过氧化氢 (100 μmol/L)，孵育24 h后洗涤细胞，采用MTT法测定细胞活力。
普鲁士蓝纳米颗粒的抗炎作用：将RAW-264.7巨噬细胞接种于6孔组织培养板，细胞密度为5×105个/孔。接种12 h后，用含或不含普鲁士蓝纳米颗粒(100 μg/mL)的脂多糖(1 μg/mL)刺激细胞，以未经任何处理的细胞作为对照。孵育24 h后，用PBS洗涤细胞，按照制造商的说明使RNA提取试剂盒提取总RNA。用超微量核酸蛋白测定仪测量纯化RNA的浓度和质量。然后将每个样本的总RNA反转录为cDNA。最后，进行实时定量PCR(RT-qPCR)，反应采用两步法，95 ℃预变性10 min，95 ℃15 s，60 ℃1 min，共40个循环，以β-actin作为内源性参照基因进行归一化。用2-ΔΔCt方法计算与对照组的相对基因表达。引物序列见表1。

普鲁士蓝纳米颗粒的光热杀菌作用：用大肠杆菌(革兰阴性菌)和金黄色葡萄球菌(革兰阳性菌)评估普鲁士蓝纳米颗粒在有无光照下的抗菌活性。在5 mL LB培养基中接种5 μL菌株，并在37 ℃下连续摇动孵育过夜。然后用LB培养基将菌液稀释至1×107 CFU/mL，取1 mL细菌稀释液加入5 mL 管内，加入普鲁士蓝纳米颗粒(100 μg/mL)，振荡均匀后，普鲁士蓝光照组用660 nm的红光照射15 min，普鲁士蓝组则避光放置15 min。将菌液稀释1 000倍后取40 μL，利用涂布棒将菌液均匀的涂布在琼脂培养基上，置于37 ℃的恒温培养箱内，24 h后取出观察计数。每个样品平行测试3次。
1.4.3 普鲁士蓝纳米颗粒的体内实验
糖尿病创面模型建立：取36只ICR小鼠，禁食 12 h 后，腹腔注射链脲佐菌素，第1天注射100 mg/kg，之后连续 2 d注射50 mg/kg。2周后测空腹血糖，血糖水平≥16.7 mmol/L的小鼠视为糖尿病造模成功。以异氟烷呼吸麻醉小鼠，每只小鼠背部两侧各制作1个圆形全厚皮肤创面(直径6 mm)。采用随机数字表法将36只小鼠分为对照组、普鲁士蓝组及普鲁士蓝光照组，每组12只。对照组使用注射器在伤口部位滴加0.1 mL的PBS；普鲁士蓝组使用相同方式滴加0.1 mL的普鲁士蓝纳米颗粒溶液(100 μg/mL)；普鲁士蓝光照组使用相同方式滴加等剂量的普鲁士蓝纳米颗粒溶液(100 μg/mL)，随后使用660 nm红光照射15 min。
创面宏观愈合评估：创面造模第0，7，14天，用数码相机观察和捕捉创面愈合图片。用 ImageJ软件计算创面愈合面积。创面愈合率=(第0天创面面积−某一天创面面积)/第0天创面面积。
创面组织形态学变化观察：创面造模后第 7，14 天，每组取6只小鼠，获取创面边缘组织，随机分成2组，一组固定于体积分数4%甲醛溶液中，进行石蜡切片；另一组使用OCT包埋剂固定放入液氮速冻，-80 ℃保存，进行冰冻切片。切片厚度均为5 μm，采用苏木精-伊红染色和Masson染色以及免疫荧光染色对创面边缘组织进行病理学观察。
免疫荧光染色：冰冻切片恢复至室温，在甲醇中浸泡10 min固定，以PBS漂洗后使用0.5%的Triton X-100孵育1 h，接着使用进口山羊血清封闭液封闭1 h以阻断非特异性结合，吸取封闭液后，加入一抗稀释液于4 ℃过夜(抗体以1∶100的比例用山羊血清稀释)；第2天室温平衡后用PBS漂洗，加入荧光二抗室温避光孵育2 h，之后使用DAPI复染，封固后在荧光显微镜下观察α-SMA、CD31及F4/80的表达。
1.5 主要观察指标普鲁士蓝纳米颗粒的生物相容性、抗炎、抗氧化以及抗菌作用，以及对小鼠创面愈合的作用。
1.6 统计学分析使用 GraphPad Prism 9 软件进行统计学分析及相关图片的绘制。来自3个单独实验的数据表示为x±s，采用方差分析(ANOVA)进行分析，然后进行Tukey检验，P < 0.05被认为差异有显著性意义。文章统计学方法已通过牡丹江医学院统计学专家审核。

讨论

创面愈合一般要经历凝血和止血、炎症、增殖和基质重塑几个阶段[29-30]，糖尿病与创面愈合受损之间的病理生理学关系十分复杂，高糖环境致使创面愈合过程的各个阶段均受到负面影响，表现为伤口难以愈合[31-33]。如前言所述，在以往的研究中，无机纳米颗粒通常作为抗菌剂单独使用，或仅发挥抗氧化和抗炎作用，使得这些纳米颗粒的治疗效果受限，未能达到预期[34-35]。而普鲁士蓝纳米颗粒除了和许多金属纳米粒子一样具有显著的抗菌效果外，还具有优异的抗炎和抗氧化性能[28]。为探讨普鲁士蓝纳米颗粒改善糖尿病创面微环境的作用，此次实验采用三氯化铁和亚铁氰化钾合成了粒径分布窄、结晶度高、生物相容性良好的普鲁士蓝纳米颗粒，分别从清除活性氧、抗炎和光热抗菌3方面进行考察。
活性氧是指含有氧自由基的高活性物质，如过氧化氢和超氧阴离子：①一方面，当炎症发生时，活性氧水平增加介导细胞氧化应激并诱导细胞凋亡[36]。普鲁士蓝纳米颗粒作为一种人工纳米酶具有类似各种过氧化物酶的活性，它可以通过氧化还原途径将过氧化氢和超氧阴离子分解成无毒的产
物[25，37-38]。此次实验中，普鲁士蓝纳米颗粒显示出了很强的过氧化氢和超氧阴离子清除能力，且呈时间和剂量依赖性。并且进一步在细胞上验证了这一点，结果显示：普鲁士蓝纳米颗粒可以有效清除细胞产生的活性氧，提高细胞在氧化应激环境中的存活率，可作为活性氧清除剂。②另一方面，活性氧可作为信号分子激活炎症通路，进一步放大炎症反应[27]，因此糖尿病创面常表现出炎症反应失衡，促炎型(M1)巨噬细胞增多且抑炎型(M2)巨噬细胞数量减少。M1型巨噬细胞则会持续分泌大量的炎性递质，致使炎症期延长[39-41]。因此，为了获得更好的治疗效果，减轻激活的巨噬细胞的促炎特性是非常必要的。研究表明，普鲁士蓝纳米颗粒具有很强的抗炎特性，能够促进M2巨噬细胞极化，下调白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α等多种促炎细胞因子，并上调白细胞介素10等抗炎细胞因子表达[42-43]。此次实验采用脂多糖诱导巨噬细胞的炎症反应，普鲁士蓝纳米颗粒干预后可使巨噬细胞促炎因子表达水平减少而抗炎因子表达水平升高，说明普鲁士蓝纳米颗粒能够抑制脂多糖诱导巨噬细胞的炎症，促进其向M2型转化。
预防感染也是创面修复的重要一环，普鲁士蓝纳米颗粒的抗菌效果主要来源于光照后的升温，破坏细菌完整性，降低ATP，扰乱细菌代谢[44]。研究表明，50-60 ℃短时间内不会损害周围正常组织[45-46]。WANG等[47]利用普鲁士蓝纳米颗粒的光热抗菌治疗感染性创面，使用红光照射20 min后温度升高至55 ℃，具有良好的治疗效果。LI等[24]采用红光照射普鲁士蓝纳米颗粒15 min，温度升高至54 ℃，具有良好的抗菌效果，且在感染性创面中检测到了Ki67的高表达，表明治疗后有更多的细胞增殖。此次实验中，普鲁士蓝纳米颗粒在引入红光照射15 min后对于大肠杆菌和金黄色葡萄球菌显示出了显著杀伤作用，抗菌效果良好。
在体内实验中，普鲁士蓝纳米颗粒治疗组较对照组呈现出更高的创面愈合率、更短的伤口长度、更多的胶原沉积和皮肤附属器，引入光照后治疗效果更好。免疫荧光染色结果显示，与对照组相比，普鲁士蓝纳米颗粒治疗组a-SMA和CD31的表达都显著提高、F4/80表达显著减少，这表明应用普鲁士蓝纳米颗粒可以改善糖尿病创面微环境诱导高水平的血管生成，减少炎症期创面巨噬细胞的浸润，阻止促炎细胞因子的分泌，这可能有助于缩短炎症阶段并有效促进创面愈合。SAHU等[28]将500 μg剂量的普鲁士蓝纳米颗粒应用于小鼠创面模型的治疗，结果显示普鲁士蓝纳米颗粒有效促进了炎症创面愈合，14 d伤口愈合率为(87.6±1.5)%。此次实验普鲁士蓝纳米颗粒的使用剂量较SAHU等的低，但显示出更高的创面愈合率(89.8±1)%，这可能与普鲁士蓝的光热效应有关。
综上所述，普鲁士蓝纳米颗粒通过清除活性氧、促M2型巨噬细胞极化以及光热抗菌的联合作用缩短炎症期、增加胶原沉积和新生血管，从而实现糖尿病难愈合创面的治疗。由于糖尿病创面需要频繁换药，不利于创面的修复，普鲁士蓝纳米颗粒的应用仍面临挑战。在将来的研究中或可将鲁士蓝纳米颗粒以包裹或交联的方式负载到生物材料中，以实现普鲁士蓝纳米颗粒在创面部位的按需释放。中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料；口腔生物材料；纳米材料；缓释材料；材料相容性；组织工程

普鲁士蓝纳米颗粒促进糖尿病皮肤创面愈合

Prussian blue nanoparticles promote wound healing of diabetic skin

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[1]	李文兰, 王文渊, 任文秀, 张玉佩, 杨小燕, 王志刚, 夏纪筑. 制备近红外光响应性仿生纳米探针及在乳腺癌光热诊疗中的应用[J]. 中国组织工程研究, 2024, 28(5): 669-675.
[2]	张娅, 牟秋菊, 王自林, 刘宏杰, 祝丽丽. 负载富血小板血浆的水凝胶促进糖尿病大鼠创面愈合[J]. 中国组织工程研究, 2024, 28(5): 690-696.
[3]	焦文成, 代晶, 严文锐, 沈锦涛, 胡静璐, 金义光, 杜丽娜. 3D打印多功能敷料治疗放创复合伤[J]. 中国组织工程研究, 2024, 28(10): 1562-1567.
[4]	邓锐, 黄科铭, 罗建 , 陈功, 冯健 , 黄维义, 魏刚. 血红素氧合酶1介导阿托伐他汀在巨噬细胞极化和胆固醇蓄积中的作用[J]. 中国组织工程研究, 2024, 28(1): 62-67.
[5]	田沁玉, 田兴贵, 田壮, 眭翔, 刘舒云, 鲁晓波, 郭全义. 四氧化三锰纳米颗粒抗氧化损伤保护骨髓间充质干细胞的伸展功能[J]. 中国组织工程研究, 2023, 27(6): 821-826.
[6]	李丽, 李骁, 李杜晨晖, 张洁, 肖天骄, 康佳兵, 田艾. 骨替代材料引导骨组织再生过程中白细胞介素4对破骨细胞分化的调控[J]. 中国组织工程研究, 2023, 27(34): 5455-5461.
[7]	田雨一, 刘立宏. 巨噬细胞的骨免疫学效应[J]. 中国组织工程研究, 2023, 27(29): 4712-4722.
[8]	刘继超, 赵金龙, 于洋. 丝素胶原蛋白复合支架联合富血小板血浆修复皮肤损伤[J]. 中国组织工程研究, 2023, 27(25): 3971-3976.
[9]	张洁, 田艾. M2巨噬细胞参与骨再生相关信号通路的作用与机制[J]. 中国组织工程研究, 2023, 27(2): 314-321.
[10]	徐明奎, 许日明, 林业武, 罗原泰, 张熙辉, 周理, 袁仕国. 柚皮素调控巨噬细胞极化和肌卫星细胞增殖修复骨骼肌损伤[J]. 中国组织工程研究, 2023, 27(14): 2133-2138.
[11]	范亚茹, 李瑞欣, 李凤集, 罗睿, 刘浩, 严颖彬. 载吲哚菁绿聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球的表征及其光热效应[J]. 中国组织工程研究, 2023, 27(12): 1817-1823.
[12]	马洪峰, 任庆, 程万民, 王继国, 孟庆艳. 三黄凝胶对耳郭皮肤缺损兔创面愈合、碱性成纤维细胞生长因子和白细胞介素17水平的影响[J]. 中国组织工程研究, 2023, 27(12): 1842-1847.
[13]	胡金龙, 全桦红, 王静成, 张佩, 张家乐, 陈鹏涛, 梁远. 温敏性水凝胶Pluronic F127载硫化铜纳米颗粒修复大鼠感染性创面[J]. 中国组织工程研究, 2023, 27(12): 1927-1931.
[14]	甘甜, 王文渊, 晏殊瑾, 郝兰, 冉海涛, 王志刚, 夏纪筑. 携载LXR激动剂近红外光响应性纳米粒的光热协同免疫效应[J]. 中国组织工程研究, 2023, 27(12): 1863-1869.
[15]	苏梦, 王昕, 张津, 贝颖, 黄玉, 朱彦兆, 李嘉丽, 武艳. 纳米细胞囊泡负载姜黄素促进糖尿病小鼠创面的愈合[J]. 中国组织工程研究, 2023, 27(12): 1877-1883.